CC BY
121
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 615.155.392.8-036.12:575.08
КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА УРОВНЯ ТРАНСКРИПТА BCR-ABLm!iI У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ ПРИ ПОМОЩИ АЛЛЕЛЬ-СПЕЦИФИЧНОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ
РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ
Абдуллаев А.О.1, Скоробогатова А.В.2, Треглазова С.А.1 Степанова Е.А.1, Бидерман Б.В.1, Шухов О.А.1, Челышева Е.Ю.1, Туркина А.Г.1, Судариков А.Б.1
1ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, 125167, Москва, Россия; 2ФГОУ ВПО Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, 119991, Россия
Резюме. Резистентность к ингибиторам тирозинкиназ и прогрессия клона трансформированных клеток при хроническом миелолейкозе (ХМЛ) наиболее часто ассоциированы с мутацией T315I-киназного домена химерного гена BCR-ABL. Частота выявления мутации T315I широко варьирует в зависимости от фазы заболевания и используемых методов ее диагностики. В настоящее время для диагностики мутаций киназного домена гена BCR-ABL, как правило, применяют метод прямого секвенирования. Однако количественный анализ мутации T315I, основанный на аллель-специфичной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ), обладает большей чувствительностью по сравнению с прямым секвенированием, является более доступным и менее трудоемким методом. Данные преимущества позволяют использовать аллель-специфичную ПЦР-РВ для раннего выявления мутантного клона BCR-ABL™5' у больных ХМЛ.
Ключевые слова:хронический миелолейкоз; BCR-ABL; мутация T315I; полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
QUANTITATIVE ALLELE-SPECIFIC REAL-TIME PCR FOR ESTIMATION OF BCR-ABL7315- MUTANT CLONE IN PATIENTS WITH CHRONIC MYELOID LEUKEMIA
AbdullayevA.O.', Skorobogatova A.V.2, TreglazovaS.A.', Stepanova E.A.', Biderman B.V.', ShukhovO.A.', Chelysheva E.Yu.',
Turkina A.G.', Sudarikov A.B.'
'Hematology Research Center, Moscow, Russia; 2M.V.Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia
Summary. Resistance to tyrosine kinase inhibitors and progression of the mutant clone in patients with chronic myeloid leukemia are often associated with T315I mutation of the BCR-ABL kinase domain. Estimation of T315I mutation load varies with the disease phase and assay methods. Despite the low sensitivity, direct sequencing is mostly used to study the presence of BCR-ABL kinase domain mutations. Comparing to direct sequencing, quantitative allele-specific real-time PCR is more sensitive, available and simple technique. These advantages allow using of quantitative allele-specific real-time PCR for early detection of BCR-ABLT315' - mutant clone in patients with chronic myeloid leukemia.
Key words: chronic myeloid leukemia; BCR-ABL; T315I mutation; real-time PCR.
Хронический миелолейкоз (ХМЛ) - миелопроли-феративное заболевание, обусловленное реципрок-ной транслокацией ^9;22)^34^11) и образованием слитного гена BCR-ABL, кодирующего белок BCR-ABL р210 [1]. Аномальный белок обладает повышенной тирозинкиназной активностью и играет ключевую роль в активации сигнальных путей, способствующих пролиферации клеток костного мозга, ингибированию апоптоза и снижению клеточной адгезии [2-4].
Для корреспонденции:
Абдуллаев Адхамжон Одилович, кандидат мед. наук, старший научный сотрудник лаборатории молекулярной гематологии ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России. Адрес: 125167, Москва, Новый Зыковский проезд, д.4 а. Телефон: +7(495) 612-65-11. E-mail: adham_abdullaev@mail.ru
Corresponding author:
AbdullaevAdhamzhon, MD, PhD (adham_abdullaev@mail.ru).
Использование в клинической практике ингибиторов тирозинкиназ (ИТК) позволило значительно увеличить продолжительность жизни больных ХМЛ и стало «золотым стандартом» терапии ХМЛ во всем мире [5-7]. Тем не менее у части больных ХМЛ со временем может проявляться резистентность к препаратам ИТК, обусловленная более 70 точечными мутациями киназного домена (КД) химерного гена BCR-ABL [8]. Клинико-фармакологический эффект большинства препаратов ИТК реализуется через сте-рическое взаимодействие с остатком аминокислоты треонина (Thr315) в положение 315 белка BCR-ABL p210. Замена треонина (Thr315) на изолейцин (Ile315) препятствует взаимосвязи химерного белка BCR-ABL p210 с препаратами ИТК и является основной причиной неудачи терапии препаратами ИТК и прогрессии ХМЛ [9-11].
