CC BY
9УДК 599.4.063.7:591.9(476)
А. В. Шпак1, Е. Э. Хейдорова1, А. И. Ларченко1, М. Е. Никифоров1, А. Казарян2, Г. Папов2,
В. В. Демянчик3
КРИПТИЧЕСКИЙ ВИДОВОЙ КОМПЛЕКС РУКОКРЫЛЫХ PLECOTUSAURITUS/AUSTRIACUS В БЕЛАРУСИ: ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ФИЛОГЕОГРАФИЧЕСКИЕ ПАТТЕРНЫ
Тосударственное научно-производственное объединение «Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по биоресурсам» Республика Беларусь, 220072, г. Минск, ул. Академическая, 27 e-mail: shpak.dvergr@gmail.com ^Ереванский государственный университет Армения, 0025, г. Ереван, ул. А. Манугяна, 1 3Полесский аграрно-экологический институт Национальной академии наук Беларуси Республика Беларусь, 224020, г. Брест, ул. Московская, 204/1-1
В работе представлены результаты филогеографического анализа криптического видового комплекса Pl. auritus/austriacus. Парсимониальный анализ гаплотипов по трем митохондриальным маркерам (D-loop, COI, ND1) показал, что постгляциальная реколонизация Западной Европы бурым ушаном осуществлялась из двух рефугиумов — «иберийского» и «апеннинского», в составе представителей двух гаплотипических линий, различающихся по времени образования. Молекулярно-генетической верификацией видового определения Pl. austriacus подтверждено обитание данного вида в Беларуси. Для серого ушана источником пост-гляциальной реколонизации Европы являлся только «иберийский» рефугиум, в то время как популяция из «балканского» рефугиума не проявила тенденции к широкой экспансии.
Ключевые слова: рукокрылые, бурый ушан, серый ушан, криптические виды, филогеография, митохон-дриальная ДНК.
Введение
Объективная оценка таксономической структуры, корректная идентификация в сложных видовых комплексах и знание фи-логеографической структуры исследуемого таксона являются неотъемлемой частью научного подхода к управлению популяциями редких видов животных. Особенную актуальность молекулярно-генетическая диагностика таксономической принадлежности и филогеографические исследования приобретают в отношении комплексов криптических видов, находящихся в статусе редких, уязвимых или угрожаемых под национальной или международной охраной. На территории Европы к таким криптическим комплексам относятся виды рода Plecotus Gray, 1821, или Ушаны, морфологическая идентификация которых в ряде случаев довольно сложна, в силу чего видовой либо подвидовой статус некоторых форм явля-
ется дискуссионным [1,2,3]. В Беларуси отмечено 2 вида данного рода: ушан бурый Plecotus auritus (Linnaeus, 1758) и ушан серый Plecotus austriacus (Fischer, 1829).
Бурый ушан — транспалеарктический вид, является обычным для Европы видом, где на севере его распространение ограничено 63-64° с. ш., а южная граница ареала пролегает по югу Пиренейского, Апеннинского и Балканского полуостровов, при этом распространение в средиземноморском регионе носит фрагментарный характер [4].
В Европе выделяют два подвида бурого ушана — Pl. a. begognae, распространение которого ограничено Иберийским полуостровом [6], и Pl. a. auritus, встречающийся на остальном пространстве ареала [5]. При этом последний представлен двумя линиями, «западной» (Австрия, Италия, Греция, Украина, Ладога и Пермская область Российской Федерации) и «восточной» (Краснодарский
край Российской Федерации, Кавказ), что некоторые ученые связывают с особенностями расселения вида в постгляциальный период [3].
Серый ушан — преимущественно средиземноморский вид, распространен в Западной, Центральной и Южной Европе, достигая на севере 53° с. ш. Восточная граница ареала пролегает по западным областям Турции, Украины и Беларуси [5].
