CC BY
10
Integration of science and practice for the development of 14. Ivanyuk VP., Bobkova G.N. Etiological aspects
the Agro-industrial complex: Sat. Art. all-Russian scientific and development of therapeutic techniques for acute ca-conf. Tyumen, 2017. Р. 311-317. tarrhal mastitis in cows. Izvestia Orenburg State Agrarian
University. 2020; 81(1): 136-139
Клавдия Александровна Сидорова, доктор биологических наук, профессор, sidorova@gausz.ru, https://orcid.org/0000-0001-6912-7454
Ольга Александровна Драгич, доктор биологических наук, профессор, dragichoa@gausz.ru, https://orcid.org/0000-0002-1086-5687
Андрей Тимофеевич Ротькин, аспирант, ibvm.veterinarya@yandex.ru
Claudia A. Sidorova, Doctor of Biologу, Professor, sidorova@gausz.ru, https://orcid.org/0000-0001-6912-7454
Olga A. Dragich, Doctor of Biologу, Professor, dragichoa@gausz.ru, https://orcid.org/0000-0002-1086-5687
Andrey T. Rotkin, postgraduate, ibvm.veterinarya@yandex.ru
Вклад авторов: все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Contribution of the authors: the authors contributed equally to this article. The authors declare no conflicts of interests.
Статья поступила в редакцию 31.03.2022; одобрена после рецензирования 18.04.2022; принята к публикации 11.05.2022.
The article was submitted 31.03.2021; approved after reviewing 18.04.2022; accepted for publication 11.05.2022. -♦-
Научная статья
УДК 636.082:636.22/.28
doi: 10.37670/2073-0853-2022-95-3-230-235
Клинико-биохимический статус и некоторые особенности системной самоорганизации сыворотки крови у тёлок при рубцовом ацидозе и рахите
Ильдар Флюрович Калимуллин, Евгения Борисовна Шарафутдинова,
Алексей Петрович Жуков
Оренбургский государственный аграрный университет, Оренбург, Россия
Аннотация. Изучено клиническое состояние, биохимический статус крови, системная структурная организация сыворотки крови (СК) с идентификацией маркеров патологических процессов у тёлок на доращивании при ацидозе рубца и рахите. Результаты исследования показали глубокие трофологические и клинико-гематологические нарушения в организме животных, причиной которых явились элементарные нарушения формирования рациона. Наиболее значимые изменения касаются локомоторного дисбаланса в силу гипокальциемии и диспротеинемии, а также системными (иррадиальный тип фации, незавершённые конкреции) и подсистемными нарушениями структуропостроения фации сыворотки крови (языки Арнольда, токсические бляшки, шипы, широкие и штриховые трещины, дихотомии, морщины, складки и пр.). Выявленные морфотипы позволяют идентифицировать состояние аутоинтоксикации на фоне деструктивных воспалительных процессов, гипоксии, низкий адаптационный резерв и напряжение реактивных сил организма.
Ключевые слова: ацидоз рубца, рахит, сыворотка крови, клиновидная дегидратация, маркёры, фация, морфотипы.
Для цитирования: Калимуллин И.Ф., Шарафутдинова Е.Б., Жуков А.П. Клинико-биохимический статус и некоторые особенности системной самоорганизации сыворотки крови у тёлок при рубцовом ацидозе и рахите // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2022. № 3 (95). С. 230 - 235. (In Russ.). https://doi.org/10.37670/2073-0853-2022-95-3-230-235.
Original article
Clinical-biochemical status and some features of systemic self-organization of blood serum in heifers with cicatricial acidosis and rachitis
Ildar F. Kalimullin, Evgenia B. Sharafutdinova, Alexey P. Zhukov
Orenburg State Agrarian University, Orenburg, Russia
Abstract. The conducted studies of the clinical condition, biochemical status of blood, systemic structural organization of blood serum (SC) with the identification of markers of pathological processes in heifers on rearing with scar acidosis and rickets, showed deep trophological and clinical-hematological disorders in the body of animals, the cause of which were elementary violations of the formation of the diet. The most significant
changes relate to locomotor imbalance due to hypocalcemia and dysproteinemia, as well as systemic (irradiated facies, incomplete nodules) and subsystem disorders of the structure of the FGC (Arnold tongues, toxic plaques, spikes, wide and dashed cracks, dichotomies, wrinkles, folds, etc.). The revealed morphotypes make it possible to identify the state of auto-intoxication, against the background of destructive inflammatory processes, hypoxia, low adaptive reserve of the body and the tension of the body's reactive forces.