Мутантный клон BCR-ABLT3151 может быть первичным или появиться в процессе лечения за счет
Таблица 1
Сравнительные характеристики методов диагностики мутации T315I
Метод
Чувствительность, %
Преимущества
Недостатки
Секвенирование по Сэнгеру 15-20 Денатурирующая
жидкостная хроматография 10-15 высокого давления
Пиросеквенирование 1-5
Аллель-специфичная ПЦР-РВ 0,01-0,1
Доступность и возможность чтения КД с двух сторон
Возможность исследовать несколько мутаций одновременно
Доступность, чувствительность, возможность количественного анализа
Высокая чувствительность и количественный анализ, доступность
Дороговизна, трудоемкость, низкая чувствительность, невозможность количественной оценки
Трудоемкость, низкая чувствительность, невозможность количественной оценки
Возможность анализа только коротких фрагментов киназного домена
Необходимость подбора праймеров и зондов для каждой конкретной мутации
селективного ингибирования ИТК чувствительных клонов [12]. В настоящее время для диагностики мутации Т3151 применяют различные методы: прямое секвенирование [13], денатурирующая жидкостная хроматография высокого давления [14, 15], пиросеквенирование [16], электрофорез в двойном денатурирующем градиенте [17] и аллель-специфичная по-лимеразная цепная реакция (ПЦР) [18, 19] (табл. 1).
Относительно высокая чувствительность и возможность динамического мониторинга BCR-ABLT315I мутантного клона явилась причиной разработки в лаборатории молекулярной гематологии ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России методики с использованием количественной аллель-специфичной ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для выявления и количественной оценки соотношения BCR-ABLT315I и «дикого» BCR-ABL-положительного клона у больных ХМЛ.
Цель исследования - разработка и апробация способа количественного определения мутации Т3151 киназного домена гена BCR-ABL на основе аллель-специфичной ПЦР-РВ в образцах крови и костного мозга больных ХМЛ, резистентных к препаратам ИТК.
Материалы и методы
В исследование включены образцы мРНК от 65 больных ХМЛ с разными фазами заболевания и с уровнем транскрипта BCR-ABL р210 от 1% и выше. У 11 из 65 больных не было оптимального ответа на терапию препаратами ИТК.
Выделение мРНК проводили из клеток 2,5 мл крови или 1 мл костного мозга с помощью набора реагентов РИБО-золь-D («Интерлабсервис», Россия) согласно инструкции производителя. Получение кДНК проводили с помощью набора реагентов со случайными гексамерами («Синтол», Россия) согласно инструкции производителя. Количественную оценку уровня транскрипта мРНК BCR-ABL р210 проводили методом ПЦР-РВ с гибриди-зационно-флюоресцентной детекцией с использованием прибора Rotor-Gene 6000 («Corbett Research», Австралия) и набора реагентов Ампли Сенс Лейкоз квант M-bcr-FRT («Интерлабсервис», Россия) согласно инструкции производителя. Исследование мутационного статуса участка химерного гена BCR-ABL р210 проводили с помощью метода прямого секвенирования по Сэнгеру [20]. Получение необходимого количества участка химерного гена BCR-ABL р210 для прямого секвенирования осуществляли путем проведения двухраундового ПЦР с использованием набора реактивов ПЦР-РВ («Синтол», Россия) с помощью подобранных праймеров (рис. 1).
M-bcr BCR-ABL р210
BCR(22qll) ABL(9q34)
BCR exil BCR ех12 BCR ех12 8CR ех13 BCR ех14 ABL ех2 ABL ехЗ ABL ех4 KD ABL ех7 ABL exil
BCR13F ABL4F ABL7R ABLUR
Рис. 1. Расположение праймеров, использованных для проведения ПЦР. KD (kinase domain) - киназный домен.
Рис. 2. Расположение праймеров и зондов, использованных для исследования мутации T315I.