В Беларуси бурый ушан отмечался практически с начала систематических зоологических исследований [7, 8] и при этом всегда рассматривался как широко распространенный, многочисленный дендрофильный вид [9]. Напротив, серый ушан был зарегистрирован только в начале 1990-х годов [10], причем его ареал ограничивается крайним юго-западом Беларуси, что соответствует северо-восточной границе европейского ареала. В 2015 г. он был внесен в 4-е издание Красной книги Беларуси (IV категория, NT). В Украине самые восточные находки серого ушана были отмечены в Полтавской и Черкасской областях, причем было высказано предположение о происходящей его экспансии в северо-восточном направлении [11]. Исходя из этого, возможно допустить либо обитание серого ушана, либо его скорое появление на всей территории Белорусского Полесья.
Следует отметить, что видовая идентификация бурых и серых ушанов в Беларуси проводилась исключительно на основании морфологических параметров, которые, в случае с криптическим видовым комплексом (Р1. аигИж/аж^1асш), не всегда способны обеспечить достоверный уровень определения вследствие отсутствия резких, хорошо заметных отличий, широкого диапазона индивидуального проявления или наличия переходных форм признаков.
Таким образом, целью нашей работы — уточнить с помощью молекулярно-генетиче-ских методов видовой статус и распространение на территории Беларуси представителей комплекса Р1. ашНж/ашМасж и установить их внутривидовые филогеографические связи в пределах ареала для выяснения истории послеледникового расселения и выявления редких генетических линий, нуждающих-
ся в расставлении новых акцентов в природоохранной практике. В этом отношении крайний интерес представляет серый ушан, находящийся в Беларуси на краю ареала, но, вероятно, имеющий тенденцию к территориальной экспансии.
Материалы и методы
Отловы рукокрылых проводились по стандартной методике (при помощи паутинных сетей в ночное время суток) на территории Беларуси и Армении. Сети длиной от 6 до 12 м и шириной 2,5 м устанавливались в местах пролетной и охотничьей активности рукокрылых. Пробы тканей (диаметром около 1 мм) отбирались при помощи метода панч-биопсии из крыловой перепонки, после чего фиксировались 96% этанолом и депонировались в Генетический банк дикой фауны ГНПО «НПЦ НАН Беларуси по биоресурсам» для долговременного хранения при -70 °С. Во избежание контаминации инструменты стерилизовались перед отбором каждой новой пробы. У всех отловленных особей сняты морфометрические параметры, определен их пол, возраст, проведена оценка репродуктивного статуса. После отбора генетической пробы животные отпускались на волю.
Для целей данного исследования был использован биоматериал от шести бурых ушанов, отловленных на территории Беларуси (в Минской, Гомельской и Брестской областях) и Армении, а также от двух серых ушанов из Брестской области.
Выделение тотальной ДНК из собранных проб тканей осуществлялось с использованием коммерческих наборов «АртДНК» согласно протоколам производителя («АртБиоТех», Республика Беларусь). В качестве генетических маркеров были использованы следующие участки митохондриальных генов:
- D-loop с использованием комплекса прай-меров (P): L, 5'-TCCTACCATCAGCACCCAA AGC-3', (T): H, 5'-TTGACTGTATGGGGTATG TAC-3', рекомендованных в работе Wilkinson and Chapman [12];
- COI с использованием праймеров LCO1490 (5' -GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3') и HCO2198 (5'- TAAACTTCAGGGTGACCAA AAAAT-3') [13];
- ND1 с использованием праймеров ER65 (5'-CCTCGATGTTGGATCAGG-3') и ER66 (5'-GTATGGGCCCGATAGCTT-3') [14].
ПЦР проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 1х Taq-буфер (Fermentas, Литва), 1х dNTPs, 3,0 мМ MgCl2, 0,4 pmol праймеров, 1U Taq-полимеразы (ОДО «Праймтех», Республика Беларусь) в амплификаторе модели CFX96 (Bio-Rad Laboratories, США).
Для амплификации участка D-loop использовали следующий режим ПЦР: предварительная денатурация — 94 °C, 4 мин, затем 35 циклов денатурации (94 °C, 30 с), отжига (58 °C, 45 с) и удлинения цепи (72 °C, 1 мин) с последующей финальной достройкой цепи (72 °C, 20 мин).
