CC BY
8doi: 10.17116/terarkh201688645-50
© Коллектив авторов, 2016
Клиническое значение полиморфных маркеров генов TNF, IL6 и IL10 при хроническом гломерулонефрите
Е.С. КАМЫШОВА1, М.Ю. ШВЕЦОВ1, 2, И.М. КУТЫРИНА1, А.М. БУРДЕННЫЙ3, 4, А. ЧЖЭН2, В.В. НОСИКОВ4, И.Н. БОБКОВА1
1ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им.и И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия; 2ФГБОУ ВПО «МГУ им. М.В. Ломоносова»», Москва, Россия; 3ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии» РАМН, Москва, Россия; 4ФГБНУ «Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля» РАН, Москва, Россия
резюме
Цель исследования. Изучить ассоциацию полиморфных маркеров (ПМ) G(-238)A гена TNF, G(-174)C гена IL6 и G(-1082) A гена IL10 с клиническими особенностями хронического гломерулонефрита (ХГН) и ответом на иммуносупрессивную терапию (ИСТ).
Материалы и методы. У 102 больных ХГН проанализировали клинические синдромы на момент установления диагноза, морфологические варианты нефрита и ответ на ИСТ в зависимости от носительства исследуемых ПМ генов TNF, IL6 и IL10.
результаты. Ассоциации ПМ G(-238)A гена TNF с особенностями клинической картины ХГН не обнаружено. У носителей аллеля С ПМ G(-174)C гена IL6 по сравнению с гомозиготами GG чаще отмечалось нарушение функции почек на момент установления диагноза (р=0,014). У носителей генотипа АА ПМ G(-1082)A гена IL10 чаще обнаруживали АГ (р=0,023); кроме того у них наблюдалась тенденция к более частому сочетанию нефротического синдрома и АГ (р=0,082). При анализе распределения морфологических вариантов ХГН обнаружено, что пролиферативные варианты чаще выявляли у больных с генотипом GG (ген TNF) по сравнению с носителями аллеля А (р=0,067), а непролиферативные формы — у гомозигот GG (ген IL6) по сравнению с носителями аллеля С (р=0,067). При изучении ответа на ИСТ обнаружено, что полный ответ к 12-му месяцу лечения чаще наступал у носителей аллеля С гена IL6 (р=0,045) и генотипа GG гена IL10 (р=0,030). Заключение. Обнаружена ассоциация ПМ G(-174)C гена IL6 и G(-1082)A гена IL10 с клиническими особенностями ХГН и ответом на ИСТ.
Ключевые слова: хронический гломерулонефрит, полиморфный маркер, ген TNF, ген IL6, ген IL10.
Clinical value of TNF, IL-6, and IL-10 gene polymorphic markers in chronic glomerulonephritis
E.S. KAMYSHOVA1, M.YU. SHVETSOV1, 2, I.M. KUTYRINA1, A.M. BURDENNYI34, A. ZHENG2, V.V. NOSIKOV4, I.N. BOBKOVA1
M.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of Russia, Moscow, Russia; 2M.V. Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia; 3Research Institute of General Pathology and Pathophysiology, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow, Russia; 4N.M. Emanuel Institute of Biochemical Physics, Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia
Aim. To study the association of the polymorphic markers (PMs) G(-238)A of the TNF gene, G(-174)C of the IL-6 gene, and G(-1082)A of the IL-10 gene with the clinical characteristics of chronic glomerulonephritis (CGN) and a response to immunosuppressive therapy (1ST).
Subjects and methods. Clinical syndromes at the time of diagnosis, the morphological types of nephritis, and a response to 1ST were analyzed in relation to the carriage of the examined PMs of the TNF, IL-6, and IL-10 genes in 102 patients with CGN. Results. No association was found between the PM G(-238)A of the TNF gene and the clinical features of CGN. The carriers of the C allele of the PM G(-174) C of the IL-6 gene versus the homozygous individuals were observed to have more frequently kidney dysfunction at the time of diagnosis (p=0.014). Hypertension was more common in the carriers of the AA genotype of the PM G(-1082)A of the IL-10 gene (p=0.023); moreover, they tended to have a more frequent concurrence of nephrotic syndrome and hypertension (p=0.082). Analysis of the distribution of the morphological types of CGN disclosed that the proliferative variants were more common in the patients with the GG genotype (the TNF gene) as compared to the A allele carriers (p=0.067); and the nonproliferative forms were in the individuals homozygous for GG (the IL-6 gene) as compared to the C allele carriers (p=0.067). Examination of an 1ST response showed that a complete response at 12 months of treatment occurred more frequently in the carriers of the C allele of the IL-6 gene (p=0.045) and in those of the GG genotypes of the IL-10 gene (p=0.030). Conclusion. There was an association of the PMs G(-174)C of the IL-6 gene and G(-1082)A of the IL-10 gene with the clinical features of CGN and a response to 1ST.
