CC BY
21
8. Фидарова A.M. Некоторые морфологические и конф. молодых ученых СОГМА. - Владикавказ,
функциональные особенности почек в условиях 2007. -С.116-117.
острой почечной недостаточности // Тез. Докл. VI 9. Шейман Дж. А. Патофизиология почки / Дж.А.
Шейман. - М. - СПб, 1999. - 346 с.
Реферат
ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СТРОЕНИЯ И ФУНКЦИИ ФИЛЬТРАЦИОННОГО БАРЬЕРА ПОЧЕК У КРЫС В НОРМЕ
Баскевич О.В., Левицкий В.А.
Ключевые слова: крысы, почки, фильтрационный барьер, онтогенез.
В статье представлены сведения об возрастных изменениях структурных компонентов фильтрационного барьера почек крыс. Отмечено, что морфологические и морфометрические показатели этой структуры тесно коррелируют с функциональными и отражают общебиологические закономерности роста и старения организма.
Summary
AGE-SPECIFIC CHANGES IN STRUCTURE AND FUNCTION OF THE FILTRATIONAL KIDNEY BARRIER IN RATS IN NORM
Baskevych O.V., Levytskiy V.A. .
Key word: rat, kidney, filtration barrier, ontogenesis.
The paper focuses on the age-specific changes in the structural components of rats' filtration kidney barrier. It should be mentioned the morphological and morphometric indices of this structure closely correlate with functional indices and reflect general biological regularities of the body growth and aging .
УДК 616.1/.9-055.5/.7-092]-085:616.891:616.831-001.001.6
КОРРЕКЦИЯ НЕВРОЛОГИЧЕСКОГО И КОГНИТИВНОГО ДЕФИЦИТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЕ МЕТОДОМ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНА АПОЕ2
Белошицкий В.В., Гридина Н.Я., Цыба Л.А., Величко О.Н.
Институт нейрохирургии АМН Украины, г. Киев
Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, г. Киев
Цель работы - изучение влияния генной терапии, вызывающей индукцию синтеза изоформы s2 аполипопротеина Е в ткани травмированного мозга, на выраженность двигательных расстройств и нарушения памяти и обучаемости при ЧМТ в эксперименте. Тяжелая ЧМТ наносилась крысам под общей анестезией свободным падением груза массой 450 г с высоты 1,5 м. Внутрижелудочковая инфузия катионных липосом DOTAP, несущих 25 мкг плазмидного вектора pCMV ■ SPORT6 с кДНК гена апоЕ2, выполнялась при помощи осмотических помп ALZET. Оценка посттравматического неврологического дефицита проводилась по шкале двигательной дисфункции в день начала эксперимента, до нанесения травмы (0-й день) и с 1-го по 7-й дни после травмы. Когнитивные функции (пространственная память и обучаемость) оценивались в водном лабиринте Морриса в течение 7-10 дней после травмы. Результаты исследования показывают, что индукция синтеза в нервной ткани изоформы е2 АпоЕ с помощью плазмидного вектора, доставляемого в клетки при помощи катионных липосом, способствует более быстрому регрессу неврологических и когнитивных нарушений при экспериментальной черепно-мозговой травме.
Ключевые слова: черепно-мозговая травма, генная терапия, Апо£2, двигательные нарушения, когнитивные нарушения
Актуальной проблемой современного общества и медицины остаются последствия ЧМТ. Только в США от 2,5 до 6,5 миллионов человек испытывают социоэкономические трудности, связанные с неврологическими, когнитивными и психосоциальными последствиями ЧМТ [5]. Это оправдывает разработку методов лечения, воздействующих на кпеточно-молекулярные звенья патогенеза ЧМТ, лежащие в основе посттравматического неврологического и когнитивного дефицита.
Одним из перспективных способов нейропро-текции при ЧМТ может стать генная терапия -метод, позволяющий индуцировать в клетках поврежденного мозга синтез тех или иных бел-
ков с потенциальным терапевтическим эффектом.
