Конструирование экспериментальной тест-системы иммуноферментной моноклональной: определение констант аффинности антител Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

2014, Т. 4, № 1

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

Полученные результаты соответствуют данным литературы о преобладании в циркуляции у населения европейской части России субгенотипа 1А ВГА. Метод секвенирования дает представление о генотипе и о гомологии изучаемых штаммов.

КОНСТРУИРОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ МОНОКЛОНАЛЬНОЙ:ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСТАНТ АФФИННОСТИ АНТИТЕЛ

Т.В. Замарина

ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора

Одно из перспективных направлений современной иммунодиагностики мелиоидоза — это разработка препаратов и тест-систем на основе моно-клональных антител (МКА) к антигену 200 kDa Burkholderiapseudomallei, предназначенных для обнаружения и идентификации вирулентных штаммов данного микроорганизма.

Для изготовления высокочувствительной тест-системы необходимо подбирать такие компоненты, которые бы проявляли высокую активность, не обладали кросс-реактивностью и были при этом вы-сокоафинными. Поэтому при выборе компонентов тест-систем (МКА первого и второго порядка) необходимо тщательно изучить их свойства.

Аффинность МКА характеризует прочность связывания активных центров молекулы антитела (АТ) с определенным участком (эпитопом) антигена (АГ). Этот параметр необходимо учитывать при подборе компонентов иммуноферментных тест-систем, так как технология постановки твердофазного иммуно-ферментного метода (ТИФМ) предусматривает этапы отмывки, во время которых возможно разрушение комплекса антиген—антитело.

Целью данной работы являлся подбор высокоаффинных МКА для экспериментальной тест-системы имму-ноферментной, предназначенной для поиска B. pseudomallei и антигенов этой патогенной буркхольдерии.

Аффинность количественно измеряли с помощью определения константы связывания по J.D. Beatty в процессе выполнения непрямого варианта ТИФМ. Для этого производили двукратное титрование образцов МКА в лунках планшетов с предварительно сорбированным антигеном 200 kDa B. pseudomallei 100 (контрольная серия) и строили графики зависимости величины оптической плотности от логарифма разведения и вычисляли разведение МКА, которое соответствовало двукратному уменьшению количества связавшихся с носителем антител.

Величины констант аффинности (Kaff) для МКА, взаимодействующих с антигеном 200 kDa B. pseudomallei 100, варьировали от 9 х 105 до 2 х 108 М-1, что свидетельствовало о разной степени связывания МКА с гомологичными им участками контрольного АГ.

В результате проведенного исследования были определены МКА в качестве компонентов экспериментальной тест-системы: смесь МКА (3C6+5C2+2A6) на твердой фазе и МКА 5C2, для изготовления ИПК. Kaff МКА 3C6, 5C2, 2A6 были равны 9 х 105 М-1, 2 х 108 М-1 и 8 х 107 М-1 соответственно.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ МИКОПЛАЗМ MYCOPLASMA HOMINIS И UREAPLASMA SPP. К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ

О.В. Заручейнова1, В.Н. Вербов1, Н.В. Семенов2

1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург

2ГБУЗ Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина, Санкт-Петербург

Урогенитальные микоплазмы M. hominis и Ureaplasma spp. вызывают такие распространенные заболевания, как эндометриты, негонококковые уретриты и бактериальные вагинозы. Они могут быть причиной преждевременных родов, рождения детей с малым весом и заражения крови. В настоящее время актуальной остается проблема повышения эффективности лабораторной диагностики этих инфекций. В большинстве случаев диагностика и лечение основываются на выявлении основного возбудителя без учета количественных критериев. Существует множество антимикробных препаратов, используемых при лечении мико-плазменных и уреаплазменных инфекций, но не проводится микробиологический контроль их эффективности (изучение антибиотикочувстви-тельности), предварительное определение которого при назначении лечения позволяет снизить удельный вес положительных результатов при повторном обследовании после курса антибиотико-терапии.

Целью данного исследования являлась оценка чувствительности M. hominis и Ureaplasma spp. к антибиотикам разных групп, наиболее часто назначаемых при лечении урогенитальных микоплаз-мозов, методом серийных разведений в жидких питательных средах с определением минимальных подавляющих концентраций (МПК). На клинических изолятах M. hominis и Ureaplasma spp. проводилось исследование их чувствительности к следующим антибиотикам: тетрациклинам (док-сициклин, тетрациклин), макролидам (джозами-цин, мидекамицин, эритромицин, кларитроми-цин, азитромицин, рокситромицин, спирамицин), фторхинолонам (офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, левофлоксацин, пефлоксацин, моксифлоксацин, ломефлоксацин), линкозамидам (клиндамицин, линкомицин) и аминогликозиду (гентамицин).

Результаты исследования показали, что группа тетрациклинов показала высокую активность к урогенитальным микоплазмам, только активность тетрациклина к Ureaplasma spp. оказалась умеренной. Также к Ureaplasma spp. практически все фторхинолоны показали достаточно высокую активность, как и макролиды, кроме спирамицина и мидекамицина. Для M. hominis из макролидов наиболее активным был джозамицин. Из фторхиноло-нов наибольшую активность к M. hominis проявили спарфлоксацин и моксифлоксацин. В отношении к M. hominis умеренную активность проявили лин-козамиды и гентамицин, к Ureaplasma spp. — только гентамицин.