Keywords: chronic glomerulonephritis, polymorphic marker, TNF gene, IL-6 gene, IL-10 gene.
АГ — артериальная гипертония ГН — гломерулонефрит ГУ — гематурия
ДАД — диастолическое артериальное давление
ИЛ-10 — интерлейкин-10
ИЛ-6 — интерлейкин-6
ИСТ — иммуносупрессивная терапия
НС — нефротический синдром
п.н. — пар нуклеотидов
ПУ — протеинурия
ПЦР — полимеразная цепная реакция
САД — систолическое артериальное давление
СКФ — скорость клубочковой фильтрации
ССЗ — сердечно-сосудистые заболевания
ТПН — терминальная почечная недостаточность
ФСГС — фокально-сегментарный гломерулосклероз
ХБП — хроническая болезнь почек
ХГН — хронический гломерулонефрит
ЦФ — циклофосфан IL1A — ген интерлейкина-1
ЭУ — эритроцитурия IL1R — ген антагониста рецептора интерлейкина-1
IL13 — ген интерлейкина-13
Неуклонный рост заболеваемости хронической болезнью почек (ХБП) и связанных с ней инвалидностью и смертностью представляет собой серьезную медико-социальную проблему во всем мире. В связи с этим по-прежнему актуален поиск новых факторов риска возникновения и прогрессирования почечной недостаточности. В структуре ХБП особое место занимает хронический гло-мерулонефрит (ХГН) как одна из причин терминальной стадии почечной недостаточности (ТПН). Несмотря на то что в последние годы достигнут значительный прогресс в понимании механизмов возникновения и прогрессирова-ния этого многофакторного заболевания, молекулярно-генетические основы, определяющие разнообразие его клинических проявлений, различия в исходах и эффективности терапии, окончательно не установлены. Их изучение имеет не только теоретическое, но и большое практическое значение, поскольку создает подходы для разработки персонифицированной тактики лечения больных ХГН.
В последние годы особое внимание уделялось изучению роли воспалительного ответа, опосредуемого провос-палительными цитокинами и хемокинами, в поражении почек. В ряде исследований уточнены характеристики основных про- и противовоспалительных цитокинов и механизмы их действия, приводящие к формированию склероза клубочкового аппарата и интерстициальной ткани [1—8]. Это позволило рассматривать кодирующие их гены в качестве возможных генов-кандидатов, полиморфные маркеры которых могут быть ассоциированы с предрасположенностью к развитию и прогрессированию ХГН, определять особенности его клинического течения и ответ на терапию.
Опубликованы единичные работы, посвященные изучению ассоциаций полиморфных маркеров генов цито-кинов с транскрипционной активностью и уровнем цито-кинов, а также клиническими проявлениями заболеваний
Сведения об авторах:
Швецов Михаил Юрьевич — к.м.н., в.н.с. научно-исследовательский отд. нефрологии НИЦ ПМГМУ им. И.М. Сеченова, доц., каф. внутренних болезней, факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова
Кутырина Ирина Михайловна — д.м.н., проф. каф. нефрологии и гемодиализа Института профессионального образования ПМГМУ им. И.М. Сеченова
Бурденный Алексей Михайлович — к.б.н., м.н.с. лаб. постгеномных молекулярно-генетических исследований Института биохимической физики им. Н.М. Эммануэля, с.н.с. лаб. патогеномики и транскриптомики НИИ общей патологии и патофизиологии Чжэн Антай — аспирант каф. внутренних болезней, факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова Носиков Валерий Вячеславович — д.б.н., проф., зав. лабораторией постгеномных молекулярно-генетических исследований Института биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Бобкова Ирина Николаевна — д.м.н., зав. научно-исследовательским отд. нефрологии НИЦ ПГМУ им. И.М. Сеченова
почек, в том числе гломерулонефритов (ГН), эффективностью иммуносупрессивной терапии (ИСТ). Так, обнаружена ассоциация полиморфных маркеров C-889T гена интерлейкина-1 (IL1A) и A-4257G гена интерлейкина-13 (IL13) с выраженностью протеинурии [9]. В другой работе генотип АА полиморфного маркера A-4257G гена IL13 был ассоциирован с развитием нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ) у детей [10]. Получены данные о влиянии ряда полиморфных маркеров генов провоспалительных цитокинов интерлейкина-4 (IL4), интерлейкина-6 (IL6) и фактора некроза опухоли-а ( TNF) на чувствительность к ИСТ при НСМИ у детей [11]. Для полиморфных маркеров С-592С гена интерлейки-на-10 (IL10) и VNTR гена — антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL1R) описана ассоциация с клиническими вариантами ХГН [12]. В то же время в ряде работ [13— 15] подобные ассоциации отсутствовали, что объясняется, по-видимому, малым числом исследований, различием изучаемых популяций, в том числе неоднородностью групп по клиническим и морфологическим формам ХГН.
