CC BY
82
ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ
Контроль эффективности терапии гиперадренокортицизма собак трилостаном по концентрации белков острой фазы
Обоснование: белки острой фазы (БОФ) включают гаптоглобин (Нр), С-реактивный белок (СРБ) и сывороточный амилоид А (САА). Повышение концентрации Нр у собак может индуцироваться эндогенными или экзогенными глюкокортикоидами.
Цели: выяснить, влияет ли успешный контроль гиперадренокортицизма на концентрации Нр, СРБ, САА, холестерина и активность щелочной фос-фатазы (ЩФ), и установить возможность использования этих показателей для оценки эффективности терапии гиперадренокортицизма трилоста-ном, а также установить достоверность сочетания данных тестов как метода оценки эффективности терапии.
Методы: Нр, СРБ, СО, ЩФ и холестерин определяли в плазме 11 собак со спонтанным гиперадренокортицизмом (ГАК) до и после лечения трилостаном. Лечение считали эффективным при концентрации кортизола после пробы с АКТГ менее 150 нмоль/л.
Результаты: у животных, отвечавших на терапию, обнаружено значительное снижение Нр, ЩФ, холестерина и САА (Р < 0,05), но не СРБ. Информативным оказалось лишь определение Нр, холестерина и ЩФ, однако информативность метода для оценки эффективности контроля заболевания была умеренной (чувствительность и специфичность больше 0,7) в сравнении со стимуляцией адренокортикотропином или кортикотропи-ном (АКТГ). Определение САА и СРБ не имело диагностического значения (чувствительность и специфичность меньше 0,7). Анализ сочетания данных показателей не повышал корреляцию с результатами пробы с АКТГ.
Клиническое значение: определение данных показателей при оценке эффективности лечения ГАК трилостаном не даёт какой-либо новой информации, которая могла бы дополнить результаты пробы с АКТГ.
A. Arteaga, N.K. Dhand, T. McCann, C.M. Knottenbelt, A.J. Tebb, H. Evansa, P. David Eckersall and I.K. Ramsey
Journal of Small Animal Practice (2010) 51, 204-209 DOI: 10.1111/j.1748-5827.2009.00863.x
ВВЕДЕНИЕ
Образующиеся при повреждении клеток цитокины индуцируют изменение концентрации некоторых гликопротеинов (белки острой фазы -БОФ), синтезирующихся преимущественно в печени. БОФ включают
гаптоглобин (Нр), С-реактивный белок (СРБ), сывороточный амилоид А (САА), церулоплазмин, ^-кислый гликопротеин и фибриноген (Ceron и др. 2005). Динамика концентрации БОФ варьирует в зависимости от вида животных и природы повреждения (Eckersall and others 1999). БОФ
считаются информативным показателем для диагностики, прогноза и контроля эффективности лечения в медицине (Child and others 1978, Kushner and Mackiewicz 1987, Thomson and others 1992). Появление в продаже готовых ветеринарных диагностических наборов расширило возможности использования этого метода для животных.
Гиперадренокортицизм (ГАК) -распространённое эндокринное нарушение у собак (Feldman and Nelson 2004). В настоящее время единственным лицензированным препаратом для лечения ГАК у собак является трилостан (Веторил, Декра Ветеринарии Продактс Лтд., Шрусбери, Великобритания). Он представляет собой обратимый конкурентный ингибитор 3р-гидроксистероид-дегидрогеназы, блокирующий биосинтез стероидов в надпочечниках, подавляя выработку кортизола. В настоящее время для контроля эффективности лечения ГАК рекомендуется проба со стимуляцией адрено-кортикотропином или кортикотро-пином (АКТГ) (Neiger and others 2002, Ruckstuhl and others 2002, Herrtage 2004).
Концентрация Нр в сыворотке собак повышается под действием эндогенных и экзогенных глюкокор-тикоидов (Harvey and West 1987, MartTnez-Subiela and others 2004). Этот эффект приписывают прямой индукции стероидами (McGrotty and others 2003).
Экзогенные глюкокортикоиды не влияют на концентрации других БОФ, например СРБ и САА (Thomson and others 1992). В литературе нет данных об изменении СРБ и САА у собак с ГАК. Ранее мы показали повышение Нр у собак при ГАК, при этом у собак, получавших
терапию ГАК, концентрация Нр была ниже (хотя и выше нормы) (McGrotty and others 2005).