Аполипопротеин Е (апоЕ обозначает ген; АпоЕ обозначает белок) - гликопротеин плазмы крови, играющий центральную роль в метаболизме, транспорте и регуляции уровней холестерола и триглицеридов. После ЧМТ синтез АпоЕ приобретает важнейшее значение для репарации ли-пидного компонента мембран нейронов и глио-цитов, обеспечивая транспорт холестерола и фосфолипидов в ранней и промежуточной фазах процесса реиннервации. При ЧМТ у АпоЕ-дефицитных животных выявляют более грубые структурные изменения и худший функциональный исход [4,6].
У человека существует 3 изоформы белка АпоЕ - е2, е3 и е4, которые отличаются наличием аргинина либо цистеина в 112-й и 158-й позициях аминокислотной последовательности. Первоначально аллель апоЕ е4 был идентифицирован как фактор риска развития болезни Альцгеймера. Было доказано, что носительство аллеля е4 гена апоЕ сопровождается дисфункцией липид-транспортных систем и в случае ЧМТ связано с худшим ростом нейритов и ре-моделированием синапсов. Носительство е4-аллеля прямо коррелирует с наличием более массивных структурных проявлений ЧМТ у человека, худшими исходами травмы и развитием отдаленных последствий травмы, в частности -болезни Альцгеймера [3]. Возможность повлиять на баланс между внутриклеточными процессами, которые, с одной стороны, осуществляют эффекты первичной травмы и последующих вторичных повреждений мозга, а с другой стороны, обеспечивают регенеративно - репара-тивные процессы в ЦНС, в настоящее время предоставляется с помощью трансфера в клетки травмированного мозга гена апоЕ2.
Целью работы было изучение влияния генной терапии, вызывающей индукцию синтеза изоформы е2 аполипопротеина Е в ткани травмированного мозга, на выраженность двигательных расстройств и нарушений памяти и обучаемости при ЧМТ в эксперименте.
Материал и методы исследования
Исследование выполнено на 15 крысах-самцах линии Wistar с массой тела от 350 до 400 г разводки вивария Института нейрохирургии. Животные были разбиты на 3 группы:
• Контроль-1 - группа, в которой животным не наносилась ЧМТ и не выполнялось каких-либо хирургических манипуляций с лечебной целью (интактные животные).
• Контроль-2 - группа животных с экспериментальной ЧМТ и установкой в левый боковой желудочек канюли, соединенной с подкожным резервуаром, заполненным физиологическим раствором вместо лекарственного препарата.
• Опыт - группа животных с экспериментальной ЧМТ и установкой в левый боковой желудочек канюли, соединенной с подкожным резервуаром для внутрижелу-дочковой инфузии препарата катионных липосом с плазмидным вектором, несущим ген апоЕ2, в посттравматическом периоде.
Нанесение экспериментальной ЧМТ и все хирургические манипуляции выполнялись под наркозом, который обеспечивался внутрибрюшин-ной инъекцией раствора тиопентала натрия (50 мг/кг). После завершения эксперимента на 10 сутки животные были умерщвлены с помощью внутрибрюшинной инъекции раствора тиопентала натрия (200 мг/кг). Мозг извлекали из полости
черепа для оценки эффективности трансфекции (определения mPHK, транскрибируемой с гена апоЕ2) методом обратнотранскриптазной поли-меразной цепной реакции (RT-PCR) и гистологического исследования. Результаты последних, опубликованные нами ранее [1,2], свидетельствуют, что генная терапия, направленная на индукцию синтеза изоформ АпоЕ в ткани головного мога крыс с ЧМТ, оказывает положительный эффект на структуру и ультраструктуру гиппо-кампа, значительно снижая вторичную гибель его нейронов.
