Концентрация и динамика интерлейкина-2, интерлейкина-6 и фактора некроза опухоли альфа в крови при хронических заболеваниях печени Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

№ 3 (35), 2015

Медицинские науки. Клиническая медицина

УДК 616.36-002.2:612.82

В. Е. Куликов, М. А. Тонеева,

В. А. Корнилова, Э. Р. Антонова, Т. А. Емелина

КОНЦЕНТРАЦИЯ И ДИНАМИКА ИНТЕРЛЕИКИНА-2, ИНТЕРЛЕЙКИНА-6 И ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ АЛЬФА В КРОВИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ

Аннотация.

Актуальность и цели. Учитывая разнородность научных литературных публикаций, касающихся уровней цитокинов в сыворотке крови при хронических заболеваниях печени, в частности при циррозах печени (ЦП), целью данного исследования было определение сывороточных уровней интерлейкина (ИЛ)-2, интерлейкина (ИЛ)-6, а также фактора некроза опухоли альфа (ФНО-а) с оценкой их динамики у больных ЦП классов А, В, С по Chald - Pugh.

Материал и методы. У 117 больных ЦП классов А, В, С по Chald - Pugh методом твердофазного иммуноферментного анализа определялись уровни цитокинов в сыворотке крови. С помощью корреляционно-матричного метода статистики Спирмена осуществлялось определение степени взаимосвязи между отдельными признаками. Непосредственно статистическая обработка осуществлялась при помощи статистической программы Stat Soft Statistica, версия 8.0.

Результаты. Выявлено, что при снижении компенсации ЦП отмечаются повышения сывороточных уровней ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-а в пределах рефе-ренсных значений, за исключением уровня ИЛ-6 при ЦП класса С.

Выводы. Концентрации ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а и их динамика определяются компенсацией цирроза. У больных ЦП класса С по Chald - Pugh уровень ИЛ-6 превышает референсные значения и находится в пределах от 9,94 до 25,21 пг /мл со средней концентрацией 14,89 ± 4,96 пг /мл.

Ключевые слова: интерлейкин-2, интерлейкин-6, фактор некроза опухоли альфа, цирроз печени.

V. E. Kulikov, M. A. Toneeva, V. A. Kornilova, E. R. Antonova, T. A. Emelina

СОNCENTRATION AND DYNAMICS OF INTERLEUKIN-2,

INTERLEUKIN-6, TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA OF BLOOD AT CHRONIC LIVER DISEASES

Abstract.

Background. The research objectives are to determine serum interleukins (IL-2, IL-6) and tumor necrosis factor alpha (TNF-а) and evaluate their interrelation in liver cirrhosis (class A, B, C according to Chad - Pugh).

Material and methods. 117 patients were examined and their cytokines levels were determined using the enzyme-linked immunosorbent analysis.

Results. An increase of cytokine levels of IL-2, IL-6 and TNF-а within reference values was found in liver cirrhosis cases, except for the level of IL-6 in liver cirrhosis cases of class C.

Conclusions. In liver cirrhosis cases of class C the IL-6 level exceeds reference values and is within the limit of 9,94-25,21 pg/ml with average concentration of 14,89 ± 4,96 pg/ml.

Medical sciences. Clinical medicine

71

Известия высших учебных заведений. Поволжский регион

Key words: interleukin-2, interleukin-6, tumor necrosis factor alpha, cirrhosis of liver.

Введение

Изучению цирроза печени (ЦП) и его осложнений посвящено множество клинических и экспериментальных исследований. Вместе с этим многие вопросы патогенеза осложнений ЦП остаются еще недостаточно изученным, а результаты научных исследований, проводимых в этом направлении, противоречивы. В настоящее время наиболее правомочной теоретической основой, объясняющей этиологию развития осложнений при ЦП, считается теория периферической вазодилатации, однако и она не дает ответа на все существующие вопросы по данной проблеме [1, 2]. В настоящее время недостаточно изучены частота возникновения и характер осложнений при ЦП на фоне влияния цитокинов на активацию патологического процесса в печени и нарушение портального кровотока [3-6].

Кроме того, существуют данные об активации цитокинового каскада при ЦП. Так, гиперпродукция ФНО-а и ИЛ-6 вызывает повреждение печени и коррелирует с тяжестью течения ЦП [7, 8]. Учитывая разнородность данных в литературе, касающихся уровня цитокинов в сыворотке крови и их влияния, исследования механизмов патогенеза и осложнений при ЦП в этом направлении должны неуклонно продолжаться. В то же время нет четких данных о взаимосвязи между функциональными показателями печени и уровнями цитокинемий при ЦП [9, 10].

