CC BY
36
№ 3 - 2007 г. 15.00.00 фармацевтические науки
УДК 615.225:543.25
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕНАЗЕПРИЛА ГИДРОХЛОРИДА ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
С.В. Чернышева, С.В. Терентьева
ГУ ВПО "Новосибирский государственный медицинский университет Росздрава",(г.
Новосибирск)
Разработана вольтамперометрическая методика количественного определения беназеприла гидрохлорида в модельном растворе на полуавтоматическом анализаторе ТА
- 2 (ООО НПП "Техноаналит", Россия, г. Томск). Параметры определения: потенциал электролиза - (-1,3) В; время электролиза - 210 с; постоянно-токовая форма развертки потенциала со скоростью 50 мВ/с. Аналитический сигнал беназеприла гидрохлорида регистрируют в диапазоне потенциалов от 0,2 В до 0,8 В. Время единичного анализа не превышало 10 - 15 мин. Погрешность методики составила не более 5 %.
Ключевые слова: ингибитор ангиотензин-превращающего фермента; количественное определение; инверсионная вольтамперомтерия; беназеприла гидрохлорид
Беназеприла гидрохлорид (3 - [([1 - этоксикарбонил - 3 - фенил - (1 Б)] - пропил) амино] -
2, 3, 4 - тетрагидро - 2 - оксо - 1 Н - 1 - (3 Б) - бензазепин - 1 - уксусной кислоты гидрохлорид), относящийся к группе ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента, оказывает положительный клинический эффект, который выражается в улучшении функционального класса, повышении толерантности к нагрузке, уменьшении эпизодов нарушения сердечного ритма и ишемии миокарда, а также в частичной оптимизации агрегационной функции тромбоцитов. Он проявляет выраженное влияние на уменьшение эпизодов снижения сегмента ST на электрокардиограмме и эпизодов безболевой ишемии миокарда Длительное лечение беназеприла гидрохлоридом способствует дальнейшему улучшению клинических и лабораторных показателей состояния больных. Побочных эффектов, требующих отмены препарата, не наблюдается [1, 2, 3].
Количественное определение беназеприла гидрохлорида является актуальным в оценке эффективности лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы при проведении фармакокинетических исследований. Начальным этапом данного вида исследований является подбор оптимальных условий количественного определения лекарственного вещества на основе высокочувствительного, специфичного и избирательного метода, которым является вольтамперометрия. Поэтому цель нашей работы состояла в разработке методики количественного определения беназеприла гидрохлорида в модельном растворе.
Для достижения поставленной цели требовалось подобрать условия электролиза на основе стандартного образца (природу электрода и электролита, время и потенциал электролиза, а также скорость и границы развертки), оценить воспроизводимость разработанной методики.
Материалы и методы. В качестве объекта исследования выбрали субстанцию беназеприла гидрохлорида с содержанием действующего вещества 99,9 %, представляющую собой белый кристаллический порошок растворимый в воде, легко растворимый в 96 % этаноле и метаноле; брутто-формула: C24H28N2O5. (R), предоставленную фирмой-изготовителем Novartis Farmacéutica S.A., Barbera (Испания).
Подбор оптимальных условий количественного определения осуществляли на полуавтоматическом анализаторе ТА - 2 (ООО НПП "Техноаналит", Россия, г. Томск) с программным обеспечением VALab 2000 в комплекте с IBM-совместимым компьютером PENTIUM и монитором HYUNDAI. К автоматическому анализатору прилагались ячейки со встроенными электродами и комплект электродов: ртутно-пленочный, стеклоуглеродный, графитовый, платиновый и золотой, электрод сравнения хлор-серебряный.
Результаты исследований. На начальном этапе разработки методики количественного определения беназеприла гидрохлорида выбрали оптимальные условия обнаружения аналитического сигнала.
Оптимальным признали золотой игольчатый электрод, так как только на нем выявили сигнал беназеприла гидрохлорида (рис. 1).
