CC BY
37
33. Лисенко, С. А Структуры особливост штоскокштинних карцином у хворихна рак легеш з шаранеошластичним ревма-тологтчним синдромом / С. А. Лисенко, Б. А. Болюх, В. Н. Стри-жалковський // Свiт медицини та бюлоги. — 2012. — Т. 8, № 2. — С. 120-122.
34. Мазуров, В. И. Клиническая ревматология: рук-во для врачей / В. И. Мазуров. — СПб.: ФОЛИАНТ, 2005. — 389 с.
35. Мороз, Н. Г. Паранеошластическая реакция типа ревматоидного артрита и аллергического синдрома при опухолевых заболеваниях / Н. Г. Мороз, Т. Н. Бызова, Н. М. Мазина // Терапевтический архив. — 1985. — Т. 18. — С. 130-132.
КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА
36. Ивашкин, В. Т. Паранеопластический артрит: этиопато-генез — клинико-диагностические параллели / В. Т. Ивашкин // Клиническая геронтология. — 2009. — Т. 15, N° 2. — С. 27-33.
37. Ревматические маски паранеопластического синдрома. / А. П. Ребров [и др.] // Научно-практическая ревматология. —
2001. — № 2. — С. 18-21.
38. Фомина, Л. Л. Паранеопластические синдромы в ревматологии / Л. Л. Фомина // Научно-практическая ревматология. —
2002. — № 2. — С. 4.
39. Паранеопластический артрит / А. Н. Калягин [и др.] // Сибирский медицинский журнал. — 2013. — № 5. — С. 139-141.
Поступила 30.09.2014
УДК 618.19-006.6(476.6)
КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВЫЯВЛЕНИЯ BRCA-1 С ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЙ ОЦЕНКОЙ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ АНДРОГЕНОВ И C-KIT ^117) ПРИ ТРОЙНОМ НЕГАТИВНОМ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ЖЕНЩИН ГРОДНЕНСКОЙ ОБЛАСТИ
А. Ю. Крылов, Ю. В. Крылов, М. Г. Зубрицкий, И. А. Курстак, С. А. Ляликов, В. А. Басинский
Институт повышения квалификации и переподготовки кадров Государственного комитета судебных экспертиз Республики Беларусь, г. Минск Витебский государственный медицинский университет Гродненское областное клиническое патологоанатомическое бюро Гродненский государственный медицинский университет
В Гродненской области в 2010-2015 гг. проведено иммуногистохимическое обследование 2008 пациенток с раком молочной железы с определением Нег2/пеи, рецепторов эстрогена и прогестерона. Тройной негативный рак молочной железы, отрицательный к этим маркерам, выявлен в 19,8 % случаев при ежегодных колебаниях его доли в пределах 16,4-21,6 %.
В базе данных по определению BRCA-1 (449 женщин с раком молочной железы) у 39 был установлен тройной негативный рак молочной железы. Мутация BRCA-1 выявлена в 5 из 39 (12,8 %) наблюдений. Гистологически эти опухоли были представлены инвазивным протоковым раком, в2-в3 — у 3 пациенток, а также медуллярным раком, в3 — 2 случая. При ИГХ-исследовании 23 случаев экспрессия CD117 различной интенсивности выявлена в 11 (47,8 %), а очаговая ядерная экспрессия (< 1 %) андроген рецепторов — в 1 (4,35 %) случае.
Наличие случаев гиперэкспресии С-кй (СБ-117) предполагает изучение возможности таргетной терапии иматинибом по аналогии с гастроинтестинальными стромальными опухолями. Это, в свою очередь, требует включения С-кк (СБ-117) в список обязательных ИГХ-маркеров при тройном негативном раке молочной железы, а установление в послеоперационном диагнозе тройного негативного рака молочной железы, предполагает необходимость определения мутации BRCA-1.
Ключевые слова: тройной негативный рак молочной железы, BRCA-1 мутации, экспрессия рецепторов андрогенов и С-кй.
