CC BY
122
УДК 591.85 : 598.1
Б01 10.21685/2307-9150-2019-1-14
А. В. Павлов
КЛЮЧЕВЫЕ МОМЕНТЫ ГЕМАТОЛОГИИ РЕПТИЛИЙ: ОСОБЕННОСТИ ОЦЕНКИ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ЧАСТИ КРОВИ
Аннотация.
Актуальность и цели. В герпетологии гематологические показатели широко используются в ветеринарной практике, в эколого-биологических исследованиях и в качестве комплексного биоиндикатора. Разночтения в интерпретации результатов разных исследований обусловлены особенностями гемопоэза рептилий и вариабельностью морфологии лейкоцитов, что ведет к искажениям реальной картины. Цель работы - обобщение критически значимых многовариантных моментов в гематологии рептилий, имеющих существенную значимость для теории и практики.
Материалы и методы. В работе использованы материалы автора по морфологии лейкоцитов девяти видов рептилий. Обобщены собственные и литературные данные. Рассмотрены наиболее дискуссионные особенности лейкоцитарной части крови и ее интерпретации.
Результаты. Выделены три типа ошибок в морфологии клеток белой крови: сходство тромбоцитов и лимфоцитов, нейтрофильно/гетерофильной и мо-ноцитарно/азурофильной группы лейкоцитов. Тромбоциты и лимфоциты четко диагностируются по комплексу: цитоплазма, ядро. Наиболее надежна структура хроматина ядра. Считается, что у рептилий отсутствуют нейтро-филы, их функции выполняют гетерофилы. По морфологическим признакам у ряда видов выделены нейтрофилы, подобные таковым млекопитающих. Природа моноцитов и азурофилов остается дискуссионной: вероятно, у змей они имеют нейтрофильное происхождение, у ящериц - близки к моноцитам. Спорные моменты также связаны с терминологическими трудностями и разнообразием токсически измененных лейкоцитов. Количественные показатели позволяют выявлять природу лейкоцитов. Пристальное внимание необходимо уделять объему выборочных данных на всех уровнях исследования. Абсолютные и относительные показатели содержания лейкоцитов крови могут быть интерпретированы двояко.
Заключение. На сегодняшний день затруднения в гематологии рептилий окончательно не преодолены. Для оценки качества исследований и их интерпретации предложен методический перечень признаков, позволяющий определять допустимый круг решаемых задач: 1) время и место получения гематологического материала; 2) пол, возраст животных, размер выборки каждой группы; 3) клинический статус особей (как минимум, размерные и весовые показатели); 4) количество мазков от каждой особи; 5) описание техники приготовления, фиксации и окраски мазков; 6) количество исследованных мазков и объем выборки клеток; 7) ссылки на источник описания морфологии клеток и используемую терминологию; 8) при первичном исследовании вида - приведение изображения и описание клеток; 9) численные показатели в абсолютных (мкл) и удельных (%) значениях.
Ключевые слова: гематология рептилий, методика исследования, тромбоциты, лимфоциты, нейтрофилы, гетерофилы, моноциты, азурофилы, референтный интервал.
© Павлов А. В., 2019. Данная статья доступна по условиям всемирной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая дает разрешение на неограниченное использование, копирование на любые носители при условии указания авторства, источника и ссылки на лицензию Creative Commons, а также изменений, если таковые имеют место.
A. V. Pavlov
KEY POINTS OF REPTILES HEMATOLOGY: PECULIARITIES OF ESTIMATION OF THE LEUKOCYTIC BLOOD
Abstract.
Background. In herpetology, hematological indicators are widely used in veterinary practice, in ecological and biological studies, and as a complex bioindicator. Differences in interpreting the results of various studies are due to the peculiarities of reptilian hemopoiesis and the variability of leukocyte morphology, which leads to distortions of the real picture. The aim of the work - a synthesis of critical multiva-riate moments in reptile hematology, which are essential for theory and practice.
Materials and methods. The author's materials on leukocyte morphology of 9 reptile's species are used. Generalized own and literary data. The most controversial features of the leukocyte blood and its interpretation are considered.
Results. Three types of errors in the study of morphology of the elements of white blood were identified: similarity of platelets and lymphocytes, neutrophil/ heterophil, and monocyte/azurophil leukocytes. Platelets and lymphocytes are clearly diagnosed by the complex: cytoplasm, nucleus. The most reliable is structure of the chromatin of the nucleus. Reptiles are believed to have no neutrophils, their functions are performed by heterophiles. According to morphological features, a number of species have been defined neutrophils, similar to those of mammals. The nature of monocytes and azurophil remains controversial: it is likely that they have a neutrophilic origin in snakes, and lizards are close to monocytes. Controversial issues are also associated with terminological difficulties and a variety of toxicly modified leukocytes. Quantitative indicators allow us to identify the nature of leukocytes. Careful attention must be paid to the amount of sample data at all levels of research. Absolute and relative indicators of the leukocytes content can be interpreted dually.
Conclusions. Nowadays, difficulties in reptile hematology have not been completely overcome. To assess the quality of researches and their interpretation, a methodical list of features has been proposed, allowing to determine the permissible range of tasks to be solved: 1) the time and place of obtaining hematological material; 2) gender, age of animals, sample size of each group; 3) clinical status of individuals (at a minimum, size and weight indicators); 4) the number of smears from each individual; 5) description of the technique of preparation, fixation and staining of smears; 6) the number of smears examined and the cells count sample; 7) links to the source of description cell morphology and terminology used; 8) images and cell descriptions in pioneer study of the species; 9) absolute indices (^L), and specific values (%).
Keywords: reptile hematology, research methodology, platelets, lymphocytes, neutrophils, heterophiles, monocytes, azurophils, reference interval.