Цель работы состояла в изучении ассоциации полиморфных маркеров G(-238)A гена TNF, G(-174)C гена IL6 и G(—1082)A IL10 с клиническими особенностями ХГН и ответом на ИСТ.
Материалы и методы
Обследовали 102 больных ХГН (47 мужчин и 55 женщин), наблюдавшихся в клинике нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева УКБ №3 ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России.
Клинические особенности ХГН на момент постановки диагноза проанализировали у всех больных. У 38,8% больных проте-инурия (ПУ) не превышала 1 г/сут, у 16,3% наблюдалась выраженная (более 1 г/сут) ПУ, но без нефротического синдрома (НС), у 44,9% имелся НС. Прогностически наиболее неблагоприятное сочетание НС и артериальной гипертонии (АГ) отмечалось у 21,1% обследованных больных. Гематурия (ГУ) на момент постановки диагноза наблюдалась у 61% больных ХГН. Синдром АГ (систолическое артериальное давление — САД >140 и/или диастолическое артериальное давление — ДАД >90 мм рт.ст.) отмечался у 30 (35,7%) больных, в том числе у 13 тяжелая АГ (АД >160/110 мм рт.ст.). Нарушение функции почек (скорость клу-бочковой фильтрации — СКФ CKD-EPI <60 мл/мин/1,73 м2) на момент установления диагноза ХГН наблюдалось у 19 пациентов, из них у 12 это расценивали как проявление активности нефрита.
На основании совокупности клинических данных на момент постановки диагноза ХГН выделены 4 степени активности ХГН. Минимальную активность ХГН констатировали при ПУ <1 г/сут, эритроцитурии (ЭУ) <30 в поле зрения, нормальном или стойко повышенном (выше верхней границы нормы для конкретной лаборатории) уровне креатинина («=45). Умеренной активности
Контактная информация:
Камышова Елена Сергеевна — к.м.н., с.н.с. научно-исследовательского отдела нефрологии НИЦ ПМГМУ им. И.М. Сеченова; 199991 Москва, ул. Россолимо, 11, стр. 4; e-mail: kamyshova-es@ yandex.ru
ГН соответствовала ПУ от 1 до 3 г/сут в сочетании с сохранной функции почек. Высокую активность ГН диагностировали при ПУ >3 г/сут или наличии НС и сохранной функцией почек. Очень высокая степень активности характеризовалась наличием ПУ >3 г/сут, НС либо ПУ 1—3 г/сут и ЭУ >30 в поле зрения в сочетании с нарушением функции почек в рамках активности нефрита.
У 56 пациентов диагноз ХГН подтвержден морфологически. Мезангиопролиферативный ГН выявлен у 17 больных, мезангио-капиллярный — у 5, мембранозная нефропатия — у 11, минимальные изменения — у 10, фокально-сегментарный гломеруло-склероз (ФСГС) — у 5, фибропластический гломерулонефрит — у 2, нефросклероз — у 5 больных и у 1 пациентки диагностирована С3-нефропатия. На момент проведения биопсии почки средний возраст больных составил 37,1+17,0 года; длительность ХГН — 3,2+5,1 года.
ИСТ проводилась у 62 больных с активными формами нефрита. Возраст начала ИСТ составил 35,3 (25,7; 52,7) года, длительность ХГН — 6,1 (1,3; 14,3) мес. Большинство пациентов получали стандартную ИСТ, которая включала прием преднизоло-на у 14 больных в виде монотерапии, у 32 в сочетании с пульс-терапией преднизолоном и циклофосфаном (ЦФ), у 7 в сочетании с приемом цитостатиков (ЦФ принимали 2 пациента, азати-оприн — 2 и препараты микофеноловой кислоты — 3), 9 пациентам назначали циклоспорин А.
Эффективность ИСТ оценивали к 12-му месяцу лечения после достижения полного ответа, которым у пациентов с НС считали купирование его со снижением ПУ до <0,5 г/сут (при полном восстановлении или сохранении функции почек), а у больных с активным ХГН без НС — снижение ПУ до <0,5 г/сут с полным восстановлением или сохранением функции почек. Частичным ответом считали уменьшение признаков НС или купирование НС с персистированием ПУ >0,5 г/сут с улучшением или сохранением функции почек (для больных с НС) и снижение ПУ не менее чем на 50% с сохранением или восстановлением функции почек (для больных с активным ХГН без НС). Сохранение или нарастание выраженности НС и/или нарушения функции почек, персистирование ПУ >0,5 г/сут рассматривали как отсутствие ответа.
