CC BY
246
Генетика в педиатрии
Е.И. Кондратьева1, В.П. Пузырев2, Л.П. Назаренко2, А.А. Рудко2, Г.Н. Янкина1, Е.В. Лошкова1
1 Сибирский государственный медицинский университет, Томск
2 НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, Томск
Клинико-генетические параллели при целиакии у детей Томска
СТАТЬЯ ПОСВЯЩЕНА АНАЛИЗУ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ЦЕЛИАКИИ. ИЗУЧЕНЫ АССОЦИАЦИИ ГЕНОВ HLA И ГЕНОВ-МОДИФИКАТОРОВ ИММУННОГО ОТВЕТА (ИНТЕРЛЕЙКИНА 1, АНТАГОНИСТА РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА 1, ИНТЕРЛЕЙКИНА 4, а-СУБЪЕДИНИЦЫ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА 4, РЕЦЕПТОРА К ВИТАМИНУ D) С ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬЮ К БОЛЕЗНИ, А ТАКЖЕ С ВАРИАНТАМИ ЕЕ ТЕЧЕНИЯ И СОПУТСТВУЮЩИМИ АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ (АУТОИММУННЫМ ТИРЕОИДИТОМ, САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ ТИПА 1).
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ЦЕЛИАКИЯ, НАСЛЕДСТВЕННАЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ, ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ.
Контактная информация:
Кондратьева Елена Ивановна, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой педиатрии ФПК и ППС ГОУ ВПО Сибирского государственного медицинского университета Адрес: 634050, Томск,
Московский тракт, д.4, тел. (3822) 531-012 Статья поступила 03.07.2007 г., принята к печати 15.10.2007 г.
Среди аутоиммунных заболеваний целиакия остается наименее изученной. Основное проявление заболевания — синдром мальабсорбции, который определяет нарушение всех видов обмена веществ и клинический полиморфизм болезни, затрудняет диагностику, способствует развитию множества дефицитных состояний, усугубляет социально-биологическую адаптацию ребенка, приводя к инвалидности [1-3].
Известно, что аутоиммунным механизмам принадлежит важная роль в дебюте целиакии. Доказано, что манифестация заболевания возникает вследствие активации как клеточного, так и гуморального звена иммунитета в ответ на присутствие глютенов (проламинов и глютенинов пшеницы, ржи, ячменя, овса) у генетически предрасположенных лиц [1-6]. Механизмы, лежащие в основе повреждающего действия глютенов, тесно связаны с Т лимфоцитами и детерминированы генами главного комплекса гистосовместимости (Н1_А), конкретно аллелями II класса [7]. Типирование Н1_А-антигенов иногда имеет решающее значение в постановке диагноза целиакии, хотя окончательный диагноз возможен только после гистологического исследования слизистой оболочки тонкой кишки [7].
В последнее десятилетие при изучении генетических аспектов целиакии особое внимание уделяется поиску новых генов подверженности болезни, не относящихся к главному комплексу гистосовместимости [8, 12, 14]. Известна роль генов цитокинов в развитии аутоиммунного процесса при целиакии, но пока остается малоизученным вопрос о влиянии полиморфизма генов-модификаторов иммунного ответа на развитие заболевания и его клинические проявления, что представляет как научный, так и практический интерес. В связи с этим в настоящем исследовании было поставлены следующие три задачи.
♦ Изучение частоты аллелей локусов Н1_А-О0А1 и Н1_А-О0В1 у больных целиакией Томска и в группе лиц высокого риска (сибсы).
25
Ye.I. Kondratyeva1, V.P. Puzyriov2, L.P. Nazarenko2,
A.A. Rudko2, G.N. Yankina1, Ye.V. Loshkova1
1 Siberian State Medical University, Tomsk
2 Research Institute of Medical Genetics, Tomsk Scientific Center, Siberian Department of the Russian Academy of Medical Sciences, Tomsk
Clinical and genetic parallels along celiac disease among Tomsk children
THE ARTICLE IS DEVOTED TO THE ANALYSIS OF THE GENETIC PREDISPOSITION TO CELIAC DISEASE. THE AUTHORS STUDIED THE ASSOCIATIONS OF THE HLA GENES AND MODIFIER GENES OF THE IMMUNE RESPONSE (INTERLEUKINE 1, INTERLEUKINE 1 RECEPTOR ANTAGONIST, INTER-LEUKINE 4, a-SUBUNITS OF INTERLEUKINE 4 RECEPTOR, RECEPTOR TO D VITAMIN) ALONG WITH PREDISPOSITION TO THE DISEASE, AS WELL AS THE VARIANTS OF ITS RUN AND ACCOMPANIED AUTOIMMUNE DISEASES (AUTOIMMUNE THYROIDITIS, INSULAR DIABETES TYPE 1).
