CC BY
29
УДК 616.5-004.1:616.15-07:577.15
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА В ЛИЗАТАХ ЛИМФОЦИТОВ БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЕЙ
Н. А. Ермолаева, В. Ф. Мартемьянов
ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН, г. Волгоград
Обследован 51 больной системной склеродермией (ССД). В процессе лечения определялись уровни гуа-ниндезаминазы (ГДА), гуанозиндезаминазы (ГЗДА), гуанозинфосфорилазы (ГФ) и пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) в лизатах лимфоцитов. Высокая активность патологического процесса при системной склеродермии ассоциировалась с низкой активностью ГДА и ПНФ и высокой активностью ГЗДА и ГФ. Для диагностики минимальной степени активности патологического процесса рекомендуется определять ГДА и ГЗДА.
Ключевые слова: системная склеродермия, гуаниндезаминаза, гуанидиндезаминаза, гуанозинфосфорила-за, пуриннуклеозидфосфорилаза.
CLINICAL AND DIAGNOSTIC VALUE OF PURINE METABOLISM INDICES IN LYMPHOCYTE LYSATE OF PATIENTS WITH SYSTEMIC SCLERODERMA
N. A. Ermolaeva, V. F. Martemyanov
Abstract. 51 patients with systemic scleroderma (SSD) were observed. Guanine deaminase (GDA), Guanosine deaminase (GSDA), Guanosine phosphorylase (GP), Purine nucleoside phosphorylase (PNP) were determined in lymphocyte lysate during their treatment. High activity of SS was accompanied by a low activity of GDA and PNP and a high activity of GSDA and GP. The indices of GDA and GSDA activity were the most informative for determining the minimal disease activity.
Key words: systemic scleroderma, guanine deaminase, guanosine deaminase, guanosine phosphorylase, purine nucleoside phosphorylase.
Системная склеродермия (ССД) является типичным представителем системных заболеваний соединительной ткани, и хотя она не имеет столь широкого распространения, как ревматоидный артрит, остеоартроз и другие ревматические заболевания, однако характеризуется выраженным прогрессирующим течением без четко выраженных фаз клинической ремиссии, множественными висцеральными поражениями, частой и ранней инвалидизацией и достаточно высокой летальностью, что и предопределяет актуальность борьбы с этим заболеванием. Учитывая,
что ССД характеризуется выраженными метаболическими, иммунологическими нарушениями, дискоординацией пластических процессов, в своей работе мы провели исследование активности некоторых энзимов пуринового метаболизма: гуаниндезаминазы (ГДА), гуанозиндезаминазы (ГЗДА), пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и гуанозинфосфорилазы (ГФ) в лимфоцитах крови больных ССД исходя из биологической роли пу-ринового метаболизма, заключающейся, в том числе, в регуляции иммунных и пластических процессов [1, 2, 4,].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Повысить качество диагностики активности патологического процесса при ССД, объективизацию контроля эффективности проводимой терапии и раскрыть некоторые патогенетические механизмы ССД.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Под наблюдением в условиях стационара находился 51 больной ССД, из которых 5 (9,8 %) мужчин и 46 (90,2 %) женщин. Средний возраст больных - (41,8±1,4) лет, средняя продолжительность болезни - (7,2±3,1) лет. Диагностика ССД и определение степени активности патологического процесса проводились на основании критериев Американской ревматологической ассоциации и отечественной классификации болезни. I степень активности процесса определялась у 17 (33,3 %) больных, II степень - у 28 (54,9 %) и III степень - у 6 (11,8 %) больных. Хроническое течение заболевания установлено у 23 (45,1 %) больных, подострое течение - у 23 (45,1 %) и острое течение болезни - у 5 (9,8 %) больных. I стадия болезни определена у 19 (37,3 %) и II стадия -32 (62,7 %) больных.
Контрольную группу составили 35 практически здоровых людей (доноры станции переливания крови).