ПЦР программа для амплификации участка COI содержала следующие стадии: предварительная денатурация — 95 °C, 1 мин, затем 35 циклов денатурации (95 °C, 30 с), отжига (52 °C, 30 с) и удлинения цепи (72 °C, 1,5 мин) с последующей финальной достройкой цепи (72 °C, 5 мин).
Участок гена ND1 амплифицировали при использовании следующей программы ПЦР: предварительная денатурация — 94 °C, 3 мин, затем 40 циклов денатурации (94 °C, 30 с), отжига (50 °C, 30 с) и элонгации (72 °C, 1,5 мин) с последующей финальной достройкой цепи (72 °C, 5 мин).
Полученные ПЦР-продукты очищали с помощью набора NucleoSpin Gel and PCR Clean-up (Macherey-Nagel, Германия) и сек-венировали с использованием GenomLab Dye Terminator Cycle Sequencing with Quick Start Kit (Beckman Coulter, Германия) и системы генетического анализа GenomeLAB GEXP (Beckman Coulter, Германия). Некоторые образцы были секвенированы на приборе Applied Biosystems в Институте биоорганической химии НАН Беларуси (г. Минск, Республика Беларусь). Выравнивание и анализ полученных последовательностей проводили с помощью пакета программ MEGA ver. 6 [15]. Построение парсимониальных сетей производилось в программе PopArt ver. 1.7. Для сравнительного анализа привлечены аналогичные участки мтДНК данных видов из базы Национального центра биотехнологической информации США (https://www.ncbi. nlm.nih.gov/).
Результаты и обсуждение
Филогеографические исследования в большинстве своем не требуют большого количества расшифрованных нуклеотидных последовательностей, так как гаплотипы мтДНК животных в отдельно взятых географических пунктах являются отражением истории всей популяции исследуемого региона в целом. Всего было получено 15 сиквенсов различных участков генов митохондриаль-ной ДНК — D-loop (3 нуклеотидные последовательности), COI (2 последовательности) и ND1 (10 последовательностей). Ввиду большого размера ген ND1 анализировался нами только на своем начальном и конечном участке. Для сравнительного анализа было привлечено 47 нуклеотидных последовательностей из международной базы NCBI: по ND1 — 26 последовательностей (AF401369, AF516276, AF401374, AF401370, AY131291, AF401368, KJ948318, AF401373, AF401371, AF401372, AF516273, KJ948310, DQ915072, KF218516, AY699874, AB079817, HM164052, NC015484, AF401363, AF401365, AF401364, AF516271, AF516270, DQ915065, DQ915066, AF401367), по D-loop — 15 (KJ150736.1, AF515171.1, AF515169.1, AF515170.1, AF515175.1, AF515172.1, AF515173.1, AF515176.1, AF515177.1, AF515174.1, AF515178.1, AF515166.1, AF515167.1, AF515168.1, AY030077.1), по COI — 13 (JF443101.1, JF443099.1, JF443097.1, FR856810.1, FR856803.1, FR856805.1, FR856806.1, FR856802.1, FR856809.1, JF443100.1, JF443098.1, KY754537.1, KY754535.1). Авторские последовательности вкупе с депонированными в Genbank последовательностями других ученых представляют собой срез установленного на сегодняшний день гаплотипического разнообразия, достаточно надежной основы для изучения филогеографической истории двух европейских видов Plecotus.
Анализ нуклеотидных последовательностей D-loop бурого ушана
Результаты проведенного парсимониаль-ного анализа нуклеотидных последовательностей D-loop бурого ушана показывают наличие двух гаплотипических линий — «иберийской» и «центрально-европейской». Первая объединяет два кластера, в одном из которых группируются гаплотипы из Испании и Великобритании, а в другом добавляются
гаплотипы из Швейцарии. Вторая линия включает гаплотипы из Германии, Дании, Австрии и Беларуси. Гаплотип из Армении занимает промежуточное положение, однако в структуре сети находится значительно ближе к «центрально-европейской» гаплотипической линии (рис. 1).