Введение
Исследования гематологического характера как самостоятельное научное направление, а так же как методический прием для оценки состояния животных носят определенную ценность и часто незаменимы. Для рептилий гематологические показатели относительно широко используются в ветеринарной практике [1-5] и в меньшей степени в экологических и биологических исследованиях [6-10]. В рассматриваемой группе комплекс гематологических параметров служит своеобразным вектором и часто единственной возможно-
стью для оценки физиологического состояния, статуса здоровья и индикатором детерминантов окружающей среды. Наиболее оперативными и показательными являются состав и показатели лейкоцитарной части крови. Именно эта группа иммунокомпетентных клеток среди исследованных видов пресмыкающихся является наиболее вариабельной и не имеет окончательной интерпретации. Очевидно, что это накладывает ограничения, нарушение которых ведет к ошибкам, искажающим реальную картину.
Целью исследования является обобщение критически значимых многовариантных моментов в гематологии рептилий, имеющих существенную значимость для теории и практики.
Материалы и методы
В работе использованы собственные данные (на основе собранного автором и предоставленного коллегами материала) по морфологии клеток крови девяти видов рептилий: Anguis fragilis, Zootoca vivipara, Lacerta agilis; Еremias arguta, Phrynocephalus guttatus, Natrix natrix, Coronella austriaca, Vipera berus, V. renardi. В анализ включены литературные источники, связанные с темой исследования и описывающие особенности крови представителей класса, относимых к пяти таксономическим группам: клювоголовые, черепахи, крокодилы, ящерицы и змеи. Обобщены результаты работ с описанием методов и результатов исследований по лейкоцитарной части крови с определением количественного и качественного состава по мазкам крови. В ряде моментов для сравнения использованы сведения по гематологии высших животных и человека. В обзоре затрагиваются только наиболее дискуссионные особенности картины крови и ее интерпретации.
Первичный материал
Техника взятия крови обусловлена не только удобством и эффективностью процедуры, но и варьированием показателей. Классическая гематология предполагает использование единого места забора проб. В крови, взятой из различных участков сосудистой системы, находится далеко не одинаковое количество кровяных телец, особенно лейкоцитов [11-13]. При этом значительно колеблется и соотношение отдельных форм белой крови. Правильная подготовка предполагает также исключение различных загрязнений (лимфой, внутритканевой жидкостью, внешними веществами). Требования к процедуре описаны в разнообразных руководствах и публикациях [4, 11, 14] и полностью справедливы для рептилий.
Особенности работы с рептилиями (сложности в доступе к сосудам, мелкие размеры ряда видов, работа вне лаборатории) создают трудности при получении первичного материала и изготовлении мазков. Для достоверного определения клеток в мазке и объективизации их содержания препарат должен отвечать следующим требованиям: он тонок, равномерен, т.е. форменные элементы лежат в нем в один слой и большей частью не повреждены. Качественный мазок имеет форму широкой линии без прерываний, не касающейся краев стекла с окончанием «метелка».
Деформация кровяных телец и артефакты, присутствующие в мазках с нарушением этих правил, ведут к неверной интерпретации и выявлению несуществующих типов клеток. Показателен пример описания «випроцитов» [15, 16].
Лейкоциты в силу разновеликости распределяются в мазке неравномерно: крупные клетки многочисленнее в более толстой части и по краям. Точные результаты невозможны при подсчете только в одной части мазка. Необходим множественный подсчет в нескольких полях разного качества. Существуют несколько подходов [11, 17]: 2-, 4-польные методы подсчета, 5-10-, 20-польные. В последнем случае точность достигается разными подходами: усреднением, пропуском полей с высоким варьированием значений. При подсчете не учитывают дегенерирующие и трудно классифицируемые клетки.
Морфология элементов белой крови
В отличие от высших животных и человека все клетки рептилий обладают ядрами. Так, тромбоциты на разных стадиях развития или при неудовлетворительных условиях фиксации и окрашивания могут приниматься за малые или голоядерные лимфоциты, что ведет к недоучету или завышению доли содержания лимфоцитов [4, 18]. Вероятность ошибки увеличивается при образовании смешанных агрегаций клеток. Различия элементов связаны с комплексом признаков (табл. 1). Наиболее надежны характеристики ядра.
Таблица 1
Сравнительные признаки тромбоцитов и лимфоцитов рептилий
Показатели Тромбоциты Лимфоциты
Величина Примерно однородные Варьирует
Цитоплазма Слабо окрашена (светло-серая, светло-голубая), чаще бесцветна Базофильная, изредка содержит гранулы разных типов
Ядро Всегда округло-овальной формы От округлой до неправильной и угловатой
Хроматин ядра Густой, кряжисто ориентированный в продольном направлении, глубоко базофильной окраской, контрастирует со свободным от хроматина пространством Полностью заполняет пространство ядра, плотный грубый, однородно окрашенный без резких переходов с хаотичным размещением глыбок
Один из спорных вопросов заключается в разделении и номенклатуре лейкоцитов, особенно гранулоцитов. В значительной степени классификация зрелых клеток затруднена отсутствием барьеров костного мозга у рептилий, следствием чего является наличие в кровотоке многих незрелых форм, которые часто трудно идентифицировать [19].
