CC BY
195
ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
2017 БИОЛОГИЯ Вып. 4
БИОТЕХНОЛОГИЯ
УДК 581.143.6: 582.975
М. М. Ишмуратоваa, Н. И. Барышникова1, Э. М. Газиеваa
a Башкирский государственный университет, Уфа, Россия
b Магнитогорский государственный технический университет им. Г.И. Носова, Магнитогорск, Россия
КЛОНАЛЬНОЕ МИКРОРАЗМНОЖЕНИЕ IN VITRO: ВЫБОР ЭКСПЛАНТОВ (НА ПРИМЕРЕ ВИДОВ РОДА VALERIANA)
С целью сохранения промысловых видов лекарственных растений рекомендовано вводить их в культуру и плантационное возделывание, в том числе используя культуру in vitro. Для многолетних травянистых растений важным являются выбор оптимального экспланта и приема культивирования. В условиях культуры in vitro у видов рода Valeriana описаны следующие типы морфогенеза: эмбриоидогенез, каллусогенез, геммогенез и ризогенез. Растения-регенеранты могут быть получены путем активации существующих апикальных и пазушных меристем надземных и подземных органов, соматического эмбриоидогенеза и образования растений de novo из каллусной ткани. Эксплантами для введения в культуру in vitro могут быть семена, апикальные меристемы побега и корня, черешок и пластинка ассимилирующих листьев, почки возобновления, узлы вегетативно-репродуктивного побега. Эффективное размножение с целью получения растений-регенерантов видов ряда Оfficinales (V. alternifolia Ledeb., V. dubia Bunge., V. officinalis L., V. wolgensis) возможно при использовании в качестве эксплантов семян и узлов из зоны торможения вегетативно-репродуктивного побега. Оптимальным приемом культивирования является активация существующих меристем. Время для введения в культуру in vitro эксплантов подбирается индивидуально для каждого вида и зависит от природы экспланта и феноритмов развития растений.
Ключевые слова: виды рода Valeriana; приемы культивирования; культура in vitro; экспланты.
М. М. Ishmuratovaa, N. I. Baryshnikovab, Е. М. Gazievaa
a Bashkir State University, Republic of Bashkortostan, Ufa, Russia
b Nosov Magnitogorsk State Technical University, Magnitogorsk, Russia
CLONAL MICRO REPRODUCTION IN VITRO: EXPLANTS CHOICE (FOR EXAMPLE, SPECIES OF THE GENUS VALERIANA)
With the aim of preserving commercial species of medicinal plants (many of which are rare) it is recommended to introduce them to the culture and plantation cultivation, including using in vitro culture. In addition, for perennial herbaceous plants that have a system of aboveground and underground organs, important are the choice of optimal Explant and receiving cultivation. In a culture in vitro in species of the genus Valeriana are described the following types of morphogenesis: embryologist, callusogenesis, Her-mogenes and rhizogenesis. Regenerated plants can be obtained by activating existing apical and axillary meristems of the aerial and underground organs, somatic embryogenesis and the formation of de novo plants from callus tissue. The introduction of explants for in vitro culture can be used seeds, apical meristems of shoot and root, petiole and lamina assimilating leaves, buds resume, the nodes of vegetative and reproductive escape. Effective reproduction with the aim of obtaining regenerated plants of several types Оfficinales (V. alternifolia Ledeb., V. dubia Bunge., V. officinalis L., V. wolgensis) is possible by using as explants the seeds and nodes of the zone of inhibition of the vegetative-reproductive escape. The optimal method of cultivation is the activation of existing meristems. The time for the introduction in culture in vitro of explants selected individually for each species and depends on the nature of Explant and fenarimol development of plants.
Key words: Species of the genus Valeriana; methods of cultivation; culture in vitro; explants.
Эксплуатация ресурсных видов растений ставит проблему сохранения их естественных популяций и разработку мер по их восстановлению, поскольку многие из этих видов являются редкими и исче-
зающими, в т.ч. по причине их ресурсного использования. В настоящее время отмечают повышение спроса на сырье лекарственных растений и истощение их природных популяций [Kling, 2016], в
© Ишмуратова М. М., Барышникова Н. И., Газиева Э. М., 2017
442
связи с чем действенной мерой сохранения ресурсов лекарственных растений признано введение видов в культуру и их плантационное выращивание [Сацыперова, Рабинович, 1990; Schippmann, Leaman, Cunningham, 2002].