К биохимическим показателям, повышение которых при неконтролируемом ГАК у собак наиболее постоянно, относят щелочную фосфатазу (ЩФ) и холестерин (76 и 90 % случаев соответственно) (Ling and others 1979). Показано значительное снижение обоих показателей после лечения (Ruckstuhl and others 2002, Perez-Alenza and others
2006). Соотношение кортизола и креатинина в моче, а также малая дексаметазоновая проба неинформативны в качестве показателей эффективности терапии (Angles and others 1997, Ruckstuhl and others
2002, Braddock and others 2003).
Дороговизна АКТГ в некоторых странах создаёт необходимость в альтернативных методах (Behrend and others 2006). Даже в странах, где АКТГ относительно дёшев, проба с АКТГ не позволяет оценить долговременный контроль концентрации кортизола. Последний необходим для успешного лечения ГАК, т. е. маркёр должен отражать контроль кортизола в течение длительного времени (по аналогии с фруктоза-мином при диабете). Данное исследование проведено, чтобы оценить, сопровождается ли эффективный контроль ГАК при терапии трило-станом (определяющийся по концентрации кортизола в сыворотке после пробы с АКТГ) значительным изменением сывороточной концентрации БОФ (Нр, СРБ и САА), а также холестерина. Вторичной целью было установление возможности использования БОФ, ЩФ и холестерина в качестве альтернативных показателей для оценки эффективности лечения ГАК трилостаном, а также оценить достоверность этого метода при оценке эффективности терапии.
Для исследования было отобрано 16 принадлежащих владельцам собак, направленных в клинику мелких домашних животных Университета Глазго. Клинические признаки,
результаты осмотра, биохимического и клинического анализа крови всех собак соответствовали диагнозу ГАК (Herrtage 2004). Диагноз был подтверждён внутривенной пробой с АКТГ (Синактен, Альянс Фарма-цевтикалз Лтд., Вильтшир, Великобритания) и/или отсутствием снижения концентрации кортизола при малой дексаметазоновой пробе и очевидном одно- или двухстороннем увеличении надпочечников по результатам УЗИ брюшной полости. Пробу с АКТГ и малую дексамета-зоновую пробу проводили, как описано ранее (Herrtage 2004).
Трём собакам был поставлен диагноз ГАК надпочечниковой этиологии, и их исключили из исследования. Этическое одобрение всех процедур в рамках исследования было получено у местной комиссии по этике под управлением британского главного офиса. Все показатели определяли в образцах крови, взятых до введения АКТГ (за исключением кортизола после пробы с АКТГ) при поступлении в клинику, а затем через 2, 4, 12 и 24 недели после начала терапии трилоста-ном (начальная доза 30-60 мг внутрь каждые 12-24 ч). В данном исследовании критерием эффективности терапии ГАК считали концентрацию кортизола после введения АКТГ менее 150 нмоль/л (Herrtage 2004, McGrotty and others 2005) при анализе через 4-6 ч после введения три-лостана. Результаты определения этих показателей регистрировали и сравнивали со значениями до лечения. Если ГАК не удавалось контролировать, собак исключали из исследования. Из статистического анализа также исключали собак с ГАК надпочечниковой этиологии. Во время исследования ни одна из собак не получала каких-либо других лекарств. Сыворотку для определения БОФ получали из яремной вены и замораживали при -20 °С для дальнейшего одновременного анализа. Нр измеряли по ранее описанному методу (McGrotty and others
2003). СРБ и САА измеряли с помощью микропланшетного фотометра (Тридельта Девелопмент Лтд., Ирландия), разработанного для опре-
деления концентрации САА у разных видов животных и прошедшего проверку для анализа образцов сыворотки собак в нашей лаборатории. Точность анализа оценивали ранее по коэффициентам вариации (КВ) внутри одной серии анализов и между разными сериями. КВ в пределах одной серии вычисляли по КВ результатов анализа пробы в двух повторностях (Fraser 1986); они составили 1,82 и 2,85 % в диапазоне концентраций Нр от 18 до 74 мкг/мл и 3 и 1,2 % в диапазоне концентраций САА от 46,7 до 178 мкг/мл. Вариабельность результатов между сериями проб также вычисляли по результатам двукратного повторного анализа контрольных образцов. КВ были 5,63 и 4,83 % при средней концентрации Нр 0,28-0,73 г/л. КВ между сериями проб вычисляли также для СРБ и САА по результатам повторного анализа контрольных проб в каждой серии. КВ были 11,1 и 12,6 % при средней концентрации СРБ 19-75 мкг/мл (Mishcke and others 2007) и 26 и 15 % при средних концентрациях САА 56 и 189 мкг/мл (ReactivLab, University of Glasgow, Bearsden, Scotland, data on file). Правильность метода подтверждали путём анализа серийных разведений стандартов и опытных проб сыворотки от собак с повышенной концентрацией СРБ и САА. По опубликованным данным, нормальное содержание Нр для собак составляет 2,2 г/л, а концентрация выше 10 г/л считается признаком сильной воспалительной реакции (Eckersall and others 1999a). Нормальные пределы СРБ составляют 0,46-9,6 мкг/мл (Mischke and others
2007), а САА - 0,08-8,75 мкг/мл (ReactivLab, data on file).