У рептилий отсутствуют нейтрофильные лейкоциты, морфологически подобные таковым высших млекопитающих. Функционально их замещают гетерофилы (рис. 1). В противоположность нейтрофилам - крупным клеткам с пылевидной нейтрально окрашиваемой зернистостью - у гетерофилов наряду с пылеобразными гранулами в цитоплазме имеются множественные крупнозернистые включения от овальной до вытянутой конфигурации и имеющие сродство к красителям различного типа. Гетерофилы - крупные (10-23 цш) [20] округлые клетки с эксцентрично расположенным ядром от круглой, овальной до сегментоядерной формы. Цитохимически и ультра-структурно они аналогичны нейтрофилам млекопитающих [4, 21, 22].
a b rw u
ml * О Ф
e у * 5 jR Jj 'íb' 10 h
'4 20 fim Heterophil sr r>
"©1 „ - J p
II) j.m a i i 20 цп) >0r
Рис. 1. Нейтрофильно-гетерофильные гранулоциты: a, b - нейтрофилы человека [28]; c - нейтрофил Sphenodon punctatus [23]; d - гетерофил Е. arguta (собственные данные); e - гетерофил A. fragilis (собственные данные); f - гетерофил Ph. guttatus (собственные данные); g - гетерофил Tiliqua rugosa [29]; h - гетерофил V. berus [16]; i - гетерофил Boa constrictor [3]; j - гетерофил Lampropeltis sp. [5]; k - гетерофил T. rugosa [29]; l - гетерофил V. berus (собственные данные); m - гетерофил V. ammodytes [30]; n - гетерофил Z. vivipara (собственные данные); o - гетерофил Terrapene carolina triunguis [3]; p - гетерофил Chameleo fischeri [4]. Названия клеток и видов приведены в соответствии с указанием авторов. Приведенные шкалы из первоисточников. Окраска по: a-c, m - May-Grünwald-Giemsa; d—f h, l, n - Романовский-Гимза; g - Romanowsky-type rapid stain; i-k, o, p - Wright-Giemsa stain
Расхождения в интерпретации часто обусловлены терминологическими проблемами, так как использование термина «нейтрофил» к клеткам с включениями иного характера формально считается некорректным. Однако во многих случаях морфологические признаки дают основание считать наличие нейтрофилов у ряда видов. Эти элементы выделены у бокошейных черепах, клювоголовых, ящериц, змей [1, 20, 23-27]. Наибольшее сходство с человече-
скими имеют нейтрофилы гаттерии, что подтверждается цитохимическими тестами [23]. Собственные данные [16] свидетельствуют о наличии свето-оптически сходных элементов у ряда видов (см. рис. 1,c-f).
Источником ошибок могут служить токсически измененные гетеро-филы/нейтрофилы у животных с инфекционными или воспалительными процессами, что проявляется в интенсивной базофилии цитоплазмы и ее вакуолизации, анормальной грануляции (исчезновение, увеличение изменения окраски и формы гранул) и сегментации ядра (см. рис. 1,k,p) [4]. В зависимости от стадии реактивности так же, как и у нейтрофилов человека, эти признаки могут обнаруживаться в различной степени: на рис. 1,a нейтрофил человека с токсической грануляцией, рис. 1,b - нормальный нейтрофил человека.
Моноциты у рептилий разнообразны в размерах (8-25 цш) с варьирующей формой ядра (круглое, овальное или бобовидное), цитоплазма отличается нежной комковатой структурой, часто с азурофильными гранулами, цветом от серо-голубого до синего.
Азурофилы - уникальные для рептилий клетки, обнаруживающие совместное проявление признаков гранулоцитов и моноцитов [31-33]. Их природа остается дискуссионной. Разные исследователи относят их к моноци-тарному или гранулоцитарному росткам, определяя как разные стадии этих линий, либо выделяют в самостоятельную [20, 31, 32]. Обычно азурофилы наблюдаются у чешуйчатых и крокодилов и реже у черепах. Это округлые клетки с серо-голубой цитоплазмой, содержащей гранулы от азурофильного до пурпурного цвета; ядро округлое или овальное со структурой хроматина, подобной у моноцитов. Цитохимически азурофилы змей сходны с нейтро-филами млекопитающих (положительная реакция на бензидиновую перокси-дазу, черный судан B и ШИК-тест) [18, 32], в то время как азурофилы ящериц дают положительную реакцию на кислую фосфатазу, отрицательную на бен-зидиновую пероксидазу и черный судан B, показывая сходство с моноцитами млекопитающих, т.е. при морфологическом сходстве у разных видов они, вероятно, имеют различное происхождение. Такое объяснение наиболее полно соответствует картине, имеющейся в разнообразных публикациях, и согласуется с количественными данными у животных разного статуса.
Доля этих клеток увеличивается при бактериальных инфекциях [18]. У V. berus при поражениях, вызываемых Pseudomonas aeruginosa и Candida albicans, количество элементов с содержанием азурофильной зернистости значительно возрастает [34]. У этого вида такие клетки рассматриваются как гетерофилы азурофильного типа (рис. 2f) [16].
В некоторых случаях критика верификации лейкоцитов связывается с их изменением в ходе изготовления препаратов крови и использования различных методик. Так, в случае с L. agilis (рис. 2,i,j) отличия двух клеток можно отнести к разнице в условиях фиксации, окрашивания и (или) освещения при фотосъемке. Окрашивание зависит от pH раствора, а также обусловлено обилием свободных гликопротеидов плазмы крови на поверхности мазка, затрудняющих окрашивание.
Следует добавить, что функциональная природа нейтро/гетерофилов и моноцито/азурофильных лейкоцитов также может быть источником ошибок. Иммунологическая реактивность отражается на их «облике». На рис. 2,n по-
казан лейкоцит V. berus, определяемый как азурофил. Однако явственной азурофильной грануляции не наблюдается, контур цитоплазмы неровный, хроматин ядра однороден с просматриваемыми ядрышками. Такое сочетание отражает одно из двух состояний: либо это реактивная клетка, либо распадающийся лейкоцит.