Целью исследования было определение сывороточных уровней ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а с оценкой их динамики у больных ЦП классов А, В, С по Chald -Pugh.

Материалы и методы

Основные выводы работы основаны на научном материале, полученном при исследовании 117 пациентов с ЦП вирусной этиологии без сопутствующих основному диагнозу воспалительных процессов органов и систем в стадии обострения, повышения гормонального статуса и артериальной гипертонии третьей степени, госпитализированных в стационар ГУЗ «Ульяновская областная клиническая больница». При поступлении в стационар все больные (или их ближайшие родственники) подписывали информированное добровольное согласие на медицинское вмешательство и внесение персональной информации.

У наибольшего количества больных (п = 54 (46,1 %)) ЦП развивался на фоне HCV-инфекции, при HBV-инфекции - у 41 (35,1 %) и микс-инфекции (HCV + HBV) - у 22 (18,8 %) пациентов. ЦП развивался преимущественно от 10 и более лет с момента установления диагноза. Наименьший период развития ЦП отмечался у больных смешанной этиологии (HBV + HCV-инфекций), но в то же время статистически недостоверно (р = 0,079) в сравнении с больными других этиологий. В среднем ЦП развивался в течение 10,1 ± 2,8 года и имел место во всех возрастных периодах больных. ЦП чаще развивался у мужчин (п = 91 (77,8 %)), чем у женщин (п = 26 (22,2 %), и в более молодом возрасте: у мужчин в возрастном интервале 55,4 ± 2,9 года, у женщин - 62,3 ± ± 3,5 года. Средний возраст всех больных составил 57,3 ± 4,6 года.

72

University proceedings. Volga region

№ 3 (35), 2015

Медицинские науки. Клиническая медицина

Диагноз заболевания с верификацией результатов диагностики и лечения ставился в полном соответствии с классификацией экспертов ВОЗ (Лос-Анджелес, 1994) и Национальными клиническими рекомендациями Всероссийского научного общества гастроэнтерологов (2011). На основании классификации ЦП по Chald - Pugh (1996) пациенты были разделены на три группы: первую группу составили больные (п = 38) Chald - Pugh класса А с ФНО-а и ИЛ-2, ИЛ-6; вторую группу - больные (п = 40) Chald - Pugh класса В c ФНО-а и ИЛ-2, ИЛ-6; в третью группу вошли больные (п = 39) Chald - Pugh класса С с ФНО-а и ИЛ-2, ИЛ-6. Контрольную группу составили 30 здоровых добровольцев (доноры крови).

Определение уровней ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-а было основано на методе твердофазного иммуноферментного анализа в «сэндвич»-варианте. Для получения результатов и динамических наблюдений, адекватно отражающих изменение концентраций ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-а в крови, использовались наборы реагентов одного наименования («Интерлейкин-2-ифа-бест», «Интерлейкин-6-ифа-бест» и «ФНО-альфа-ифа-бест») и одного того же предприятия-изготовителя (г. Нижний Новгород). Концентрации цитокинов измерялись в крови с 9 до 11 ч.

Достоверность оценивалась в несколько этапов. На первом этапе классическим методом, основанным на теории выборки, был проведен расчет объема нужной статистической выборки. Полученный статистический материал группировался в вариационные ряды, которые далее анализировались на соответствие распределения с помощью дескриптивной статистики, закона распределения Гаусса - Лапласа. Также использовались непараметрические методы статистики, основыванные на конкордации Кендалла и критериях Фридмана. Были использованы средние величины, в сравнительном анализе учитывался показатель M ± SD. На втором этапе обработки полученного статистического материала была проведена группировка данных по вариационным рядам с учетом величины статистической значимости результатов при p < 0,05. По величинам интерквартильного размаха оценивалась величина распределения плотности Гаусса. С помощью корреляционно-матричного метода статистики Спирмена осуществлялось определение степени взаимосвязи между отдельными признаками.

Непосредственно статистическая обработка осуществлялась при помощи статистической программы Stat Soft Statistica, версия 8.0.

Результаты и их обсуждения

Были изучены параметры уровней ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-а в крови у больных ЦП классов А, В, С. Результаты представлены в табл. 1.