Данные об ответе на ИСТ получены у 35 больных: полный ответ к 12-му месяцу лечения достигнут у 31,4% пациентов, частичный — у 31,4% и ответ на ИСТ к 12-му месяцу отсутствовал у 37,1% больных.
Аллели полиморфных маркеров G(-238)A гена TNF, G(-174)C гена IL6 и G(-1082)A гена IL10 идентифицировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим анализом длин рестрикционных фрагментов.
Выделение геномной ДНК из венозной крови обследованных осуществляли методом фенол-хлороформной экстракции после инкубации образцов крови с протеиназой К в 0,1% растворе SDS. Термостабильная ДНК-полимераза Taq получена от фирмы «Диалат» (Москва, Россия), протеиназа К — от фирмы «Диа-М» (Москва, Россия). Фрагменты геномной ДНК, содержащие полиморфные участки генов-кандидатов, амплифициро-вали с помощью ПЦР на термоциклере ABI 7500 Fast.
Амплификацию полиморфного участка G(-238)A (rs361525) гена ТЖРпроводили с помощью ПЦР в реальном времени на термоциклере CFX96 («BioRad», США) в 10 мкл реакционной смеси следующего состава: 70 мМ трис-HCl, pH 8,8, 16,6 мМ сульфат аммония, 0,01% твин-20, 2 мМ хлорид магния, 200 нМ каждого dNTP, 500 нМ праймеров (FJ, 5'-CCTACACACAAATCAGTCA 3' и RJ, 5'-CAAGCATCAAGGATACCC-3'), 100 нМ зондов (FAM, FAM-5'-ctGcTcCgAtTccg-3'-BHQ1 и VIC, VIC-5'-ctGcTcTgAtT ccg-3'-BHQ2) 1,5 ед. Taq ДНК-полимеразы, 50—100 нг геномной ДНК. Условия амплификации фрагмента ДНК: 95 °C/2 мин — 1-й цикл; 94 °C/10 с, 60 °C/60 с — 40 циклов. Размер продукта амплификации 90 пар нуклеотидов (п.н.). Анализ продуктов амплификации проводили методом детекции «по конечной точке» с помощью встроенных средств программного обеспечения версии BioRad CFX Manager 3.0.
Амплификацию полиморфного участка G(-174)C (rs1800795) гена IL6 осуществляли с помощью ПЦР на основе аллельспеци-
фичной ПЦР с использованием 3 пар праймеров (F-внеш., GACTTCAGCTTTACTCTTTGTCAAGACA R-внеш., GCACACA CAGAAGGCACTTGAATAGA, R-внутр., GAATGAGCCTCAGA CATCTCCAGTCCTA) в 25 мкл реакционной смеси следующего состава: 70 мМ трис-HCl, pH 8,8, 16,6 мМ сульфат аммония, 0,01% твин-20, 2 мМ хлорид магния, 200 нМ каждого dNTP, 500 нМ праймеров. Условия амплификации фрагмента ДНК: 95 °C/2 мин — 1-й цикл; 92 °C/10 с, 62 °C/15, 72 °С/20 — 35 циклов. Размер продукта амплификации 326 и 205 и/или 176(С). Анализ продуктов амплификации проводили методом электрофоретическо-го разделения.
Амплификацию полиморфного участка G(-1082)A (rs1800896) гена IL10 выполняли с помощью ПЦР в реальном времени на термоциклере ABI 7500 Fast («Applied Biosystems», США) в 20 мкл реакционной смеси следующего состава: 70 мМ трис-HCl, pH 8,8, 16,6 мМ сульфат аммония, 0,01% твин-20, 2 мМ хлорид магния, 200 нМ каждого dNTP, 500 нМ праймеров (FJ, 5'-GGAAGAAGTTGAAATAACAAG-3' и RJ, 5'-CCAAGAC AACACTACTAAG-3'), 100 нМ зондов (FAM, FAM-5'-acttcCcc CtcCcaaa-3'-BHQ1 и VIC, VIC-5'-acttcCccTtcCcaaa-3'-BHQ2) 1,5 ед. Taq ДНК-полимеразы, 50—100 нг геномной ДНК. Условия амплификации фрагмента ДНК: 95 °C/2 мин — 1-й цикл; 94 °C/10 с, 60 °C/60 — 40 циклов. Размер продукта амплификации 126 п.н. Анализ продуктов амплификации проводили методом детекции «по конечной точке» с помощью встроенных средств программного обеспечения версии SDS 1.4.