Из представленной картины можно полагать, что западная часть современного ареала бурого ушана сформирована потомками выходцев из «иберийского» (кластер 1 «иберийской» гаплотипической линии) и «аппенинского» (кластер 2 «иберийской» гапло-типической линии) ледниковых рефугиумов после завершения плейстоценовых оледенений. При том, что в настоящее время кластеры не имеют жесткого географического разделе-
ния, оно, очевидно, было в прошлом, возможно, в гляциальные пики плейстоцена. Об этом свидетельствует значительная генетическая удаленность гипотетических предковых форм обоих кластеров.
В постгляциальный период «иберийские» предки оказались менее экспансивными, так как гаплотип кластера 1 пока обнаружен только в Британии. В то же время из «аппенинского» рефугиума гаплотипы попали и на Иберийский полуостров, и на Британские острова.
Восточная часть популяции бурого ушана демонстрирует более сложно структурированную группу гаплотипов, которые тем не менее имеют один источник, давший эволюционную радиацию гаплотипического разнообразия на значительном пространстве умеренной зоны
Рис. 1. Парсимониальная сеть гаплотипов контрольного региона D-loop бурого ушана
Европы, включая Данию на западе и Беларусь как минимум на востоке.
Анализ нуклеотидных последовательностей COI бурого ушана
Сравнительный анализ участка COI позволил выделить 7 гаплотипов. Гаплотип Н1, представленный последовательностями из Беларуси, ряда регионов России (Домодедово, Звенигород, Брянский Лес) и Северной Италии отстоит на одну мутацию от гаплотипов из Австрии и Волгограда, формируя тем самым ядро гаплотипической группы звездообразной структуры, характерной в основном для таксонов, прошедших этап быстрого роста численности популяции. Другие гаплотипы Н4, Н5, Н6, Н7, представленные последовательностями из Италии и Краснодара, имеют общего предка, но при этом показывают значительную генетическую дистанцию между собой, что свидетельствует о длительном периоде их независимого формирования (рис. 2).
Представленные на рисунке 2 результаты парсимониального анализа могут быть интерпретированы следующим образом: северная часть восточноевропейского ареала бурого ушана образована формами, связанными происхождением с севером аппенинского региона — Северной Италией, в то время как популяция юга России (Предкавказье) имеет самостоятельную и, очевидно, более древнюю связь через общего предка с территорией в контексте плейстоценовых оледенений воспринимаемой в целом как «аппенинский рефугиум». Из этого следует, что постгляциальное расселение бурого ушана в центральной и северной части Восточной Европы имело своим исходным регионом как минимум северную часть «аппенинского» рефугиума, распространяясь на территорию Австрии, Беларуси и ряда центральных регионов России до Волгограда на юге. При этом популяция более южной части Восточной
H3
H6
I
H7
1 Huiaple
Belarus BP Belarus Lielchycy ^ ^ Russia Domodedovo "" Russia Bryanski Les Russia Zvenigorod Russia Volgograd Russia Krasnodar 1111 Austria
North Italy Central Italy |j| jjl South Italy
Рис. 2. Парсимониальная сеть гаплотипов COI бурого ушана
Европы (Краснодар), вероятнее всего, имела связь с популяцией исходного плейстоценового ареала вида в холодной фазе плейстоцена (либо представляла собой часть данной популяции). В нашем представлении этот ареал мог распространяться на достаточно пространную территорию, так называемую «рефугиальную зону» [16], охватывающую как большую часть Апеннинского полуострова, так и другие территории юга Восточной Европы, где влияние оледенения не сказывалось отрицательно на обитании многих видов фауны, впоследствии занявших умеренную зону Европы.
Анализ нуклеотидных последовательностей ND1 бурого ушана
Парсимониальный анализ маркера ND1 для бурого ушана показал схожую картину гаплотипического распределения для начальной и концевой частей гена. В случае с начальной частью показано наличие ряда близких гаплотипов: Н7 (Италия), Н8 (Беларусь), Н9 (Беларусь), Н10 (Италия и Австрия), Н11 (Австрия). Вторая группа представлена рядом далеких друг от друга гаплотипов: Н1 (Западная Палеарктика),
Н2 (Австрия), Н3 (Испания) и Н6 (Италия), которые, в свою очередь, значительно отдалены от гаплотипов Н4 (Корея) и Н5 (Япония) (рис. 3).