KEY WORDS: CELIAC DISEASE, GENETIC PREDISPOSITION, GENETIC ANALYSIS.
a
I-
n
и
Щ
X
♦ Изучение частоты тканеспецифического антителоноси-тельства и гистологических изменений на слизистой оболочке тонкого кишечника в группе высокого риска (сибсы).
♦ Исследование влияния аллельных вариантов генов иммунного ответа: интерлейкина 1 (1Ь1В — +3953А1/А2), антагониста рецептора интерлейкина 1 (IL1RN — VNTR), интерлейкина 4 (^4 — 3'-1^ G/C), а-субъединицы рецептора интерлейкина 4 (^4 RA — 150У), а также гена рецептора к витамину D (VDR — F/f и В/Ь) на клинические проявления целиакии.
ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ
В исследование были включены дети с целиакией (п = 50) в возрасте от 9 мес до 19 лет, а также родственники первой степени родства (п = 86) из 35 семей. Типичная форма целиакии была диагностирована у 26 детей, атипичная форма — у 24. Контрольную группу составили 123 человека, представители русского населения Томска. Использовали два исследовательских подхода, отличающихся друг от друга по контрольной группе. В одном случае в качестве контрольной группы использовали популяционную выборку (п = 123), в другом — родственников больных (п = 86). Последний подход является непременным атрибутом современных генетико-эпидемиологических исследований заболеваний [11]. Молекулярно-генетический анализ проводили на выделенной тотальной ДНК цельной крови с помощью стан-
дартного метода фенол-хлороформной экстракции. Характеристика исследованных полиморфизмов генов представлена в табл. 1. Генотипирование специфичностей HLA-системы (локусы HLA-DQA1, HLA-DQB1) проводили с применением коммерческих наборов для HLA-типирования фирмы «ДНК-технология» (Москва). Для проверки соответствия распределения генотипов ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга, сравнения частот аллелей и генотипов, оценки связи аллелей генов с ТБ использовали критерий х2 Пирсона с поправкой Йетса на непрерывность при числе степеней свободы, равном 1, а также двусторонний точный критерий Фишера в случае, если ожидаемое значение хотя бы в одной ячейке таблицы сопряженности было меньше 5 [9, 15]. Об ассоциации разных генотипов (или их комбинаций) и аллелей с заболеванием судили по величине отношения шансов [Odds Ratio (OR)], которое показывает, во сколько раз выше вероятность заболеть для индивида с определенным генотипом (или комбинацией генотипов) [16].