В качестве фоновых электролитов исследовали растворы Бриттона-Робинсона; хлоридов натрия, лития, кальция; сульфатов и нитратов натрия, калия, аммония и ряда других квалификации ос.ч. и х.ч. Однако аналитические сигналы беназеприла гидрохлорида на перечисленных фоновых электролитах были нечеткими и плохо воспроизводимыми, либо вообще отсутствовали. Тогда как раствор аммония фосфорнокислый двузамещенный обеспечивал необходимые условия для обработки сигнала и экспресс-анализа. Оптимальная концентрация фона составила 0,005 моль/л. В более концентрированных растворах не наблюдали прироста от добавки при наличии большого остаточного тока, тогда как разбавление приводило к неустойчивости во времени. Выбранная же концентрация обеспечивала минимальный остаточный ток и максимальную величину аналитического сигнала.
Проведя развертку вольтамперограммы в катодном и анодном направлениях, пришли к заключению о целесообразности использования метода анодной вольтамперометрии с предварительным накоплением, ввиду того, что в данном направлении сигнал беназеприла гидрохлорида более выражен.
На следующем этапе исследования установили оптимальные условия электролиза (время и потенциал накопления, а также оптимальные границы развертки потенциала).
Определяющим фактором методики является потенциал накопления, который должен способствовать максимально полному выделению исследуемого вещества без мешающего влияния других ионов. Экспериментальным путем установили оптимальное значение данного параметра, составляющее (- 1,3) В, так как в данном случае наблюдали наибольшее значение силы тока, тогда как смещение потенциала накопления в более положительную или более отрицательную область приводило к уменьшению величины регистрируемого параметра (рис. 2).
Для определения оптимального времени электролиза, с целью получения более выраженного сигнала, апробировали область значений данного показателя от 30 до 600 с. Высота сигнала беназеприла гидрохлорида возрастала пропорционально времени пропускания до 210 с, при этом наблюдали максимальное значение величины тока растворения накопленных осадков с поверхности золотого электрода и хорошую воспроизводимость результатов. При времени накопления менее 210 с величина тока растворения не достигала максимального значения, что снижало чувствительность определения исследуемого вещества. При увеличении параметра более чем 210 с, происходило насыщение осадка на электроде, что приводило к размыванию аналитического сигнала беназеприла гидрохлорида, и затруднению обработки полярограмм (рис. 3).
Важным этапом в подборе условий электролиза является определение границ развертки. Данный параметр установили при постоянстве начального потенциала (- 1,3) В, соответствующего потенциалу электролиза. Оптимальное значение верхней границы развертки потенциала составило 1,5 В. Изменение данного значения в более положительную область приводило к размыванию пика, расширение же области приводило к увеличению предельного тока, что затрудняло обработку сигнала. Таким образом, оптимальная область развертки потенциала соответствовала значениям: от (-1,3) до 1,5 В.
Наряду с имеющимися параметрами, экспериментальным путем определили рациональную скорость развертки потенциала, равную 50 мВ/с, при замедлении или ускорении которой границы аналитического сигнала становились нечеткими, что затрудняло обработку поляризационных кривых.
Минимальная определяемая концентрация беназеприла гидрохлорида составила 1 нг/л.
При построении графика зависимости силы тока в цепи от концентрации беназеприла гидрохлорида в датчике было показано, что сила тока возрастала до определенного момента, а затем резко уменьшалась. Подобная зависимость характерна для веществ органической природы и связана с тем, что их крупные молекулы постепенно занимают активные центры электрода, уменьшая тем самым его рабочую поверхность.
С целью проверки воспроизводимости результатов определения беназеприла гидрохлорида по разработанной методике провели тест "введено - найдено" для ста двадцати проб с концентрацией 991,0; 99,1; 9,91; 0,991; 0,0991 и 0,00991 мг/л, по двадцать проб для каждой (табл.).