Моделирование ЧМТ. Для воспроизведения у крыс тяжелой ЧМТ использовалась "модель ударного ускорения" [7,10], обеспечивающая развитие, в основном, диффузных повреждений мозга. Под общей анестезией выполнялся продольный разрез скальпа головы длиной 2 см по средней линии с обнажением bregma (точки пересечения коронарного и сагиттального швов черепа) и lambda (точки пересечения сагиттального и ламбдовидного швов). После обнажения свода черепа крысы распатором и высушивания костной поверхности к кости прочно с помощью зубного цемента фиксировался так называемый "шлем" - круглая стальная пластина диаметром 1 см - в срединном положении между коронарным и ламбдовидным швами. Травма наносилась падением с высоты 1,5 м на "шлем" груза массой 450 г с тупой поверхностью, что обеспечивает ускорение движения головы при минимальном локальном воздействии груза в точке приложения травмирующей силы.
Создание векторных конструкций для генной терапии. В работе были использованы кДНК гена апоЕ2 человека, субклонированная в вектор pUC18, предоставленная профессором G. Dickson и исследователем T. Athanasopoulos (факультет биохимии Королевского Лондонского университета, Великобритания) и вектор pCMV»SPORT6 ("Invitrogen", США), имеющий ци-томегаловирусный промотор и сигнал полиаде-нилирования SV40, что позволяет экспрессиро-вать клонированную в нем последовательность ДНК в эукариотических клетках. кДНК гена апоЕ2 переклонировали в вектор pCMV»SPORT6, по сайтам рестриктаз Smal и SalI, вектор обрабатывали рестриктазами Hindlll и Sail, при этом концы ДНК после обработки рестиктазой Hindlll тупили с помощью фрагмента Кленова. Полученную конструкцию pCMV»SPORT6-APOE2 выделяли в препаративных количествах методом щелочного лизиса используя реактивы и колонки tip 500 фирмы "Qiagen" (США).
Внутрижелудочковые инфузии плазмидного вектора, несущего ген апоЕ2. Для доставки препарата в головной мозг крыс после нанесения травмы мы использовали «Наборы для мозговых инфузий» и осмотические помпы ALZET (производство DURECT Corp., США). 10 осмотических помп были заполнены в соответствии с
инструкцией производителя: 5 штук - физиологическим раствором (группа Контроль-2), и 5 штук - препаратом катионных липосом с плаз-мидным вектором, несущим ген апоЕ2 (группа Опыт). Использовалась модель помпы 2001D, обеспечивающая непрерывную инфузию препарата со скоростью 8 микролитров в час на протяжении 25 часов, что составляло суммарно около 200 мкл. Крысам группы Опыт проводилась внутрижелудочковая инфузия 25 мкг плаз-мидной ДНК. Препарат катионных липосом/ДНК готовился с помощью реактива DOTAP Metho-sulfate (5 мкл на 1 мкг ДНК) (SIGMA-ALDRICH, США) в соответствии с инструкцией производителя. Система, состоящая из канюли, катетера и осмотической помпы, собиралась в соответствии с инструкцией производителя. Сразу после нанесения травмы голова животного фиксировалась в стереотаксическом аппарате. "Шлем" и зубной цемент удалялись. В подкожном пространстве спины животного, начиная от нижнего края разреза и далее через межлопаточное пространство, корнцангом формировался карман для осмотической помпы. В точке проекции переднего рога левого бокового желудочка при помощи бормашины круглой фрезой на кость свода черепа накладывалось фрезевое отверстие. Использовались следующие стереотакси-ческие коодинаты переднего рога бокового желудочка: кзади от bregma - 0,8 мм, латерально -1,5 мм, дорсовентрально - 4,8 мм. Канюля длиной 5 мм устанавливалась через фрезевое отверстие и фиксировалась к поверхности черепа зубным цементом. Осмотическая помпа погружалась в подкожный карман. Кожная рана ушивалась узловыми атравматическими швами. Животное извлекалось из стереотаксического аппарата и помещалось в клетку.