Виды рода Valeriana являются лекарственными растениями, источниками валепотриатов и эфирных масел, обладают седативным действием [Ломагина, Данчул, 1990; Горбунов, 2002; Pilerood, Prakash, 2013; Heng-Wen Chen et al., 2015 и др.]. С целью расширения сырьевой базы V. officinalis L., в качестве дополнительного источника лекарственного сырья, рекомендуют использовать близкородственные виды, часть из которых являются редкими видами [Барышникова, 2005; Харрасова, 2012; Семенова, Егорова, 2013; Сулейманова, 2013; Ишмуратова и др., 2017 и др.]. Однако эксплуатационные запасы сырья видов рода Valeriana даже в оптимальных частях ценокомплексов не стабильны в силу биологических особенностей видов (все они малолетники с выраженной R- составляющей в стратегии жизни) [Барышникова, 2005; Сулейманова, 2013; Ишмуратова и др., 2017 и др.]. Этот факт накладывает ограничения на использование природных популяций видов рода Valeriana в качестве ресурсных.
Дополнением существующих методов сохранения биоразнообразия ресурсных и редких видов ex situ является метод культуры in vitro [Ишмуратова, 2006].
Перед исследователем, размножающим редкие и ресурсные виды растений в условиях in vitro, возникает ряд вопросов оптимизации технологий, связанных с биологией вида, его редкостью и финансовой затратностью метода in vitro: какой растительный материал нужно (можно) изолировать для успешного введения в культуру; какой период времени является оптимальным для введения в культуру; как максимально, без потерь использовать небольшой объем растительного материала; каким методом размножать.
Важно правильно выбрать эксплант, приемы и методы размножения in vitro, поскольку значительная часть растительного материала теряется на первых этапах при разработке протоколов микроразмножения.
При размножении в культуре in vitro редких растений существует целый ряд ограничений, связанных, в первую очередь, с небольшим объемом растительного материала, находящегося в распоряжении экспериментатора. К тому же, среди таких видов встречаются и «трудноразмножаемые». Считаем, что для преодоления этой проблемы должны быть определены потенциально успешные подходы, которые необходимо предварительно отобрать по результатам скрининга технологий размножения родственных видов и видов одной жизненной формы.
Цель работы - выбор экспланта и оптимального времени его изоляции для клонального микроразмножения in vitro видов рода Valeriana для получения однородного посадочного материала.
Материалы и методы исследования
Объекты исследования - виды рода Valeriana: V. alternifolia Ledeb., V. dubia Bunge., V. officinalis L., V. wolgensis Kazak., V. tuberosü L.
Жизненные формы. Исследуемые виды относятся к гемикриптофитам.
В.Н. Ворошилов [1959] описывает жизненные формы валериан следующим образом: «виды лекарственной валерианы, все без исключения, относятся к типу замещающих двулетников» со столонами или без них. «Явление замещающей, или возобновляющейся двулетности (монокарпичности), заключается в том, что подземная часть плодоносившего растения не сохраняется, как у настоящих многолетников, а отмирает вместе со старым стеблем, т.е. все старое растение отмирает после плодоношения целиком, как у настоящего двулетника, а вегетативную жизнь растения продолжают отделившиеся от растения почки возобновления, сидящие на новом корнеклубне».
Эксплантами для введения в культуру in vitro являлись семена, ассимилирующие листья, узлы из зоны торможения вегетативно-репродуктивного побега и почки возобновления.
Стерилизацию эксплантов проводили дробным способом:
1. Промывка материала в проточной воде, а затем в мыльном растворе.
2. Обработка раствором «Бриллиант» (0.9-1%-ный р-р акрилдиметиламмоний хлорида и 0.80.9% р-р глутарового альдегида и функциональные компоненты) в разведении 1 мл на 100 мл воды с экспозицией 40 мин.
3. Обработка 0.1% р-ром диацида с экспозицией 10-35 мин.
4. Обработка 70% р-ром этилового спирта с экспозицией 1 мин.
5. Обработка хлоргексидином с экспозицией 15 мин.
После каждого этапа стерилизации экспланты трижды промывали дистиллированной водой.