Активность ЩФ в плазме измеряли стандартным методом в коммерческой лаборатории (Национальные Лаборатории, Ланкашир, Великобритания). Нормы ЩФ у собак (0-100 МЕ/л) и холестерина (3,9-7,8 ммоль/л), использовавшиеся в данном исследовании, получены из лаборатории. Концентрацию кортизола до и после стимуляции АКТГ измеряли с помощью готовых твёрдофазных радиоимму-
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
нологических тест-систем (Coat-a-Count, DPC), прошедших аттестацию для анализа проб от собак (Специализированная лабораторная служба Кембриджа, Кембридж, Великобритания).
Статистический анализ проводили с помощью статистической программы SAS (версия 9.1, © 2002-2003, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Для оценки изменения концентрации анализируемых компонентов использовали знаково-ранговый критерий Уилкоксона (время = 0) в сравнении с контролем заболевания (время =1). Этот непараметрический критерий был предпочтительнее соответствующего параметрического парного t-критерия, поскольку распределение различий (значительное различие Р < 0,05) концентрации метаболита вряд ли было нормальным, что является важным допущением параметрического критерия. Кривые соотношений правильного и ложного сигналов для Нр, САА, СРБ, ЩФ и холестерина строили с помощью онлайн-макроса SAS, %ROCPLOT (http://support.sas.com/kb/25/018.html) и использовали для оценки чувствительности и специфичности метода контроля болезни при различных концентрациях анализируемых компонентов, соответствующих граничному значению.
Другой онлайн-макрос, %ROC (http://support.sas.com/kb/25/017.html), использовался для вычисления площадей под кривыми и доверительных интервалов. Затем использовали разные сочетания анализируемых параметров, исследовавшихся последовательно или параллельно, после определения их ковариантности (Dohoo and others 2003). Определя-
ли чувствительность и специфичность при оптимальных граничных значениях (максимальная чувствительность и специфичность) для разных анализируемых метаболитов, которые использовали для сравнительной оценки дискриминирующей способности парных определений при последовательном или параллельном анализе.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Две из 13 включённых в исследование собак разных пород со спонтанным гипофизарным ГАК были исключены из статистического анализа. У одной из них концентрация кортизола после пробы с АКТГ была выше 150 нмоль/л, а для другой было недостаточно лабораторных данных. Данные по оставшимся
11 собакам включили в окончательный анализ. Возраст собак был от 6 до 12 лет (средний 8,6, медиана 8,5). Среди них было 7 кобелей и 4 суки, масса тела варьировала от 4,2 до 46 кг (средняя 17,75, медиана 9). Все собаки, за исключением одной, получали трилостан дважды в сутки. Через 2 недели лечения у 2 собак из 6 концентрация кортизола после введения АКТГ снизилась до желаемой (менее 150 нмоль/л), через
12 недель - ещё у 2 собак и через 24 недели - у 3. Отмечено статистически значимое снижение Нр, САА, ЩФ и холестерина до и после лечения трилостаном. Однако статистически значимого различия в концентрации СРБ до и после лечения не обнаружено. До лечения у 100 % собак концентрация Нр была выше нормы, а у 9,09 % (1/11) и 18,1 % (2/11) собак обнаружены повышен-
ные сывороточные концентрации СРБ и САА соответственно. У всех собак, как до, так и после лечения трилостаном, обнаружена повышенная активность ЩФ. Концентрация холестерина была повышена у 90,9 % собак (10/11) до и 45,45 % (5/11) после лечения трилостаномм (табл. 1). Были построены кривые соотношений правильного и ложного сигналов (рис. 1а и 1Ь). Площади под кривой и 95 % доверительные интервалы (табл. 2) свидетельствуют о вариации площадей под кривой концентрации разных анализируемых метаболитов от 0,58 до 0,82.