Для анализа ассоциаций генных маркеров с целиакией на семейном материале, в котором в качестве контрольной группы выступали собственные родители или сибсы пробандов, использовали Transmission disequilibrium test (TDT) [11], считающийся одним из наиболее мощных и точных подходов анализа ассоциаций. Статистика теста рассчитывается по формуле: TDT = (b-c)2 / (b + c), где
Таблица 1. Характеристика исследованных полиморфизмов генов
Ген Локализация гена на хромосоме/OMIM Полиморфизм Локализация в гене Метод детекции (диагностический набор, фермент рестрикции)
Гены HLA-системы
HLA-DQA1 6p21.3/146880 DQA1*0101 DQA1*0102 DQA1*0103 DQA1*0201 DQA1*0301 DQA1*0401 DQA1*0501 DQA1*0601 Структурная часть гена Комплект реагентов для генотипирования HLA, научно-производственная фирма «ДНК-диагностика», Москва
HLA-DQB1 6p21.3/604305 DQB1*0201 DQB1*0301 DQB1*0302 DQB1*0303 DQB1*0304 DQB1*0305 DQB1*0401/2 DQB1*0501 DQB1*0502/4 DQB1*0503 DQB1*0601 DQB1*0602-8 Структурная часть гена
Не HLA-гены
IL1B 2q14/147720 (+3953)A1/A2 Экзон 5 TaqI
IL1RN 2q14.2/147679 VNTR Интрон 2 -
IL4 5q31.1/147780 3'-UTR G/C 3'-UTR Vne I
IL4RA 16p12.1-11.2/147781 I50V (A148G) Экзон 3 Rsa I
VDR 12q12-q14/601769 F/f Экзон 2 FokI
B/b 8 интрон BsmI (PctI)
26
Ь и с — наследуемые от гетерозиготных родителей аллели, и в случае верной нулевой гипотезы (Н0: нет ассоциации) распределена как х2 с 1 степенью свободы.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
HLA-типирование было проведено 66 детям (47 про-бандов, 14 сибсов и 5 детей с подозрением на целиа-кию); из 47 детей с целиакией у 30 была диагностирована типичная форма заболевания, у 17 — атипичная. Патологические HLA-маркеры целиакии обнаружены у всех больных целиакией. Наиболее часто у детей с целиакией регистрировали специфичности DQA1*501 (45%), DQA1*102 (30%), DQВ1*201 (25%). При типичной форме целиакии у детей наиболее часто выявляли аллели HLA-DQA1*301: 26,3% против 12,5% при атипичной целиакии (табл. 2). В то же время патологический аллель HLA-DQA1*102 в 2 раза чаще выявляли при атипичной форме целиакии. Частота сочетания аллелей HLA-комплекса DQA1 и DQВ1 составила 70%, при этом комбинация HLA-DQ А1*0501 В1*0201 выявлена в 29,7% случаев (14 детей), что значительно ниже, чем в странах Северной Европы. Англия, Финляндия характеризуются самой высокой распространенностью (95-99%) патологических аллелей HLA-системы [1].
Из 14 обследованных сибсов у 98,5% найдены патологические антигены HLA, лишь у одного ребенка HLA-маркеры целиакии отсутствовали. Повышенный уровень антител к глютену (^ и ^) был выявлен у 78,6% сибсов, однако проведенное в последующем гистологическое исследование слизистой оболочки тонкой кишки позволило верифицировать диагноз целиакии только у 3 (21,4%) детей. Таким образом, HLA-типирова-ние должно быть первым этапом в формировании групп риска среди родственников больных целиакией (группа генетического риска). Серологический этап (второй этап диагностики) позволяет выявить лиц с иммунологическими отклонениями (группа иммунологического риска), которые требуют дальнейшего дина-
мического наблюдения при отрицательных результатах гистологического исследования слизистой оболочки тонкой кишки (третий, основной, этап диагностики).
При изучении полиморфизма генов VDR, ^1В,
^4, IL4RA и ^12В в контрольной выборке русских жителей Томска распределение генотипов практически всех изученных полиморфных вариантов соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга, отклонение было выявлено лишь для VNTR полиморфизма гена IL1RN (х2 = 13,84, р < 0,01) за счет недостатка гетерозигот (НоЬз = 0,178, Нехр = 0,287, D = -0,380) (табл. 3). В выборке детей с целиакией распределение генотипов по всем изученным полиморфизмам соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (см. табл. 3). Для трех полиморфных вариантов ^717С, 1504 F/f) в контрольной выборке выявлен избыток гетерозигот, а у больных целиакией — их недостаток, тогда как для полиморфизмов В/Ь и +3953А1/А2 наблюдалась обратная ситуация, то есть избыток гетерозиготных генотипов в выборке больных при их недостатке в контрольной выборке (см. табл. 3). Данный факт может косвенно свидетельствовать о значимости гетерозиготных генотипов этих полиморфных вариантов в развитии целиакии.