Оценка нарушений двигательной функции. При оценке посттравматических двигательных дисфункций у крыс нами использовался наиболее часто употребляемый метод [9]. Исследователь, неинформированный о принадлежности животных к той или иной экспериментальной группе, оценивает по 5-бальной шкале (от 0 -тяжелого поражения до 4 - нормальной силы или двигательной функции) следующие показатели: 1) сгибание левой передней лапки при поднимании животного за хвост; 2) сгибание правой передней лапки при поднимании животного за хвост; 3) сгибание левой задней лапки в то время, когда передние конечности находятся на ровной поверхности, а задние поднимаются тягой за хвост; 4) сгибание правой задней лапки в то время, когда передние конечности находятся на ровной поверхности, а задние поднимаются тягой за хвост; 5) способность противостоять боковому толчку влево; 6) способность противостоять боковому толчку вправо; 7) способность стоять на наклонной поверхности в левой позиции (левым боком кверху); 8) способность стоять на наклонной поверхности в правой позиции
(правым боком кверху); 9) способность стоять на наклонной поверхности в вертикальной позиции. В трех последних тестах максимальной оценкой в 4 балла оценивается способность животного стоять на плоскости, наклоненной под углом в 40°, 3 балла - 37.5°, 2 балла - 35°, 1 балл - 32.5° и 0 баллов - <32.5°.
В нашем исследовании оценка двигательной функции проводилась в группах Контроль-2, Опыт в день начала эксперимента, до нанесения травмы, (0-й день) и с 1-го по 7-й дни после травмы. В группе Контроль-1 данный показатель оценивался в течение тех же 8 дней. Общий функциональный показатель для каждого животного определяется суммированием баллов, полученных во всехтестах.
Оценка нарушений когнитивных функций. Нарушения когнитивных функций после экспериментальной ЧМТ выявляли с помощью оценки пространственной памяти в водном лабиринте Морриса. Поскольку расстройства памяти сохраняются после экспериментальной ЧМТ более продолжительное время по сравнению с двигательными нарушениями [8], исследование животных в водном лабиринте Морриса проводили в период с 7-х по 10-е сут после травмы, чтобы имеющийся ранее неврологический дефицит не повлиял на способность животных плавать, делая недостоверными результаты данного теста.
Водный лабиринт Морриса представлял собой круглый бак диаметром 140 см и высотой 45 см, заполненный теплой водой, которая делалась непрозрачной с помощью красителя (высота заполнения бака водой — 30 см). В постоянное место бака помещали подвижную платформу диаметром 10 см и высотой 28 см, поверхность которой находится на 2 см ниже поверхности воды. На 7-8-9-10-е сут после нанесения травмы проводили 16 "тренировок" животных (4 в день), в которых они обучались находить платформу, полагаясь на внешние визуальные ориентиры. Во время каждой из 4 "тренировок" в течение дня животное погружали поочередно в одну из 4 постоянных "стартовых позиций" (их очередность в течение дня была случайной). После достижения животным платформы его оставляли там в течение 30 с, а затем переносили в клетку. Между "тренировками" в течение дня выдерживался 4-минутный интервал. В каждый день исследования для каждой крысы определяли показатель "времени поиска" - среднее для 4 "тренировок" время (в секундах), затраченное животным на достижение платформы. На основе этих данных определяли среднее "время поиска" для каждой из групп эксперимента в конкретный день исследования. Увеличение "времени поиска" свидетельствует о большем дефиците пространственной памяти.
Обработку данных осуществляли методами вариационной статистики. Результаты 1Л-теста показали, что все выборки в сравниваемых
группах были распределены по нормальному закону. Поэтому для оценки статистической вероятности различий между средними значениями параметров в сравниваемых группах использовали ¿-критерий Стьюдента. Достоверными считались различия при Р<0,05.
