CC BY
26
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
УДК 618.3-06-08:577.112.385.2
КОРРЕКЦИЯ РЕЗВЕРДТР0Л0М ДОМА-ПОДОБНОГО ГЕСТОЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
ВАГуреев1 В.И.Кочкаров2 Е.В. Проскурякова3
1)Курский государственный медицинский университет
2)Белгородский государственный университет
3)Областной перинатальный центр МЗ РФ, г. Курск
В статье изложены данные о морфофункцнональных нарушениях, возникающих при моделировании АБМА-подобного экспериментального гестоза у крыс. Приведены в сравнительном аспекте данные о коррекции резвератролом возникающих патологических изменений в сравнении с Ь-аргенином и амлодипином.
Ключевые слова: резвератрол, АБМА, гестоз, крысы, эндо-телиальная дисфункция.
e-mail: kochkarov.bsu.edu.ru
Введение. Частота гестоза в различных странах колеблется от 2 до 14% к числу всех беременностей. Гестоз остается одной из ведущих причин материнской смертности и составляет в ее структуре 25%. Наиболее часто гестоз развивается у женщин, страдающих соматическими заболеваниями, а также у первородящих и у беременных старше 30 лет. Преждевременные роды при гестозе наблюдаются в 25-41%, частота оперативного родораз-решения составляет 40%. В последние годы обнаружено повышение концентрации асимметричного диметиларгинина (АОМА) в материнской плазме у женщин с преэклампсией [30]. Повышенные концентрации АОМА обусловливает развитие эндотелиальной дисфук-ции (ЭД) и являются одними из предикторов гестоза [28,29,30].
Ранее в нашей лаборатории исследовался целый ряд препаратов, относящихся к различным фармакологическим группам, обладающих эндотелиопротективной активностью при различных МО-дефицитных состояниях [2, 3, 4, 5,13,15,17,18,19, 21, 22]. Высокообнадеживающие результаты при коррекции эндотелиальной дисфункции, в том числе и при АОМА-подобном гестозе, получены с использованием Ь-аргинина [6,14,16, 20, 24]. Данный препарат значительно снижал или полностью предупреждал развитие патофизиологических явлений. Другим перспективным препаратом обладающим способностью, влиять на развитие морфофункцнональных нарушений при гестозе, по нашему мнению является резвератрол - антиоксидант и активатор ЫО-синтазы одновременно [23]. Следуя выработанной ранее концепции [20], в настоящем исследовании проведено сравнительное изучение способности коррекции гестоза с помощью резвератрола.
Методика исследования. Опыты проводились на белых крысах-самках (беременных 14-16-е сутки) линии массой 250-300 г. Неселективный блокатор ЫО-синтазы М-нитро-Ь-аргинин-метиловый эфир (Ь-МАМЕ) вводился внутрибрюшинно в
дозе 25 мг/кг/сут. На 8-й день от начала эксперимента (22-24-е сутки беременности) под наркозом проводили сосудистые пробы на эндотелийзависимую и эндотелийнезависимую вазодилатацию с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) [12]. Беременные самки были разделены на группы (n=io): I - интактные; II - с введением L-NAME; III - с введением на фоне L-NAME L-аргинина (200 мг/кг внутрижелудочно) однократно; IV - с введением на фоне L-NAME амлодипина («Норваск», «Файзер») (0,5 мг/кг, внутрижелудочно) однократно; V - с введением на фоне L-NAME резвератро-ла 2 мг/кг (внутрижелудочно) однократно. Исследование микроциркуляции в плаценте и почках проводили с помощью оборудования компании Biopac systems: полиграф MPioo с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDfiooC и датчиком TSD144. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ) [1]. Суточную мочу собирали при помещении животных в метаболические клетки с последующим определением протеинурии.
Результаты исследования. Блокада NO-синтазы, вызванная семидневным введением L-NAME, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазо-констрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствует увеличение КЭД с 1,28±о,23 у интактных беременных животных до 3,o6±o,32 (р<0,05). Кроме этого, наблюдался значительный подъем систолического и диастолического артериального давления с 125±6,з и 82,о±5,8 до 18з,1±9,4 и 1з6,7±7,4 мм рт. ст. соответственно. Введение L-NAME приводило также к увеличению протеинурии с 0,90±0,10 г/л до 1,88±о,19 г/л (р<0,05). Для более полной оценки нарушений, возникающих при моделировании данной патологии, нами было проведено исследование микроциркуляции в плаценте и корковом веществе левой почки. Введение блокатора NO-синтазы приводило к значительному снижению показателя микроциркуляции в плаценте с 425>90±39>55 ДО 237,50±38,i8 (р<0,05). Микроциркуляция в почках практически не страдала.