При сравнении частот аллелей изученных полиморфизмов между контрольной группой и выборкой больных целиакией, ассоциаций не выявлено ни для одного из полиморфных вариантов генов VDR, ^1В, ^12В,
^4, IL4RA. Наблюдалась тенденция к более высокой частоте аллеля А2 VNTR полиморфизма гена IL1RN (р = 0,08) и аллеля А2 полиморфизма +3953А1/А2 гена ^1В у детей с целиакией. Сравнение частот генотипов для VNTR полиморфизма не проводилось в связи с большим количеством аллелей [4]. Известно, что аллель А2+ VNTR полиморфизма гена IL1RN даже в гетерозиготном состоянии многократно усиливает секрецию кодируемого продукта, что приводит к противовоспалительному эффекту [4]. Функция рецепторного антагониста к ^1, кодируемого геном заклю-
27
Таблица 2. Распространенность аллелей HLA-DQ при целиакии у детей Томска
Аллели Целиакия типичная, % Целиакия атипичная, % Общая группа детей, %
В1*0201 36,8 21 25
А1*0501 58 56,3 45
А1*0301 26,3 (р < 0,05) 12,5 16
А1*0102 26,3 56 (р < 0,05) 31
А1*0201 5 25 11
А1*0102 10 12,5 9
А1*0101 32 44 30
А1*0201 16 25 16
В1*0301 37 38 30
В1*602-8 42 75 45
В1*0301 37 31 27
Примечание:
р — достоверность различий между группами сравнения (целиакия типичная, целиакия атипичная); курсивом выделены патологические аллели, отвечающие за предрасположенность к целиакии.
ПЕДИАТРИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ/ 2007/ ТОМ 4/ № 5
Таблица 3. Полиморфизм генов интерлейкинов у больных и в группе контроля
а
н
л
о
ш
ф
X
.ф
28
Выборка Генотип N.0. ^Е. 1 II •6 Частота аллеля ИоЬ8 ± в.е. Иехр ± в.е. D
VNTR полиморфизм гена IL1RN
Целиакия 11 12 22 29 14 6 26.45 19,10 3.45 2,089 р = 0,148 1 = 0,735 2 = 0,265 И0[ж = 0,286 ± 0,004 Иехр = 0,390 ± 0,042 -0,267
Контроль 11 12 22 87 21 10 80.56 33,88 3.56 13,843 р < 0,001 1 = 0,826 2 = 0,174 И0[ж = 0,178 ± 0,001 Иехр = 0,287 ± 0,032 -0,380
+3953 А1/А2 гена 1Ь1Б
Целиакия А1А1 А1А2 А2А2 27 19 1 28.35 16,30 2.35 0,331 р = 0,565 1 = 0,777 2 = 0,223 Ио1ж = 0,404 ± 0,005 Иехр = 0,347 ± 0,048 0,165
Контроль А1А1 А1А2 А2А2 75 37 5 74.72 37,56 4.72 0,000 р = 0,987 1 = 0,799 2 = 0,201 И0[ж = 0,316 ± 0,002 Иехр = 0,321 ± 0,031 -0,015
в/С Э'-иТР полиморфизм гена 1Ь4
Целиакия СС GC GG 4 17 28 3.19 18,62 27.19 0,071 р = 0,790 С = 0,255 G = 0,745 Ио1ж = 0,347 ± 0,005 Иехр = 0,380 ± 0,043 -0,087
Контроль СС GC GG 5 53 65 8.07 46,87 68.07 0,878 р = 0,349 С = 0,256 G = 0,744 Ио1ж = 0,431 ± 0,002 Иехр = 0,381 ± 0,027 0,131
Полиморфизм I50V гена IL4RA
Целиакия II IV № 22 19 7 20.67 21,66 5.67 0,203 р = 0,652 I = 0,656 V = 0,344 Ио1ж = 0,396 ± 0,005 Иехр = 0,451 ± 0,030 -0,123
Контроль II IV № 40 64 18 42.49 59,02 20.49 0,209 р = 0,647 I = 0,590 V = 0,410 И0[ж = 0,525 ± 0,002 Иехр = 0,484 ± 0,011 0,084
Полиморфизм F/f гена VDR
Целиакия FF Ff ff 16 18 15 12.76 24,49 11.76 2,012 р = 0,156 F = 0,510 f = 0,490 Ио1ж = 0,367 ± 0,005 Иехр = 0,500 ± 0,002 -0,265
Контроль FF Ff ff 42 54 17 42.13 53,73 17.13 0,00 р = 1,00 F = 0,611 f = 0,389 И0[ж = 0,525 ± 0,002 Иехр = 0,484 ± 0,011 0,476
Полиморфизм В/Ь гена VDR
Целиакия ВВ ВЬ ЬЬ 4 22 23 4.59 20,82 23.59 0,004 р = 0,948 В = 0,306 Ь = 0,694 Ио1ж = 0,449 ± 0,005 Иехр = 0,425 ± 0,036 0,057
Контроль ВВ ВЬ ЬЬ 11 40 47 9.81 42,38 45.81 0,033 р = 0,856 В = 0,316 Ь = 0,684 Ио1ж = 0,408 ± 0,002 Иехр = 0,433 ± 0,024 -0,056
Полиморфизм 1188А/С гена IL12B