Результаты и их обсуждение
Влияние трансфекции клеток головного мозга крыс геном апоЕ2 на динамику двигательной дисфункции и когнитивных нарушений при экспериментальной ЧМТ. Исследование невроло-
гических нарушений по шкале оценки двигательной дисфункции показало, что экспериментальная ЧМТ в группе Контроль-2 вызывает выраженный неврологический дефект, который демонстрирует тенденцию к постепенному регрессу к 7-м суткам после травмы (35,0±0,70 балла до нанесения травмы, 15,4±3,43 балла в 1-е сутки, 26,9±3,16 балла на 7-е сутки). Данный показатель во все сроки исследования (1-7 сутки) оставался достоверно отличным от данных группы Контроль-1, то есть от нормы.
40
х
■0
о
35
30
25
20
15
Ш 10
0
е; с
" с
«5 5
ГО
5
1 0
о
* * * * * * *
к-' ' ■■■■.. .. »11 1 1 '♦ 1 1 1 ■■ ♦ 1 # # -А'" * ...к
\ *# *# .--А'"" ■-
\ ▲...... .....А" 4£ #
\
^..... — "#
# #
0 сутки
1 сутки
2 сутки
3 сутки
4 сутки
5 сутки
6 сутки
7 сутки
День эксперимента
^^♦^Контроль-1 —■— Контроль-2 -- А --Опыт
Рис. 1. Влияние генной терапии с использованием гена апоЕ2 на динамику неврологического дефицита у крыс с экспериментальной ЧМТ
* - Различие с группой Контроль-2 достоверно
# - Различие с группой Контроль-1 достоверно
В группах Опыт проведенное лечение способствовало тому, что неврологический дефицит после травмы регрессировал быстрее по сравнению с группой Контроль-2 (ЧМТ без лечения). Сумма баллов по шкале оценки двигательной дисфункции на 3-й, 4-е и 7-е сутки в опытной группе достоверно превышала аналогичные показатели группы Контроль-2 (26,2±3,96 балла в группе Опыт по сравнению с 17,2±3,11 баллами в Контроле-2 на 3-й сутки, 26,4±3,36 балла в Опыте по сравнению с 19,8±3,11 баллами в Контроле-2 на 4-е сутки, 33,0±2,91 балла в группе Опыт по сравнению с 26,9±3,16 баллами в группе Контроль-2 на 7-е сутки). В последнем сроке исследования (7-е сутки) данные группы (чмт+генная терапия) существенно не отличались от результата группы Контроль-1, то есть достигали нормальных зна-
чении.
Оценка влияния генной терапии на динамику расстройств пространственной памяти у крыс с ЧМТ показало, что уже в первый день проведения исследования в водном лабиринте Морриса (7-е сутки после травмы) было отмечено достоверное отличие "времени поиска" платформы в группах Контроль-2 и Опыт (соответственно 86,4±4,32 с и 83,2±4,22 с) от значения этого показателя в группе Контроль-1 (69,2±2,15 с). Такое различие объясняется тем, что в группе Контроль-1 (крысы без ЧМТ) животные быстрее находили платформу уже в ходе 3-й и 4-й "тренировок" первого дня исследования (7-е сутки после травмы). В последующие дни в группе Контроль-1 "время поиска" платформы быстро сокращалось. В отличие от этого, в группе Кон-троль-2 (ЧМТ без лечения) "время поиска"
уменьшалось более медленными темпами и во все сроки исследования достоверно превышало аналогичный показатель группы Контроль-1 -соответственно 74,2±3,27 с и 17,2±2,28 с на 8-е сутки, 64,7±4,03 и 16,2±1,80 с на 9-е сутки, 61,2±3,62 с и 9,6±2,16 с на 10-е сутки. Это указывает, что экспериментальная ЧМТ в нашем исследовании вызывала у животных отчетливый дефицит пространственной памяти, значительно ухудшала их обучаемость.