Пероральное введение резверотрола на фоне моделирования патологии не приводило к достоверному снижению КЭД 4,о±о,6о по отношению к нелеченным животных (р>0,05), тогда как введение препаратов сравнения L-аргинина и амлодипина снижало КЭД до 1,50±0,25 и 1,48±о,21 соответственно (р<0,05). Однако несмотря на это, у животных, получавших резвератрол, отмечалось снижение артериального систолического и диастолического давления до 147,2±7,о и ю6,1±8,з мм рт. ст., что достоверно ниже аналогичных показателей группы нелеченых животных (р>0,05) и сопоставимо с группами животных получавших препараты сравнения (рис. l).
мм рт. ст.
200 п
0САД ЕЗДАД
интактные
L-arg
резвератрол
Рис. 1. Влияние резвератрола иа системное артериальное давление в условии
АБМА-подобного гестоза Примечание: * - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-ЫАМЕ
Исследование микроциркуляции у животных, получавших ревератрол, позволило отметить сопоставимо значимое ее улучшение в плаценте до 404,8±б0,з по сравнению с группой животных, получавших Ь-аргинин, и значительно превосходивший данный показатель в группе нелеченых животных и животных получавших амлодипин (р<0,05) (табл. 1). К положительным эффектам исследуемого препарата можно отнести сопоставимо значимое снижение протеинурии по сравнению с животными, леченными другими препаратами до о,8±о,1 г/л.
Таблица 1
Влияние резвератрола на патологические изменения при моделировании Ь-МАМЕ-индуцированного гестоза
Показатель Группа САД ДАД КЭД Микроциркуляция Протеинурия
Интактные 125±6,3* 82,0±5,8* 1,28±0,23* 425,90±39,55* 0,90±0,10*
Ь^АМЕ 183,1±9,4 136,7±7,4 3,06±0,32 237,50±38,18 1,88±0,19
Ь^АМЕ + Ь- аргинин 151,2±5,3* 112,8±6,8* 1,50±0,25* 342,50±29,33* 0,98±0,11*
Ь^АМЕ + амлодипин 1б5,7±6,8* 123,5±6,9* 1,48±0,21* 202,80±18,47 0,79±0,11*
Ь^АМЕ + резвератрол 147,2±7,0* 106,1±8,3* 4,0±0,60 404,8±60,3* 0,8±0,1*
Примечание: * - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-ЫАМЕ.
Обсуждение. Анализ полученных в ходе эксперимента данных позволяет сделать вывод о том, что введение блокатора МО-синтазы, вызывающего ЭД, приводит к патологическому АБМА-подобному гестозу.
В процессах, связанных с нарушением плацентарной гемодинамики и плодно-материнского кровообращения, наряду с вазоконстрикторами важную роль играют и ва-зодилататоры. Среди последних особое место принадлежит N0, обладающему выраженными сосудорасширяющими свойствами. Роль оксида азота в поддержании сосудистого гомеостаза не ограничивается дилатацией локального участка, а оказывает также анти-пролиферативное влияние на гладкомышечные клетки сосудистой стенки, блокируя агрегацию тромбоцитов, экспрессию молекул адгезии, продукцию эндотелина. По мере развития физиологической гестации продукция N0, как и активность МО-синтазы, существенно возрастает во втором триместре по сравнению с аналогичными величинами первого триместра (в 1,7 и 1,6 раза соответственно). Именно в этот период плацента формируется как орган, достигающий своей функциональной зрелости, а в организме плода происходят существенные преобразования процессов биохимической и морфологической дифферен-цировки, требующие формирования адекватного плацентарно-плодового кровотока.
Свободнорадикальные повреждения в организме матери и плода являются одним из основных механизмов в общей цепи нарушений [у, 9, ю, 25, 26]. Многочисленные данные свидетельствуют о том, что во всех реакциях с участием молекулярного кислорода наблюдается образование элементо-органических форм неполного окисления кислорода. Свободнорадикальная природа N0, являющегося антагонистом АБМА, обусловливает его легкое вовлечение в патологические реакции, замыкая таким образом порочный круг [8, и, 27]. Недостаток N0 способствует развитию гипоксии. Гипоксия приводит к недостатку N0.
Введение резвератрола, обладающего антиоксидантной активностью и активирующей способностью N0-cинтaзы, приводило к значительному улучшению основных показателей сопоставимо с препаратами сравнения. Исключением является интегральный показатель КЭД, который характеризует нарушение регуляторных механизмов. Рез-вератрол является фитоэстрогеном, поэтому, по всей видимости, гестогенный фон, который сопровождает беременность, играет некоторую антагонистическую роль и не позволяет исследуемому препарату в полной мере оказать влияние на регуляторные механизмы сосудистого тонуса.