Таблица 2
Нуклеотидные последовательности праймеров для ПЦР
Двух-
раундовый Название Последовательность нуклеотидов 5'-3'
ПЦР
Первый
раунд
ПЦР
Второй раунд ПЦР и секвени-рование
BCR13F 5'TCCGCTGACCATCAAYAAGGA3'
ABL 11R ' CCTTCTCTAGCAGCTCATACACCTG3' ABL4F 5'TGGTTCATCATCATTCAACGG3 ABL7R 5'GGACATGCCATAGGTAGCA3'
Амплификацию проводили в следующем режиме: при температуре 95°С - 10 мин 30 циклов, при температуре 95°С - 30 с, при 60°С - 30 с и при 72°С - 90 с (первый раунд ПЦР) и при температуре 95°С - 10 мин, 40 циклов: при температуре 95°С - 30 с, при 60°С - 30 с, при 72°С -60 с (второй раунд ПЦР). Последовательности использованных праймеров приведены в табл. 2.
Конечный ПЦР-продукт очищали в 2% агарозном геле, элюцию из геля проводили с использованием набора реагентов Diatom DNA Elution («Биоком», Россия) согласно инструкции производителя. Полученные фрагменты гена ABL секвенировали в обоих направлениях с использованием реактивов BigDye Terminator 1.1. («Applied Biosystems», США) на автоматическом секвенаторе ABI3130 («Applied Biosystems», США). Полученную нуклеотид-ную последовательность сравнивали с референсной последовательностью транскрипта c-ABL 1 (NCBI Reference Sequence: NM_005157.4).
Количественную оценку содержания BCR-ABLT3151 -мутантного клона осуществляли с использованием прибора Rotor-Gene 6000 («Corbett Research», Австралия) и набора реагентов для проведения ПЦР-РВ («Синтол», Россия). ПЦР-РВ проводили в объеме реакционной смеси 25 мкл, каждая проба содержала 0,2 мкл продукта первого этапа амплификации, 7,5 пкмоль каждого праймера и 0,5 пкмоль зонда. Амплификацию проводили в следующем режиме: при температуре 95°С - 10 мин, 45 циклов в режиме при температуре 95°С - 15 с, при 60°С - 60 с. Для проведения АС ПЦР-РВ подобраны [21] (рис. 2, табл. 3).
Количественную оценку результатов ПЦР проводили по формуле: BCR-ABLT3151 % = 2-ACt • 100%, где ACt =
Ct T315I - et
BCR-ABL BCR-ABL.
Таблица 3
Нуклеотидные последовательности праймеров и зондов для аллель-специфичной ПЦР-РВ [21]
Мутация
Последовательность нуклеотидов 5'-3'
BCR-ABL р210
T315I
ENF501 5'TCCGCTGACCATCAAYAAGGA3'
ENP541 5'FAM CCCTTCAGCGGCCAGTAGCATCTGA BQH1 3' ENR561 5'CACTCAGACCCTGAGGCTCAA3'
T315I_f 5'GCCCCCGTTCTATATCATAAT3'
T315I_pr 5'FAM TACATGGCCACTCAGATCTCGTCA RTQ1 3' T315I_mt 5'GGATGAAGTTTTTCTTCTCCAG3'
Результаты и обсуждение
Проанализировано 65 образцов мРНК клеток крови и костного мозга больных ХМЛ с различными фазами заболевания. У 3 (27%) из 11 больных был выявлен клон с мутацией T315I в количестве 2,73, 6,75 и 100. Образец со 100% содержанием BCR-ABLT3151 - мутантного клона принадлежал больному А., длительно страдающему ХМЛ. У больного А. наблюдалась резистентность ко всем зарегистрированным в РФ препаратам ИТК. Уровень экспрессии мРНК (BCR-ABL/ABL • 100%) BCR-ABL p210 в образце составлял 29,3%. Кривые ПЦР-РВ данного образца и расчеты представлены на рис. 3.
Для подтверждения результатов ПЦР-РВ провели секвенирование данного образца. Результаты секве-нирования представлены на рис. 4.
Для сравнения чувствительности прямого секве-нирования и аллель-специфичной ПЦР-РВ приготовили серийные 2-кратные разведения лейкоцитов больного А. с клетками линии К562 в соотношениях 10, 5, 2,5, 1 и 0,1%. Результаты количественной аллель-специфичной ПЦР-РВ с разведениями 10, 5, 2,5, 1 и 0,1% приведены на рис. 5.
Нижний предел чувствительности прямого секве-нирования составил 15% (рис. 6).