В группе Опыт было отмечено положительное влияние трансфекции ткани головного мозга
геном апоЕ2 на регресс когнитивных нарушений у экспериментальных животных. "Время поиска" было достоверно меньшим по сравнению с таковым в группе Контроль-2 (ЧМТ без лечения) на 8-е и 9-е сутки, в группе Опыт-2 - на 7-е, 8-е, 9-е и 10-е сутки. Так, на 8-е сутки эксперимента значение этого показателя в опытной группе составляло 49,9±4,72 с по сравнению с 74,2±3,27 с в группе Контроль-2, на 9-е сутки - 36,5±3,26 с по сравнению с 64,2±4,03 с, а на 10-е сутки -31,8±4,63 с по сравнению с 61,2±3,62 с (различия достоверны во все указанные сроки).
100
90
80
70
60
50
о
£1 40
m
30
20
10
#
#
-
*# - ▲
♦
*
г
7 сутки
8 сутки 9 сутки
День эксперимента
10 сутки
Контроль-1
- Контроль-2
- А - Опыт
Рис.2. Влияние генной терапии с использованием гена апоЕ2 на динамикукогнитивных нарушений
у крыс с экспериментальной ЧМТ
* - Различие с группой Контроль-2 достоверно
# - Различие с группой Контроль-1 достоверно
Приведенные данные свидетельствуют о том, что в нашем эксперименте трансфекция клеток травмированного мозга геном апоЕ2 способствует более быстрому регрессу неврологического дефицита и уменьшению когнитивных нарушений, в частности снижению дефицита пространственной памяти и обучаемости.
Выводы
1. Генная терапия является перспективным методом лечения неврологических и когнитивных последствий черепно-мозговой травмы.
2. Индукция синтеза изоформы е2 аполипо-протеина Е в ткани головного мозга с помощью плазмидного вектора, доставляемого в клетки катионными липосомами, эффективно способствует регрессу неврологического дефицита и когнитивных нарушений при экспериментальной
черепно-мозговой травме у крыс.
Литература
1. Белошицкий В.В. Основные направления применения генной терапии при черепно-мозговой травме // BicH. Укра'шського товариства генетиюв i се-лекцюнерв. - 2005. - Т.3, №1-2. - С.15-20.
2. Белошицкий В.В. Влияние генной терапии на структурные проявления черепно-мозговой травмы в эксперименте / В.В. Белошицкий, В.М. Семенова, Н.Я. Гридина [и др.] // Укр. нейрохфург. журн. - 2009. - №1. - 14-20.
3. Педаченко Е.Г. Аполипопротеин Е: физиологическая роль и возможная терапевтическая эффективность при черепно-мозговой травме / Е.Г. Педаченко, В.В. Белошицкий, И.Г. Васильева // Нейрохирургия. - 2003. - №1. - С.59-65.
4. Chen Y. Motor and cognitive deficits in apolipoprotein E-deficient mice after closed head injury / Y. Chen, L.
0
Lomnitski, D.M. Michaelson, E. Shohami // Neuroscience. - 1997. - V.80, №4. - P.1255-1262.
5. Fujimoto S.T. Motor and cognitive function evaluation following experimental traumatic brain injury / S.T. Fujimoto, L. Longhi, K.E. Saatman [et al.] // Neurosci. Biobehav. Rev. - 2004. - V.28. - P.365-378.
6. Lynch J.R. Apolipoprotein E affects the central nervous system response to injury and the development of cerebral edema / J.R. Lynch, J.A. Pineda, D. Morgan [et al.] // Ann. Neurol. - 2002. - V.51, №1. -P. 113-117.
7. Marmarou A. A new model of diffuse brain injury in rats. Part I: Pathophysiology and biomechanics / A. Marmarou, M.A. Foda, W. van den Brink [et al.] // J. Neurosurg. - 1994. - V.80. - P. 291 - 300.
8. Morris R.G.M. Developments of a water maze procedure for studying spatial learning in the rat // J. Neurosci. Methods. - 1984. - V.11. - P. 47- 60.