При статистической обработке данных для протяженных переменных рассчитывали среднее значение и стандартное отклонение (mean + SD) или медиану, 25-й и 75-й квартили — Me (25%; 75%) в зависимости от соответствия данных нормальному распределению. Достоверность различий оценивали с помощью критерия U Манна—Уитни. Для проверки статистической значимости различий частотных показателей использовали критерий X2 по Пирсону. Достоверными считали различия при р<0,05; 0,05<р<0,1 рассматривали как тенденцию к различию.
результаты
Генотипы исследуемых полиморфных маркеров генов распределялись следующим образом: частота генотипа GG полиморфного маркера G(-238)A гена TNF составила 72,5%, генотипа GA — 24,5%, генотипа AA — 3%. Генотип GG полиморфного маркера G(—74)C гена IL6 выявлен у 72,5% больных, генотип GC — у 10,8% и генотип СС — у 16,7%. Генотип GG полиморфного маркера G(—1082)A гена IL10 идентифицирован в 9,8% случаев, генотип GA — в 50% и генотип AA — в 40,2%.
В связи с малым количеством гомозигот по минорным аллелям исследуемых генов дальнейший анализ проводили в следующих группах: для гена TNF в группах GG и A (объединявшей носителей генотипов GA и AA); для гена IL6 в группах GG и С (включавшей больных с генотипами GC и CC); для гена IL10 в группах G (в которую объединили гомозигот GG с гетерозиготами GА) и AA.
Ассоциации исследуемых полиморфных маркеров с возрастом начала ХГН не обнаружено. Соотношение мужчин и женщин в выделенных группах также было сопоставимым.
При изучении особенностей клинической картины на момент диагностики ХГН в зависимости от полиморфного маркера G(-238)A гена TNF достоверных различий между группами не обнаружено.
Выявлена тенденция к различиям активности ХГН в зависимости от генотипов полиморфного маркера G(— 174)C гена IL6: в группе больных с генотипом GG частота развития активного ГН (выраженная ПУ/НС с сохранной функцией почек) выше, чем у носителей аллеля С (41,9 и
Характеристика больных ХГН на момент проведения биопсии почки в зависимости от аллелей и генотипов исследуемых полиморфных маркеров генов TNF, IL6 и IL10
Ген TNF Ген IL6 Ген IL10
Показатель генотип аллель A р генотип аллель C р аллель G генотип р
GG (n=40) (n=14) GG (n=27) (n=8) (n=19) AA (n=16)
Возраст начала ИСТ, 33,6 (25,5; 38,6 Нд 35,9 (25,9; 29,2 Нд 29,7 (25,3; 35,9 (25,9; Нд
годы 52,1) (24,9; 58,9) 52,2) (25,3; 55,4) 55,1) 51,6)
Длительность ХГН до 7,3 (1,5; 3,7 (0,8; Нд 7,0 (1,9; 4,0 (0; Нд 7,5 (1,9; 4,0 (1,2; Нд
начала ИСТ, мес 19,5) 7,5) 15,2) 9,9) 20,9) 9,5)
Полный ответ на ИСТ
к 12-му месяцу, % 29,2 36,4 Нд 22,2 62,5 0,045 47,4% 12,5% 0,030
Примечание. Нд — недостоверно.
25% соответственно; р=0,088), в то время как у носителей аллеля С чаще обнаруживали очень высокую активность ХГН (выраженная ПУ/НС с нарушением функции почек) по сравнению с группой GG (21,4 и 8,1% соответственно; р=0,069). Кроме того, в целом у носителей аллеля С гена IL6 по сравнению с больными, гомозиготными по аллелю G, на момент постановки диагноза ХГН чаще отмечалось нарушение функции почек (в 35,7 и 13% случаев соответственно; р=0,014).
У носителей генотипа АА полиморфного маркера G(—1082)A гена IL10 чаще обнаруживали АГ в дебюте ХГН (у 56,3% по сравнению с 32,2% носителей аллеля G; р=0,023). У них же наблюдалась тенденция к более частому сочетанию НС и АГ в начале заболевания (29,7% по сравнению с 15,5% у больных из группы IL10G; р=0,082).