Таким образом, вариант количественной оценки мутации T315I, основанный на аллель-специфичной ПЦР-РВ, обладает большей чувствительностью по
Рис. 3. Кривые количественной аллель-специфичной ПЦР-РВ образца со 100% содержанием мутантного клона BCR-ABU3151.
Рис. 4. Нуклеотидная последовательность образца со 100% содержанием мутантного клона BCR-ABU3151. Мутация 944C>T (T315I) указана стрелкой.
Рис. 5. Кривые аллель-специфичной ПЦР-РВ с калибровочными разведениями.
Рис. 6. Нуклеотидная последовательность образца с 15% мутацией 944C>T (указана стрелкой).
сравнению с прямым секвенированием по Сэнгеру, что позволяет использовать данный метод для раннего выявления BCR-ABL13151 - мутантного клона у больных ХМЛ.
Однако остается открытым вопрос, касающийся прогностических значений малых концентраций клона BCR-ABL13151, обнаруживаемых с помощью аллель-специфичной ПЦР-РВ. По данным некоторых исследований [22, 23], низкие концентрации, выявляемые только при аллель-специфичной ПЦР-РВ, не имеют значения в достижении большого молекулярного ответа (БМО) и прогнозе выживаемости больных ХМЛ. T. Lange и соавт. [22] показали, что терапия препаратами ИТК второго поколения (дазатиниб и нилоти-ниб) позволила к 12 мес достичь БМО у 8 (44%) из 18 больных ХМЛ при наличии мутации BCR-ABLT3151. Ранее S. Willis и соавт. [23] отметили отсутствие отрицательного влияния низкого содержания клона BCR-ABL13151 на выживаемость больных ХМЛ. Исходя из этого, можно предположить, что клинико-прогно-стическое значение имеет только положительная динамика роста уровня мутантного клона BCR-ABL13151. Мы считаем, что молекулярный мониторинг низкоуровневых клонов BCR-ABL13151 с помощью метода аллель-специфичной ПЦР-РВ может стать высоко-
чувствительным маркером для оценки минимальной остаточной болезни при различных методах терапии ХМЛ. Кроме того, высокая специфичность метода и скорость выполнения ПЦР-РВ являются преимуществом для быстрого получения результатов и принятия клинических решений.
ЛИТЕРАТУРА [REFERENCES]
1. Sawyers C.L. Chronic myeloid leukemia. N. Engl. J. Med. 1999; 340(17): 1330-40.
2. Cilloni D., Saglio G. Molecular pathways: BCR-ABL. Clin. Cancer Res. 2012; 18(4): 930-7.
3. Pendergast A.M., Muller A.J., Havlik M.H., Maru Y., Witte O.N. BCR sequences essential for transformation by the BCR-ABL oncogene bind to the ABL SH2 regulatory domain in a non-phosphotyrosine dependent manner. Cell. 1991; 66(1): 161-71.
4. Zhang X., Subrahmanyam R., Wong R., GrossA.W. , Ren R. The NH(2)-terminal coiled-coil domain and tyrosine 177 play important roles in induction of a myeloproliferative disease in mice by Bcr-Abl. Mol.
Cell. Biol. 2001; 21(3): 840-53.
5. Hehlmann R., Hochhaus A., Baccarani M. Chronic myeloid leukemia. Lancet. 2007; 370 (9584): 342-50.
6. Kantarjian H., O'Brien S., Jabbour E., Garcia-Manero G., Quintas-Cardama A., Shan J., et al. Improved survival in chronic myeloid leukemia since the introduction of imatinib therapy:a single-institution historical experience. Blood. 2012; 119(9): 1981-87.
7. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А. Эффективность терапии иматиниба мезилатом (гливеком) в хронической фазе миелолейкоза. Терапевтический архив. 2003; 8: 62-7.