Целиакия АА АС СС 31 16 2 31.04 15,92 2.04 0,00 р = 0,999 А = 0,796 С = 0,204 И0[ж = 0,327 ± 0,004 Иехр = 0,325 ± 0,048 0,005
Контроль АА АС СС 85 43 1 87.92 37,15 3.92 1,539 р = 0,215 А = 0,826 С = 0,174 Ио1ж = 0,333 ± 0,002 Иехр = 0,288 ± 0,031 0,157
-е
Примечание:
N.0. — наблюдаемая численность генотипов; ^Е. — ожидаемая численность генотипов; критерий х2 использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому исходя из равновесия Харди-Вайнберга; <±1\ — число степеней свободы; ИоЬз ± в.е. и Иехр ± в.е. — соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность с ошибкой; D — относительное отклонение наблюдаемой гетерозиготности от ожидаемой.
чается во взаимодеиствии с рецептором цитокина и его блокировании, что проявляется в ослаблении клеточного иммунитета. В то же время, изученный полиморфный вариант гена ^1В изменяет экспрессию кодируемого продукта (аллель А1 полиморфизма +3953А1/А2 повышает экспрессию ^ 1) — одного из ключевых провоспалительных цитокинов [4]. Таким образом, сочетанное влияние полиморфизма генов локуса ^1 может приводить к изменениям функции клеточного иммунитета, что, в свою очередь, может сказываться на клинической картине аутоиммунных заболеваний, в частности целиакии.
Наряду с поиском ассоциации полиморфных вариантов генов-модуляторов иммунного ответа с целиакией методом случай-контроль, был использован метод оценки связи болезни с генетическими маркерами на семейном материале с помощью метода TDT. Кроме того, с помощью TDT-метода проводили поиск ассоциации с вариантами течения заболевания (типичная форма диагностирована у 26 детей, атипичная — 24). Метод оценивает предпочтительность переноса аллеля М1 больному потомку от М1М2 гетерозиготных родителей. Если аллель М1 переносится существенно больше, чем в половину раз, можно заключить, что маркерный локус сцеплен с локусом предрасположенности к заболеванию, и что аллель М1 положительно ассоциирован с аллелем, который увеличивает восприимчивость к заболеванию, или является таковым. Расчет TDT провели для всех исследованных полиморфных маркеров.
На семейном материале больных целиакией выявлена ассоциация с заболеванием полиморфизма 3'-1^ G/C гена ^4 (TDT = 3,849; р = 0,024). Дети с целиакией лишь в 31% случаев наследовали от родителей аллель С, тогда как аллель G — в 69% случаев (табл. 4). Данная ассоциация, вероятно, обусловлена связью полиморфизма с атипичным вариантом течения целиакии (TDT = 3,60; р = 0,025), наследование аллеля G при такой форме заболевания наблюдается в 80% случаев. 1Ь 4 является ключевым цитокином ^2 иммунного ответа, индуцируя дифференцировку CD4 Т лимфоцитов в Th2-хелперные клетки. Исследованный полиморфизм 3'-1^ G/C гена локализован вне кодирующей области, поэтому его эффект, вероятно, может быть связан с изменением уровня экспрессии ^4. Известно, что полиморфизм 3'-1^ G/C находится в тесном неравновесии по сцеплению (р < 0,0001) с полиморфизмом С-5901 (сцеплены аллели G и С). Аллель 590Т (3'-1^ С) ассоциирован с пониженным уровнем экспрессии ^4, тогда как аллель С-590 (или сцепленный с ним 3'-1^ G) ассоциирован с нормальным или повышенным уровнем экспрессии. Таким образом, выявленные в настоящем исследовании ассоциации аллеля 3'-1^ G могут быть связаны с повышенной активацией гуморального звена иммунитета, что приводит к развитию патологического фенотипа.