Во второй части гена также есть группа довольно близких гаплотипов: Н1 (Италия, Беларусь), Н2 (Австрия), Н3 (Австрия), Н4 (Италия); вторая группа гаплотипов: Н5 (Италия), Н6 (Западная Палеарктика). На значительном отдалении находятся гаплоти-пы Н9 (Корея) и Н10 (Япония) (рис. 4).
Анализ структуры парсимониальных сетей по гену ND1 бурого ушана подтверждает географическое распространение выявленных по другим митохондриальным маркерам D-loop и COI гаплотипических линий, но более четко и наглядно демонстрирует более древнее происхождение одной из них. На рисунке 3 гаплотипы H1-H6 удалены друг от друга на значительную генетическую дистанцию, в то время как гаплотипы H7-H11 относительно ближе друг другу и составляют достаточно компактную группу, структура сети которой свидетельствует о недавних изменениях в последовательностях гена. Похожую картину можно проследить и на рисунке 4.
Рис. 3. Полиморфизм ND1 у P. auritus (начальная часть гена)
Рис. 4. Полиморфизм ЫБ1 у P auritus (концевая часть гена)
Таким образом, на основании генетических дистанций, выраженных количеством нуклеотидных замен в вариабельной части гена ND1, можно сделать вывод, что современная популяция бурого ушана на территории Европы образована потомками двух гаплотипических линий, формировавшихся независимо друг от друга. При этом юго-западная часть ареала населена представителями более древней гаплотипической линии, объединяющей гаплотипы, накопившие большое количество мутаций вследствие более длительной истории их формирования в условиях ледниковых изоляций плейстоцена. А северо-восточная часть ареала возникла уже после последнего оледенения, когда за относительно короткий промежуток времени расселяющаяся часть популяции на значительном пространстве современной умеренной зоны Европы, включая и территорию Беларуси, сформировала молодую гаплоти-пическую линию, о чем свидетельствует незначительная генетическая дистанция между гаплотипами достаточного вариабельного митохондриального маркера D-loop. Следует отметить, что на территории современных Италии и Австрии присутствуют обе выяв-
ленные гаплотипические линии, а белорусская популяция бурых ушанов принадлежит только ко второй.
Анализ нуклеотидных последовательностей ND1 серого ушана
Образцы биоматериала серого ушана были проанализированы по двум участкам ми-тохондриального гена ND1. Достоверная кластеризация белорусских последовательностей гена ND1 с аналогичными участками генома серых ушанов, имеющихся в международной базе NCBI, подтверждает корректность видовой идентификации П. austriacus и, таким образом, является первым молеку-лярно-генетическим доказательством присутствия данного вида в Беларуси.
Анализ парсимониальных сетей, построенных для первой и второй частей анализируемого участка ND1 (рис. 5, 6), показывает для серого ушана довольно схожие картины: балканские гаплотипы из Хорватии и Греции (Н1, Н2, Н3) достаточно схожи между собой, но значительно отличаются от таковых из других европейских регионов и Беларуси. Испанские гаплотипы (Н4, Н5) формируют группу, объединенную общим предком, хотя и значительно отдалены друг
Рис. 5. Парсимониальная сеть, построенная на основе полиморфизма гена ND1 у Р. аш'Маси^' в пределах
ареала (начальная часть)
Рис. 6. Парсимониальная сеть, построенная на основе полиморфизма гена ND1 у Р. аш'Маси^' в пределах
ареала (концевая часть)
от друга. Третья группа гаплотипов (Н6, предок которых связан с «испанской» груп-Н7) объединяет последовательности из пой гаплотипов.