[Turkina A.G., Khoroshko N.D., Druzhkova G.A. The effectiveness of therapy imatinib mesylate (Gleevec) in chronic phase of myeloid leukemia. Terapevticheskiy archiv. 2003; 8: 62-7]. (in Russian)
8. Soverini S., Hochhaus A., Nicolini F.E., Gruber F., Lange T., Saglio G., et al. BCR-ABL kinase domain mutation analysis in chronic myeloid leukemia patients treated with tyrosine kinase inhibitors: recommendations from an expert panel on behalf of European LeukemiaNet. Blood. 2011; 118 (5): 1208—15. Hughes T., Saglio G., Branford S., Soverin S., Kim D.W., Muller M.C., et al. Impact of baseline BCR-ABL mutations on response to nilotinib in patients with chronic myeloid leukemia in chronic phase. J. Clin. Oncol. 2009; 27(25): 4204-10. doi: 10.1200/JC0.2009.21.8230
10. Bradeen H.A., Eide C.A., O'Hare T., Johnson K.J., Willis S.G., Lee F.Y., et al. Comparison of imatinib mesylate, dasatinib (BMS-354825), and nilotinib (AMN107) in an N-ethyl-N-nitrosourea (ENU)-based mutagenesis screen: high efficacy of drug combinations. Blood. 2006; 108(7): 2332-8.
11. Wei G., Rafiyath S., Liu D. First-line treatment for chronic myeloid leukemia: dasatinib, nilotinib, or imatinib. J. Hematol. Oncol. 2010; 3: 47. doi: 10.1186/1756-8722-3-47.
12. Roche-Lestienne C., Soenen-Cornu V., Grardel-Duflos N., Lai J.L., Philippe N., Facon T., et al. Several types of mutations of the Abl gene can be found in chronic myeloid leukemia patients resistant to STI571, and they can pre-exist to the onset of treatment. Blood. 2002; 100(3): 1014-8.
13. Kang H.Y., Hwang J.Y., Kim S.H., Goh H., Kim M., Kim D.W. Comparison of allele specific oligonucleotide-polymerase chain reaction and direct sequencing for high throughput screening of ABL kinase domain mutations in chronic myeloid leukemia resistant to imatinib. Haematologica. 2006; 9(5): 659—62.
14. Deininger M.W., McGreevey L., Willis S., Bainbridge T.M., Druker B.J., Heinrich M.C. Detection of ABL kinase domain mutations with denaturing high-performance liquid chromato-graphy. Leukemia. 2004; 18(4): 864-71.
9
15. Soverini S., Martinelli G., Amabile M., Poerio A., Bianchini M., Rosti G., et al. Denaturing-HPLC-based assay for detection of ABL mutations in chronic myeloid leukemia patients resistant to Imatinib. Clin. Chem. 2004; 50(7): 1205-13.
16. Schumacher J.A., Szankasi P., Bahler D.W., Ho A.K., Kelley T. W. A pyrosequencing-based test for detection and relative quantification of the BCR-ABL1 T315I point mutation. J. Clin. Pathol. 2011; 64(7): 618-25.
17. Sorel N., Chazelas F., Brizard A., Chomel J.C. Double-gradient-denaturinggradient gel electrophoresis for mutation screening of the BCR-ABL tyrosine kinase domain in chronic myeloid leukemia patients. Clin. Chem. 2005; 51(7): 1263-6.
18. Chomel J.C., Sorel N., Bonnet M.L., Bertrand A., Brizard F., Saulnier P. J., et al. Quantitative monitoring of the T315I mutation in patients with chronic myeloid leukemia (CML). Leuk. Res. 2009; 33(4): 551-5.
19. Manrique Arechavaleta G., Scholl V., Perez V., Bittencourt R., Moellmann A., Hassan R., et al. Rapid and sensitive allele-specif-ic (AS)-RT-PCR assay for detection of T315I mutation in chronic myeloid leukemia patients treated with tyrosinekinase inhibitors. Clin. Exp. Med. 2011; 11(1): 55-9.
20. Sanger F., Niclein S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977; 74(12): 5463-67.
21. Gabert J., Beillard E., van der Velden V.H., Bi W., Grimwade D., Pallisgaard N., et al. Standardization and quality control studies of 'real-time' quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia - a Europe Against Cancer program. Leukemia. 2003; 17: 2318-57. Available at: http://www.nature.com/leu/ journal/v17/n12/pdf/2403135a.pdf
22. Lange T., Ernst T., Gruber F.X., Maier J., Cross M., Müller M.C., et al. The quantitative level of T315I mutated BCR-ABL predicts for major molecular response to second-line nilotinib or dasatinib treatment in patients with chronic myeloid leukemia. Haematologica. 2013; 98(5): 714-17.
23. Willis S.G., Lange T., Demehri S., Otto S., Crossman L., Nie-derwieser D., et al. High sensitivity detection of BCR-ABL ki-nase domain mutations in imatinib-naive patients: correlation with clonal cytogenetic evolution but not response to therapy. Blood. 2005; 106(6): 2128-37.