a b с 4И d
É
e W f 9 h
>M
Vi j k 1
о P
/i Í Azurophil ^ i # 4 rw |
Рис. 2. Моноциты и клетки азурофильного типа: a - моноцит человека [28]; b - моноцит T. rugosa [29]; c - азурофил T. rugosa [29]; d- моноцит Е. arguta (собственные данные); e - моноцит V. berus [16]; f - азурофильный гетерофил V. berus [16]; g - азурофил Gallotia simonyi [35]; h - азурофильный моноцит I. iguana [4]; i - моноцит L. agilis [36]; j - азурофил
L. agilis [36]; k - азурофил V. ammodytes [30]; l - моноцит P. najadum [26]; m - моноцит V. berus [9]; n - азурофил V. berus [9]; o - азурофил Varanus sp. [5]; p - моноцит Gopherus agassizii [4]. Названия клеток и видов приведены в соответствии с указанием авторов. Шкалы даны из оригинальных первоисточников и равны 10 цш. Окраска по: a, g - May-Grünwald-Giemsa; b, с, k - Wright-Giemsa stain; d-f, i, j, m, n - Романовский-Гимза; h, o, p - Wright-Giemsa stain, l - Wright's stain
Таким образом, особое внимание следует уделять материалу, полученному от больных рептилий, у которых широко проявляются реактивные свойства большинства лейкоцитов. В таких случаях возможна неправильная идентификация моноцитов, азурофильных моноцитов, гетерофилов и эозино-филов. Вместе с тем воздействие антигенов провоцирует реактивные свойства лейкоцитов, давая возможность выявлять их функциональную значимость.
Количественные показатели
С одной стороны, количественные показатели дают возможность оценивать состояние животных, с другой - позволяют понять природу лейкоцитов. У здоровых животных доля моноцитов, за некоторым исключением, колеблется в пределах 0-10 %. Их количество возрастает при хроническом антигенном воздействии, воспалительных реакциях, бактериальных или паразитарных заболеваниях [22]. В ряде публикаций [6, 37, 38] значение этого показателя при значимой выборке превышает 25-30 %, что свидетельствует о допущении одной или нескольких ошибок, обсуждавшихся выше.
Содержание азурофильных лейкоцитов у змей часто выше 10 %, вплоть до 35 % [10, 22, 39, 40], что может служить косвенным подтверждением в пользу их гетерофильного происхождения. В других группах рептилий их доля минимальна или они вовсе отсутствуют [5, 22].
В качественно поставленных исследованиях от каждой особи готовится несколько препаратов (3-20) [10, 29, 30, 41], оценка лейкоцитарного профиля основывается на подсчете не менее 200-300 клеток. Поскольку у рептилий варьирование показателей крови зависит от множества факторов (возраст, пол, сезон, общее состояние животного, высокая географическая изменчивость и др.), для определения нормального (базового) референтного интервала параметров крови в естественной среде необходимы достаточные выборочные данные (количество особей) в каждой географической точке.
Получение и верификация референтных значений является ключевым моментом в популяционных исследованиях. Признаваемый в настоящее время протокол и принципы по установке и изменению референтного интервала [42, 43] предполагают значительный объем выборки: надежный порог более 40 особей (золотой стандарт - более 120) с учетом всего комплекса факторов, влияющих на гематологические параметры. В большинстве случаев для рептилий получение такого материала в силу различных причин достаточно сложно. В простейшем случае для установки верхних и нижних границ используется доверительный интервал на уровне 95 % значимости.
Предварительный референтный интервал лейкоцитарного профиля V. berus на основе такого подхода приведен в табл. 2 [34]. Границы интервала практически для всех лейкоцитов составили половину и более от средних значений. Такой размах варьирования говорит о низкой чувствительности, что позволяет использовать его для решения ограниченного круга задач.
Интерпретация содержания лейкоцитов часто проводится на основе лейкоцитарной формулы (%). Поскольку у клинически здоровых рептилий варьирование показателей имеет крайне широкий размах, такой подход не всегда отражает особенности, которые можно выявить по абсолютным значениям. Это отчетливо проявляется при сравнении показателей из выборок жи-
вотных разного иммунологического статуса [34]. На рис. 3 видно, в группе _)иуеш8 содержание нейтрофилов в процентах - самое высокое после доли лимфоцитов, а по абсолютным значениям содержание нейтрофилов и вакуо-лизированных клеток - примерно одинаковое. Учитывая то, что вакуолизи-рованные клетки являются производными гетерофилов, мы по абсолютным и относительным значениям получим разные выводы. Сравнение лейкоцитарной формулы больных и взрослых (а^Ьш) здоровых гадюк показывает, что доля лимфоцитов у здоровых выше, чем у заболевших. Сравнение абсолютных значений приведет нас к противоположному выводу. В большинстве объемных исследований приводятся именно абсолютные показатели. При оценке параметров у видов с ранее верифицированными данными, видимо, можно ограничиться лейкоцитарным профилем.
Таблица 2
Показатели периферической крови обыкновенной гадюки в естественных условиях в летний период (июнь - первая половина августа, Республика Татарстан), п = 15, тыс/мкл; = 2,145
Показатель min-max M ± m M ± tm
Гетерофилы (нейтрофильный тип) 0,17-0,74 0,45 ± 0,09 0,45 ± 0,21
Гетерофилы (азурофильный тип) 0-1,65 0,30 ± 0,12 0,30 ± 0,25
Вакуолизированные клетки 0-0,86 0,39 ± 0,14 0,39 ± 0,31
Эозинофилы 0,04-0,62 0,39 ± 0,08 0,39 ± 0,18
Базофилы 0,33-4,56 1,62 ± 0,67 1,62 ± 1,43
Моноциты 0-0,33 0,09 ± 0,01 0,09 ± 0,03
Лимфоциты 2,33-24,08 10,35 ± 2,19 10,35 ± 4,96
Плазматические клетки 0,04-1,07 0,30 ± 0,15 0,30 ± 0,30
35
30
25
20
15
10
тыс./гякл
6К ■ Г
М Л ПК
шлАм___I
Больные змеи
Ad'jltu:
Juvenis
а)
Рис. 3. Сравнительные данные по содержанию лейкоцитов V. Berus:
а - лейкоцитаный профиль; b - лейкоцитарная формула; Н - нейтрофилы; ВК - вакуолизированные клетки; Г - гетерофилы; Э - эозинофилы; Б - базофилы; М - моноциты; Л - лейкоциты; ПК - плазматические клетки (начало)
so
70 60 50 40 30 20 10 0
Рис. 3. Сравнительные данные по содержанию лейкоцитов V. Berus: а - лейкоцитаный профиль; b - лейкоцитарная формула;
Н - нейтрофилы; ВК - вакуолизированные клетки; Г - гетерофилы;
Э - эозинофилы; Б - базофилы; М - моноциты; Л - лейкоциты;
ПК - плазматические клетки (окончание)
Заключение
Исследование качественного и количественного состава лейкоцитов крови рептилий связано с рядом трудностей, обусловленных как особенностями морфологии клеток, диффузностью кроветворения, так и внешними факторами. Повышение качества первичного материала связано с методологией и техниками исследования. На сегодняшний день все затруднения окончательно не преодолимы. Для оценки качества проведенных исследований и перспектив их интерпретации предлагается методический перечень признаков, позволяющий в дальнейшем определять допустимый круг решаемых задач: 1) время и место получения гематологического материала; 2) пол, возраст животных, размер выборки каждой группы; 3) клинический статус особей (как минимум, размерные и весовые показатели); 4) количество мазков от каждой особи; 5) описание техники приготовления, фиксации и окраски мазков; 6) количество исследованных мазков и объем выборки клеток; 7) ссылки на источник описания морфологии клеток и используемую терминологию; 8) при первичном исследовании вида - приведение изображения и описание клеток; 9) численные показатели приводятся в абсолютных (мкл) и удельных (%)значениях.