В зависимости от результатов морфологического исследования биоптата почки пациентов объединили в 2 группы. В 1-ю группу включили больных с пролифератив-ными вариантами ХГН (22 с мезангиопролиферативным и мембранопролиферативным ГН), а во 2-ю группу — 26 пациентов с непролиферативными формами (мембраноз-ной нефропатией, ФСГС, болезнью минимальных изменений); больных с нефросклерозом и фибропластическим ГН из этой части анализа исключили, поскольку на этой стадии определить первичную форму нефрита не представлялось возможным. Обнаружена тенденция к более высокой распространенности пролиферативных вариантов ХГН у больных с генотипом GG (ген TNF) по сравнению с носителями аллеля А (46,3 и 20% соответственно; р=0,067), тогда как у лиц с генотипом GG (ген IL6) несколько чаще наблюдались непролиферативные формы нефрита (53,7%) по сравнению с носителями аллеля С (26,7%; р=0,067).
При изучении ответа на ИСТ обнаружено, что у носителей аллеля С гена IL6 и генотипа GG гена IL10 частота достижения полного ответа к 12-му месяцу лечения достоверно выше (см. таблицу).
Обсуждение
Полиморфный маркер G(-238)A гена TNF, кодирующего фактор некроза опухоли-а, — мощный провоспали-тельный цитокин, продуцируемый активированными макрофагами, при заболеваниях почек практически не изу-
чен. Мы обнаружили только две работы, в которых обследуемые группы включали пациентов с ТПН в исходе различных первичных и вторичных нефропатий. В одной из этих работ ассоциация данного полиморфного маркера с предрасположенностью к почечной недостаточности и развитием сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) при ТПН отсутствовала [16], в то время как в другой носитель-ство генотипа АА полиморфного маркера 0(—238)А было ассоциировано с повышенным риском развития ТПН [17]. В нашем исследовании не обнаружена ассоциация данного полиморфного маркера с клиническими проявлениями ХГН. Однако выявлена тенденция к более высокой частоте выявления пролиферативных вариантов ХГН у больных с генотипом ОО по сравнению с носителями аллеля А (46,3 и 20% соответственно; р=0,067). Вероятно, это может отражать более выраженное стимулирующее влияние ТКБ-а на пролиферацию мезангиальных клеток у носителей данного генотипа.
Ассоциация с поражением почек полиморфного маркера О(—174)С гена 1Т6, кодирующего другой медиатор воспаления — интерлейкин-6 (ИЛ-6), также изучена недостаточно. По данным одних исследований, с более высокими уровнями ИЛ-6 в крови ассоциировано носитель-ство аллеля С [18], а по другим — аллеля О [19]. В нескольких работах носительство аллеля С ассоциировано с худшим прогнозом (например, более низкой выживаемостью почечного трансплантата [20]) и предрасположенностью к развитию ССЗ [21,22], в том числе при заболеваниях почек. Так, у пациентов, получающих диализную терапию, носительство аллеля С ассоциировано с высоким АД, гипертрофией левого желудочка и снижением функционального статуса [23]. По нашим данным, «неблагоприятным» оказалось носительство аллеля С, которое ассоциировано с более частым нарушением функции почек в дебюте ХГН. Однако при изучении ответа на ИСТ, оказалось, что у носителей аллеля С частота достижения ремиссии к 12-му месяцу терапии выше, чем у гомозигот ОО. Этот результат отчасти согласуется с результатами исследования 8. Agrawal и соавт. [11], которые обнаружили более высокую распространенность генотипа ОО у детей со стероидрезистентным НС, что свидетельствовало об ассоциации между данным полиморфным маркером и ответом на стероиды. Поскольку мы не исследовали корреляции между носительством различных генотипов исследуе-
мого полиморфного маркера и уровнем ИЛ-6 в крови, механизмы, лежащие в основе выявленных ассоциаций, нуждаются в уточнении.
Активно изучаются ассоциации полиморфных маркеров гена IL10, кодирующего основной противовоспалительный цитокин — интерлейкин-10 (ИЛ-10), который угнетает секрецию ТЪ1-клетками ИЛ-1, а-ФНО, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12 [24—26] и снижает активность макрофагов. Ген IL10, кодирующий синтез ИЛ-10, состоит из 5 экзо-нов и содержит 3 однонуклеотидных полиморфизма: Q-592)A, C(—819)T и G(-1082)A [27, 28]. Из них наиболее исследован полиморфизм G(—1082)A; обнаружено, что носительство генотипа АА ассоциировано с низким уровнем ИЛ-10 и повышенной смертностью, связанной с ССЗ, у больных с ТПН [28, 29]. Полученные нами результаты свидетельствуют об ассоциации генотипа АА с АГ на момент диагностики ХГН, а также о тенденции к более частому сочетанию НС и АГ в начале заболевания. Кроме того, мы обнаружили ассоциацию между данным полиморфным маркером и эффективностью ИСТ: пациенты с генотипом АА гена IL10 хуже отвечали на ИСТ по сравнению с носителями аллеля G (положительный ответ наблюдался в 12,5 и 47,4% случаях соответственно; р=0,029). В мировой литературе связь данного полиморфного маркера с ответом на ИСТ при первичном ГН не отражена. В работе Т.Н. Красновой и соавт. [30], оценивавших взаи-
мосвязь данного полиморфного маркера с течением вол-чаночного нефрита, носительство аллеля А оказалось связано с лучшим ответом на лечение. Таким образом, выявленная нами ассоциация между полиморфным маркером G(—1082)A гена IL10 и эффективностью ИСТ нуждается в уточнении в последующих исследованиях, равно как и механизмы влияния ИЛ-10 на клинические особенности ХГН.