При поиске связи с клиническими формами заболевания на семейном материале ассоциация была выявлена и для полиморфизма 150У гена IL4RА с типичной формой заболевания (ТDT = 6,250; р = 0,001), за счет
большего наследования аллеля I, а также для аллеля F полиморфизма РД гена VDR (ТDT = 4,500; р = 0,009) с типичной формой заболевания. Таким образом выявленные в настоящем исследовании ассоциации аллеля 3’-1^ G могут быть связаны с повышенной активацией гуморального звена иммунитета, что приводит к развитию патологического фенотипа.
Аллельный вариант 150У локализован в экстрацеллю-лярном домене гена IL4RA. Известны ассоциации этого полиморфного варианта с атопической бронхиальной астмой, повышенным уровнем и другими иммунологическими нарушениями [9]. Аллель 150 повышает сродство рецептора к STAT6, усиливая таким образом эффект ^4, чем вероятно и обусловлена выявленная ассоциация с типичной формой заболевания. Полиморфизм РД гена VDR, расположенный во втором экзоне, влияет на строение кодируемого рецептора, что может приводить к иммунологическим изменениям. Выявлены ассоциации данного полиморфизма с нарушениями минерального обмена кости, с инфекционными заболеваниями, в частности туберкулезом [3]. Существует предположение, что одним из генетических факторов, способных определять ^1-^2 поляризацию иммунного ответа, может быть генотип VDR, в зависимости от которого может проявляться тенденция к развитию ^1- или Th2-иммунитета [3], что в свою очередь может определять характер клинического течения исследуемой патологии.
Известно, что целиакия характеризуется значительным полиморфизмом клинической картины и сопровождается различными осложнениями. В настоящее время по данным литературы атипичная форма заболевания развивается в 7 раз чаще, чем типичная, причем заболевание чаще диагностируют у женщин [1]. В томской популяции типичная форма была диагностирована у 26 (52%) детей, атипичная — у 24 (48%). Заболевание одинаково часто наблюдалось как у мальчиков (23 человека), так и у девочек (27 человек). Кроме того, в исследовании в качестве анализируемых фенотипов использовались наличие или отсутствие таких сочетанных с целиакией заболеваний, как аутоиммунный тиреоидит (АИТ) и остеопенический синдром. Анализ ассоциации исследуемых полиморфизмов с данными фенотипическими проявлениями проводили путем сравнения частот аллелей и генотипов между группами больных и контроля, а также внутри выборки больных между пациентами с наличием выше указанных заболеваний и без таковых.
Для полиморфного варианта 150У гена IL4RA при сравнении больных типичной и атипичной формой между собой выявлены статистически значимые отличия частот генотипов (р = 0,016), 0R для аллеля I при типичной формы заболевания составил 3,34 (95% ДИ 1,22-9,33; р = 0,016), кроме того у больных атипичной формой заболевания чаще выявляли генотип W (0R = 15,6; 95% ДИ 1,48-391,15; р = 0,013). Полученные данные подтверждают ассоциацию полиморфизма 150У с характером течения целиакии, выявленную на семейном материале при помощи TDT-теста.