Благодарности. Автор выражает благодарность А. С. Воробьевой, С. В. Ганщук, Н. А. Литвинову (Пермский ГПУ) за предоставленные препараты, Е. Б. Романовой (Нижегородский ГУ) и Н. М. Акуленко (Институт зоологии НАН Украины) за консультации и критические замечания.
Библиографический список
1. Frye, F. L. Hematology as applied to clinical reptile medicine / F. L. Frye // Biomedical and surgical aspects of captive reptile husbandry / ed. F. L. Frye. - 2nd ed. -Malabar : Kreiger Publishing Company, 1991. - Vol. 1. - P. 209-279.
2. Васильев, Д. Б. Ветеринарная герпетология: ящерицы / Д. Б. Васильев. -Москва : Проект-Ф, 2005. - 477 с.
*
L iL L.
Больные змеи Adullus J uve п is
б)
3. Campbell, T. W. Clinical pathology of reptiles / T. W. Campbell // Reptile medicine and surgery. - 2nd ed. - St. Louis : Saunders Publishing, 2006. - P. 453-470.
4. Strik, N. I. Circulating inflammatory Cells / N. I. Strik, A. R. Alleman, K. E. Harr // Infectious diseases and pathology of reptiles : color atlas and text / ed. by E. Jacobson. -Boca Raton : CRC Press, 2007. - P. 167-218.
5. Jenkins-Perz, J. Hematologic evaluation of reptiles: a diagnostic mainstay / J. Jen-kins-Perz // Veterenary technician. - 2012. - Vol. 33, № 8. - URL: http://www.vetfolio. com/diagnostics/hematologic-evaluation-of-reptiles-a-diagnostic-mainstay (дата обращения: 06.12.2018).
6. Воробьева, А. С. Сравнительная характеристика периферической крови змей Волжского бассейна / А. С. Воробьева // Актуальные проблемы герпетологии и токсинологии : сб. науч. тр. - Тольятти, 2007. - Вып. 10. - С. 25-30.
7. Davis, A. K. The use of leukocyte profiles to measure stress in vertebrates: a review for ecologists / A. K. Davis, D. L. Maney, J. C. Maerz // Functional Ecology. - 2008. -Vol. 22. - P. 760-772.
8. Акуленко, Н. М. Возможно ли использование периферической крови рептилий для определения степени загрязнения биотопа? / Н. М. Акуленко // Пращ украшського герпетолопчного товариства. - 2014. - № 5. - C. 3-11.
9. Оценка лейкоцитарного состава крови гадюки обыкновенной Vipera berus из Самарской области / Е. Б. Романова, В. Ю. Николаев, Е. И. Соломайкин, А. Г. Баки-ев, Р. А. Горелов // Принципы экологии. - 2016. - № 5. - С. 30-45.
10. Hematological and plasma biochemical parameters in a wild population of Naja naja (Linnaeus, 1758) in Sri Lanka / D. S. B. Dissanayake, L. D. Thewarage, R. M. P. M. Rath-nayake, S. A. M. Kularatne, J. G. S. Ranasinghe, R. P. V. J. Rajapakse // Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases. - 2017. - № 23 (8). - URL: https://jvat.biomedcentral.com/articles/10.1186/s40409-017-0098-7 (дата обращения: 06.12.2018).
11. Кудрявцев, А. А. Клиническая гематология животных / А. А. Кудрявцев, Л. А. Кудрявцева. - Москва : Колос, 1974. - 339 с.
12. Никитин, В. Н. Гематологический атлас сельскохозяйственных и лабораторных животных / В. Н. Никитин. - Москва : Сельхозгиз, 1956. - 157 с.
13. Effect of venipuncture site on hematologic and serum biochemical parameters in marginated tortoise (Testudo marginata) / J. R. Lopez-Olvera, J. Montane, I. Marco, A. Martinez-Silvestre, J. Soler, S. Lavin // Journal of Wildlife Diseases. - 2003. - № 39 (4). -Р. 830-836.
14. Основы клинической гематологии : справ. пособие / С. Ю. Ермолов, Ф. В. Курды-байло, В. Г. Радченко, О. А. Рукавицын, Е. Р. Шилова. - Санкт-Петербург : Диалект, 2003. - 304 с.
15. Перевалов, А. А. Новое в исследовании крови у змей / А. А. Перевалов // Вопросы герпетологии. - Ленинград, 1973. - С. 142-144.