9. Philips M.F. Neuroprotective and behavioral efficacy of nerve growth factor-transfected hippocampal progenitor cell transplants after experimental traumatic brain injury / M.F. Philips, G. Mattiasson, T. Wieloch [et al.] // J. Neurosurg. - 2001. - V.94, № 5. - P. 765774.
10. Yang X.Y., Yang S.Y., Zhang J.N., Xue L. Experimental study on expression and activation of caspase 3 after acute brain trauma// Proceedings 12th World Congress of Neurosurgery. - 2001. - P. 155-157.
Резюме
КОРЕКЦ1Я НЕВРОЛОГ1ЧНОГО Й КОГН1ТИВНОГО ДЕФ1ЦИТУ ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЫН1Й ЧЕРЕПНО-МОЗКОВ1Й TPABMI МЕТОДОМ ГЕНН01 ТЕРАПИ 13 ЗАСТОСУВАННЯМ ГЕНУАПОЕ2 Бтошицький В.В., Гридша Н.Я., Циба Л.О., Величко О.М.
Ключов1 слова: черепно-мозкова травма, генна терагля, Апо£2, pyxoBi розлади, когнлтивнл порушення
Мета роботи - вивчення впливу генно'Г терапп, що викликае ¡ндукцш синтезу ¡зоформи е2 аполтоп-роте'шу Е в тканиш травмованого мозку, на виразнють рухових розлад1в i порушень пам'ят1 та здатно-CTi до навчання при черепно-мозковш травм1 (ЧМТ) в експериментк Тяжка ЧМТ завдавалась щурам nifl загальною анестез1ею в результат! втьного падшня вантажу вагою 450 г з висоти 1,5 м. Внутр1ш-ньошлуночкова ¡нфуз1я катюнних лтосом DOTAP, що несли 25 мкг плазмщного вектору pCMV»SPORT6 з кДНК гену апоЕЭ, виконувалась за допомогою осмотичних помп ALZET. Оцшка посттравматичного невролопчного дефщиту виконувалась за шкалою руховоТ дисфункцп в день початку експерименту (0-й день) та з 1-го до 7-го дня пюля травми. Когштивш функцп (просторова пам'ять та здатнють до навчання) оцшювали у водному лаб1ринт1 Морриса впродовж 7-10 дшв пюля травми. Ре-зультати дослщження показують, що ¡ндукц1я синтезу ¡зоформи е2 АпоЕ за допомогою плазмщного вектору, що доставлявся в кл1тини за допомогою катюнних л1посом, сприяе б1льш швидкому perpecoBi невролог1чних i когн1тивних розлад1в при експериментальнш ЧМТ.
Summary
CORRECTION OF NEUROLOGIC AND COGNITIVE DEFICIENCY UNDER EXPERIMENTAL CRANIOCEREBRAL TRAUMA BY GENE THERAPY WITH THE APOE2 GENE Biloshytsky V.V., Gridina N.Ya., Tsyba L.O., Velychko O.M.
Key words: craniocerebral trauma, gene therapy, apoE2, motor dysfunction, cognitive disorders
The research was aimed to study was the effect of gene therapy causing the induction of apoE e2 synthesis in damaged brain tissue on the level of motor dysfunction and memory and learning disorders after experimental craniocerebral trauma (CCT). Severe CCT in rats was inflicted under the general anesthesia by free fall of the weight (450 g) from a height of 1.5 m. The mixture of cation DOTAP liposomes and 25 ^g of plasmid vector pCMV»SPORT6 with cDNA of APOE2 gene was infused intraventricularly. The estimation of posttraumatic neurologic deficiencies was performed according to the scale of motor dysfunction at the beginning of the experiment (0 day) and from the 1st to the 7th day after CCT. Cognitive functions (spatial memory and learning abilities) were tested by means of Morris water maze within 7-10 days after CCT. The data obtained show the cationic liposome-mediated APOE2 gene transfer causes the quicker regress of neurologic and cognitive disorders after experimental CCT.
