CC BY
19
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
макопеи. Данные статистически обработаны методом параллельных линий.
Результаты. При статистической обработке методом параллельных линий результатов экспериментов на беспородных мышах, выявлено несоответствие обязательным критериям параллельности и линейности. Результаты на мышах линий B6D2F1 и Balb/с статистически не отличались.
Правильность результатов при подсчете ретикуло-цитов методом проточной цитометрии имеет смещение в пределах 1-8 %, световой микроскопии — 4-31%. Прецизионность результатов проточной цитометрии, в 2 раза выше, чем микроскопии. Доверительные интервалы рассчитанной активности, полученной подсчетом световым микроскопом, не соответствовали требованиям ЕФ.
Наличие обратной зависимости между величиной стандартного отклонения результатов и количеством подсчитанных клеток, свидетельствует о возможности повышения правильности и прецизионности результатов микроскопии путем увеличения количество подсчитываемых клеток.
Заключение. 1. Для определения специфической активности эритропоэтинов подходят линейные мыши. 2. Использование проточной цитометрии характеризуется высокой точностью и соответствует требованиям Европейской фармакопеи. Результаты световой иммерсионной микроскопии обладают меньшей точностью и не соответствуют требованиям Европейской Фармакопеи по доверительному интервалу. 3. В случае отсутствия проточного цитометра использование менее точной световой микроскопии требует отработки оптимальных условий (увеличения количества подсчитываемых клеток), что позволит соответствовать требованиям ЕФ, как по величине рассчитанной активности, так и по доверительному интервалу полученных результатов.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОВЕЗИКУЛ МАКРОФАГОВ ПЕРВОГО И ВТОРОГО ТИПА
Янковская А.А., Баторов Е.В., Шевела Е.Я.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Макрофаги являются гетерогенной популяцией клеток, и в зависимости от условий активации и функций можно выделить «классические», или провос-палительные, М1 и «альтернативные», или противоспали-
тельные М2 макрофаги. Исследованиями последних лет продемонстрирована значительная роль микровезикул (Мв) в реализации биологических эффектов различных типов клеток, однако спектр и свойства Мв, продуцируемых различными типами макрофагов и, в частности, М2, которые активно участвуют в процессах иммуномодуля-ции и репарации, остается неизученным.
Цель. Охарактеризовать Мв, секретируемые М1 и М2 макрофагами.
Материалы и методы. Макрофаги первого и второго типа генерировали из прилипающей фракции моно-нуклеарных клеток периферической крови доноров при культивировании в присутствии GM-CSF, в условиях нормального и сниженного содержания ростовых факторов сыворотки. Продукцию Мв оценивали в 48-часовых супернатантах М1 и М2 макрофагов, стандартизованных по количеству клеток. Мв получали методом препаративного ступенчатого ультрацентрифугирования, окрашивали моноклональными антителами (CD206, CD11c, HLA-DR, B7H1) и анализировали при помощи проточной цитофлуометрии.
Результаты. М1-специфичные Мв коэкспрессиру-ют характерные для М1 макрофагов маркеры — CD11c и HLA-DR, а также общие с М2 поверхностные структуры — маннозный рецептор (CD206) и коингибиторную молекулу B7H1. В ответ на стимуляцию эндотоксином спектр Мв значимо не изменялся. Среди Мв, продуцируемых М2 макрофагами, обнаруживалось достоверно меньше CD11c+ Мв в сочетании с увеличением относительного количества CD206+ Мв и коэкспрессирующих HLA-DR+ и B7H1+ Мв. При стимуляции ЛПС спектр также достоверно не менялся.
Заключение. Полученные предварительные результаты могут свидетельствовать о том, что М1 и М2 макрофаги продуцируют — спонтанно и при стимуляции эндотоксином — определенный спектр микровезикул, соответствующий определенному функциональному фенотипу.