Работу в асептических условиях, приготовление и стерилизацию питательных сред проводили согласно имеющимся в литературе рекомендациям [Бутенко, 1964; Калинин, Сарнацкая, По-лищук, 1980; Биотехнология..., 1989].
Питательной средой культивирования являлась модифицированная питательная среда Мура-сиге-Скуга (МС) [Murashige, Skoog, 1962].
В качестве регуляторов роста для инициации морфогенетических процессов использовали
гормональные добавки 6-бензиламинопурин (6 -БАП) в концентрации 0.1-1.0 мг/л; индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) в концентрации 0.5-1.0 мг/л; кинетин в концентрации 1.0 мг/л.
pH питательной среды - 5.5-5.8.
Условия культивирования. Растения культивировали в биологических пробирках и колбах объемом 50-100 мл, при люминесцентном освещении в 10 000 лк, 16-часовом фотопериоде, 26°С и относительной влажности воздуха 70%.
Результаты и их обсуждение
Выбор оптимальных эксплантов для введения в культуру in vitro зависит от многих факторов, главными из которых являются жизненная форма растений, способы размножения: половой и/или бесполый, возраст и жизненность растений-доноров.
Анализ литературы по размножению в условиях культуры in vitro видов рода Valeriana показывает, что протоколы клонального микроразмножения для некоторых видов (V. edulis ssp. рrocera, V. jatamansi, V. glechomifolia, V. officinalis, V. wallichii) разработаны с использованием разных эксплантов - апикальных меристем побега [Kaur et al., 1999; Salles et al., 2002] и корня [Mathur et all., 1989], черешка [Reza, Morteza, Akhtar, 2009] и пластинки ассимилирующих листьев [Castillo et al., 2000].
В наших экспериментах эксплантами для некоторых видов являлись почки возобновления, ассимилирующие листья, узлы из зоны торможения вегетативно-репродуктивного побега и семена [Ишмуратова, Барышникова, 2003; Ишмуратова, 2008; Ишмуратова, Ткаченко, 2009; Ишмуратова и др., 2017].
Исследуемые виды являются гемикриптофита-ми, почки возобновления у которых расположены близко к поверхности почвы (рис. 1), поэтому введение в культуру in vitro таких эксплантов представляет определенную сложность, связанную с их высокой зараженностью грибковой и бактериальной инфекцией. Лучшие результаты стерилизации таких эксплантов были достигнуты при последовательном использовании 70%-ного раствора этанола в течение 1 мин. и 0.1%-ного раствора диацида в течение 25 мин. При этом доля стерильных и жизнеспособных эксплантов, из которых формировались растения-регенеранты (рис. 2), была очень низкой и не превышала 10-15%.
Лучшее состояние почек для введения в культуру - когда они плотно укрыты почечными чешуями (рис. 1). Это период до начала вегетации или же в конце вегетации. У исследованных видов эти фенологические фазы приходятся на разное время года.
Нами исследованы феноритмы видов рода Valeriana в Республике Башкортостан [Ишмуратова и
др., 2011а, б]. Два вида V. tuberosа и V. dubia начинают вегетировать ранней весной. Valeriana tuberosа (при определенных условиях и V. dubia) -эфемероид и начинает вегетировать под снегом. Это накладывает ограничения на введение этих видов в культуру in vitro в период «до начала вегетации».
Рис. 1. Почки возобновления Valeriana dubia, находящейся в фазе вегетации
Рис. 2. Растения-регенеранты Valeriana wol-gensis при введении в культуру in vitro почек возобновления
У двух видов (V. dubia и V. wolgensis) отмечается отрастание розеточных побегов после периода плодоношения (рис. 3), поэтому необходимо выбрать оптимальное состояние почек возобновления до времени конца вегетации.
Рис. 3. Отрастание розеточных побегов Valeriana wolgensis, находящейся в фазе окончания плодоношения
Нами установлено, что для этих видов оптимальным периодом для введения в культуру in vi-
tro почек возобновления является фенофаза «начало плодоношения». В условиях Южного Урала этот период приходится на конец мая - начало июня для V. tuberosü, июнь - для V. dubia, июль -для V. wolgensis и июль-август - для V. оfflcinaUs [Ишмуратова и др., 2011а; Харрасова, Барышникова, Ишмуратова, 2011].