Заключение
На основании полученных результатов можно сделать вывод об ассоциации полиморфных маркеров G(—238)A гена TNF, G(-174)C гена IL6 и G(-1082)A гена IL10 с клиническими и морфологическими особенностями ХГН, а также ответом на ИСТ. Однако необходимы дальнейшие исследования в более крупных выборках, в том числе с использованием подходов, позволяющих уточнить совокупный вклад данных (и других) генов в развитие заболевания, персонифицировать прогноз и терапевтическую тактику.
Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант №14-04-01819).
Конфликт интересов отсутствует.
ЛИТЕРАТУРА
1. Вашурина Т.В., Сергеева Т.В. Цитокины и адгезивные молекулы в патогенезе хронического гломерулонефрита. Нефрология и диализ. 2002;3:171-181.
2. Богомазов С.Ю., Гладских О.П., Иванов А.А. и др. Цитокины и внеклеточный матрикс при экспериментальных гломе-рулопатиях. Архив патологии. 1997;59(6):45-50.
3. Chen A, Chen W, Sheu L, Lin C. Pathogenesis of IgA nephropathy: In vitro activation of human mesangial cells by IgA immune complex leads to cytokine secretion. J Pathol. 1994;173(2):119-126. doi: 10.1002/path. 1711730208.
4. Liang Y, Zhang J, Zhou Y, Xing G, Zhao G, Liu Z. Proliferation and Cytokine Production of Human Mesangial Cells Stimulated by Secretory IgA Isolated from Patients with IgA Nephropathy. CelPhysiolBiochem. 2015;36(5):1793-1808.
doi: 10.1159/000430151.
5. Couser W. Pathogenesis of glomerular damage in glomerulone-phritis. Nephrol Dial Transplant. 1998;13(90001):10-15.
doi:10.1093/ndt/13.suppl_1.10.
6. Waldherr R, Noronha I, Niemir Z, KmlSger C, Stein H, Stumm G. Expression of cytokines and growth factors in human glomeru-lonephritides. Pediatr Nephrol. 1993;7(4):471-478.
doi:10.1007/bf00857578.
7. Ifuku M, Miyake K, Watanebe M et al. Various Roles of Th Cytokine mRNA Expression in Different Forms of Glomerulonephritis. Am J Nephrol. 2013;38(2):115-123.
doi: 10.1159/000353102.
8. Чеботарева Н.В., Бобкова И.Н., Непринцева Н.В. и др. Мочевые маркеры повреждения подоцитов: значение для оценки течения и прогноза хронического гломерулонефрита. Терапевтический архив. 2015;6:34-39.
9. Чурносов М.И., Калмыкова Е.В., Некипелова Е.В., Рудых Н.А., Аристова И.К., Должников А.А. Аллельные варианты генов интерлейкинов при хроническом гломерулонефрите. Цитокины и воспаление. 2010;9(2):37-41.
10. Петросян Э.К., Цыгин А.Н., Шестаков А.Е., Носиков В.В. Роль генетического полиморфизма интерлейкинов 4 и 13 в развитии нефротического синдрома с минимальными изменениями у детей и подростков. Педиатрия. Журнал им. Г.Н. Сперанского. 2006; 5: 7-10.
11. Agrawal S, Tripathi G, Jafar T et al. Does cytokine gene polymorphism affect steroid responses in idiopathic nephrotic syndrome? Indian J Med Scie. 2008;62(10):383.
doi: 10.4103/0019-5359.44017.
12. Калмыкова Е.В., Полякова И.С., Прощаев К.И. и др. Изучение взаимосвязей молекулярно-генетических маркеров ин-терлейкинов с клиническим течением хронического гломе-рулонефрита. Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. 2009;4:619-620.
13. Parry R, Gillespie K, Parnham A, Clark A, Mathieson P. Interleu-kin-4 and interleukin-4 receptor polymorphisms in minimal change nephropathy. Clin Sci. 1999;96(6):665-668. doi:10.1042/cs0960665.