Чувствительность и специфичность при оптимальных граничных значениях, определённых по кривым соотношения правильного и ложного сигналов (табл. 2), превышали 0,7 только для Нр, холестерина и ЩФ; при определении других метаболитов либо чувствительность, либо специфичность были менее 0,7. Таким образом, исследовалось только сочетание Нр, холестерина и ЩФ при последовательном или параллельном анализе проб. При параллельном анализе чувствительность была выше (0,95), но специфичность - ниже (0,55). И наоборот, при последовательном анализе чувствительность была ниже (0,59), а специфичность - выше.
ОБСУЖДЕНИЕ
Данное исследование показало значительное снижение концентрации Нр в сыворотке собак после лечения ГАК трилостаном, хотя она оставалась выше нормы у всех собак, кроме одной. Это согласуется с результатами нашего предыду-
Таблица 1. Концентрация разных метаболитов при поступлении (время 0) и на первый контрольный момент времени (время 1)
Единицы Нормы Время 0 Время 1 Значение Р
сред. медиана межквартильное значение диапазон сред. медиана межквартильное значение диапазон
Нр, г/л 0-2,2 8,09 7,45 5,7 2,8-13,6 4,55 4,20 2,30 1,5-8,1 0,0002*
СРБ, мкг/мл 0,46-9,6 4,69 1,58 1,15 0-27,5 6,04 2,05 3,76 0,32-41,5 0,9
САА, мкг/мл 0,08-8,75 2,04 1,10 1,95 0-9,5 1,55 0,30 1,08 0-14,9 0,03*
ЩФ, МЕ/л 0-100 1010,15 830,00 470 113-4091 456,92 269,00 406,50 118-2068 0,002*
Холестерин, моль/л 3,9-7,8 10,18 9,60 3,3 6,7-16,8 7,35 6,70 2,77 4,8-11,5 0,001*
Значения, отмеченные*, указывают на статистически значимое различие (Р < 0,05)
щего исследования (McGrotty and others 2005). Насколько известно авторам, это первая публикация, описывающая изменения СРБ и САА у собак со спонтанным ГАК до и после лечения.
Хотя мы обнаружили значительное снижение концентрации САА при эффективном контроле ГАК, этот результат следует интерпретировать с осторожностью, поскольку у большинства собак в данном исследовании концентрация САА оставалась в пределах нормы как до, так и после лечения. Как и в случае с Нр, повышение концентрации СРБ у одной из собак во время исследования после успешного контроля ГАК может быть связано с сопутствующим или основным воспалительным заболеванием, не выявленным при клиническом исследовании (Onishi and others 2000, Kobelt
and others 2003, Cerón and others 2005, Tecles and others 2005, Caldin and others 2009).
Повышение концентрации Нр отмечается при ряде болезней (Harvey and West 1987, McGrotty and others
2003, Martínez-Subiela and others
2004).
В литературе описаны сопутствующие воспалительные состояния у собак с ГАК, в т. ч. контролируемым, сопровождающиеся повышением Нр, в частности пиодерма, инфекция мочевыводящих путей, остеоартрит и новообразования (Feldman and Nelson 2004, Caldin and others 2009). Эти состояния, за исключением новообразований гипофиза, не сопровождались очевидными клиническими симптомами. Однако нельзя исключить заболевания в субклинической форме. Механизм индукции синтеза Нр у со-
бак под действием кортизола и экзогенных глюкокортикоидов неизвестен (Martinez-Subiela and others
2004, McGrotty and others 2005). Описано накопление эндогенных предшественников АКТГ и кортизола после лечения трилостаном (Siebert-Ruckstuhl and others 2006). У собак с атипичным ГАК и повышенной концентрацией стероидных гормонов (иных, чем кортизол) возможны сходные биохимические изменения крови (Oliver 2007). Таким образом, авторы настоящего исследования предполагают, что накопление предшественника кортизола у собак, получающих трилостан, может также способствовать повышению других показателей, например ЩФ или Нр.