В качестве эксплантов для размножения видов валерианы in vitro нами использованы также семена [Ишмуратова, Барышникова, 2003; Ишмуратова, 2008; Ишмуратова, Ткаченко, 2009; Ишмуратова и др., 2017 и др.]. Так как при лабораторном хранении в течение года семена некоторых видов рода Valeriana теряют всхожесть, рекомендуем использовать для введения в культуру in vitro свежесобранные семена. Созревание семян исследованных видов приходится на разные сроки.
При стерилизации 0.1%-ным раствором диаци-да в течение 10-12 мин. можно добиться 75-100% неинфицированных семян.
Семена высевали на безгормональную питательную среду, содержащую минеральные соли по прописи МС. По достижении имматурного возрастного состояния, растения пересаживали на питательные среды по прописи МС, содержащие различные комбинации и концентрации БАП, ИУК и кинетин для мультипликации побегов (рис. 4).
Рис. 4. Мультипликация побегов на растениях-регенерантах Valeriana alternifolia (а) и V. wolgensis (б), полученных при введении в культуру in vitro семян
Выбор и поиск оптимального экспланта при введении в культуру in vitro видов рода Valeriana продиктован следующими факторами: 1) низкая жизнеспособность семян некоторых видов; 2) низкая стерильность и жизнеспособность эксплантов при введении почек возобновления.
В качестве варианта в выборе эксплантов нами были взяты узлы вегетативно-репродуктивного побега. В норме вегетативно-репродуктивный побег не ветвится до побегов второго и третьего порядков. Но при определенных условиях у видов ряда Gfficinales в пазухах стеблевых листьев репродуктивного побега развиваются боковые вегетативные побеги. Например, для V. officinalis такое явление в условиях неполной яровизации при выращивании растений в теплице описано П.Л. Нухимов-ским [2002]. Пробуждение почек в зоне торможения вегетативно-репродуктивного побега можно вызвать и иными способами - например, удалением флоральной зоны побега. Через некоторое время после этой манипуляции можно вводить узлы вегетативно-репродуктивного побега в культуру in vitro. Рекомендуем удалять флоральную зону побега в фазе начала бутонизации, которая у исследованных видов приходится на разные сроки.
Из введенных стеблевых фрагментов, содержащих узлы, на питательной среде МС, содержащей БАП и ИУК, формируются вегетативные побеги (рис. 5 а, б), а в дальнейшем - и растения-регенеранты (рис. 6).
Рис. 5. Геммогенез (б) Valeriana wolgensis при введении в культуру in vitro узлов вегетативно-репродуктивного побега (а)
Эти же подходы в отношении выбора экспланта нами [Ишмуратова, Зарипова, 2000] были успешно реализованы при клональном микроразмножении in vitro другого вида - Polemonium caeruleum L.,
а
б
близкого к некоторым видам рода Valeriana по жизненной форме. Для размножения P. caeruleum in vitro и получения растений-регенерантов нами были рекомендованы семена и узлы вегетативно-репродуктивного побега. Эти результаты позволяют говорить о том, что для растений одной жизненной формы можно использовать единые подходы при выборе экспланта и приема культивирования для микроклонального размножения.
Рис. 6. Растения-регенераты Valeriana wolgensis в культуре in vitro при введении в качестве экспланта узлов вегетативно-репродуктивного побега
Выбор оптимальных методов и приемов размножения in vitro зависит от биологии и морфоге-нетических потенций размножаемого вида и задач, которые перед собой ставит исследователь.
К настоящему времени в мировой практике разработаны протоколы микроразмножения in vitro некоторых видов рода Valeriana (V. alternifolia, V. dubia, V. edulis ssp. frocera, V. glechomifolia, V. jatamansi, V. officinalis, V. wallichii, V. wolgensis) с использованием различных приемов культивирования. Размножения растений в условиях культуры in vitro авторам удалось достичь путем активации апикальных и пазушных меристем надземных и подземных органов [Mathur et all., 1989; Salles et all., 2002; Ишмуратова, Барышникова, 2003; Ишмуратова, 2008; Ишмуратова и др., 2017], стимуляции органогенеза и соматического эмбриоидоге-неза в каллусе листового происхождения [Kaur et all., 1999; Castillo et all., 2000; Reza, 2009]. Обобщая результаты своих исследований и исследований других авторов, можно сделать вывод о том, что в условиях культуры in vitro у видов рода Valeriana присутствуют следующие типы морфогенеза: эмбриоидогенез, каллусогенез, геммогенез и ризо-генез. Растения-регенеранты можно получить путем активации существующих меристем, образования растений de novo из каллусной ткани.