CLINICAL AND MORPHOLOGICAL ANALYSIS OF BRCA-1 IDENTICATION WITH IMMUNOHISTOCHEMICAL ASSESSMENT OF ANDROGEN RECEPTOR AND C-KIT (CD117) EXPRESSION IN TRIPLE-NEGATIVE BREAST CANCER IN WOMEN OF GRODNO REGION
A. Y. Krylov, Y. V. Krylov, M. G.Zubritsky, I. A. Kurstak, C. A. Lyalikov, V. A. Basinski
Institute of In-service Training and Staff Retraining of the State Committee of the Republic of Belarus Legal Expertise, Minsk Vitebsk State Medical University Grodno Regional Clinical Patholoanatomical Bureau Grodno State Medical University
We conducted the immunohistochemical examination of 2008 patients with breast cancer determining Her2/neu, receptor estrogene, and progesterone in Grodno region over 2010-2015. We revealed triple negative breast cancer to be negative to these markers in 19.8 %, with annual fluctuations of its share within 16.4-21.6 %.
39 women from the BRCA-1 database (449 women with breast cancer) detected triple negative breast cancer. Mutation of BRCA-1 was identified in 5 out of 39 (12.8 %) cases. Histologically, these tumors were presented by invasive ductal carcinoma, by G2-G3 and also medullary cancer in 3 cases, by G3 — in 2 cases. During the im-munohistochemical study of 23 cases, CD-117 expression of varying intensity was detected in 11 (47.8 %) and focal nuclear expression of androgen receptors (< 1 %) in 1 case (4.35 %).
The presence of C-kit (CD-117) hyperexpression presupposses the study of the possibility of the targeted therapy with imatinib by analogy with gastrointestinal stromal tumors, which, in turn, requires the inclusion of C-kit (CD 117) into the list of mandatory immunohistochemical markers in triple negative breast cancer, and the postoperative diagnosis of triple negative breast cancer presupposses the necessity for BRCA-1 mutation identification.
Key words: triple-negative breast cancer, BRCA-1 mutations, expression of androgen receptor and C-kit.
Введение
О большей частоте мутаций BRCA-1 в тройном негативном раке молочной железы (ТНРМЖ) по сравнению с остальными случаями рака молочной железы (РМЖ) сообщают, в частности, N. M. Tun et al. (2014) [1].
Отсутствие возможности использования для лечения ТНРМЖ таргетной и гормональной терапии диктует необходимость поиска иммуногисто-химических (ИГХ) маркеров для определения возможности разработки таргетной терапии ТНРМЖ. Недавно появились публикации об экспрессии в ряде случаев ТНРМЖ рецепторов андрогенов (AR). По данным литературных источников, AR экспрессируется в 10-43 % ТНРМЖ [2, 3, 4].
В наших предыдущих исследованиях AR определялись в ТНРМЖ в 11 случаях из 50, что составило 22 %, и характеризовались отсутствием регионарных и отдаленных метастазов [5]. В последние годы появились публикации, в которых описаны попытки таргетной терапии AR + РМЖ [6].
Кроме того, по данным литературных источников, в части случаев ТНРМЖ определяется экспрессия C-kit (CD-117). M. Tahany et al. (2011) в 54 из 72 (75 %) случаев ТНРМЖ обнаружили позитивные C-kit (CD-117), причем отчетливо окраска была в 20 (37,1 %) наблюдениях [7]. Sara Janssan et al. (2014) при анализе 34 случаев ТНРМЖ обнаружили позитивную реакцию C-kit (CD-117) в 16 (49 %) наблюдениях, негативную — в 17 (51 %) [8]. Все вышесказанное указывает на возможность проведения ИГХ-анализа экспрессии AR и C-kit (CD-117) клетками опухолей пациенток с ТНРМЖ, которым проводилось определение мутации гена BRCA-1.
Цель исследования
Провести клинико-морфологический анализ выявления BRCA-1 при ТНРМЖ с оценкой экспрессии AR и C-kit (CD-117).