Meijer (1980) предположил, что активность ЩФ является одним из самых информативных лаборатор-
Специфичность
Специфичность
— л — Холестерин см —•— СРБ
Рис. 1а. (а) Кривые соотношений правильного и ложного сигналов для гаптоглобина (Нр) и щелочной фосфатазы (ЩФ) после эффективного контроля гиперадренокортицизма (кортизол после введения АКТГ < 150 нм/л) и (Із) для С-реактивного белка (СРБ), сывороточного амилоида А (САА) и холестерина после успешного контроля гиперадренокортицизма (кортизол после введения АКТГ < 150 нм/л)
Таблица 2. Площадь под кривыми и соответствующие 95 % доверительные интервалы для разных метаболитов. СО = среднеквадратичная ошибка, ППК = площадь под кривой
Показатели ППК СО Доверительный интервал Граничное значение Чувствительность Специфичность
Нр 0,82 0,09 0,62, 1,00 4,80 0,73 0,91
СРБ 0,51 0,13 0,25, 0,77 2,26 0,46 0,82
САА 0,69 0,12 0,45, 0,93 0,19 0,64 0,82
ЩФ 0,74 0,12 0,50, 0,97 531,00 0,80 0,73
Холестерин 0,82 0,09 0,64, 1,00 6,2 0,60 1,0
ных показателей для подтверждения диагноза при подозрении на ГАК, и в ходе предыдущих исследований было обнаружено значительное снижение активности ЩФ после терапии трилостаном (Ruckstuhl and others 2002, Perez-Alenza and others 2006). Мы обнаружили повышенную активность ЩФ у всех собак до лечения и значительное снижение после лечения, что согласуется с этими работами, однако значения оставались выше нормы. За это могут быть ответственны такие факторы, как малая длительность действия трилостана, индукция ферментов вследствие накопления других предшественников кортизола или сопутствующих патологических процессов (Dunn and others
1995, Neiger and Hurley 2001, Siebert-Ruckstuhl and others 2006). У большинства собак с ГАК 70 % общей активности ЩФ приходится на изоформу ЩФ, индуцируемую стероидами (Wilson and Feldman 1992). В настоящем исследовании определяли только общую ЩФ сыворотки. Возможно, измерение активности изоформы, индуцируемой стероидами, дало бы более значимые результаты. Хотя определяли ЩФ, индуцируемую стероидами, в ходе нескольких исследований на собаках с ГАК (Teske and others 1989, Wilson and Feldman 1992, Solter and others 1993), возможность применения ЩФ или изоформы, индуцируемой стероидами, в качестве показателя для оценки контроля ГАК при терапии трилостаном или митотаном не изучалась.
Показано, что холестерин, как и ЩФ, повышается при ГАК у собак (Ling and others 1979, Meijer 1980). В литературе уже описано значительное снижение холестерина сыворотки при успешном лечении ГАК трилостаном (Ruckstuhl and others 2002), что согласуется с нашими результатами. Снижение концентрации холестерина после лечения может быть обусловлено усилением эффективности путей ферментативного превращения липидов. О влиянии повышения эндогенного АКТГ и других предшественников кортизола (Siebert-Ruckstuhl and others
2006) ничего не известно, но оно могло приводить к повышению холестерина у некоторых собак в исследовании.
Второй целью исследования было установить возможность использования БОФ, ЩФ и холестерина в качестве альтернативных показателей для оценки эффективности терапии ГАК у собак трилостаном. В настоящее время для оценки контроля ГАК у собак, получающих лечение мито-таном (Dunn and others 1995) или трилостаном (Neiger and others 2002, Ruckstuhl and others 2002, Braddock and others 2003), рекомендуется проба с АКТГ. Нормальный диапазон концентраций кортизрола в сыворотке после пробы с АКТГ у собак, получающих трилостан, определён как 30-250 нмоль/л (Neiger and others
2002, Ruckstuhl and others 2002, Brad-dock and others 2003). Мы использовали произвольно выбранную концентрацию кортизола после пробы с АКТГ (< 150 нмоль/л), основываясь на результатах предыдущего исследования, выполненного нашей группой (McGrotty and others 2005).
Альтернативный метод можно считать точным (в сравнении с «золотым стандартом»), если площадь под кривой равна 0,9-1 при данном граничном значении. При площади под кривой от 0,7 до 0,9 информативность метода считается умеренной (Greiner and others 2000). С помощью кривых соотношений правильного и ложного сигналов мы обнаружили, что наиболее информативными показателями для оценки контроля болезни при терапии трилостаном являются Нр, холестерин и ЩФ, так как площади под кривыми для них были выше, чем для СРБ и САА. При сравнении Нр, холестерина и ЩФ с концентрациями кортизола после АКТГ этот метод был умеренно информативным (максимальная чувствительность и специфичность около 73 %). СРБ и САА плохо подходят в качестве показателей контроля заболевания. Этот результат не был неожиданным в случае СРБ, учитывая отсутствие значительных изменений его концентрации после лечения три-лостаном.