Выделение лимфоцитов проводили из венозной крови (с добавлением 3,8 %-го раствора цитрата натрия из расчета 0,1 мл на 1 мл крови) с использованием силиконированной химической посуды по методике, описанной Boyum [3]. Активность ГДА и ГЗДА в лизатах лимфоцитов определяли по содержанию аммиака, образующегося при дезаминировании гуанина (для ГДА) и гуанозина (для ГЗДА) с помощью фенолгипо-хлоритного реактива, ПНФ - по приросту мочевой кислоты, ГФ - по содержанию гуанина [5]. Активность всех энзимов выражалась в нмоль/мин/мл.
Активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах
2007
Статистическая обработка данных проводилась с использованием программного пакета "STATISTIKA 6.0". Для каждой исследуемой группы определялись средняя арифметическая - М, ошибка средней арифметической - m, среднее квадратическое отклонение - о. При сравнении двух групп в случаях нормального распределения признака использовался f-критерий Стью-дента, при непараметрических вариантах - критерий Манна-Уитни.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В лизатах лимфоцитов здоровых людей наибольшая активность энзима определялась для ПНФ - (34,6±0,52) нмоль/мин/мл, наименьшая для ГЗДА - (8,17+0,18) нмоль/мин/мл. Референтные пределы, рассчитанные по формуле: М ± 2о,
для здоровых людей были следующими:
ГДА - 9,44-14,2 нмоль/мл/мин;
ГЗДА - 6,0-10,3 нмоль/мл/мин;
ПНФ - 28,4-40,8 нмоль/мл/мин;
ГФ - 6,7-17,1 нмоль/мл/мин.
Активность всех изученных энзимов существенно не зависела от пола и возраста, и поэтому в дальнейшем при анализе энзимных показателей эти факторы не учитывались.
При поступлении в стационар (табл. 1) у всей группы больных ССД в лимфоцитах по сравнению со здоровыми определялась более высокая активность ГЗДА, ГФ и более низкая активность ГДА и ПНФ.
По окончании курса стационарного лечения (табл. 2) по сравнению с начальным этапом наблюдалось дальнейшее повышение активности ГДА, ПНФ, снижение активности ГЗДА и ГФ. Но и после проведенного курса стационарного лечения полной нормализации активности энзимов не произошло: остались сниженными активности ГДА, ПНФ и повышенными активности ГЗДА и ГФ.
Таблица 1
1мфоцитов крови больных ССД до лечения
Контингент ГДА 10-7 ГЗДА 10-7 ПНФ 10-7 ГФ 10-7
Здоровые, n = 35 11,8±0,2 8,17±0,18 34,6±0,52 11,9±0,44
Вся группа больных ССД , n = 51 6,38±0,09* 13,8±0,23* 28,0±0,35* 17,3±0,27*
ССД - I степень активности, n = 17 7,07±0,11* 12,1 ±0,16* 30,4±0,24* 15,1 ±0,32*
ССД - II степень активности, n = 28 6,14±0,05* 14,3±0,15* 27,5±0,24* 18,1 ±0,11*
ССД - III степень активности, n = 6 5,60±0,04* 16,6±0,39* 23,2±0,49* 19,9±0,43*
Хроническое течение, n = 23 6,89±0,11* 12,5±0,19* 30,0±1,18* 15,8±1,60**
Подострое течение, n = 23 6,06±0,05* 14,6±0,18* 27,0±0,27* 18,2±0,15*
Острое течение, n = 5 5,58±0,04* 16,7±0,43* 23,0±0,50* 20,1 ±0,51 *
I стадия болезни, n = 19 6,89±0,14* 12,7±0,32* 29,6±0,32* 15,9±0,42*
II стадия болезни, n = 32 6,08±0,07* 14,5±0,24* 27,0±0,44* 18,1 ±0,27*
* - различия по сравнению со здоровыми высоко достоверны (р<0,001); ** - различия по сравнению со здоровыми досто-
верны (р<0,01).
Активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов больных ССД после лечения
Контингент ГДА ГЗДА ПНФ ГФ
Здоровые, n = 35 11,8±0,20 8,17±0,18 34,6±0,52 11,9±0,44
Больные ССД (вся группа), n = 51 10,6±0,10* 9,51 ±0,10* 31,7±0,19* 13,6±0,09**
ССД - I степень активности, n = 17 11,1 ±0,07* 8,88±0,06** 32,9±0,11*** 12,9±0,10*
ССД - II степень активности, n = 28 10,5±0,15* 9,75±0,14* 31,3±0,21 * 13,8±0,07*
ССД - III степень активности, n = 6 9,95±0,09* 10,2±0,08* 30,0±0,48* 14,4±0,22***
Хроническое течение, n = 23 10,7±0,15 9,07±0,10 32,7±0,15 13,1 ±0,11
Подострое течение, n = 23 10,7±0,15 9,81 ±0,17 31,0±0,23 13,8±0,09
Острое течение, n = 5 9,88±0,06 10,2±0,09 30,1±0,57 14,5±0,17
* - р<0,001; ** - р<0,01; *** - р<0,05 при сравнении с практически здоровыми лицами.
Далее нами был проведен анализ энзимных показателей в зависимости от клинических особенностей заболевания.
У больных ССД с I степенью активности процесса при поступлении в стационар определялось повышение активности ГЗДА, ГФ, снижение активности ГДА и ПНФ. Учитывая индивидуальные энзимные показатели и референтные величины у здоровых людей (условная норма), у всех больных с I степенью (100 %) активность ГДА была ниже, а ГЗДА - выше границ условной нормы. Активность ПНФ и ГФ ни у одного больного не выходила за пределы нормы.
По окончании курса стационарного лечения по сравнению с начальным этапом отмечалось дальнейшее снижение активности ГЗДА, ГФ и повышение активности ГДА и ПНФ. Однако полной нормализации активности энзимов не произошло, за исключением ГФ: осталась сниженной активность ГДА, ПНФ и повышенной активность ГЗДА.
У больных ССД с II степенью активности процесса при поступлении на лечение по сравнению со здоровыми ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА и ГФ, а по сравнению с I степенью активности процесса - выше активность ГЗДА, ГФ и ниже активность ГДА, ПНФ (различия высоко достоверны).
После проведенного курса стационарного лечения существенно снизилась активность ГЗДА, ГФ и повысилась активность ГДА, ПНФ, но активность всех энзимов так и не достигла уровня здоровых: остались сниженными активности ГДА, ПНФ и повышенными активности ГЗДА, ГФ.
У больных с III степенью активности процесса при поступлении на лечение по сравнению со здоровыми значительно ниже активность ГДА, ПНФ, но выше активность ГЗДА, ГФ. По сравнению с больными ССД с I степенью - ниже активность ГДА, ПНФ, выше активность ГЗДА и ГФ; по сравнению с II степенью - ниже активность ГДА, ПНФ, но выше активность ГЗДА и ГФ (различия
высоко достоверны).
После проведенного курса лечения отмечалось дальнейшее снижение активности ГЗДА, ГФ, повышение активности ГДА и ПНФ, но полной нормализации среднестатистических величин активности энзимов не произошло: остались повышенной активность ГЗДА, ГФ и сниженной активность ГДА и ПНФ.
У больных ССД с хроническим течением по сравнению со здоровыми выше активность ГЗДА, ГФ, ниже активность ГДА и ПНФ. При подостром течении по сравнению со здоровыми также ниже активность ГДА, ПНФ, но выше активность ГЗДА и ГФ. У больных с острым течением по сравнению со здоровыми выше активность ГЗДА, ГФ, ниже активность ГДА и ПНФ.
У больных с хроническим течением по сравнению с подострым выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА, а по сравнению с острым течением выше активность ГДА, ПНФ, но ниже активность ГЗДА. При подостром течении по сравнению с острым выше активность ГДА, ПНФ, ниже активность ГЗДА и ГФ. При I стадии болезни по сравнению со II выше активность ГДА, ПНФ, но ниже активность ГЗДА и ГФ (высоко достоверно).
Таким образом, проведенные исследования выявили существенные изменения активности энзимов пуринового метаболизма в лимфоцитах крови больных ССД, зависящие от клинических особенностей заболевания. Определялась довольно чёткая закономерность: чем выше степень активности патологического процесса, острее характер течения заболевания, тем ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА и ГФ.