Материал и методы
Молекулярно-генетическое исследование образцов ДНК на наличие мутаций в генах BRCA-1 проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) у 449 пациенток с РМЖ. При анализе базы данных установлено, что BRCA-1 исследовался в 39 случаях ТНРМЖ, где был проведен клинико-морфологический анализ. ИГХ-исследование экспрессии AR и C-kit (CD-117) проведено у 23 больных, так как часть материала была выдана на руки пациенткам. Для морфологического исследования из архивных парафиновых блоков готовили срезы толщиной 5 мкм, которые депарафинировали в ксилоле, спиртах и окрашивали гематоксилином и эозином. Для иммуногистохимического исследования использовались стандартные методики и наборы антител фирмы «DAKO». Оценка морфологических параметров проводилась с использованием светового оптического микроскопа «Carl Zeiss» Axioscop 40 при увеличении в 100, 200 и 400.
Статистический анализ результатов исследования был выполнен с использованием аналитического пакета «Statistica», 7.0. При необходимости сравнения частот встречаемости признаков в различных группах использовали таблицы сопряжения — тест %2, а при малом (n < 10) размере сравниваемых групп — точный тест Фишера (Fisher's exact test).
Результаты и обсуждение
В Гродненской области в 2010-2015 гг. проведено иммуногистохимическое (ИГХ) обследование 2008 пациенток с раком молочной железы (РМЖ) с определением Her2/neu, рецепторов эстрогена (ER) и прогестерона (PR). Тройной негативный рак (ТНРМЖ), отрицательный к этим маркерам, выявлен в 398 (19,8 %) случаях при ежегодных колебаниях его доли в пределах 16,4-21,6 % (таблица 1).
Таблица 1 — Выявление ТНРМЖ в Гродненской области 2010-2015 гг.
Показатель 2010 х2 Р 2011 х2 Р 2012 х2 Р 2013 х2 Р 2014 х2 Р 2015 всего
ТНРМЖ (абс./% ) 34/16, 4 % 0,79 0,3748 65/19 % 0,07, 0,7858 67/20 % 0,22, 0,6397 58/17,4 % 0,22, 0,6381 77/20 % 0,22, 0,6368 97/21,6 % 398/ 19,8 %
РМЖ 207 — 334 — 330 - 308 - 380 - 449 2008
Анализ данных таблицы 1 показывает, что удельный вес ТНРМЖ колебался в пределах 16,4-21,6 %, составляя в среднем за изученный период 19,8 %, и статистически значимых различий ежегодно не наблюдалось (р > 0,05).
Пик заболеваемости РМЖ регистрировался у женщин в возрасте 60-65 лет [9]. По нашим данным, в 2010 г. средний возраст составил 52,8, в 2011 г. — 56,4, в 2012 г. — 57,2, в 2013 г. — 56,6, в 2014 г. — 56,5, в 2015 г. — 58 лет. Средний возраст пациенток с ТНРМЖ в нашем исследовании составил 56,2 года. Данные литературных источников также свидетельствуют о более молодом возрасте выявления опухоли при ТНРМЖ: 50 лет [10], 55,6 лет [11].
В наших предыдущих исследованиях мутаций BRCA-1 у населения Гродненской области их частота у пациенток без учета наслед-
Анализ данных таблицы показывает, что при ТНРМЖ данная мутация встречается чаще, чем в группе пациенток с не ТНРМЖ.
При морфологическом анализе ТНРМЖ был представлен в 29 (74,4 %) случаях инвазивной протоковой карциномой (02-3), в 4 (10,3 %) — инвазивной дольковой карциномой (02-3), в 5 (12,8 %) случаях — медуллярным (03) и в 1 (2,5 %) — недифференцированным раком (03).
Мутация гена BRCA-1 выявлена в 5 (12,8 %) случаях ТНРМЖ из 39. Средний возраст пациенток составил 52,6 ± 11,8 года. Гистологически эти опухоли были представлены: в 2 случаях медуллярным раком 03, в 3 — инвазив-ным протоковым раком 02-03. 2 наблюдения были представлены первично-множественными злокачественными опухолями. Так, в одном случае имело место метахронное билатеральное поражение молочных желез, а в другом — метахронное поражение молочной железы и эндометрия.