Окончательной целью исследования было определение достоверности сочетания показателей в качестве метода оценки контроля ГАК. Сочетание СРБ и САА не исследовали из-за низкой чувствительности и специфичности определения этих показателей, что, скорее всего, еще больше снизит чувствительность и специфичность анализа их комбинации (Dohoo and others 2003). Сочетание Нр, холестерина и ЩФ при параллельном и последовательном определении оказалось неинформативным в связи со снижением специфичности и чувствительности комбинированного теста.
Это исследование имеет ряд ограничений. Возможно, малое количество случаев снижает его статистическую мощность, однако не влияет на результаты, оказавшиеся значимыми. Иными словами, истинность обнаруженных различий высоковероятна. Для дальнейшей оценки результатов, определённых в данном исследовании как незначимые, потребовалась бы большая выборка. Другим ограничением исследования является применение статистического метода оценки адекватности определения нескольких метаболитов на основании «золотого стандарта» (проба с АКТГ). Следовательно, при сравнении результатов анализа разных показателей с результатами определения кортизола после пробы с АКТГ мы принимаем диагностическую значимость последнего метода за 100 % (Greiner and others 2000). Однако проба с АКТГ не является абсолютно чувствительной или специфичной, и оценка контроля болезни у собак, получающих трилостан, всё ещё опирается также на клинические наблюдения за течением болезни (Braddock and others 2003, Feldman and Nelson 2004).
В настоящее время проходят оценку некоторые другие методы диагностики и оценки контроля ГАК, например внутримышечная проба с АКТГ, определение кортизола в слюне и соотношения кортикоидов/креа-тинина в моче после малой дексаме-тазоновой пробы (Kobelt and others
2003, Vaessen and others 2004, Behrend and others 2006).
В качестве показателя контроля ГАК мы использовали произвольное граничное значение концентрации кортизола в сыворотке менее 150 ммоль/л (Herrtage 2004, McGrot-ty and others 2005). Это может не соответствовать полному контролю клинических проявлений. Другие авторы предложили использовать меньшие концентрации кортизола после введения АКТГ (< 70 нмоль/л) для случаев с хорошо контролируемым заболеванием (Ruckstuhl and others 2002). Возможно, при использовании более низкого граничного значения изменение некоторых проанализированных показателей было бы более значимым. Граничное значение концентрации кортизола менее 15 нмоль/л было предложено как показатель избыточного контроля ГАК (Braddock and others 2003). Эти собаки входят в группу риска гипокортизолемии и могут нуждаться в снижении дозы трилостана. Ни у одной из собак в данном исследовании концентрация кортизола в сыворотке не падала ниже этого значения, хотя предел количественного определения кортизола равен 6,89 моль/л. На результаты измерения БОФ, ЩФ и холестерина может влиять гипер-липидемия, гипербилирубинемия и/или гемолиз (Kaplan and Pesce
1996, Martínez-Subiela and Cerón
2005). Однако лаборатория не сообщала об очевидных изменениях в образцах для анализа. Характер изменения концентрации БОФ у собак с опухолями надпочечников может отличаться из-за сопутствующей воспалительной реакции вследствие роста самой опухоли (Teske and others 1989), поэтому такие собаки были исключены из статистического анализа. Число собак с опухолями надпочечников в нашем исследовании было слишком малым для анализа этого эффекта. Для оценки их влияния на концентрацию БОФ необходимы дальнейшие исследования с большими когортами собак, получающих трилостан. Мы оценили только БОФ, ЩФ и холестерин в определённый момент времени, что может оказаться недостаточным для объяснения ха-
рактера изменения концентрации разных метаболитов за более длительный период времени. Необходимы дальнейшие исследования для оценки других БОФ у собак с ГАК надпочечниковой и гипофизарной природы на разных стадиях контроля, например ai-кислый гликопротеин, церулоплазмин или а1-анти-протеаза. В заключение можно сказать, что настоящее исследование показало значительные изменения Нр, САА, ЩФ и холестерина и отсутствие значительных изменений концентрации СРБ после успешного лечения ГАК трилостаном. По сравнению с пробой с АКТГ, информативность определения данных метаболитов у собак с ГАК варьировала от меньшей до умеренной, даже в сочетании. Таким образом, определение Нр, СРБ, САА, ЩФ и холестерина нельзя рекомендовать в качестве метода оценки эффективности контроля гиперадренокор-тицизма гипофизарной или надпочечниковой природы у собак, получающих трилостан.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить Европейский колледж внутренних болезней животных, благодаря фонду клинических исследований которого этот проект стал возможным. Кроме того, они хотели бы поблагодарить ветеринарных врачей и младший персонал, участвовавших в лечении животных.