29
ПЕДИАТРИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ/ 2007/ ТОМ 4/ № 5
Таблица 4. Количество аллелей, унаследованных больными целиакией потомками от гетерозиготных родителей
30
Полиморфизм Патология Аллели Количество перенесенных аллелей TDT р (^. = 1)
11_1В +3953А1/А2 Целиакия А1 А2 13 8 1,190 0,385
Типичная форма А1 А2 5 6 0,000 1,000
Атипичная форма А1 А2 7 3 1,600 0,263
11_^Ы УЫТР Целиакия А1 А2 8 11 0,474 0,673
Типичная форма А1 А2 5 3 0,125 0,724
Атипичная форма А1 А2 2 6 2,000 0,178
11_4 07170 Целиакия в 0 18 8 3,849 0,024
Типичная форма в 0 10 5 1,667 0,263
Атипичная форма в 0 8 2 3,600 0,025
11_4Р 150У Целиакия I V 20 11 2,613 0,083
Типичная форма I V 13 3 5,063 0,024
Атипичная форма I V 4 9 1,923 0,210
11_12В А11880 Целиакия А 0 14 10 0,375 0,540
Типичная форма А 0 6 6 0,083 0,773
Атипичная форма А 0 5 4 0,000 1,000
О \ > |-ь Целиакия F 1 13 12 0,000 1,000
Типичная форма F 1 7 1 4,500 0,009
Атипичная форма F 1 6 11 0,941 0,332
VDR В/Ь Целиакия В Ь 11 17 0,893 0,345
Типичная форма В Ь 8 10 0,056 0,814
Атипичная форма В Ь 3 6 1,000 0,442
-е
Для полиморфизма 3'-1^ G/C гена 1Ь4 получена связь с развитием остеопенического синдрома на фоне целиа-кии. При сравнении частот аллелей между больными целиакией с остеопорозом и больными без остеопеничес-ких осложнений отношение шансов составило 0,43 и было статистически незначимо (р = 0,336). При сравнении частоты генотипа CG против остальных генотипов между выборками детей с целиакией в сочетании с ос-теопенией и больных без остеопении выявлена связь этого генотипа с изучаемым фенотипом (OR = 12,0; 95% ДИ 1,08-309,68; р = 0,039).
Обнаружена связь изученного полиморфизма гена 1_4 с развитием аутоиммуного тиреоидита у детей с целиакией. При сравнении больных без АИТ и больных с АИТ, было выявлено преобладание генотипа GG в первой группе, отношение шансов для него составило 0,12 (95% ДИ 0,02-0,79, X2 = 5,21, р = 0,022), во второй группе преобладал гетерозиготный генотип — OR 7,47 (95% ДИ 1,09-59,4; р = 0,042), гомозиготы СС в данных выборках не встречались. Для изученных полиморфизмов генов 1_1В, 1_^^ 1_12В и VDR ассоциации с вариантами течения и осложнениями целиакии методом случай-контроль не выявлено.
В целом, в ходе проведенного исследования, самая тесная связь с исследуемой патологией была выявлена для полиморфизма 3'-1^ в/0 гена I_4: обнаружены ассоциации с целиакией, атипичной формой заболевания, а также с остеопеническими синдромом и аутоиммунным тиреоидитом, наблюдаемыми при целиакии. Кроме того, связь с типичной формой целиакии была выявлена для полиморфизма I50V гена I_4RA, и F/f гена VDR. Белковые продукты генов !_4 и I_4RA играют одну из ключевых ролей в развитии гуморального иммунитета, обнаруженные в настоящем исследовании ассоциации их полиморфных вариантов свидетельствуют о значимой роли изменчивости генов ТИ2 иммунитета в формировании изучаемой патологии.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о недостаточной диагностике атипично протекающей целиакии и необходимости дальнейшего поиска больных целиакией с нехарактерными клинико-лабораторными проявлениями в группах риска.
Давно известно, что сахарный диабет типа 1, аутоиммунный тиреоидит и целиакия нередко сочетаются у одного больного или чаще встречаются в таком сочетании у ближайших родственников, чем в общей популяции [1-3]. Также сочетания, называемые синтропиями (или синт-ропными болезнями) могут иметь общую генетическую основу, а гены, определяющие предрасположенность к таким сочетаниям болезней, названы синтропными генами [14]. Это убедительно показано в отношении генов Н_А-системы [5, 7]. Для другой части генома человека (не Н_А-генов) лишь начато накопление данных.
В материале, анализируемом в данной статье, сочетание целиакии и аутоиммунного тиреоидита было зарегистрировано у четверти больных, сочетание сахарного диабета типа 1 и целиакии — у одного ребенка.