16. Система крови / А. В. Павлов, Р. Х. Юсупов // Гадюки (Reptilia: Serpentes: Viperi-dae: Vipera) Волжского бассейна / А. Г. Бакиев, В. И. Гаранин, Д. Б. Гелашвили, Р. А. Горелов, И. В. Доронин, О. В. Зайцева, А. И. Зиненко, А. А. Клёнина, Т. Н. Макарова, А. Л. Маленёв, А. В. Павлов, И. В. Петрова, В. Ю. Ратников, В. Г. Старков, И. В. Ширяева, Р. Х. Юсупов, Т. И. Яковлева. - Тольятти : Кассандра, 2015. - Ч. 1. - С. 137-155.
17. Avian and Reptile Estimated White Blood Cell Count. - URL: https://ahdc.vet.cornell. edu/docs/Avian_and_Reptile_Estimated_White_Blood_Cell_Count.pdf (дата обращения: 07.12.2018).
18. Alleman, A. R. Morphologic, cytochemical staining, and ultrastructural characteristics of blood cells from eastern diamondback rattlesnakes (Crotalus adamanteus) / A. R. Alleman, E. R. Jacobson, R. E. Raskin // American Journal of Veterinary Research. - 1999. - Vol. 60, № 4. - P. 507-514.
19. Wojtaszek, J. Metody badan i morfologia komorek krwi gadow / J. Wojtaszek // Przeglad zoologiczny. - 1991. - T. XXXV, № 1-2. - P. 25-37.
20. Saint Girons, M.-C. Morphology of the circulating blood cells / M.-C. Saint Girons // Biology of Reptilia. - London ; New York : Academic Press, 1970. - Vol. 3. -P. 73-91.
21. Work, T. M. Morphological and cytochemical characteristics of blood cell from Hawaiian green turtles / T. M. Work, R. T. Raskin, G. Y. Balazs, S. D. Whittaker // American Journal of Veterinary Research. - 1998. - Vol. 59, № 10. - P. 1252-1257.
22. Stacy, N. Diagnostic Hematology of Reptiles / N. Stacy, A. R. Alleman, F. Sayler // Clin. Lab. Med. - 2011. - Vol. 31. - P. 87-108.
23. Desser, S. S. Morphological, cytochemical, and biochemical observations on the blood of the tuatara, Sphenodon punctatus / S. S. Desser // New Zealand Journal of Zoology. - 1978. - Vol. 5. - P. 503-508.
24. Wojtaszek, J. S. Haematology of the grass snake Natrix Natrix Natrix L. / J. S. Wojtaszek // Comparative Biochemistry and Physiology. A Comparative Physiology. - 1991. - Vol. 100A, № 4. - P. 805-812.
25. Pitol, D. L. Morphological characterization of the leukocytes in circulating blood of the turtle (Phrynops hilarri) / D. L. Pitol, J. P. M. Issa, F. H. Caetano, L. O. Lunardi // International Journal of Morphology. - 2007. - № 25 (4). - P. 677-682.
26. Morphology of peripheral blood cells from some lacertid lizards from Turkey / H. Aiykan, B. Gogmen, M. Z. Yildiz, Q. Ilgaz, Y. Kumluta // Russian Journal of Herpe-tology. - 2009. - Vol. 16, № 2. - P. 101-106.
27. Morphology of peripheral blood cells from various Turkish snakes / H. Arikan, B. Gogmen, M. K. Atatur, Y. Kumluta§, K. Qigek // North-Western Journal of Zoology. -2009. - Vol. 5, № 1. - P. 61-73.
28. Theml, H. Color Atlas of Hematology. Practical Microscopic and Clinical Diagnosis / H. Theml, H. Diem, T. Haferlach. - Stuttgart ; New York : Thieme, 2004. - 198 p.
29. Moller, C. A. The hematology of captive Bobtail lizards (Tiliqua rugosa): blood counts, light microscopy, cytochemistry, and ultrastructure / C. A. Moller, T. Gaal, J. N. Mills // Veterinary Clinical Pathology. - 2016. - Vol. 45/4. - P. 634-647.
30. Biochemical and hematological profiles of a wild population of the nose-horned viper Vipera ammodytes (Serpentes: Viperidae) during autumn, with a morphological assessment of blood cells / D. Lisicic, D. Bikic, V. Benkovic, A. H. Knezevic, N. Orsolic, Z. Tadic // Zoological Studies. - 2013. - T. 52, № 11. - URL: https://zoologicalstudies. springeropen.com/articles/10.1186/1810-522X-52-11 (дата обращения: 07.12.2018).
31. Cooper, E. L. Reptilian Immunity / E. L. Cooper, A. E. Klempau, A. G. Zapata // Biol. Reptilia. - New York, 1985. - Vol. 14. - P. 601-636.
32. Montali, R. J. Comparative pathology of inflammation in the higher vertebrates (reptiles, birds and mammals) / R. J. Montali // Journal of Comparative Pathology. -1988. - № 99 (1). - P. 1-26.
33. Sypek, J. Reptiles / J. Sypek, M. Borysenko // Vertebrate blood cells / eds.: A. F. Rowley, N. A. Ratcliffe. - Cambridge : Cambridge University Press, 1988. - P. 211.
34. Павлов, А. В. Эколого-морфологическая характеристика обыкновенной гадюки (Vipera berus L.) в зависимости от условий естественной и искусственной среды : дис. ... канд. биол. наук / Павлов А. В. - Казань : Казанский гос. ун-т, 1998. -174 с.
35. Morphology, cytochemical staining, and ultrastructural characteristics of the blood cells of the giant lizard of El Hierro (Gallotia simonyi) / A. Martinez-Silvestre, I. Marco, M. A. Rodriguez-Dominguez, S. Lavin, R. Cuenca // Research in Veterinary Science. -2005. - Vol. 78. - P. 127-134.
36. Хайрутдинов, И. З. Характеристика крови рептилий и ее связь с условиями среды обитания / И. З. Хайрутдинов, Ф. М. Соколина. - Казань : Казанский гос. ун-т, 2010. - 44 с.