Для этого в пластиковый стаканчик емкостью 40 мл помещали 20 мл 0,005 моль/л раствора аммония фосфорнокислого двузамещенного. Для исключения мешающего влияния кислорода раствор деаэрировали азотом в течение 210 с и проводили электролиз при следующих условиях: потенциал электролиза - (-1,3) В, время электролиза - 210 с. Фиксировали вольтамперограмму при постоянно-токовой форме развертки со скоростью 50 мВ/с. Отсутствие пиков на поляризационной кривой свидетельствовало о чистоте фона. Затем добавляли 0,01 мл стандартного раствора беназеприла гидрохлорида определенной концентрации, перемешивали и проводили электрохимическое накопление при тех же условиях. Аналитический сигнал беназеприла гидрохлорида регистрировали как пробу в диапазоне потенциалов от 0,2 В до 0,8 В. В качестве внутреннего стандарта использовали такое же количество раствора беназеприла гидрохлорида и высоту суммарного сигнала замеряли как пробу с добавкой. Время единичного анализа не превышало 10-15 мин.
Метрологические характеристики разработанной методики
(£, число степеней свободы, - 19; Р, доверительная вероятность, - 95 %; ^Р; S), критерий
Стьюдента (табл.), - 2,09)
№ п/п Истинное значение измеряемой величины. мг/л и Средние выборки. X Дисперсия. S2 Стандартное отклонение. S Полуширина доверительного интервала, результат отдельного определения. ±АХ Относи- тельная почет- ность отдельной варианты. S, % Относи- тельная погреш- ность среднего результата, £ , % Коэффи- циент Стьюдента. получении й расчетным путём. t-ЕЫЧ
I 991.000 990,419 3,679 1,918 4,001 4,05 0,91 1,35
1 99.100 99.060 2,485 1,577 3,295 3,33 0,74 0,11
$ 9,910 9,903 6,725 • 10"3 8,201 ■ 10*! 0,171 1,73 039 0,14
4 0,991 9.908 • 10"1 2,779 • 10-* 1,667 ■ 10-: 3,484 • IO"2 3,52 0,78 0,05
5 0,0991 9,907 • IO"2 7369 • IO"7 8,585 ■ КИ 1,794 • 10-3 1,81 0,40 0,16
6 0.00991 9,909 10-3 1,676 10-* 1,295 10-4 2,706 10“4 2,73 0,61 0,05
Погрешность методики составила не более 5 %, что соответствует погрешности вольтамперометрического метода, причем коэффициент Стьюдента, полученный расчетным путем, во всех случаях не превышает табличный.
Выводы. В результате проведенных исследований выявлена способность и подобраны рациональные условия концентрирования беназеприла гидрохлорида на поверхности золотого электрода, сопровождающиеся регистрацией сигнала вещества на вольтамперограмме. Установленные параметры анализа дают возможность с достаточно высокой чувствительностью и экспрессностью определять содержание беназеприла гидрохлорида в модельных растворах методом анодной вольтамперометрии с накоплением, что в дальнейшем позволяет перенести разработанную методику на биологические среды.
Список литературы
1. Божко В.В. Применение беназеприла при гипертонической болезни / В.В. Божко // Кардиологический журнал [Электронный ресурс]. - Электрон. журн. - 1998. - N 12.
- http://www.rql.net.ua/cardio_j/1998/12/bozko.htm.
2. ЗадионченкоВ.С. Сравнительная эффективность лотензина и капотена у больных хронической сердечной недостаточностью / В.С. Задионченко, Н.Ю. Тимофеева, В.В. Ли, С.С. Суворова // Терапевтический архив. - 2004. - N 4. - С. 54 - 56.
3. РЛС Энциклопедия лекарств. Изд. 10, перераб., доп. / Под ред. Машковского М.Д. -М.: <РЛС - 2003>, 2002. - 1438 с.