наиболее северных частей ареала (более Полученные данные свидетельствуют о конкретная локация гаплотипа «Западная том, что источником постгляциальной ре-Палеарктика неизвестна), гипотетический колонизации территории современной уме-
ренной зоны Европы серым ушаном являлся «иберийский» рефугиум. При этом популяция, локализованная в балканском рефуги-уме, не проявила тенденции к расселению на постгляциальном пространстве Европы. В результате в настоящее время на территории Беларуси наблюдается расселение серого ушана, генетически родственного формам из географически удаленного Пиренейского региона, а не более близкого Балканского.
Заключение
Парсимониальный анализ гаплотипов по трем митохондриальным маркерам (D-loop, COI, ND1) показал вполне согласующиеся между собой результаты, позволяющие охарактеризовать особенности филогеогра-фических паттернов видов криптического комплекса Pl. auritus/austriacus. В частности постгляциальная реколонизация Западной Европы бурым ушаном осуществлялась из двух рефугиумов - «иберийского» и «апеннинского». При этом юго-западная часть ареала населена представителями более древней гаплотипической линии, объединяющей га-плотипы, накопившие большое количество мутаций вследствие более длительной истории их формирования в условиях ледниковых изоляций плейстоцена. Расселение вида на постгляциальных пространствах современной умеренной зоны Европы, включая Центральную и Восточную Европу, в том числе и территорию Беларуси, имело своим исходным регионом как минимум северную часть «апеннинского» рефугиума. В целом восточная часть популяции бурого ушана демонстрирует более сложно структурированную группу гаплотипов. Северо-восточная часть ареала возникла уже после последнего оледенения, когда за относительно короткий промежуток времени расселяющаяся часть популяции на значительном пространстве сформировала молодую гаплотипическую линию. Популяция наиболее южной части Восточной Европы, вероятнее всего, сохраняла связь с популяцией исходного плейстоценового ареала вида в холодной фазе плейстоцена либо представляла собой часть данной популяции.
Молекулярно-генетической верификацией видового определения Pl. austriacus под-
тверждено обитание данного вида в Беларуси. Для серого ушана источником постгляциаль-ной реколонизации Европы являлся только «иберийский» рефугиум, в то время как популяция из «балканского» рефугиума не проявила тенденции к широкой экспансии.
Работа выполнена в том числе при поддержке гранта Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований № Б17Арм-048 «Филогеографический анализ популяций рукокрылых Беларуси и Армении».
Список цитированных источников
1. EUROBATS MoP 8. Resolution 8.2 (2018) [Electronic resource]. - Mode of access: https:// www.eurobats.org/sites/default/files/docu-ments/pdf/Meeting_of_Parties/MoP8.Resolu-tion%208.2%20Amendment%20of%20the%20 Annex%20to%20the%20Agreement_0.pdf. -Date of access: 25.08.2020.
2. Ancillotto, L. An African bat in Europe: Plecotus gaisleri: Biogeographic and ecological insights from molecular taxonomy and Species Distribution Models / L. Ancillotto [et al.] // Ecology & Evolution. - 2020. - Vol.10. -P. 5785-5800. doi: 10.1002/ece3.6317.
3. Spitzenberger, F. A preliminary revision of the genus Plecotus (Chiroptera, Vespertil-ionidae) based on genetic and morphological results / F. Spitzenberger [et al.] // Zoologica Scripta. - 2006. - Vol. 35. - P. 187-230. doi: 10.1111/j.1463-6409.2006.00224.x.
4. Horácek, I. Plecotus auritus Linnaeus, 1758 - Braunes Langohr / I. Horácek, B. Du-lic // Handbuch der Säugetiere Europas. -2004. - Band 4: Fledertiere, Teil I: Chiroptera 2: Vespertilionidae 2, Molossidae, Nycteri-dae. - P. 953-999.
5. Dietz, C. Bats of Britain, Europe and Northwest Africa / C. Dietz, D. Nill, O. von Helversen. - A&C Black, 2009. - 400 p.
6. Paz, O. De. Systematic position of Pleco-tus (Geoffroy, 1818) from the Iberian Peninsula (Mammalia: Chiroptera) / O. De Paz // Mammalia. - 1994. - Vol. 58, № 3. - P. 423-432. doi: 10.1515/mamm.1994.58.3.423.