Keywords: rumen acidosis, rickets, blood serum, wedge-shaped dehydration, markers, facies, morphotypes.
For citation: Kalimullin I.F., Sharafutdinova E.B., Zhukov A.P. Clinical-biochemical status and some features of systemic self-organization of blood serum in heifers with cicatricial acidosis and rachitis. Izvestia Orenburg State Agrarian University. 2022; 95(3): 230-235. (In Russ.). https://doi.org/10.37670/2073-0853-2022-95-3-230-235.
Изменения в структуре рациона и увеличение концентрированных кормов свыше 50 % от сухого вещества рациона могут носить только временный характер. Продолжительное применение таких рационов приводит к снижению рН рубцового содержимого до 4,0 - 6,0, что вызывает развитие ацидоза рубца. Зерновые корма, которые преобладают в составе комбикормов, содержат высокий уровень легко расщепляемых углеводов, что стимулирует высокую скорость гликолиза с образованием и накоплением в рубце большого количества молочной кислоты и, как следствие, развитие патологических биохимических процессов по типу метаболического ацидоза [1, 2].
При хроническом ацидозе костная матрица действует как буферная система, при этом ионы Са++ и Р++ высвобождаются в обмен на ионы Н+. При рационах с низкой структурой волокнистого корма и преобладанием концентратов возникает дефицит витамина D, в результате нарушается усвоение Са и Р, запасы которых в костях интенсивно расходуются. Нарушение фосфорно-кальциевого обмена приводит к рахиту молодняка, хронически протекающей болезни, характеризующейся деформацией костной ткани [3, 4].
Цель работы заключалась в исследовании клинического состояния, биохимического статуса крови, системной структурной организации сыворотки крови (СК) с идентификацией маркеров патологических процессов у тёлок на доращи-вании при ацидозе рубца и рахите.
Материал и методы. Исследование проводили в условиях ООО «Агрохолдинг Промышленный» Оренбургского района, где была подобрана группа тёлок чёрно-пёстрой породы 9 - 10-месячного возраста в количестве 10 гол. с выраженными признаками ацидоза рубца и рахита. Кровь отбирали в утренние часы до кормления в вакуумные пробирки. Биохимические тесты выявляли с использованием унифицированных методик, апробированных в комплексной аналитической лаборатории университета. Для исследования методом клиновидной дегидратации 0,02 мл СК наносили на поверхность стандартного предметного стекла, расположенного строго горизонтально. При данном объёме СК задаются необходимые параметры: угол кривизны поверхности капли -25 - 30о, диаметр капли - 5 - 7 мм, средняя толщина - около 1 мм. В течение
18 - 24 час. образец высушивали при температуре 25 °С и относительной влажности 65 - 70 %. При анализе СК исследованию подвергались два объекта: исходная фация сыворотки крови (ИФСК), полученная из свежевзятой крови, и фация, полученная из СК, хранившейся в течение суток при температуре +4...+8 °С, - суточная фация (СФСК). Т.е. исследовали СК как в фазе текущих, так и в фазе завершённых биохимических процессов [5]. Изучение структурообразующих элементов дегидратированной капли проводили на микроскопе Levenhuk Д870Т, при увеличении х10, х40, х80, с фотофиксацией цветовой цифровой камерой C800NG. От каждой пробы СК готовили 2 - 3 стекла по три капли на каждом.
Рубцовое содержимое получали через носоглоточный зонд, аспирируя шприцем Жанэ. Для определения рН содержимого использовали тест-полоски фирмы ООО «Биосенсор».
Цифровой материал экспериментальных данных обрабатывали методом вариационной статистики с применением программного комплекса Microsoft Excel 7.0.
Результаты и обсуждение. Физиологическая буферизирующая ёмкость рубца позволяет поддерживать рН рубца между 6 и 7 на большинстве зимних рационов. Поддержание рН рубца в пределах физиологических параметров определяется регулированием потребления корма, эндогенным производством буферов, микробной адаптацией и поглощением летучих жирных кислот [6].