Между всеми степенями активности процесса и вариантами течения заболевания, стадиями болезни выявлены существенные энзимные различия, что способствует их дифференциации и назначению адекватной терапии. В процессе лечения энзимные показатели меняются в соответствии с меняющимся клиническим состоянием больных, что может способствовать объективи-
зации оценки эффективности проводимой терапии. Наиболее информативными в индикации минимальной активности патологического процесса при ССД оказались ГДА и ГЗДА, активность которых в 100 % случаев выходила за референтные пределы здоровых людей.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. В лимфоцитах крови больных системной склеродермией выявлены существенные изменения активности энзимов гуаниловой ветви пу-ринового метаболизма, зависящие от клинических особенностей заболевания.
2. Чем выше степень активности патологического процесса при ССД и острее течение заболевания, тем ниже активность ГДА, ПНФ и выше активность ГЗДА и ГФ.
3. Для выявления минимальной активности процесса при системной склеродермии целесообразно определять активность ГДА и ГЗДА в ли-затах лимфоцитов.
4. Показатели активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов способствуют объективизации оценки эффективности терапии больных системной склеродермией.
ЛИТЕРАТУРА
1. Зборовский А. Б., Брагина Т. Г., Мартемьянов В. Ф. и др. // Проблемы медицинской энзимологии. Современные технологии лабораторной диагностики нового столетия: тр. Всеросс. конфер. 28-31 мая 2002 г. - М., 2002. - С. 96-97.
2. Кудряков Р. Ш. Клинико-диагностическое значение исследования активности гуаниндезаминазы, гуанозиндезаминазы, гуанозинфосфорилазы, пуриннуклеозидфосфорилазы в сыворотке крови больных с ограниченными и системными формами склеродермии и красной волчанки: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Волгоград, 2004. - 23 с.
3. Медицинские лабораторные технологии: справочник / Под ред. проф. А. И. Карпищенко. - СПб.: Интермедика, 2002. - Т. 2. - С. 204-208.
4. Мозговая Е. Э., Ермолаева Н. А., Чернов А. С. и др. // Актуальные проблемы современной ревматологии: сб. науч. работ. - Волгоград, 2005. - С. 103-104.
5. Черных Т. П. Клинико-патогенетическое значение исследования активности гуаниндезаминазы, гуанозиндезаминазы, гуанозинфосфорилазы, пуриннуклеозидфосфорилазы и её изоферментов у больных ревматоидным артритом, остеоартрозом и подагрой: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Волгоград, 2001. - 22 с.
УДК 615.276.014.47.015:616.72-092.9
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОЗИЦИЙ ГЛЮКОЗАМИНА СУЛЬФАТА И ПЕКТИНА С ОРГАНИЧЕСКИМИ КИСЛОТАМИ
Д. В. Компанцев, Л. М. Макарова, В. Е. Погорелый, Е. В. Компанцева
Пятигорская государственная фармацевтическая академия
Проведено эксперментальное исследование противовоспалительной активности композиций глюкозамина сульфата и пектина с янтарной, лимонной и аскорбиновой кислотой. Показано усиление при применении этих композиций антиэкссудативного действия глюкозамина сульфата, помимо этого, композиция с использованием лимонной кислоты оказывает влияние на пролиферативную стадию воспаления.
Ключевые слова: глюкозамина сульфат, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, янтарная кислота, противовоспалительная активность.
EXPERIMENTAL STUDY OF ANTIINFLAMMATORY
AND REGENERATING ACTIVITY OF GLUCOSAMINE SULPHATE AND PECTIN COMPOSITIONS WITH ORGANIC ACIDS
D. V. Коmpantsev, L. M. Makarova, V. E. Pogorely, E. V. Коmpantseva
Abstract. Anti-inflammatory activity in the combination of glucosamine sulphate and pectin with succine, citric and ascorbic acids was experimentally established.
It was discovered that the composition of glucosamine, pectin and citric acid sulphates enhanced its antiinflammatory effect and produces the same effect at the proliberative stage of inflammation.
Key words: glucosamine sulpahte, citric acid, ascorbic asid, succine acid, antiinflammatory activity.
Глюкозамин широко используется в терапии заболеваний опорно-двигательного аппарата в ка-