Литература
1. Возможности фармакологической коррекции хронической ишемии конечности в эксперименте / Е.Б. Артюшкова, Д.В. Пашков, М.В. Покровский и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2008, - Т. 71, № з. - С. 23-25.
2. Изучение эффектов синтетических доноров оксида азота при L-NAME индуцированной эндотелиальной дисфункции / Л.В. Корокина, В.Г. Граник, В.И. Кочкаров и др. // Кубанский науч. мед. вест. - 2006, № 9. - С. 141-145.
3. Изучение эндотелиопротективного и коронарного действия производных 3-оксипиридина / М.В. Корокин, E.H. Пашин, К.Е. Бобраков и др. // Кубанский науч. мед. вест. -2009. № 4. - С. 104-108.
4. Использование металлокомплексных соединений с антиоксидантными свойствами для фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции / Л.М. Даниленко, ЭА. Парфенов, М.В. Покровский и др. // Кубанский науч. мед. вест. - 2009. № 5. - С. 20-24.
5. Исследование эндотелиопротективных эффектов препарата «Кардионат» (милдронат) на ADMA-подобной модели дефицита оксида азота при специфической блокаде NO-синтазы / Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, М.В. Корокин и др. //. International Journal on Immunorehabilitation (Международный журнал по иммунореабилитации). - 2009, Т. 11. № 1. - С. 66-67.
6. Исследование эндотелио- и кардиопротективных эффектов комбинаций основных групп антигипертензивных средств с L-аргинином при экспериментальной эндотелиальной дисфункции / Т.Г. Покровская, М.В. Покровский, В.И. Кочкаров и др. // Российский мед.-биолог. вест. им. академ. И.П. Павлова, - 2008, № 2. - С. 126-132.
7. Крукиер, И.И. Активность свободнорадикальных процессов в плодных оболочках при плацентарной недостаточности // Матер, пленумов Российской ассоц. акуш.-гинекол., проблемн. комиссии РАМН МЗ РФ. Перинат. диагн. и берем, высокого риска. - Ростов н/Д., 2003. - С. 67-68.
8. Орлов, В.И. Нарушение генерации оксида азота в плаценте - фактор перинатального риска для плода и новорожденного / В.И.Орлов, Т.Н. Погорелова, A.B. Орлов и др. // Регионализация и совершенствование перинатальной помощи: материалы VI съезда Российской ассоц. специалистов перинатальной мед., 21-25 октября 2002. - Москва. - С. 98-100.
9. Погорелова, Т.Н., Друккер H.A., Крукиер И.И., Длужевская Т.С. Влияние плацентарной недостаточности на показатели свободнорадикального окисления в плаценте и плодных оболочках // Цитология. - 1999. N 9, Т. 41. - С. 789.
10. Погорелова, Т.Н. Активность ферментов радикалообразования околоплодных вод в диагностике гипоксии плода / Т.Н. Погорелова, H.A. Друккер, И.И. Крукиер и др. // Национальная науч.-практ. конф. с международ, участием «Свободные радикалы, антиоксиданты». - Смоленск, 2001. - С.252.
11. Погорелова, Т.Н., Крукиер И.И., Орлов A.B. Сагамонова К.Ю., Друккер H.A., Шугалей B.C. The role nitric oxide in the regulation cytokine production in the placenta and fetal membranes / Т.Н. Погорелова, И.И. Крукиер, A.B. Орлов и др. // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезнь человека: национальная науч.-практ. конф. с международ, участием, Smolensk, 2003. - С. 40.
12. Покровский, М.В. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте /М.В. Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г. Покровская и др. // Кубанский науч. мед. вестн. - 2006, № 10 (91). - С. 72-77.
13. Покровский, М.В. Сравнительное изучение потенциальных эндотелиопротекторов и препарата «импаза» при моделировании дефицита оксида азота/ М.В. Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г. Покровская и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2009, Т. 148, № 8, приложение. -
с. 154-158.
14. Покровский, М.В. Эндотелиопротективные эффекты L-аргинина при экспериментальном моделировании дефицита оксида азота/ М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, В.И. Кочкаров, и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2008, Т. 71, № 2. - С. 29-31.
15. Применение ламотриджина для коррекции эндотелиальной дисфункции / Е.В. Лучкина, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, Е.Б. Артюшкова // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2008, Т. 7. № S2. - С. 221.