Искажения в агрохолдинге элементарных норм кормления тёлок на доращивании, когда животным для свободного доступа предлагают полные кормушки овса и концентратов при минимальном содержании сена, привели к серьёзным потерям в продуктивности и здоровье животных. Если брожение углеводов заканчивается большим производством молочной кислоты, система не в состоянии компенсировать рН рубца [7], и он опускается до критических величин. Так, у обследованных тёлок он был в диапазоне от 5,3 до 5,7.
У всех животных отмечалось залёживание, напряжённая «ходульная» походка с укороченным шагом. Они с трудом и медленно вставали, длительное время стояли на запястных суставах, у некоторых выявлена их контрактура.
Часть животных принимали вынужденную позу с подведёнными под туловище конечностя-
Рис. 1 - Вынужденные позы больных животных:
А - стояния с выраженным кифозом; Б - с фиксацией на запястных суставах; В - лежание из-за контрактуры плюсневых суставов
ми, что приводило к искривлению позвоночника (кифоз). У двух тёлок вынужденное лежание было постоянным, попытки поднять животных были безрезультативными, но при этом тёлки проявляли интерес к сену и потребляли его, не меняя позы (рис. 1 А, Б, В).
Концентрация общего белка в СК в среднем по группе составляла 60,26 ± 1,44 г/л при варьировании признака от 53,61 до 70,82 г/л. При этом у 90 % обследованных животных содержание общего белка было ниже физиологической нормы (70 - 80 г/л). У четырёх тёлок снижение насыщения крови альбуминами было ниже выявленной средней величины - 31,71 ± 1,47 г/л. Содержание глобулинов составляло 48,21 ± 1,63 % от общего количества белка при соотношении А/Г в пределах 1,08 ± 0,07.
Определение соответствия количества сырого протеина в рационе биологическим потребностям организма коров проводится по концентрации мочевины в СК, но при этом следует исключить функциональные нарушения печени [8].
В крови обследованных животных выявили снижение уровня мочевины до 2,81 ± 0,7 мМл, что указывает на дефицит сырого протеина в рационе тёлок.
Всасывание глюкозы из желудочно-кишечного тракта у жвачных происходит в очень малых количествах, а содержание пополняется в основном за счёт её синтеза и распада гликогена [9]. Содержание глюкозы в сыворотке крови тёлок находилось ниже порога нормы. Так, при лимите показателей от 1,2 до 2,7 мМл средний уровень содержания по группе составлял 1,83 ± 0,12 мМл. Возникновение гипогликемического состояния организма носило адаптационный характер и
указывало не только на неудовлетворительное кормление, но и на отсутствие запасов гликогена в печени, мышцах, являясь показателем нарушения углеводного обмена.
Снижение уровня кальция в крови тёлок было связано с недостатком этого элемента в кормах, а также с нарушением соотношения кальция и фосфора. Установлено варьирование концентрации кальция в СК в пределах от 0,7 до 1,4 мМл при среднем значении 1,02 ± 0,06 мМл. Насыщение крови фосфором по группе обследованных животных зафиксировано в пределах от 1,2 до 1,9 мМл, при этом средняя величина была в рамках физиологической нормы,55 ± 0,11 мМл. При оптимальном отношении кальция к фосфору - 2:1 в группе обследованных тёлок этот показатель имел критическое значение - 0,65:1. При таком дефиците кальция в СК тёлок витамин Д и паратгормон стимулировали его резорбцию из костной ткани. С другой стороны, в результате ацидотического состояния усиливалась функция паращитовидных желез, а образующийся парат-гормон вызывал деминерализацию скелета [6].
Содержание общего билирубина в сыворотке крови тёлок зафиксировно в пределах от 4,31 ± 0,22 до 7,35 ± 0,79 мкМл при среднем значении 5,68 ± 0,35 мкМл, что соответствовало физиологической норме. При оценке степени активности патологического процесса в печени с цитолитическим синдромом основное значение придавалось содержанию АлАТ и АсАТ, концентрация которых в крови тёлок соответствовала референтным значениям (АлАТ - 32,71 ± 1,42 у.ед., АсАТ - 76,17 ± 1,95 у.ед.)