Заключение
К настоящему времени интенсивная эксплуатация популяций видов лекарственных растений приводит к деградации, а порой и к их исчезновению в естественных местах обитания. С целью сохранения таких видов (многие из них являются редкими) рекомендовано вводить их в культуру и плантационное возделывание, а также размножать в условиях in vitro. При этом для многолетних травянистых растений, имеющих системы надземных и подземных органов, важными являются выбор оптимального экспланта и приема культивирования.
В условиях культуры in vitro у видов рода Valeriana описаны следующие типы морфогенеза: эм-бриоидогенез, каллусогенез, геммогенез и ризоге-нез. Растения-регенеранты могут быть получены путем активации существующих апикальных и пазушных меристем надземных и подземных органов, соматического эмбриоидогенеза и образования растений de novo из каллусной ткани. Экс-плантами для введения в культуру in vitro могут быть использованы семена, апикальные меристемы побега и корня, черешок и пластинка ассимилирующих листьев, узлы вегетативно-репродуктивного побега, почки возобновления. Эффективное размножение с целью получения растений-регенерантов видов ряда Officinales (V. alternifolia Ledeb., V. dubia Bunge., V. officinalis L., V. wolgen-sis) возможно при использовании в качестве экс-плантов семян и узлов из зоны торможения вегетативно-репродуктивного побега. Из использованных приемов культивирования оптимальным является активация существующих меристем. Время для введения в культуру in vitro эксплантов подбирается индивидуально для каждого вида и зависит от природы экспланта и феноритмов развития растений.
Библиографический список
Барышникова Н.И. Эколого-фитоценотическая характеристика, ценопопуляционный анализ и опыт введения в культуру Valeriana tuberosa L. и Valeriana dubia Bunge в степном Зауралье Республики Башкортостан: автореф. дис. ... канд. биол. наук. Уфа, 2005. 22 с. Биотехнология растений: Культура клеток. М.: Аг-
ропромиздат, 1989. 280 с. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 272 с.
Ворошилов В.Н. Лекарственная валериана. М.:
Наука, 1959. 160 с. Горбунов Ю.Н. Валерианы флоры России и сопредельных государств: Морфология, систематика,
перспективы использования. М.: Наука, 2002. 207 с.
Ишмуратова М.М. Размножение видов рода Valeriana в культуре in vitro II Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира: материалы II Всерос. науч.-практ. конф. Белгород, 2008. С. 56-59.
Ишмуратова М.М., Барышникова Н.И. Valeriana officinalis s.l. на Южном Урале: особенности биологии в природе, при интродукции и в культуре in vitro II Современное состояние не древесных растительных ресурсов России. Киров, 2003. С. 156-161.
Ишмуратова М.М., Зарипова А.А. Особенности морфогенеза Polemonium caeruleum L. in vivo и in vitro II Растительные ресурсы. 2000. Т. 36, вып. 3. С. 106-115.
Ишмуратова М.М., Ткаченко К.Г. Семена травянистых растений: особенности латентного периода, использование в интродукции и размножении in vitro. Уфа: Гилем, 2009. 115 с.
Ишмуратова М.М. и др. Фенологические характеристики Valeriana wolgensis Kazak. на Южном Урале II Известия Самарского научного центра РАН. 2011а. Т. 13, № 5(2). С. 79-81.
Ишмуратова М.М. и др. Фенология видовов рода Valeriana на Южном Урале II Вестник Оренбургского государственного университета. 2011б. № 12 (131). С. 77-79.
Ишмуратова М.М. и др. Эколого-фитоцено-тические, популяционные и репродуктивные характеристики, биология семян, культура in vitro Valeriana alternifolia II Растения в холодном регионе: сб. материалов Всерос. науч.-практ. конф. Якутск, 2017. С. 249-259.
Калинин Ф. Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев: Наук. думка, 1980. 488 с.
Ломагина З.В., Данчул Т. Ю. Семейство Valeriana-ceae Batch II Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения их химический состав, использование. Семейства Caprifoliaceae-Planta-ginaceae. Л., 1990. С. 20-30.