16. Применение L-аргинина в комплексе с амлодипином и индапамидом при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / Я.И. Залозных, Т.Г. Покровская, В.И. Кочкаров, М.В. Покровский // Кубанский науч. мед. вест. - 2007. № 1-2. -
с. 52-55.
17. Роль антиагрегантных препаратов в коррекции эндотелиальной дисфункции / В.Ю. Це-пелев, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, М.В. Корокин // Кубанский науч. мед. вест. - 2009. № 4.
- с. 149-152.
18. Роль ацетилсалициловой кислоты в коррекции эндотелиальной дисфункции //
B.Ю. Цепелев, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, М.В. Корокин // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2009, Т. 8. № S2. - С. 341а-341.
19. Сравнительное исследование эндотелио- и кардиопротективных свойств фуростаноло-вых гликозидов из культуры клеток растения Dioscorea Deltoidea и 17р-эстрадиола / М.В. Корокин, А.М. Носов, М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова. // Кубанский научн. мед. вест. - 2006, № 9.
с. 137-140.
20. Фармакологическая коррекция L-аргинином «ADMA-ENOS-ассоциированных мишеней» при экспериментальной преэклампсии / М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, В.В. Гуреев, АА. Барсук, Е.В. Проскурякова // Кубанский науч. мед. вест. - 2010. № 1. - С. 85-92.
21. Фармакологическая коррекция L-name индуцированного дефицита оксида азота реком-бинантным эритропоэтином / Л.В. Корокина, И.М. Колесник, М.В. Покровский, М.В. Корокин // Кубанский науч. мед. вест. - 2009. № 9. - С. 66-69.
22. Экспериментальное изучение кардиопротекторного и эндотелиопротекторного действия макролидов и азалидов / Е.С. Черноморцева, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, Е.Б. Артюшкова // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2009. Т. 72. № 2. - С. 29-31.
23. Эндотелиопротективные эффекты резвератрола и его комбинаций с эналаприлом и ло-зартаном при экспериментальном моделировании дефицита оксида азота // В.И. Кочкаров, М.В. Покровский, М.М. Корнеев, Т.Г. Покровская // Кубанский науч. мед. вест. - 2006, № 9. -
C. 150-152.
24. Эндотелиопротекторные эффекты L-аргинина при моделировании дефицита окиси азота // М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, В.И. Кочкаров, Е.Б. Артюшкова // Эксперимент, клин, фармакол. - 2008, Т. 71. № - 2. С. 29-31.
25. Krukier, I.I. Condition of oxidative stress in placenta during the pregnancy complicated with the placental insufficiency // Национальная научно-практическая конференция с международным участием «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health», Smolensk, 2003,
P. 138-139.
26. Pogorelova, T.N. Physical and chemical modification of placental plasmatic membranes under hypoxia / T.N. Pogorelova, NA. Drukker, I.I. Krukier et all // J. Hypoxia medical, 1998. N 2. V.6, P. 56.
27. Pogorelova, T.N. The role nitric oxide in the regulation cytokine production in the placenta and festal membranes/ T.N. Pogorelova, NA. Drukker, I.I. Krukier et all // Национальная научно-практическая конференция с международным участием ««Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health», Smolensk, 2003, - P.138.
28. Savvidou, M.D. Endothelial dysfunction and raised plasma concentrations of asymmetric di-methylarginine in pregnant women who subsequently develop pre-eclampsia // Lancet. - 2003. - Vol. 361. - P. 1511-1517.
29. Smith, C.L. Dimethylarginine dimethylaminohydrolase activity modulates ADMA levels, VEGf expression, and cell phenotype // Biochemical & Biophysical Research Communications. - 2003. -Vol. 308. - P. 984-989.
30. Speer, P.D. Elevated asymmetric dimethylarginine concentrations precede clinical preeclamp-sia, but not pregnancies with small-for-gestational-age infants // Am J Obstet Gynecol. - 2008. - Vol. 198. № 1. - P. 112-117.
RESVERATROL CORRECTION OF ADMA-LIKE GESTOSIS IN EXPERIMENT
V.V.Gureev1 V.I.Kotchkarov2 E.V.Proskuryakova3
1)Kursk State Medical University 2>Belgorod State University 3>Kursk Regional Perinatal Center
In ADMA-like experimental preeclampsia in rats morpho-functional disturbances were studied. The purpose of this study was to determine corrective effects of resveratrol in comparison aspects with L-arginine and amlodipine.
Key words: resveratrol, ADMA, preeclampsia, rats, endothe-lial dysfunction.
e-mail: kochkarov.bsu.edu.ru