При исследовании морфологического типа фаций сыворотки крови тёлок установили только
один тип - иррадиальный, как в ИФСК, так и в СФСК, с частично сформированными конкрециями (рис. 2).
Существует мнение, что тип и уровень структуропостроения ФСК свидетельствует о выраженности компенсаторно-адаптационных возможностей и сбалансированности метаболи-тических реакций, протекающих в организме [10]. Исходя из этого следует признать, что условия для гармоничного построения фации были исключены, в результате появления в организме токсических веществ, что приводит к формированию структурного рисунка за счёт патологических прочных связей, которые не позволяют проявиться радиальной симметрии, отдельностям и конкрециям [11].
Исследования ФСК у тёлок как в фазу текущих, так и в период завершённых биохимических процессов, показали наличие в них стойких патологических морфотипов. Во всех фациях был выявлен маркер, который свидетельствует о наличии у животных воспалительных процессов (маркервоспаления) - это языковые структуры, которые были представлены фракталами Арнольда. В исходной фации они располагались в несколько ярусов, занимая периферическую и промежуточную зоны, при этом вершины языков разнонаправленны и расположены каждый в своей отдельности (рис. 3).
В суточной фации фракталы языков Арнольда выявлены в двух форматах, часть из них представлена малочисленными образованиями с традиционным морфотипом, а в большей степени на пустых полях фации выявлено «двоение» языковых полей, что является маркером фибрилляции предсердий и острого воспалительного процесса (рис. 4).
К наиболее постоянным патологическим морфотипам ФСК тёлок следует отнести маркеры интоксикации. Так, в ИФСК у девяти животных были обнаружены токсические бляшки, у одного - двойная фация с морщинами, а в СФСК у всех животных выявлено наличие токсических бляшек. Токсические бляшки представлены тремя морфотипами как отдельно, так и в совокупности: с классическими, выраженными, большими с короткими параллельно расположенными складками, расположенными в краевой зоне фации; разноразмерными, от массивных до точечных, со шляпками округлой формы (колония растущих шампиньонов - вид сверху) и в виде «токсического дождя», подобие следов первых капель дождя на пыльной дороге, множественные точечные вдавления, массово покрывающие центральную и промежуточную зоны фации. Причём расположение элементов морфотипа «токсического дождя» впервые нами выявлено в центральной зоне фации (рис. 5, 6).
Во всех исходных и суточных фациях были обнаружены шипы - короткие, с чёткими границами треугольники, расположенные попарно
Рис. 2 - Иррадиальный тип фации с
незавершёнными конкрециями
Рис. 3 - СФСК:
1 - складки и морщины; 2 - двоение языков, 3 - широкие трещины; 4 - шипы; 5 -штриховые трещин
Рис. 4 - ИФСК:
1 - широкие трещины; 2 - токсические бляшки; 3 - шипы; 4 - сноп (штриховые трещины); 5 - морщины, складки; 6 - минеральное напыление; 7 - токсический дождь
с обеих сторон радиальных трещин. Шипы располагаются одиночно либо множественно на обеих сторонах трещин или на одной из сторон. Величина и форма шипов также бывает разной. В СФСК шипы разновеликие с широким основанием, часто оформленные штриховыми трещинами, отчего кажутся объемными и насыщенными. Появление в ФСК шипов указывает на нарушение микроциркуляции в жизненно важных органах. Данный маркер является устойчивым патологическим типом, так как он выявлен в 100 % случаев как в исходной, так и в суточной фациях (рис. 4, 5).
В 90 % случаев в ФСК тёлок обнаружены дихотомии, разные по форме и количеству, появление которых указывает на метаболический дисбаланс в организме животных, что ранее было подтверждено дефицитным биохимическим статусом крови тёлок. В СФСК тёлок выявлены дихотомии, оформленные штриховыми трещинами, отчего они становились утолщёнными, «сочными». Появление в текстуре фаций штриховых трещин свидетельствует о напряжении реактивных сил организма, причём как в ИФСК, так и в СФСК их выявили в девяти случаях. В двух случаях нами впервые описана необычная форма данного морфотипа, который по форме напоминал «сноп», при этом штриховые трещины, собранные пучком с веером вверху, отходили от трещины вертикально. Кроме этого, все фации в центральной и промежуточной зонах были оформлены множественными кристаллами (рис. 5, 6).