Нухимовский Е.Л. Основы биоморфологии семенных растений. М.: Оверлей, 2002. Т. 2. Габитус и формы роста в организации биоморф. 859 с.
Сацыперова И.Ф., Рабинович А.М. Проект общесоюзной программы исследований по интродукции лекарственных растений II Растительные ресурсы. 1990. Т. 26, вып. 4. С. 587-597.
Семенова В.В., Егорова П.С. Поливариантность онтогенеза Valeriana alternifolia Ledeb. и структура ее природных ценопопуляций в Якутии. Новосибирск: Наука, 2013. 111 с.
Сулейманова Э.Н. Биология, эколого-фитоцено-тические и популяционные характеристики Valeriana wolgensis Kazak. на Южном Урале
(Южно-Уральский государственный природный заповедник): автореф. дис. ... канд. биол. наук. Уфа, 2013. 22 с.
Харрасова Г.В. Интродукция некоторых видов рода Valeriana ряда Officinales в условиях культуры в степной зоне Башкирского Зауралья: автореф. дис. . канд. биол. наук. Уфа, 2012. 22 с.
Харрасова Г.В., Барышникова Н.И., Ишмуратова М.М. Интродукция видов рода Valeriana в Башкирском Зауралье // Известия Самарского научного центра РАН. 2011. Т. 13, № 5 (3). С. 116-119.
Castillo P. et al. Plant regeneration from callus and suspension cultures of Valeriana edulis ssp. procera via simultaneous organogenesis and somatic embryogenesis // Plant Science, 2000. Vol. 151, № 2. P. 115-119.
Kaur R. et al. In vitro propagation of Valeriana jata-mansi // Plant Cell, Tissue and Organ Culture., 1999. Vol. 59, № 3. P. 227-229.
Kling J. Protecting medicine's wild pharmacy // Nature plants. 2016. Vol. 2, № 5. P. 16064.
Mathur J. et al. Propagation of Valeriana wallichii DC using encapsulated apical and axial shoot buds.// Plant Sci., 1989. Vol. 60, № 6. P. 111.
Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. Vol. 15, № 13. P. 473497.
Pilerood Sh., Prakash J. Nutritional and medicinal properties of valerian (Valeriana officinalis) herb: A review // International Journal of Food, Nutrition and Dietetics, 2013. Vol. 1, № 1. P. 25-32.
Reza A.G., Morteza K.K., Akhtar S. Rapid micropropagation through shoot regeneration of Valeriana officinalis L. // Horticulture environment and biotechnology. 2009. Т. 50, № 5. P. 467-471.
Heng-Wen Chen et al. Chemical Components and Cardiovascular Activities of Valeriana spp. // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. Vol. 1. 2015. Article ID 947619 // http://dx.doi.org/10.1155/2015/947619.
Salles L.d.A. et al. Valeriana glechomifolia: in vitro propagation and production of valepotriates // Plant Science, 2002. Vol. 163, № 1. P. 165-168.
Schippmann U., Leaman J.D., Cunningham A.B. Impact of Cultivation and Gathering of Medicinal Plants on Biodiversity: Global Trends and Issues // Departmental Working Group on Biological Diversity for Food and Agriculture, Organisation of the United Nations, 2002. Rome, Italy.
References
Barysnikova N.I. Ekologo-fitocenoticeskaja charak-teristika, cenopopuljacionnyj analiz i opyt vve-denija v kul'turu Valeriana tuberosa L. i Valeriana dubia Bunge v stepnom Zaural'e. Avtoref.
diss. kand. biol. nauk [Ecologo-phytocoenotic characteristics, cenopopulation analysis and the experience of the introduction to the culture of Valeriana tuberosa L. and Valeriana dubia Bunge in the steppe Urals of the Bashkortostan Republic. Abstract Cand. Diss.]. Ufa, 2005. 22 p. (In Russ.).
Biotechnologija rastenij: Kul'tura kletok [Plant biotechnology: cell Culture]. Moscow, Agropromizdat Publ., 1989. 280 p. (In Russ.).
Butenko R.G. Kul'tura izolirovannych tkanej i fiziologija morfogeneza rastenij [Culture of isolated tissues and physiology of plant morphogenesis]. Moscow, Nauka Publ., 1964. 272 p. (In Russ.).