37. Воробьева, А. С. Характеристика периферической крови степной гадюки Vipera renardi / А. С. Воробьева, С. В. Ганщук, Н. А. Литвинов // Актуальные проблемы герпетологии и токсинологии : сб. науч. тр. - Тольятти, 2006. - Вып. 9. -С. 28-32.
38. Ганщук, С. В. Характеристика периферической крови обыкновенной Vipera berus и степной V. renardi гадюк / С. В. Ганщук, А. С. Воробьева, Т. В. Чазова // Вопросы герпетологии. - Санкт-Петербург, 2008. - С. 101-104.
39. Hematology, Morphology, Cytochemical Staining, and Ultrastructural Characteristics of Blood Cells in King Cobras (Ophiophagus hannah) / C. Salakij, J. Salakij, S. Apibal, N.-A. Narkkong, L. Chanhome, N. Rochanapat // Veterinary Clinical Pathology. -2002. - Vol. 31, № 3. - P. 116-126.
40. Trujillo, E. Valores hematológicos de Bothrops atrox mantenidos en cautiverio en la ciudad de Lima / E. Trujillo, R. Elias, W. Silva, D. Montes // Salud y Tecnología Veterinaria. - 2016. - № 4-2. - P. 44-52.
41. Monfared, A. L. Morphological characteristics of the blood cells of Persian horned viper (Pseudocerastes persicus persicus) from southwestern Iran / A. L. Monfared // Comparative Clinical Pathology. - 2014. - Vol. 23, iss. 3. - P. 813-817.
42. Friedrichs, K. R. ASVCP reference interval guidelines: determination of de novo reference intervals in veterinary species and other related topics / K. R. Friedrichs, K. E. Harr, K. P. Freeman, B. Szladovits, R. M. Walton, K. F. Barnhart, J. Blanco-Chavez // Veterinary Clinical Pathology. - 2012. - № 41/4. - P. 441-453.
43. Cray, C. Reference intervals in avian and exotic hematology / C. Cray // The veterinary clinics of North America. Exotic animal practice. - 2015. - Vol. 18. - P. 105-116.
References
1. Frye F. L. Biomedical and surgical aspects of captive reptile husbandry. 2nd ed. Malabar: Kreiger Publishing Company, 1991, vol. 1, pp. 209-279.
2. Vasil'ev D. B. Veterinarnaya gerpetologiya: yashcheritsy [Veterinary herpetology: lizards]. Moscow: Proekt-F, 2005, 477 p. [In Russian]
3. Campbell T. W. Reptile medicine and surgery. 2nd ed. St. Louis: Saunders Publishing, 2006, pp. 453-470.
4. Strik N. I., Alleman A. R., Harr K. E. Infectious diseases and pathology of reptiles: color atlas and text. Boca Raton: CRC Press, 2007, pp. 167-218.
5. Jenkins-Perz J. Veterenary technician. 2012, vol. 33, no. 8. Available at: http://www.vet folio.com/diagnostics/hematologic-evaluation-of-reptiles-a-diagnostic--mainstay (accessed Dec. 06, 2018).
6. Vorob'eva A. S. Aktual'nye problemy gerpetologii i toksinologii: sb. nauch. tr. [Actual problems of herpetology and toxicology: collected articles]. Togliatty, 2007, iss. 10, pp. 25-30. [In Russian]
7. Davis A. K., Maney D. L., Maerz J. C. Functional Ecology. 2008, vol. 22, pp. 760-772.
8. Akulenko N. M. Pratsi ukrains'kogo gerpetologichnogo tovaristva [Works of Ukrainian herpetology society]. 2014, no. 5, pp. 3-11.
9. Romanova E. B., Nikolaev V. Yu., Solomaykin E. I., Bakiev A. G., Gorelov R. A. Printsipy ekologii [Principles of ecology]. 2016, no. 5, pp. 30-45. [In Russian]
10. Dissanayake D. S. B., Thewarage L. D., Rathnayake R. M. P. M., Kularatne S. A. M., Ranasinghe J. G. S., Rajapakse R. P. V. J. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases. 2017, no. 23 (8), Available at: https://jvat.biomedcentral. com/articles/10.1186/s40409-017-0098-7 (accessed Dec. 06, 2018).
11. Kudryavtsev A. A., Kudryavtseva L. A. Klinicheskaya gematologiya zhivotnykh [Clinical hematology of animals]. Moscow: Kolos, 1974, 339 p. [In Russian]
12. Nikitin V. N. Gematologicheskiy atlas sel'skokhozyaystvennykh i laboratornykh zhivotnykh [Hematological atlas of farm and laboratory animals]. Moscow: Sel'khozgiz, 1956, 157 p. [In Russian]
13. Lopez-Olvera J. R., Montane J., Marco I., Martínez-Silvestre A., Soler J., Lavin S. Journal of Wildlife Diseases. 2003, no. 39 (4), pp. 830-836.
14. Ermolov S. Yu., Kurdybaylo F. V., Radchenko V. G., Rukavitsyn O. A., Shilova E. R. Osnovy klinicheskoy gematologii: sprav. posobie [Basics of clinical hematology: handbook]. Saint-Petersburg: Dialekt, 2003, 304 p. [In Russian]
15. Perevalov A. A. Voprosy gerpetologii [Herpetology issues]. Leningrad, 1973, pp. 142-144. [In Russian]
16. Pavlov A. V., Yusupov R. Kh. Gadyuki (Reptilia: Serpentes: Viperidae: Vipera) Volzh-skogo basseyna [Vipers (Reptilia: Serpentes: Viperidae: Vipera) of the Volga basin]. Togliatty: Kassandra, 2015, part 1, pp. 137-155. [In Russian]
17. Avian and Reptile Estimated White Blood Cell Count. Available at: https://ahdc.vet. cornell.edu/docs/Avian_and_Reptile_Estimated_White_Blood_Cell_Count.pdf (accessed Dec. 07, 2018).