Поступила 21.07.14 Received 21.07.14
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 616.155.194.7-085.275.2-036.8
КОМБИНИРОВАННАЯ ИММУНОСУПРЕССИВНАЯ ТЕРАПИЯ БОЛЬНЫХ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИЕЙ: ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОВТОРНЫХ КУРСОВ АНТИТИМОЦИТАРНОГО ГЛОБУЛИНА
Михайлова Е.А., Фидарова З.Т., Устинова Е.Н., Троицкая В.В., Гальцева И.В., Шитарева И.В., Цыба Н.Н., Паровичникова Е.Н., Савченко В.Г.
ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, 125167, Москва
Резюме. Цель настоящей работы - изучить эффективность повторных курсов терапии антитимо-цитарным глобулином (АТГ), алгоритм их проведения в сочетании с длительным приемом циклоспорина А (ЦсА) и определить частоту выявления и динамику клона клеток, характерного для пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ-клон) у больных апластической анемией (АА) на различных этапах имму-носупрессивной терапии (ИСТ). Использованный алгоритм лечения позволил у большинства больных АА (84,9%) получить положительный ответ, а у 76,7% ответивших больных была отмечена ремиссия, из них у 76,8% полная ремиссия. Большинство больных (61,6%) ответили на терапию после 1-го курса АТГ, при этом через 3 мес от начала лечения клинико-гематологическое улучшение было достигнуто уже у 52,8%, а общий ответ через 6 мес - у 83,4% больных. Этот период времени (3-6 мес от начала ИСТ) в случаях отсутствия ответа на 1-й курс АТГ следует рассматривать как оптимальный для проведения 2-го курса АТГ. После 2-го курса АТГ в данном исследовании положительный ответ был получен еще у 16 больных, т.е. после двух курсов АТГ положительно ответили 80,2% больных. Больные АА, не ответившие после 2-го курса АтГ через 6-9 мес от начала ИСТ, могут быть отнесены к группе больных рефрактерной АА. Общая и бессобытийная 7-летняя выживаемость больных АА, получавших комбинированную ИСТ, составила 89% (95% доверительный интервал - ДИ 83-96%) и 93% (95% Ди 88-97%) соответственно. До проведения ИСТ ПНГ-клон был выявлен у 20 (61%) из 33 больных АА, прослеженных в динамике. Медиана ПНГ-клона по гранулоцитам составила 1,93% (0,1-99,5%). Появление и дальнейшая персистенция клона отмечены у 6 (46%) из 13 больных, у которых ПНГ-клон до начала ИСТ не обнаруживали. У всех 6 больных был получен ответ на ИСТ. У 17 (85%) из 20 больных АА, протекающей с ПНГ-клоном, обнаруженным до начала ИСТ, наблюдался ответ на лечение. У остальных 3 (15%) больных отмечено уменьшение размера ПНГ-клона более чем в 5 раз, вплоть до полной элиминации у 1 больного. Среди больных АА, у которых до начала лечения ПНГ-клон не обнаруживался, на лечение ответили 8 (61%) больных. Результаты нашего исследования подтверждают вероятность ответа на ИСТ больных АА, протекающей с ПНГ-клоном. Анализ результатов комбинированной ИСТ у больных АА показал высокую эффективность программы, включающей повторные курсы АТГ и длительную терапию ЦсА.
Ключевые слова: апластическая анемия; иммуносупрессивная терапия; повторные курсы анти-тимоцитарного глобулина; пароксизмальная ночная гемоглобинурия; ПНГ-клон.
COMBINED IMMUNOSUPPRESSIVE THERAPY OF PATIENTS WITH APLASTIC ANEMIA: EFFICIENCY OF REPEATED ANTITHYMOCYTIC GLOBULIN COURSES
Mikhailova E.A., Fidarova Z.T., Ustinova E.N., Troitskaya V.V., Galtseva I.V., Shitareva I.V., Tsyba N.N., Parovichnikova E.N.,
Savchenko V.G.
Hematology Research Center, Moscow, 125167, Russia.
Summary. The efficiency of repeated courses of antithymocytic globulin (ATG) and algorithm thereof in combination with long-term cyclosporin A (CsA) therapy were studied. The incidence and time course of the cell clone characteristic of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH clone) were studied in patients