Литература
Angles J.M., Feldman E.C., Nelson R.W. & Feldman M.S. (1997) Use of urine cortisol: creatinine ratio versus adrenocorticotropic hormone stimulating testing for monitoring mitotane treatment of pituitary-dependent hyperadrenocorticism in dogs. Journal of the American Veterinary Medicine Association 211, 1002-1004 Behrend E.L., Kemppainen R.J., Bruyette D.S., Bush K.A. & Lee H.P (2006) Intramuscular administration of a low dose of ACTH for ACTH stimulation testing in dogs. Journal of the American Veterinary Medicine Association 229, 528-530 Braddock J.A., Church D.B., Robertson I.D. & Watson A.D.J. (2003) Trilostane treatment in dogs with pituitary-dependent hyperadrenocorticism. Australian Veterinary Journal 8, 600-607 Caldin M., Tasca S., Carli E., Bianchini S., Furlanello T, Martínez-Subiela S. & Cerón J.J. (2009) Serum acute
phase protein concentrations In dogs with hyperadrenocorticism with and without concurrent infl amma-tory conditions. Veterinary Clinical Pathology 38, 63-68 Cerón J.J., Eckersall P.D. & Martínez-Subiela S. (2005) Acute phase proteins in dogs and cats: current knowledge and future perspectives. Veterinary Clinical Pathology 34, 85-99 Child J.A., Cooper E.H., Illingworth S. & Worthy TS. (1978) Biological markers in Hodgkin’s disease and non-Hodgkin’s lymphoma. Recent Results in Cancer Research 64, 180-189 Dohoo I.R., Martin S.W. & Stryhn H. (2003) Veterinary Epidemiologic Research. AVC, Charlottetown, PEI, Canada.
Dunn K.J., Herrtage M.E. & Dunn J.K. (1995) Use of ACTH stimulation test to monitor treatment of canine hyperadrenocorticism. Veterinary Record 137, 161-175 Eckersall PD., Duthie S., Safi S., Moffat D., HoradagodaN.U., Doyle S., Parton R., Bennet D. & FitzpatrickJ.L. (1999a) An automated biochemical assay for haptoglobin: prevention of interference from albumin. Comparative Haematology International 9, 117-124 Eckersall P.D., Duthie S., Toussaint J.M., Gruys E., Heegaard P., Alava M., Lipperheide C. & Madec F. (1999) Standardization of diagnostic assays for animal acute phase proteins. Advances in Veterinary Medicine 41, 643-655 Feldman E.C. & Nelson R.W. (2004) Canine hyperadrenocorticism (Cushing’s syndrome). In: Canine and Feline Endocrinology and Reproduction. 3rd edn. Eds E.C. Feldman and R.W. Nelson. W.B. Saunders, St. Louis MO, USA. pp. 252-358 Fraser G.C. (1986) Analytical concepts. In: Interpretation of Clinical Chemistry Laboratorial Data. Blackwell Scientifi c, Edinburgh, UK. pp. 77-81 Greiner M., Pfeiffer D. & Smith R.D. (2000) Principles and practical application of the receiveroperating characteristic analysis for diagnostic tests. Preventive Veterinary Medicine 45, 23-41 Harvey J.W. & West C.L. (1987) Prednisolone-induced increases in serum alpha-2-globulin and Haptoglobin concentration in dogs. Veterinary Pathology 24, 90-92 Herrtage M.E. (2004) Canine hyperadrenocorticism. In: BSAVA Manual of Canine and Feline Endocrinol ogy. 3rd edn. Eds C.T. Mooney and M.E. Peterson. BSAVA, Gloucester, UK. pp. 150-171 Kaplan, L.A. & Pesce, A.J. (1996) Theory, analysis and correlation. In: Clinical Chemistry. 3rd edn. Mosby St Louis. pp. 521-674 Kobelt A.J., Hemsworth PH., Barnett J.L. & Butler K.L.