Из данных, представленных в табл. 1, видно, что при ЦП в зависимости от стадии компенсации отмечается общая тенденция к увеличению уровней всех исследуемых в крови цитокинов, но в пределах референсных значений, за исключением ИЛ-6. Так, при ЦП класса А уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а колебались в пределах 1,83-2,32, 5,15-9,32, 1,23-3,15 пг/мл и в среднем составили 2,02 ± 0,17, 6,47 ± 0,91, 2,47 ± 0,61 пг /мл соответственно.

При ЦП класса В уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а колебались в пределах 1,02-9,35 пг /мл, 1,11-14,95 пг /мл, 1,78-3,11 пг /мл и в среднем составили 3,66 ± 2,99 пг ,мл, 8,97 ± 3,95 пг ,мл, 2,62 ± 0,47 пг м соответственно.

Medical sciences. Clinical medicine

73

Известия высших учебных заведений. Поволжский регион

Таблица 1

Уровни значений ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а и их динамика при ЦП

Цитокины Статистические показатели

М ч М Ме М SD m Размах Плотность Гаусса

Больные циррозаМи печени Chald - Pugh класса А (п = 38)

ИЛ-2, пг / мл 1,83-2,32 1,94 2,02 0,17 0,15 0,49 0,34

ИЛ-6, пг / мл 5,15-9,32 6,45 6,47 0,91 0,63 4,17 0,97

ФНО-а, пг / мл 1,23-3,15 2,32 2,47 0,61 0,52 1,92 0,99

Больные циррозами печени Chald - Pugh класса В (п = 40)

ИЛ-2, пг / мл 1,02-9,35 2,12 3,66 2,99 2,46 8,34 5,52

ИЛ-6, пг / мл 1,11-14,95 8,32 8,97 3,95 3,01 13,85 5,33

ФНО-а, пг / мл 1,78-3,11 2,83 2,62 0,47 1,56 5,37 3,24

Больные циррозами печени Chald - Pugh класса С (п = 39)

ИЛ-2, пг / мл 1,04-8,39 2,46 3,99 2,41 2,01 7,35 4,27

ИЛ-6, пг / мл 9,94-25,21 13,31 14,8 9 4,96 4,01 15,24 7,94

ФНО-а, пг / мл 1,74-7,11 3,29 3,96 1,82 0,38 1,33 0,80

Примечание: приведены значения при C1 = 0,95(±).

У больных ЦП класса С уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а колебались в пределах 1,04-8,39 пг /Мл, 9,94-25,21 пг /Мл, 1,74-7 , 11 пг /Мл и в среднем составили 3,99 ± 2,41 пг /Мл, 14,89 ± 4,96 пг /Мл, 3,96 ± 1,82 пг /Мл соответственно.

При ЦП класса С пределы колебаний средних значений ИЛ-6 были выше референсных значений доноров и отМечались в пределах 14,89 ± 4,96 пг /Мл. Также необходиМо отМетить, что колебания уровней ИЛ-6 при ЦП класса А находились в пределах референсных значений, класса В - у 42,5 % из 40 больных, класса С - только у 30,8 % из 39 больных. У других больных ЦП классов В и С уровни колебаний ИЛ-6 превышали референсные значения.

У больных ЦП класса А величины интерквартильных разМахов уровней ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а составили 0,49, 4,17, 0,99, Медианы - в пределах 1,94, 6,45, 2,83 соответственно.

У больных ЦП класса В величины интерквартильных разМахов уровней ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а составили 8,34, 13,85, 5,37, Медианы - 2,12, 9,22, 3,29 соответственно.

У больных ЦП класса С величины интерквартильных разМахов уровней ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а были 7,35, 15,27, 1,33, Медианы - 2,46, 13,31, 2,32 соответственно.

У доноров в возрасте от 20 до 60 лет пределы колебаний концентраций ИЛ-2 составляли от 0 , 1 до 9,7 пг /Мл, ИЛ-6 от 0,2 до 9,8 пг /Мл и ФНО-а от 0 , 1 до 4,7 пг /Мл (у доноров крови полученные данные уровней цитокинов статистически достоверно не отличались от данных фирМы-изготовителя).

Была изучена сравнительная характеристика величин Между уровняМи ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а при ЦП классов А, В, С и норМой, полученной у доноров.

Результаты представлены в табл. 2.