7. Domaniewski, J. Tyzenhauza spis pta-kow i ssakow ziem polskich / J. Domaniewski // Fragmenta Faunistica Musei
Zoologici Polonici. - 1931. - Vol. 44, №2 10. -P. 209-288.
8. Shpak, A. Bats of Belarus of the 19th century: a retrospective analysis / A. Shpak // Vespertilio. - 2011. - Vol. 15. - P. 79-86.
9. Курсков, А. Н. Рукокрылые Белоруссии / А. Н. Курсков. - Минск: «Наука и техника», 1981. - 136 с.
10. Демянчик, В. Т. Рукокрылые Беларуси: справочник-определитель / В. Т. Демянчик, М. Г. Демянчик. - Брест, 2000. -216 с.
11. Годлевська, Л. Рукокриш лiвобережжя Дншра в твшчнш частиш Украши / Л. Годлевська, С. Ребров // Theriologia Ukrainica. -2018. - Vol. 16. - С. 25-50. doi: 10.15407/ pts2018.16.025
12. Wilkinson, G. M. Length and Sequence Variation in Evening Bat D-Loop mtDNA / G. M. Wilkinson, A. Chapman // Genetics. -1991. - Vol. 128, № 3. - P. 607-617.
13. Folmer, O. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates / O. Folmer [et al.] // Molecular Marine Biology Biotechnology. - 1994. - Vol. 3, № 5. - P. 294-299.
14. Petit, E. No Evidence of Bottleneck in the Postglacial Recolonization of Europe by the Noctule Bat (Nyctalus noctula) / E. Petit, L. Excoffier, F. Mayer // Evolution. - 1999. - Vol. 53, № 4. - P. 1247-1258. doi:10.2307/2640827.
15. Kumar, S. MEGA: a biologist-centric software for evolutionary analysis of DNA and protein sequences /S. Kumar [et al.] // Brief Bioinform. - 2008. - Vol. 9, № 4. - P. 299-306. doi:10.1093/bib/bbn017.
16. Никифоров, М. Е. Формирование и структура орнитофауны Беларуси / М. Е. Никифоров. - Минск: Белорусская наука, 2008. - 297 с.
A. V. Shpak1, E. E. Kheidorova1, A. I. Larchanka1, M. E. Nikiforov1, A. Ghazaryan2, G. Papov2,
V. V. Demianchyk3
CRYPTIC CHIROPTERA SPECIES COMPLEX PLECOTUS AURITUS/ AUSTRIACUS IN BELARUS: SPECIES IDENTIFICATION AND PHYLOGEOGRAPHIC PATTERNS
1State Research and Production Association
"Scientific and Practical Center of the National Academy of Sciences of Belarus for Bioresources" 27, Akademicheskaya St., 220072 Minsk, the Republic of Belarus e-mail: shpak.dvergr@gmail.com ^Yerevan State University 1, A. Manoogian St., 0025 Yerevan, Armenia 3Polesie Agrarian Ecological Institute of the National Academy of Sciences of Belarus 204/1-1 Moskovskaya St., 224020 Brest, the Republic of Belarus
The Article demonstrates phylogeographic analysis results of the cryptic species complex Pl. auritus/austriacus. Parsimony analysis of haplotypes by three mitochondrial markers (D-loop, COI, ND1) showed that postglacial recolonization of Western Europe with a brown long-eared bat was carried out from two refugia — "Iberian" and "Apennine" consisting of representatives of two haplotype lineages differing by their formation period. Molecular genetic verification of the Pl. austriacus species identification confirmed that this species inhabits Belarus. For the grey long-eared bat, a source of the postglacial recolonization of Europe was only the "Iberian" refugium, while the population from the "Balkan" refugium did not show a tendency towards widespread expansion.
Keywords: bats, brown long-eared bat, gray big-eared bat, cryptic species, phylogeography, mitochondrial DNA.
Дата поступления статьи: 14 сентября 2020 г.