Vorosilov V.N. Lekarstvennaja Valeriana [Medicinal Valerian]. Moscow, Nauka Publ., 1959. 160 p. (In Russ.).
Gorbunov U.N. Valeriany flory Rossii i sopredel'nych gosudarstv [Valerian flora of Russia and adjacent countries: Morphology, systematics, prospects of use]. Moscow, Nauka Publ., 2002. 207 p. (In Russ.).
Ismuratova M.M. [Reproduction of species of the genus Valeriana in vitro]. Biotehnologija kak instrument sochranenija bioraznoobrazija rastitel'nogo mira [Biotechnology as a tool for the conservation of biodiversity of the plant world]. Belgorod, 2008, pp. 56-59. (In Russ.).
Ismuratova M.M., Zaripova A.A. [Features of the morphogenesis Polemonium caeruleum L. in vivo and in vitro]. Rastitel'nye resursy. V. 36, Iss. 3 (2000): pp. 106-115. (In Russ.).
Ismuratova M.M., Tkacenko K.G. Semena travjanistych rastenij [Seeds of herbaceous plants: features of the latent period, the use in introduction and breeding in vitro]. Ufa, Gilem \publ., 2009. 115 p. (In Russ.).
Ismuratova M.M., Goricev U.P., Sulejmanova E.N., Barlybaeva M.S. [Phenological characteristics of Valeriana wolgensis Kazak. in the southern Urals]. Izvestija Samarskogo naucnogo centra RAN. V. 13 N 5(2) (2011): pp. 79-81. (In Russ.).
Ismuratova M.M., Isbirdin A.R., Cerosov M.M., Barysnikova N.I., Sulejmanova E.N. [Ecological-phytocoenotic, population and reproductive characteristics, biology of seeds, in vitro culture Valeriana alternifolia]. Rastenija v cholodnom re-gione [Plants in cold region]. Jakutsk, 2017, pp. 249-259. (In Russ.).
Kalinin F. L., Sarnackaa V.V., Polisuk V.E. Metody kul 'tury tkanej v fiziologii i biochimii rastenij [Tissue culture methods in physiology and biochemistry of plants]. Kiev, Nauk. dumka Publ., 1980. 488 p. (In Russ.).
Lomagina Z.V., Dancul T.U. [The Family Valeriana-ceae Batch]. Rastitel'nye resursy SSSR [Plant resources of USSR: Flowering plants, their chemical
composition, use]. Leningrad, 1990, pp. 20-30. (In Russ.).
Nuhimovskiy E.L. Osnovy biomorfologii semennych rastenij [Fundamentals of biomorphology seed plants]. Moscow, Overlej Publ., 2002, V. 2. 859 p. (In Russ.).
Sacyperova I.F., Rabinovic A.M. [Project-Union research program on introduction of medicinal plants]. Rastitel'nye resursy. V. 26, Iss. 4 (1990): pp. 587-597. (In Russ.).
Semenova V.V., Egorova P.S. Polivariantnost' onto-geneza Valeriana alternifolia Ledeb. i struktura ee prirodnych cenopopuljacij v Jakutii [The multivariate ontogeny Valeriana alternifolia Ledeb. and structure of its natural coenopopulations in Yakutia]. Novosibirsk, Nauka Publ., 2013. 111 p. (In Russ.).
Sulejmanova E.N. Biologija, ekologo-fitocenoticeskie i populjacionnye charakteristiki Valeriana wol-gensis Kazak. na Juznom Urale. Avtoref. diss. kand. biol. nauk [Biology, ecological-phytocoenotic and population characteristics of Valeriana wolgensis Kazak. in southern Ural (South-Ural state natural reserve). Abstract Cand. Diss.]. Ufa, 2013. 22 p. (In Russ.).
Harrasova G.V. Introdukcija nekotorych vidov roda Valeriana rjada Officinales v uslovijach kul'tury v stepnoj zone Baskirskogo Zaural'ja. Avtoref. diss. kand. biol. nauk [Introduction some species of the genus Valeriana Officinales range in conditions of culture in the steppe zone of the Bashkir Zauralye. Abstract Cand. Diss.]. Ufa, 2012. 22 p. (In Russ.).