Сравнительная оценка структур исходной и суточной фаций позволили дать оценку устойчивости гомеостаза организма тёлок на доращи-вании. Изменения ИФСК имели патологический характер: иррадиальный тип фаций СК, частично сформированные конкреции, наличие асимметрии и морфотипов. В СФСК эти изменения сохранялись, поэтому состояние гомеостаза животных относилось к патологическому устойчивому -периоду развёрнутой адаптации к заболеваниям.
В ИФСК были зарегистрированы повторяющиеся ансамбли морфотипов, в шести случаях состоявшие из языков Арнольда + токсических бляшек + морщин + штриховых трещин + дихотомий + шипов. В четырёх случаях они включали токсические бляшки + морщины + складки + штриховые трещины + дихотомии + шипы (рис. 5). В СФСК выявили четыре ансамбля маркеров патологических образований: 1-й (2 тёлки) - токсические бляшки + широкие трещины + штриховые трещины + дихотомии + шипы + морщины + двойная фация + чистые поля с «двоением» языков Арнольда; 2-й (2 тёлки) - токсические бляшки + широкие трещины + дихотомии + шипы; 3-й (1 тёлка) - токсические бляшки + шипы + широкие трещины + дихотомии + воронки; 4-й (1 тёлка) - токсические бляшки
+ широкие трещины + шипы + воронки + гре-бешковые структуры + структуры типа «листа» + трещины «серебра» (рис. 6). У 9 животных в СФСК увеличилось число морфотипов, в частности, появились широкие трещины, чистые поля с «двоением» языков, воронкообразные структуры, гребешковые структуры, трещины «серебра», структуры типа «листа», которые идентифицируют интоксикацию, гипоксию, воспаление, склерозирование, ангиоспазм и пр. Образование маркерных структур связано с перераспределением различных групп сывороточных белков, липидно-белковых комплексов, токсинов под влиянием дискомплементарных аутоволновых процессов. Любой патологический процесс привносит чужеродную аутоволновую информацию, искажающую фоновое состояние [6].
Рис. 5 - ИФСК:
1 - «токсический дождь»; 2 - складки и морщины; 3 - шипы; 4 - широкие трещины, 5 - минеральное напыление; 6 - штриховые трещины; 7 - дихотомии; 8 - трещины со слепым концом
Рис. 6 - СФСК:
1 - широкие трещины; 2 - массированный «токсический дождь» в центральной и промежуточной зоне ФСК; 3 - минерализация
Вывод. Проведённое исследование показало глубокие трофологические и клинико-гематологические нарушения в организме тёлок, причиной которых явились элементарные нарушения формирования рациона. Наиболее значимые изменения коснулись локомоторного дисбаланса в силу гипокальциемии и диспротеинемии, а также произошли системные (иррадиальный тип фации, незавершённые конкреции) и под-системные нарушения структуропостроения ФСК (языки Арнольда, токсические бляшки, шипы, широкие и штриховые трещины, дихотомии, морщины, складки и пр.).
Выявленные морфотипы позволяют идентифицировать состояние аутоинтоксикации на фоне деструктивных воспалительных процессов, гипоксии, низкого адаптационного резерва организма и напряжения реактивных сил организма.
Список источников
1. Самоловов А.А. Ацидоз рубца - причина всех проблем здоровья коров. Производственная болезнь. Новосибирск, 2019. 59 с.
2. Калюжный И.И. Клинико-биохимические показатели при ацидозе рубца у жвачных животных // Диагностика, лечение, профилактика незаразных болезней с.-х. животных. Саратов, 1989. С. 55 - 64.
3. Громыко Е.В. Оценка состояния организма коров методами биохимии // Экологических вестник Северного Кавказа. 2005. № 2. С. 80 - 94.
4. Sato Sh. Subacuteruminal acidosis challenge, ruminai condition and cellular immunity in cattle. Japanese Journal of Veterinary Research. 2015; 63(1): 25-36.
5. Шабалин В.Н., Шатохина С.А. Морфология биологических жидкостей человека. М.: Хризосом. 2001. 303 с.