(2003) Sources of sampling variation in saliva cortisol in dogs. Research in Veterinary Science 75, 157-161 Kushner I. & Mackiewicz A. (1987) Acute phase proteins as disease markers. Disease Markers 5, 1-11 Ling G.V, Stabenfeldt G.H., Comer K.M., Gribble D.H. & Schechter R.D. (1979) Canine hyperadrenocorticism: pretreatment clinical and laboratory evaluation of 117 cases. Journal of the American Veterinary
Medicine Association 174, 1211-1214 Martínez-Subiela S. & Cerón J.J. (2005) Effects of hemolysis, lipemia, hyperbilirubinaemia, and anticoagulants in canine C-reactive protein, serum Amyloid A, and ceruloplasmin assays. Canadian Veterinary Journal 46, 625-629
Martínez-Subiela S., Ginel PJ. & Cerón J.J. (2004) Effects of different glucocorticoid treatments on serum acute phase proteins in dogs. Veterinary Record 154, 814-817 McGrotty YL., Arteaga A., Knottenbelt C.M., Ramsey I.K. & Eckersall P.D. (2005) Haptoglobin concentrations in dogs undergoing trilostane treatment for hyper-adrenocorticism. Veterinary Clinical Pathology 43, 255-258
McGrottyYL., Knottenbelt C.M., Ramsey I.K., Reid S.W.J. & Eckersall P.D. (2003) Haptoglobin concentrations in a canine hospital population. Veterinary Record 152,562-564 Meijer J.C. (1980) Canine hyperadrenocorticism. In: Current Veterinary Therapy. 7th edn. Ed R.W. KIRK. W.B. Saunders, Philadelphia PA, USA. pp. 975-979 Mischke R., Waterston M. & Eckersall PD. (2007) Changes in C-reactive protein and haptoglobin in dogs with lymphatic neoplasia. Veterinary Journal 174, 188-192 Neiger R., Ramsey I.K., O’Connor J., Hurley K.J. & Mooney C.T (2002) Trilostane treatment of 78 dogs with pituitary-dependent hyperadrenocorticism.
Veterinary Record 150, 799-804 Neiger R. & Hurley K. (2001) 24 hour cortisol values in dogs with Hyperadrenocorticism on trilostane. Proceedings of the 44th British Small Animal Veterinary Association Conference. Birmingham, UK. p. 549 Oliver J.W (2007) Steroid profi les in the diagnosis of canine adrenal disorders. 25th ACVIM Forum. 6 to 9 June, Seattle, WA, USA. pp. 471-473 Onishi T, Inokuma H., Ohno K., Soeda S., Noguchi K. & Sasaki K. (2000) C-reactive protein concentrations in normal and diseased dogs-measured by laser nephelometric immunoassay. Journal of Japanese Veterinary Medicine Association 53, 595-601 Perez-Alenza D., Arenas C., Lopez M.L. & Melian C. (2006) Long term effi cacy of trilostane administered twice daily in dogs with pituitary dependent hyperadrenocorticism. Journal of the American Animal Hospital Association 42, 269-276 Ruckstuhl N.S., Nett C.S. & Reusch C.E. (2002) Results of clinical examinations, laboratory tests, and ultrasonography in dogs with pituitarydependent hyperadrenocorticism treated with trilostane. American Journal of Veterinary Research 63, 506-510 Siebert-Ruckstuhl N.S., Boretti,FS., Wenger M., Maser-Gluth C. & Reusch C.E. (2006) Cortisol, aldosterone, cortisol precursor, androgen and endogenous ACTH concentrations in dogs with pituitary-dependant
hyperadrenocorticism treated with trilostane. Domestic Animal Endocrinology 32, 63-75 Solter PF, Hoffmann WE., Hungerford L.L., Peterson M.E. & Dorner J.L. (1993) Assessment of corticosteroids-induced alkaline phosphatase isoenzyme as a screening test for hyperadrenocorticism in dogs. Journal of the American Animal Hospital Association 203, 534-538 Tecles F, Spiranelli E., Bonfanti U., Cerón J.J. & Paltrinieri S. (2005) Preliminary studies of serum acute-phase protein concentrations in haematologic and neoplastic diseases of the dog. Journal of Veterinary Internal Medicine 19, 865-870 Teske E., Rothuizen J., Debruijne J.J. & Rijnberk A. (1989) Corticosteroid-induced alkaline phosphatase isoenzyme in the diagnosis of canine hyperadrenocorti-cism. Veterinary Record 125, 12-14 Thomson, D., Milford-Ward, A. & Wicher, J. (1992) The value of acute phase measurements in clinical practice. Annuals of Clinical Biochemistry 29, 123-131 Vaessen M.A.R., Kooistra H.S., Mol J.A. & Rijnberk A.
(2004) Urinary corticoid: creatinine ratios in healthy pet dogs after oral low-dose dexamethasone suppression test. Veterinary Record 155, 518-521 Wilson S.M. & Feldman E.C. (1992) Diagnostic value of steroid-induced isoenzyme of alkaline phosphatase in the dog. Journal of the American Animal Hospital Association 28, 245-250