Harrasova G.V., Barysnikova N.I., Ismuratova M.M. [Introduction species of the genus Valeriana in the Bashkir TRANS-Urals]. Izvestija Samarskogo naucnogo centra RAN. V. 13, N 5(3) (2011): pp. 116-119. (In Russ.).
Castillo P., Marquez J., Rubluo A., Hernandez G., Lara M. Plant regeneration from callus and suspension cultures of Valeriana edulis ssp. procera via simultaneous organogenesis and somatic embryogenesis. Plant Science V. 151, N 2 (2000): pp. 115-119.
Kaur R., Sood M., Chander S., Mahajan R., Kumar V., Sharma D.R. In vitro propagation of Valeriana jatamansi. Plant Cell, Tissue and Organ Culture V. 59, N 3 (1999): pp. 227-229.
Kling J. Protecting medicine's wild pharmacy. Nature plants V. 2, N 5 (2016): p. 16064.
Mathur, J., Ahuja P.S., Lal N., Mathur A.K. Propagation of Valeriana wallichii DC using encapsulated apical and axial shoot buds. Plant Sci., V. 60, N 6 (1989): p. 111.
Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. V. 15, N 13 (1962): pp. 473-497.
Pilerood Sh., Prakash J. Nutritional and medicinal properties of valerian (Valeriana officinalis) herb: A review. International Journal of Food, Nutrition and Dietetics V. 1, N 1 (2013): pp. 25-32.
Reza A. G., Morteza K. K., Akhtar S. Rapid micropropagation through shoot regeneration of Valeriana officinalis L. Horticulture environment and biotechnology V. 50, N 5 (2009): pp. 467-471.
Heng-Wen Chen, Ben-Jun Wei, Xuan-Hui He, Yan Liu, Jie Wang. Chemical Components and Cardiovascular Activities of Valeriana spp. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine
V. 1 (2015). Article ID 947619. Available at: http: http://dx.doi.org/10.1155/2015/947619.
Salles L.d.A., Silva A.L., Fett-Neto A.G., von Poser G.L., Rech S.B. Valeriana glechomifolia: in vitro propagation and production of valepotriates. Plant Science V. 163, N 1 (2002): pp. 165-168.
Schippmann U., Leaman J.D., Cunningham A.B. Impact of Cultivation and Gathering of Medicinal Plants on Biodiversity: Global Trends and Issues. Departmental Working Group on Biological Diversity for Food and Agriculture, Organisation of the United Nations, 2002. Rome, Italy.
Поступила в редакцию 31.10.2017
Об авторах
Ишмуратова Майя Мунировна, профессор, доктор биологических наук, профессор кафедры экологии и биологии
ФГБОУ ВО «Башкирский государственный университет»
ORCID: 0000-0001-8379-574Х 450076, Республика Башкортостан, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32; ishmuratova@mail.ru; (347)2726370
Барышникова Надежда Ивановна, доцент, кандидат биологических наук, зав. кафедрой стандартизации, сертификации и технологии продуктов питания
ФГБОУ ВО «Магнитогорский государственный технический университет им. Г.И. Носова» ORCID: 0000-0001-9601-8173 455000, Челябинская область, г. Магнитогорск, ул. Ленина, 38; barunya@mail.ru; (351)9580639
Газиева Эльмира Миниахметовна, аспирант ФГБОУ ВО «Башкирский государственный университет»
ORCID: 0000-0003-4584-551Х 450076, Республика Башкортостан, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32; snowwood@mail.ru; (8)9279625067
About the authors
Ishmuratova Maya Munirovna, professor, doctor of biology, Professor of department of ecology and biology
Bashkir State University.
ORCID: 0000-0001-8379-574X
32 Zaki Validi str., Ufa, Republic of Bashkortostan,
Russia, 450074; ishmuratova@mail.ru;
(347)2726370
Barushnikova Nadezhda Ivanovna, associate Professor, candidate of biology; head the Department of standardization, certification and food technology
Nosov Magnitogorsk State Technical University. ORCID: 0000-0001-9601-8173 38, Lenin str., 455000, Magnitogorsk, Chelyabinsk region, Russia; barunya@mail.ru; (351)9580639
Gazieva Elmira Miniahmetovna, graduate student
Bashkir State University.
ORCID: 0000-0003-4584-551X
32 Zaki Validi str., Ufa, Republic of Bashkortostan,
Russia, 450074; snowwood@mail.ru;
+79279625067