Из данных, представленных в табл. 2, видно, что по Медиане уровни цитокинеМий у больных ЦП статистически достоверно выше уровней цито-кинеМий в контрольной группе (доноров крови).

74

University proceedings. Volga region

№ 3 (35), 2015

Медицинские науки. Клиническая медицина

Таблица 2

Характеристика величины статистической значимости между показателями цитокинового ряда при ЦП классов А, В, С и нормой

/-значение Стьюдента P Т-отнош. Фишера P

ИЛ-6-А vs ИЛ-6-норма 2,74337 0,02083 7,16781 0,000060

ИЛ-6-В vs ИЛ-6-норма 2,17999 0,035530 2,65592 0,026043

ИЛ-6-С vs ИЛ-6-норма 5,36040 0,000005 4,20274 0,028977

ФНО-а-А vs ФНО-а-норма 3,09890 0,003757 3,48733 0,011240

ФНО-а-В vs ФНО-а-норма 3,58784 0,000939 2,57704 0,037703

ФНО-а-С vs ФНО-а-норма 2,94494 0,005556 6,47002 0,000121

ИЛ-2-А vs ИЛ-2-норма 3,18237 0,0056317 2,82500 0,000000

ИЛ-2-В vs ИЛ-2-норма 3,60967 0,0057481 3,12011 0,012909

ИЛ-2-С vs ИЛ-2-норма 2,80851 0,0078659 3,36832 0,097791

Заключение

1. Концентрация и динамика ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-а определяются компенсацией цирроза печени.

2. На фоне снижения компенсации цирроза печени отмечается повышение сывороточных уровней ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-а в пределах референсных значений, за исключением уровня ИЛ-6 при циррозе печени класса С. У данной категории больных уровень ИЛ-6 превышает референсные значения и находится в пределах от 9,94 до 25,21 пг /мл со средней концентрацией 14,89 ± 4,96 пг / мл.

Список литературы

1. Ивашкин, В. Т. Осложнения портальной гипертензии при циррозе печени /

B. Т. Ивашкин // Российский физиологический журнал. - 2009. - № 10. -

C. 74-76.

2. Iwakir, Y. The hyperdynamic circulation of chronic liver diseases: from the patient to the molecule / Y. Iwakiri, R. J. Groszmann // Hepatology. - 2006. - Vol. 43, Suppl. 1. - Р. 122-130.

3. Chen, T. A. Effect of intravenous albumin on endotoxin removal, cytokines, and nitric oxide production in patients with cirrhosis and spontaneous bacterial peritonitis / T. A. Chen, T. Y. Csao, T. A. Chen // Scand. J. Gastroenterol. - 2009. - Vol. 44, № 5. -Р. 619-625.

4. Cytokine profile in the liver of primary biliary cirrhosis / T. Nagano, K. Yamamoto,

S. Matsumoto et al. // J. Clin. Immunol. - 1999. - Vol. 19. - Р. 422-426.

5. La Villa, G. Hemodynamic alterations in liver cirrhosis / G. La Villa, P. Gentilini // Mol. Aspects Med. - 2008. - Vol. 29. - Р. 113-119.

6. Интерлейкин-6 и оксид азота в патогенезе портальной гипертензии и декомпенсации цирроза печени / Г. К. Мироджанов, С. А. Авезов, М. М. Гиясов, З. М. Абдуллаева // Клиническая медицина. - 2012. - № 1. - 47-53.

7. Пальцев, М. А. Патологическая анатомия / М. А. Пальцев, Л. В. Кактурский, О. В. Зайратьянц. - М. : ГЭОТАВР, 2011. - 1206 с.

8. Шерлок, Ш. М. Заболевания печени и желчных путей / Ш. Шерлок, Дж. Дули. - М. : Медицина, 1999. - 115 с.

Medical sciences. Clinical medicine

75

Известия высших учебных заведений. Поволжский регион

9. Kоksal, A. S. Clinical features, serum interleukin-6, and interferon-gamma levels of 34 Turkish patients with hepatoportal sclerosis / A. S. Koksal, S. Koklh, M. Ibic // Dig. Dis. Sci. - 2007. - Vol. 52, № 12. - Р. 3494-3497.

10. Tumor necrosis factor and interleukin-6 in spontaneous bacterial peritionitis in cirrhosis: relationship with the development of renal impairment and mortality / M. Navasa, A. Follo, X. Filella et al. // J. Hepatol. - 1998. - Vol. 27. - Р. 1226-1232.