14. Vázquez-Huerta DI, Alvarez-Rodríguez BA, Topete-Reyes JF et al. Tumor necrosis factor alpha -238 G/A and -308 G/A polymorphisms and soluble TNF-a levels in chronic kidney disease: correlation with clinical variables. Int J Clin Exp Med. 2014;7(8):2111-2119.
15. Amoli MM, Martin J, Miranda-Filloy JA et al. Lack of association between interleukin-6 promoter polymorphism at position -174 and Henoch-Schonlein purpura. Clin Exp Rheumatol. 2007;25(1 Suppl 44):S6-9.
16. Buraczynska M, Mierzicki P, Buraczynska K, Dragan M, Ksiazek A. Tumor necrosis factor-alpha gene polymorphism correlates with cardiovascular disease in patients with end-stage renal disease. MolDiag Ther. 2007;11(4):257-263.
doi:10.1007/bf03256247.
17. Ranganath P, Tripathi G, Sharma R, Sankhwar S, Agrawal S. Role of non-HLA genetic variants in end-stage renal disease. Tissue Antigens. 2009;74(2):147-155.
doi:10.1111/j.1399-0039.2009.01276.x.
18. Brull D, Montgomery H, Sanders J et al. Interleukin-6 Gene -174G>C and -572G>C Promoter Polymorphisms Are Strong Predictors of Plasma Interleukin-6 Levels After Coronary Artery Bypass Surgery. Arterioscler, Thrombos, VascBiol.2001;21(9):1458-1463.
doi:10.1161/hq0901.094280.
19. Семенова Н.А., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Роль полиморфизма гена IL6 -174C/G в развитии хронической HCV-инфекции. Бюллетень сибирской медицины. 2010;5:93-97.
20. Muller-Steinhardt M, Hartel C, Muller B, Kirchner H, Fricke L. The interleukin-6 -174 promoter polymorphism is associated with long-term kidney allograft survival. Kidney Int. 2002; 62(5):1824-1827.
doi: 10.1046/j.1523-1755.2002.00609.x.
21. Chiappelli M, Tampieri C, Tumini E et al. Interleukin-6 gene polymorphism is an age-dependent risk factor for myocardial infarction in men. Int JImmunogenet. 2005;32(6):349-353.
doi:10.1111/j.1744-313x.2005.00537.x.
22. Sie M. Interleukin 6 -174 G/C Promoter Polymorphism and Risk of Coronary Heart Disease: Results from the Rotterdam Study and a Meta-Analysis. Arterioscler, Thrombos, Vasc Biol. 2006;26(1):212-217.
doi: 10.1161/01.atv.0000194099.65024.17.
23. Losito A, Kalidas K, Santoni S, Jeffery S. Association of interleukin-6 -174G/C promoter polymorphism with hypertension and left ventricular hypertrophy in dialysis patients. Kidney Int. 2003;64(2):616-622.
doi:10.1046/j.1523-1755.2003.00119.x.
24. Del Prete G, De Carli M, Almerigogna F et al. Human IL-10 is produced by both Type 1 Helper (Th1) and Type 2 Helper (Th2) T cell clones and inhibits their antigen-specific proliferation and Cytokine Production. J Immunol. 1993;150:353-360.
25. Fiorentino DF, Zlotnik A, Mosmann TR et al. IL-10 inhibits cy-tokine production by activated macrophages. J Immunol. 1991;147:3815-3822.
26. Moore KW, O'Garra A, de Waal Malefyt R et al. Interleukin-10. Annu Rev Immunol. 1993;1:165-190.
27. Turner D, Williams D, Sankaran D, Lazarus M, Sinnott P, Hutchinson I. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter. Eur JImmunogen. 1997;24(1):1-8.
doi: 10.1111/j. 1365-2370.1997.tb00001.x.
28. Eskdale J, Gallagher G, Verweij C, Keijsers V, Westendorp R, Huizinga T. Interleukin 10 secretion in relation to human IL-10 locus haplotypes. Proc Natl Acad Scie. 1998;95(16):9465-9470. doi: 10.1073/pnas.95.16.9465.
29. Girndt M, Ulrich C, Kaul H, Sester U, Sester M, Kohler H. Uremia-associated immune defect: the IL-10-CRP axis. Kidney Int. 2003;63:S76-S79.
doi: 10.1046/j.1523-1755.63.s84.14.x.
30. Краснова Т.Н., Самоходская Л.М., Иваницкий Л.В., Коро-година А.Д., Борисов Е.Н., Никифорова Н.В., Новиков П.И., Камалов А.А., Мухин Н.А. Влияние полиморфизмов генов интерлейкина-10 и интерлейкина-28 на развитие и течение волчаночного нефрита. Терапевтический архив. 2015;87(6):40-44.
Поступила 25.02.2016