Кроме того, установлена связь 3'-1^ в/0 полиморфизма гена !_4 с развитием аутоиммунного тиреоидита у детей с целиакией. Зарегистрировано преобладание генотипа вв у больных целиакией без АИТ, отношение шансов для него при сравнении с другими генотипами составило 0,12 (95% ДИ 0,02-0,79, х2 = 5,21; р = 0,022), в группе детей с аутоиммунным тиреоиди-том преобладал гетерозиготный генотип и отмечено значительное увеличение OR — 7,47 (95% ДИ 1,09-59,4; р = 0,042). Следует отметить, что полученные ассоциации требуют дальнейшего подтверждения при увеличении количества наблюдений.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
♦ Маркеры целиакии по Н_А-системе выявлены у всех больных с целиакией Томска. Наиболее часто у детей с целиакией Томска регистрируют специфичности Н_А^А1*501 и комбинация Н_А^ А1*0501 В1*0201.
♦ Среди сибсов больных целиакией Н_А-маркеры выявлены у 92%, повышенный уровень антител к глютену — у 71,4%, в то же время гистологическое подтверждение диагноза получено у 25% обследованных.
♦ Гены-модуляторы иммунного ответа определяют тип целиакии, развитие остеопенического синдрома и аутоиммунного тиреоидита при данном заболевании и требуют дальнейшего изучения.
31
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Бельмер С.В. Проект рабочего протокола диагностики и лечения целиакии у детей // Вопросы детской диетологии. — 2004. — Т. 2, № 1. — С. 87-103.
2. Валивач М.Н., Гаськов А.П., Бейсебаев Е.А., Бугембаева М.Д. Трехуровневый подход к оценке хронических заболеваний на примере целиакии // Аллерг. и иммунол. — 2000. — № 3. — С. 38-48.
3. Camarero C., Eiras P., Asensio A. et al. Intraepithelial lymphocytes and coeliac disease: permanent changes in CD3 (-)/CD7(+) and T cell receptor gamma delta subsets studied by flow cytometry // Acta Paediatrica. — 2000. — V. 89. — R 285-290.
4. Abdulkarim A.S., Murray J.A. Review article: The diagnosis of coeliac disease // Aliment. Pharmacol. Ther. — 2003. — V. 17. — R 987-995.
5. Bai J., Fried M., Corazza G.R. et al. A pedigree-based linkage study of coeliac disease: failure to replicate previous positive findings // Ann. Hum. Genet. — 2005. — V. 62. — P. 25-32.
6. Book L., Hart A., Blak J. et al. Structural basis for HLA-DQ2-medi-ated presentation of gluten epitopes in celiac disease // Hum. Mol. Genet. — 2001. — V. 6. — R. 1335-1339.
7. Leon A.J., Garrote J.A., Arranz E. Cytokines in the pathogeny of celiac disease // Med. Clin. Barc. — 2005. — V. 15. — R 508-516.
8. Griffin M.D., Xing N., Kumar R. Vitamin D and its analogs as regulators of immune activation and antigen presentation // Annu. Rev. Nutr. — 2003. — V. 23. — P. 117-145.
9. Spielman R.S., McGinnis R.E., Ewens W.J. Transmission test for linkage disequilibrium: the insulin gene region and insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) // Am. J. Hum. Genet. — 1993. — V. 52. — P. 506-516.
10. Tarlow J.K., Blakemore I.F., Lennard A. et al. Polymorphism in human IL1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable number of an 86-bp tandem repeat // Human Genetics. — 1993. — V. 91. — P 403-404.
11. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. — М.: Мир, 1984. — 480 с.
12. Wilkinson R.J., Liewelyn M., Toossi Z. et al. Influence of vitamin D deficiency and vitamin D receptor polymorphisms on tuberculosis among Gujarati Asians in west London: a case-control study // Lancet. — 2000. — V. 355. — P. 618-621.
13. Вейр Б. Анализ генетических данных. — М.: Мир, 1995. — 400 с.
14. Pearce N. What does the odds ratio estimate in a case-con-trol study? // Int. J. Epidemiol. — 1993. — V. 26. — P. 1189-1192.
15. Пузырев В.П. Генетика мультифакториальных заболеваний: между настоящим и будущим // Мед. генетика. — 2003. — Т. 2, № 12. — С. 498-508.
О
ПЕДИАТРИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ/ 2007/ ТОМ 4/ № 5