References

1. Ivashkin V. T. Rossiyskiy fiziologicheskiy zhurnal [Russian physiological journal]. 2009, no. 10, pp. 74-76.

2. Iwakir Y., Groszmann R. J. Hepatology. 2006, vol. 43, suppl. 1, pp. 122-130.

3. Chen T., Csao T. Y., Chen T. A. Scand. J. Gastroenterol. 2009, vol. 44, no. 5, pp. 619625.

4. Nagano T., Yamamoto K., Matsumoto S. et al. J. Clin. Immunol. 1999, vol. 19, pp. 422-426.

5. La Villa G., Gentilini P. Mol. Aspects Med. 2008, vol. 29, pp. 113-119.

6. Mirodzhanov G. K., Avezov S. A., Giyasov M. M., Abdullaeva Z. M. Klinicheskaya meditsina [Clinical medicine]. 2012, no. 1, pp. 47-53.

7. Pal'tsev M. A., Kakturskiy L. V., Zayrat'yants O. V. Patologicheskaya anatomiya [Morbid anatomy]. Moscow: GEOTAVR, 2011, 1206 p.

8. Sherlok Sh. M., Duli Dzh. Zabolevaniya pecheni i zhelchnykh putey [Liver and biliary tracts diseases]. Moscow: Meditsina, 1999, 115 p.

9. Koksal A. S., Koklh S., Ibic M. Dig. Dis. Sci. 2007, vol. 52, no. 12, pp. 3494-3497.

10. Navasa M., Follo A., Filella X. et al. J. Hepatol. 1998, vol. 27, pp. 1226-1232.

Куликов Владимир Евгеньевич доктор медицинских наук, профессор, кафедра госпитальной терапии, Институт медицины Ульяновского государственного университета (Россия, г. Ульяновск, ул. Льва Толстого, 42)

E-mail: kulikov69@bk.ru

Тонеева Марина Александровна врач ультразвуковой диагностики, Ульяновская областная клиническая больница (Россия, г. Ульяновск, ул. Третьего Интернационала, 7)

E-mail: kulikov69@bk.ru

Корнилова Вероника Александровна врач-гастроэнтеролог, Центральная городская больница (Россия, г. Ульяновск, ул. Лихачева, 12)

E-mail: kulikov69@bk.ru

Kulikov Vladimir Evgen'evich Doctor of medical sciences, рrofessor, sub-department of hospital therapy, Institute of Medicine, Ulyanovsk State University (42 Lva Tolstogo street, Ulyanovsk, Russia)

Toneeva Marina Aleksandrovna Ultrasound diagnostics physician, Ulyanovsk Regional Hospital (7 Tretyego Internationala street, Ulyanovsk, Russia)

Kornilova Veronika Aleksandrovna

Gastroenterologist, Central Municipal Hospital (12 Likhacheva street, Ulyanovsk, Russia)

76

University proceedings. Volga region

№ 3 (35), 2015

Медицинские науки. Клиническая медицина

Антонова Эльвира Рашитовна аспирант, Институт медицинского образования Новгородского государственного университета им. Ярослава Мудрого (Россия, г. Великий Новгород, ул. Большая Санкт-Петербургская, 41)

E-mail: kulikov69@bk.ru

Емелина Татьяна Александровна аспирант, Институт медицинского образования Новгородского государственного университета им. Ярослава Мудрого (Россия, г. Великий Новгород, ул. Большая Санкт-Петербургская, 41)

E-mail: kulikov69@bk.ru

Antonova El'vira Rashitovna Postgraduate student, Institute of medical education, Yaroslav-the-Wise Novgorod State University (41 Bolshaya Sankt-Peterburgskaya street,

Velikiy Novgorod, Russia)

Emelina Tat'yana Aleksandrovna Postgraduate student, Institute of medical education, Yaroslav-the-Wise Novgorod State University (41 Bolshaya Sankt-Peterburgskaya street,

Velikiy Novgorod, Russia)

УДК 616.36-002.2:612.82 Куликов, В. Е.

Концентрация и динамика интерлейкина-2, интерлейкина-6 и фактора некроза опухоли альфа в крови при хронических заболеваниях печени / В. Е. Куликов, М. А. Тонеева, В. А. Корнилова, Э. Р. Антонова,

Т. А. Емелина // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2015. - № 3 (35). - С. 71-77.

Medical sciences. Clinical medicine

77