CC BY
19
ных Т-клеток присутствуют маркеры, характерные для T-клеток памяти. Са2"-парадокс-резистентные Т-клетки и иономицин-резистенгные Т-клетки обладали функциональными свойствами Т-клеток памяти, а именно: они способны к антиген-специфическому пролиферативному ответу, оказывают помощь В-клеткам при синтезе антител и адаптивно переносят реципиентам резистентность к М. tuberculosis и к N. meningitidis.
Контроль выживания Т-лимфоцитов: роль аутокринных факторов
Луценко Г.В., Дьячкова Л.Г., Сапожников А.М.
Инст итут биоорганической химии
им. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН
Москва, Россия
Введение. Выживание и гибель нормальных клеток млекопитающих находятся под “социальным” контролем, суть которого заключается в том, что клетка, для своего выживания, должна постоянно получать сигналы от других клеток. Если она не получает таких сигналов, запускается механизм программируемой гибели, и клетка выбывает из клеточного сообщества.
Цель и задачи. Целью данной работы было исследование роли аутокринных факторов (АФ) в “социальном” контроле выживания Т-лимфоцитов. Задачами работы были: разработка простой экспериментальной системы, позволяющей тестировать влияние АФ на выживание Т-клеток, и непосредственное изучение на данной модели механизмов действия АФ.
Материалы и методы. Среда для культивирования клеток, приготовленная на основе RPMI-1640, содержала 2мМ L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина, 5x10'5 М 2-меркаптоэтанола, 5% эмбриональной сыворотки теленка и 100 Ед/мл интерлейкина-2. В качестве клеточной модели использовали IL-2-зависимую Т-клеточную линию CTLL-2. Выживание клеток оценивали с использованием МТТ-теста. Уровень апоптозных клеток определяли с использованием цитофлуориметра по наличию гиподиплоидного пика при окрашивании клеток пропидиум йодидом.
Основные результаты. Для исследования роли АФ в социальном контроле выживания Т-клеток нами была предложена экспериментальная модель с прекультивированием клеток в течение 12-14 часов в культуре высокой плотности (ВП, 2x106 клеток/см1), характеризуемой повышенной концентрацией АФ, и последующим их переносом в свежей среде в культуру низкой плотности (НП, 2x10s клеток/см1). После такого переноса 80-100% клеток CTLL-2 погибало в течение 3-5 часов. Среди клеток, взятых из ВП-культуры, доля апоптозных клеток составляла не более 10%, и она не увеличивалась после их переноса в НП-культуру, что указывает на то, что клеточная гибель осуществляется по механизму некроза. Внесение во вторичную культуру кондиционированного супернатанта (КС, надосадка культуры высокой плот-
ности, содержащего АФ) предотвращало гибель клеток. Некроз клеток после их переноса в НП-культуру указывает на нарушение энергетического метаболизма как на возможную причину их гибели. Ингибиторный анализ, проведенный с использованием цитохалазина В, ингибитора транспорта глюкозы, и ингибиторов окислительного фосфорилирования антимицина А и азида натрия показал, что главную роль в энергетическом метаболизме клеток CTLL-2, перенесенных из ВП-культуры в НП-культуру и спасенных от гибели добавлением КС, играет гликолиз как и в случае нормальных Т-лимфоцитов. Вместе с тем, оказалось, что в отсутствие КС пиру-ват, субстрат цикла Кребса, также обладает способностью спасать клетки от некроза, вызванного их переносом из ВП-культуры в НП-культуру. Внесение 1 мМ пирува-та во вторичную культуру сохраняло выживание клеток после переноса на уровне 75%-80%. Более того: если клетки CTLL-2 ранее культивировали в присутствии пи-рувата, то их прекультивирование в ВП-культуре и последующий перенос в НП-культуру, содержащую пиру-ват, никак не сказывались на их выживании, которое сохранялось на уровне не ниже 95%.
Заключение. Полученные результаты указывают на то, что аутокринные факторы способны контролировать выживание клеток CTLL-2, причем после прекультиви-рования клеток в условиях высокой концентрации АФ (ВП-культура) они адаптируются к этим условиям и при попадании в культуру с низким содержанием АФ (НП-культура со свежей средой) погибают по механизму некроза. Кроме того, представленные данные свидетельствуют в пользу того, что АФ осуществляют свое действие через контроль транспорта глюкозы и/или гликолиза, в то время как пируват, переключая энергетический метаболизм с гликолиза на окислительное фосфо-рилирование, выводит клетки из под контроля АФ.
Данная работа выполнена при поддержке РФФИ (фанг 99-04-49620).
Изучение антимикробных пептидов животных
Матукова А.Д., Алешина Г.М., Кокряков В.Н.
НИИ экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург, Россия
Введение. Антимикробные пептиды животных являются ведущими компонентами системы врожденного иммунитета, который обеспечивает защиту от патогенных микроорганизмов сразу же после заражения и помогает поддерживать определенный состав естественной микрофлоры.
В настоящее время охарактеризовано около 100 полипепетидов и белков с антимикробными свойствами выделенных из различных видов позвоночных и беспозвоночных животных, среди которых имеются пептиды —как локализованные в лизосомах фагоцитарных клеток, так и присутствующие в виде гуморальных фак-