18. Alleman A. R., Jacobson E. R., Raskin R. E. American Journal of Veterinary Research. 1999, vol. 60, no. 4, pp. 507-514.
19. Wojtaszek J. Przeglad zoologiczny [Zoological inspection]. 1991, vol. XXXV, no. 1-2, pp. 25-37.
20. Saint Girons M.-C. Biology of Reptilia. London; New York: Academic Press, 1970, vol. 3, pp. 73-91.
21. Work T. M., Raskin R. T., Balazs G. Y., Whittaker S. D. American Journal of Veterinary Research. 1998, vol. 59, no. 10, pp. 1252-1257.
22. Stacy N., Alleman A. R., Sayler F. Clin. Lab. Med. 2011, vol. 31, pp. 87-108.
23. Desser S. S. New Zealand Journal of Zoology. 1978, vol. 5, pp. 503-508.
24. Wojtaszek J. S. Comparative Biochemistry and Physiology. A Comparative Physiology. 1991, vol. 100A, no. 4, pp. 805-812.
25. Pitol D. L., Issa J. P. M., Caetano F. H., Lunardi L. O. International Journal of Morphology. 2007, no. 25 (4), pp. 677-682.
26. Arykan H., Goçmen B., Yildiz M. Z., Ilgaz Ç., Kumluta Y. Russian Journal of Herpetology. 2009, vol. 16, no. 2, pp. 101-106.
27. Arikan H., Goçmen B., Atatür M. K., Kumlutaç Y., Çiçek K. North-Western Journal of Zoology. 2009, vol. 5, no. 1, pp. 61-73.
28. Theml H., Diem H., Haferlach T. Color Atlas of Hematology. Practical Microscopic and Clinical Diagnosis. Stuttgart; New York: Thieme, 2004, 198 p.
29. Moller C. A., Gaal T., Mills J. N. Veterinary Clinical Pathology. 2016, vol. 45/4, pp. 634-647.
30. Lisicic D., Bikic D., Benkovic V., Knezevic A. H., Orsolic N., Tadic Z. Zoological Studies. 2013, vol. 52, no. 11. Available at: https://zoologicalstudies.springeropen.com/ articles/10.1186/1810-522X-52-11 (accessed Dec. 07, 2018).
31. Cooper E. L., Klempau A. E., Zapata A. G. Biol. Reptilia. New York, 1985, vol. 14, pp. 601-636.
32. Montali R. J. Journal of Comparative Pathology. 1988, no. 99 (1), pp. 1-26.
33. Sypek J., Borysenko M. Vertebrate blood cells. Cambridge: Cambridge University Press, 1988, p. 211.
34. Pavlov A. V. Ekologo-morfologicheskaya kharakteristika obyknovennoy gadyuki (Vipera berus L.) v zavisimosti ot usloviy estestvennoy i iskusstvennoy sredy: dis. kand. biol. nauk [Ecological and morphological characteristics of the common viper (Vipera berus L.), depending on the conditions of the natural and artificial environment: dissertation to apply for the degree of the candidate of biological sciences]. Kazan: Kazanskiy gos. un-t, 1998, 174 p. [In Russian]
35. Martinez-Silvestre A., Marco I., Rodriguez-Dominguez M. A., Lavin S., Cuenca R. Research in Veterinary Science. 2005, vol. 78, pp. 127-134.
36. Khayrutdinov I. Z., Sokolina F. M. Kharakteristika krovi reptiliy i ee svyaz' s usloviya-mi sredy obitaniya [Characteristics of reptile blood and its connection with habitat conditions]. Kazan: Kazanskiy gos. un-t, 2010, 44 p. [In Russian]
37. Vorob'eva A. S., Ganshchuk S. V., Litvinov N. A. Aktual'nye problemy gerpetologii i toksinologii: sb. nauch. tr. [Actual problems of herpetology and toxicology: collected articles]. Togliatty, 2006, iss. 9, pp. 28-32. [In Russian]
38. Ganshchuk S. V., Vorob'eva A. S., Chazova T. V. Voprosy gerpetologii [Herpetology issues]. Saint-Petersburg, 2008, pp. 101-104. [In Russian]
39. Salakij C., Salakij J., Apibal S., Narkkong N.-A., Chanhome L., Rochanapat N. Veterinary Clinical Pathology. 2002, vol. 31, no. 3, pp. 116-126.
40. Trujillo E., Elias R., Silva W., Montes D. Salud y Tecnología Veterinaria [Health and veterinary technology]. 2016, no. 4-2, pp. 44-52.
41. Monfared A. L. Comparative Clinical Pathology. 2014, vol. 23, iss. 3, pp. 813-817.
42. Friedrichs K. R., Harr K. E., Freeman K. P., Szladovits B., Walton R. M., Barnhart K. F., Blanco-Chavez J. Veterinary Clinical Pathology. 2012, no. 41/4, pp. 441-453.
43. Cray C. The veterinary clinics of North America. Exotic animal practice. 2015, vol. 18, pp. 105-116.
Павлов Алексей Владиленович
кандидат биологических наук, доцент, старший научный сотрудник, Волжско-Камский государственный природный биосферный заповедник (Россия, Республика Татарстан, Зеленодольский район, пос. Садовый, ул. Вехова, 1)
E-mail: zilantelan@mail.ru
Pavlov Aleksey Vladilenovich Candidate of biological sciences, associate professor, senior stuff scientist, Volga-Kama State Natural Biosphere Reserve (1 Vekhova street, Sadoviy village, Zelenodolsk district, Republic of Tatarstan, Russia)
Образец цитирования:
Павлов, А. В. Ключевые моменты гематологии рептилий: особенности оценки лейкоцитарной части крови / А. В. Павлов // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. - 2019. - № 1 (25). -С. 138-152. - БОТ 10.21685/2307-9150-2019-1-14.