КОМПЛЕКСНЫЙ ВАКЦИННЫЙ ПРЕПАРАТ ПРОТИВ ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ
Ястребова Н.Е., Овечко Н.Н., Токарская М.М., Елкина С.И.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАН, Москва, Россия
В настоящее время не существует вакцины, которая была бы эффективной в защите одновременно от кап-
ТАБЛИЦА. ОТНОСИТЕЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ МВ В НЕСТИМУЛИРОВАННЫХ И ЛПС-СТИМУЛИРОВАННЫХ 48-ЧАСОВЫХ СУПЕРНАТАНТАХ, СТАНДАРТИЗОВАННЫХ ПО КОЛИЧЕСТВУ М1 И М2 КЛЕТОК (К ТЕЗИСАМ ЯНКОВСКОЙ А.А. И ДР.)
Исследуемый антиген М1 М2
0 ЛПС 0 ЛПС
CD11c 3,38 4,7 1,5* 1,57*
HLA-DR 14,0 28,6 14,1 18,3
CD206 16,7 23,8 23,1* 27,6
B7H1 31,7 30,2 28,9 33,3
HLA-DR+B7H1 25,7 25,8 43,95* 46,4*
Примечание. Представлены медианные значения данных, полученных в четырех экспериментах. * р№ < 0,05 — достоверные различия по сравнению с соответствующими показателями М1 макрофагов.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
сульных и бескапсульных штаммов H. influenzae. Вместе с тем, распространенность, частота генерализации, тяжесть течения заболеваний и высокая летальность при инфекциях, обусловленных штаммами H. influenzae, принадлежащими к разным серотипам, требует разработки именно такого средства специфической профилактики. Известно, что комбинация углеводных составляющих с гликолипидами или гликопротеин-связывающим белком, может усилить захват антигена, гуморальный и клеточный ответы и развитие биологической памяти у взрослых и детей. Вероятно, углеводсодержащие препараты, такие как капсульный полисахарид, липоолигосахарид и препараты, содержащие белки наружной мембраны, а также комбинация некоторых из них, могут служить для создания нового вакцинного препарата, направленного на профилактику гемофильной инфекции, обусловленной как капсульными, так и бескапсульными штаммами H. influenzae. В связи с этим целью настоящего исследования явилось получение низкотоксичного препарата с высокой перекрестной активностью.
Объектами исследования являлись полученные из капсульного и бескапсульных штаммов препараты липо-олигосахаридов, белоксодержащие препараты, препараты, полученные при смешивании их с капсульным полисахаридом, их иммуногенная и протективная активность.
Нами на основании данных субтипирования, выбран наиболее распространенный в популяции бескап-сульный штамм H. influenzae — № 45 NTHi. Липоолиго-сахарид (ЛОС) 45NTHi обладал наиболее выраженной специфической и перекрестной активностью и в дозе 1 мкг защищал от заражения капсульным и бескапсуль-
ными штаммами H. influenzae 80-100% мышей. Деток-сикация солянокислым гидроксиламином позволила уменьшить токсичность исходного препарата ЛОС (LD50 = 0,063 мкг) в 25 раз (LD50 = 1,58 мкг). Кроме того, получен хроматографически очищенный белоксо-держащий препарат (БСП-ВЭ-3), содержащий в своем составе известные протективные белки наружной мембраны H. influenzae (Р2; Р5; Р6). Препарат содержал более 60% веществ белковой природы, суммарная примесь нуклеиновых кислот и углеводов не превышала 5%, был хроматографически гомогенен. Препарат обладал низкой токсичностью и в дозе 10 мкг/мышь защищал от гибели 50% мышей после заражения вирулентными культурами. Добавление к белковому препарату 1 мкг/мышь ЛОС усиливало перекрестную протективность обоих препаратов (80-100% мышей выживало). При иммунизации мышей смесью препаратов повышался уровень IgG-антител, как к ЛОС, так и к БСП. При этом, уровень IgG-антител к ЛОС был выше, что указывает на сильную стимуляцию гуморального иммунного ответа ЛОС и делает этот антиген более значимым в составе комплексного препарата для профилактики инфекций, обусловленных капсуль-ными и бескапсульными штаммами гемофильной палочки, чем БСП.
Таким образом, препарат, содержащий 10 мкг БСП-ВЭ-3 и 1 мкг ЛОС, обладал перекрестной протективной активностью, защищая 80-100 мышей от заражения летальными дозами капсульного и бескапсульного штаммов H. influenzae. Иммунизация мышей приводила к повышению уровня антител и к ЛОС, и к БСП.