Иммуногистохимическое исследование с антителами к AR и CD-117 проведено в 23 случаях, так как часть материала была выдана пациенткам. При анализе экспрессии этих маркеров установлено, что экспрессия CD-117 различной интенсивности выявлена в 11 (47,8
ственной отягощенности с диагнозом РМЖ составила 3,8 %. Частота встречаемости мутаций ВЯСЛ-1 у пациенток с первично-множественным раком (ПМР) молочной железы составила 8,6 % и была достоверно выше, чем у пациенток без ПМР молочной железы — 2,7 % (р < 0,02). Процент выявления BRCA-1 не зависел от степени экспрессии ЕЯ, РЯ и НЕЯ2/пеи [12-15].
В клинико-диагностической лаборатории Гродненской областной клинической больницы в 2010-2014 гг. проведено определение мутации BRCA-1 в 449 случаях РМЖ, при этом 39 случаев были представлены ТНРМЖ (средний возраст этих пациенток составил 54,8 ± 11,7 лет). Всего за этот период в группе из 449 наблюдений РМЖ выявлено 17 (3,8 %) женщин с мутацией в генах BRCA-1 (12 из 410 — не ТНРМЖ и 5 из 39 — ТНРМЖ) (таблица 2).
%) случаях, а очаговая ядерная экспрессия AR (< 1 %) — в 1 (4,35 %) случае.
В материале, исследованном иммуногисто-химически, было 2 наблюдения с наличием мутации BRCA-1. Оба были AR негативны. В одном случае (пациентке 61 год), гистологически представленном медуллярным раком G3 с метастатическим поражением одного из подмышечных лимфатических узлов, обнаружена очаговая цитоплазматическая экспрессия C-kit (СБ-117) (метахронное билатеральное поражение молочных желез). В другом (67 лет) — выявлялась гиперэкспрессия ^кй (СБ-117). Гистологически — медуллярный рак G3, без метастазов в лимфатические узлы (метахронное поражение молочной железы и эндометрия) (рисунок 1).
Наличие в нашем материале случаев гиперэкспрессии ^кй (СБ-117) клетками ТНРМЖ предполагает (по аналогии с позитивными к ОкЛ (СБ-117) гастроинтестинальными стромальными опухолями) изучение возможности применения иматини-ба. Это определяет необходимость включения в набор обязательных ИГХ-маркеров при ТНРМЖ маркера С-кй (СБ-117). Кроме того, относительно высокая частота мутаций BRCA-1 в ТНРМЖ предполагает при его выявлении в послеоперационном материале определение мутаций BRCA-1.
Таблица 2 — Частота определения мутации в генах BRCA-1 при ТНРМЖ и других РМЖ
Показатель Не ТНРМЖ (абс./% ) ТНРМЖ (абс./% ) х2; р
Мутация BRCA-1 12/2,9 % 5/12,8 % 7,05; 0,0079
Всего 410 39 —
Рисунок 1 — Медуллярный рак молочной железы, х400. опухоль солидного строения. Экспрессия С-кй (СБ-117). интенсивное цитоплазматическое и мембранное окрашивание
в различные оттенки коричневого цвета
Выводы
1. В 2010-2015 гг. в Гродненской области выявление ТНРМЖ колебалось в пределах 16,4-21,6 %, составляя в среднем 19,8 % от всех РМЖ.
2. Мутации BRCA-1 были выявлены в 5 из 39 (12,8 %) случаев ТНРМЖ.
Гистологически эти опухоли представлены: в 2 случаях медуллярным раком G3, в 3 — были инвазивным протоковым раком G2-G3. В двух наблюдениях отмечены первично-множественные злокачественные опухоли. В одном случае имело место метахронное билатеральное поражение молочных желез, а в другом — метахронное поражение молочной железы и эндометрия.
3. Иммуногистохимическое исследование экспрессии AR и C-kit (CD-117), проведенное в 23 случаях РМЖ, выявило экспрессию CD-117 различной интенсивности в 11 (47,8 %), а очаговую ядерную экспрессию (< 1 %) AR — в 1 (4,35 %) случае.