6. Васильева С.В., Конопатов Ю.В. Клиническая биохимия крупного рогатого скота: учеб. пособ. 2-е изд. СПб.: Лань, 2017. 188 с.
7. Лопатин С.В., Самоловов А.А. Ацидоз рубца -один из основных факторов риска болезней пальцев у коров // Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова. 2013. № 2 (31). С. 7 - 11.
8. Демидович А.П. Диагностическое значение биохимических показателей крови. Витебск: ВГАВМ, 2019. 36 с.
9. Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В., Семенова А.С. Причины и следствие лактатного ацидоза // Сельскохозяйственные вести. 2006. № 4. С.15.
10. Шатохина С.А., Шабалин В.Н. Маркеры злокачественного роста в морфологической картине биологических жидкостей человека // Вопросы онкологии. 2010. Т.56. № 3. С. 293 - 300.
11. Шарафутдинова Е.Б., Жуков А.П., Бочарова М.В. Сопоставление результатов общедоступных методов исследования с параметрами пространственно-временной самоорганизации сыворотки крови у тёлок случного возраста. ÖsterreichischesMultiscience Journal. 2021; 44: 72-79.
References
1. Samolovov A.A. Acidosis of the scar is the cause of all the health problems of cows. Industrial disease. Novosibirsk, 2019. 59 p.
2. Kalyuzhny I.I. Clinical and biochemical parameters in rumen acidosis in ruminants // Diagnosis, treatment, prevention of non-infectious diseases of agricultural animals. Saratov, 1989. P. 55-64.
3. Gromyko E.V. Assessment of the state of the body of cows by methods of biochemistry. The North Caucasus Ecological Herald. 2005; 2: 80-94.
4. Sato Sh. Subacuteruminal acidosis challenge, ruminal condition and cellular immunity in cattle. Japanese Journal of Veterinary Research. 2015; 63(1): 25-36.
5. Shabalin V.N., Shatokhina S.A. Morphology of human biological fluids. M.; Chrysostom. 2001. 303 p.
6. Vasilyeva S.V., KonopatovYu.V. Clinical biochemistry of cattle: Textbook. 2nd ed. St. Petersburg, 2017. 188 p.
7. Lopatin S.V., Samolovov A.A. Scar acidosis is one of the main risk factors for finger diseases in cows. Bulletin of the Buryat State Agricultural Academy. V.R. Filippova. 2013; 31(2): 7-11.
8. Demidovich A.P. Diagnostic value of biochemical parameters of blood. Vitebsk: VGAVM, 2019. 36 p.
9. Laptev G.Yu. Soldatova V.V., Semenova A.S. Causes and consequences of lactate acidosis. Agricultural news. 2006; 4: 15.
10. Shatokhina S.A., Shabalin V.N. Markers of malignant growth in the morphological picture of human biological fluids. Problems in oncology. 2010; 56(3): 293-300.
11. Sharafutdinova E.B., Zhukov A.P., Bocharova M.V. Comparison of the results of publicly available research methods with the parameters of spatiotemporal self-organization of blood serum in heifers of random age. Österreichisches Multiscience Journal. 2021; 44: 72-79.
Ильдар Флюрович Калимуллин, кандидат ветеринарных наук, kalimullin.84@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-2977-3088
Евгения Борисовна Шарафутдинова, кандидат биологических наук, evgesha-xp@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-4389-6383
Алексей Петрович Жуков, доктор ветеринарных наук, профессор, vet_fac@mail.ru
Ildar F. Kalimullin, Candidate of Veterinary Sciences, kalimullin.84@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-2977-3088
Evgenia B. Sharafutdinova, Candidate of Biology, evgesha-xp@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-4389-6383
Alexey P. Zhukov, Doctor of Veterinary Sciences, Professor, vet_fac@mail.ru
Вклад авторов: все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Contribution of the authors: the authors contributed equally to this article. The authors declare no conflicts of interests.
Статья поступила в редакцию 17.05.2022; одобрена после рецензирования 30.05.2022; принята к публикации 30.05.2022.
The article was submitted 17.05.2022; approved after reviewing 30.05.2022; accepted for publication 30.05.2022. -♦-