4. Наличие в нашем материале случаев гиперэкспрессии C-kit (CD-117) клетками ТНРМЖ, предполагает (по аналогии с позитивными к C-kit (CD-117) гастроинтестинальными стро-мальными опухолями) изучение возможности применения иматиниба. Это определяет необходимость включения в набор обязательных ИГХ-маркеров при ТНРМЖ C-kit (CD-117). Кроме того, относительно высокая частота мутаций BRCA-1 в ТНРМЖ предполагает при его выявлении в послеоперационном материале определение мутаций BRCA-1.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1, Risk of having BRCA1 mutation in high-risk women with triple-negative breast cancer: a meta-analysis / N. M. Tun [et al.] // Clin. Genet. — 2014. — Vol. 85(1). — P. 43-48.
2. Androgen receptor expression and breast cancer survival in postmenopausal women / R. Hu [et al.] // Clin. Cancer Res. — 2011. — Vol. 17(7). — P. 1867-1874.
3. Expression of androgen receptors in triple negative breast carcinomas / I. Mrklic' [et al.] // Acta Histochemica. — 2013. — Vol. 115. — P. 344-348.
4. Androgen receptor driven transcription in molecular apocrine breast cancer is mediated by Fox A1 / J. L. Robinson [et al.] // EMBO Journal. — 2011. — Vol. 30. — P. 3019-3027.
5. Определение андрогеновых рецепторов в клепках тройного негативного рака молочной железы / А. Ю. Крылов [и др.] // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 2016. — № 1. — С. 32-36.
6. Multiple Molecular Subtypes of Triple-Negative Breast Cancer Critically Rely on Androgen Receptor and Respond to En-zalutamide in vivo / V. N. Barton [et al.] // Molecular Cancer Therapeutics. — 2015. — С. 769-778.
7. Overexpression of c-KIT (CD-117) in triple-negative breast cancer / Sh. M. Tahany [et al.] // Egyptian Journal of Pathology. — 2011. — Vol. 31, Is. 2. — P. 113-117.
8. The Three Receptor Tyrosine Kinases c-KIT, VEGER2 and PDGERa, Closely Spaced at 4q12, Show Increased Protein Expression in Triple-Negative Breast Cancer / S. Jansson [et al.] // Open access Freely available online. — 2014. — Vol. 9, № 7. — Р. 54-62.
9. Клинические рекомендации. Онкология / под ред. В. И. Чис-сова, С. Л. Дарьяловой. — 2-е изд., испр. и доп. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. — 928 с.
10. Single Centre Clinical of a Greek Patient Population with Triple-Negative Breast Cancer / D. Panousis [et al.] // Hellenic Journal of Surgeru. — 2014. — Vol. 86, № 5. — C. 280-286.
11. Identificaation of prognostic different subgroups in triple negative breast cancer by Her 2-neu protein expression / G. Schmidt [et al.] // Arch Gynecol Obster. — 2014. — Vol. 209. — P. 1221-1229.
12. Особенности рецепторного статуса у пациенток с наследственным раком молочной железы в белорусской популяции / И. А. Курстак [и др.] // Матер. науч.-практ. конф., посвященной 55-летию учреждения образования «Гродненский государственный медицинский университет» «Актуальные проблемы медицины», Гродно, 3-4 октября 2013 г. — Гродно: ГрГМУ, 2013. — С. 384-387.
13. Частота мутаций гена BRCA и клинический риск при наследственных опухолях женской репродуктивной системы / О. Е. Кузнецов [и др.] // Здравоохранение. — 2011. — № 4. — С. 71-74.
14. Прогностическая значимость клинико-генетических признаков в диагностике предрасположенности к наследственному раку молочной железы и яичников у здоровых лиц в белорусской популяции / И. А. Курстак [и др.] // Журнал Гродн. гос. мед. университета. — 2013. — № 1 (41). — С. 34-36.
15. Прогнозирование мутации в генах BRCA у пациенток с раком молочной железы / И. А. Курстак [и др.] // Лабораторная диагностика. Восточная Европа. — 2014. — № 1(9). — С. 24-30.
Поступила 12.10.2016
УДК 616.831:616.134.9:[616.13:611.018.74]-008.6-053.81
МЕХАНИЗМ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ДИСФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ У ЛИЦ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА СО СПОНДИЛОГЕННОЙ
