CC BY
129. Brachman P. Bioterrorism: an update with a focus on anthrax. Am. J. Epidemiol. 2002, 155: 981-987.
10. Chitlaru T, Altboum Z., Reuveny S., Shafferman A. Progress and novel strategies in vaccine development and treatment of anthrax. Immunol. Rev. 2011, 239: 221-236.
11. Friedlander A., Little S. Advances in the development of next-generation anthrax vaccines. Vaccine. 2009, 27: 28-32.
12. Janssens S., Beyaert R. Role of Toll-like receptors in pathogen recognition. Clin. Microbiol. Rev. 2003, 16: 637-646.
13. Kravtsov A.L., Grebenyukova T.P., Bobyleva E.V., Golovko E.M., Malyukova T.A., Lyapin M.N., Kostyukova TA., Yezhov I.N., Kuznetsov O.S. Flow cytofluorometric assay of human whole blood leukocyte DNA degradation in response to Yersinia pestis and Staphylococcus aureus. Proc. SPIE. 2001, 4241: 260-267.
14. Liu T., Matsuguchi T., Tsuboi N.et al. Differences in expression oftoll-like receptors and their reactivities in dendritic cells in BALB/c and C57BL/6 mice. Infect. Immun. 2002, 70 (12): 6638-6645.
15. Medicines in Development Vaccines. Report. 2012. Avaible at: http://www.phrma.org/sites/default/files/ pdf/vaccines2012.pdf.
16. Mikshis N.I., Kudryavtseva O.M., Shulepov D.V., Goncharova A.Yu., Bolotnikova M.F., Novikova L.V., Popov Yu.A., Kutyrev V.V. Asporogenic recombinant producer of Anthrax protective antigen. Appl. Biochem. Microbiol. 2011, 47 (7): 667-673.
17. Rynkiewicz D., Rathkopf M., Sim I. et al. Marked enhancement of the immune response to BioThrax® (Anthrax Vaccine Adsorbed) by the TLR9 agonist CPG 7909 in healthy volunteers. Vaccine. 2011, 29 (37): 6313-6320.
18. Valiante N., O'Hagan D., Ulmer J. Innate immunity and biodefence vaccines. Cell. Microbiol. 2003, 5 (11): 755-760.
Поступила 17.10.13
Контактная информация: Микшис Наталья Ивановна, д.м.н.,
410005, Саратов, ул. Университетская, 46, р.т. (845-2) 26-21-31
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
B.М.Мицура1, Е.В.Воропаев1, О.В.Осипкина1,
C.В.Жаворонок2, Д.В.Терешков3, О.Ю.Баранов1
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ИНТЕРЛЕЙКИНА-28B И РНКазы L У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С
1Гомельский государственный медицинский университет; 2Белорусский государственный медицинский университет, Минск; 3Гомельская областная инфекционная клиническая больница, Беларусь
Цель. Определение частоты встречаемости и клинического значения полиморфизмов генов интерлейкина-28B (IL28B) и РНКазы L у пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС). Материалы и методы. Обследованы 104 стационарных пациента с ХГС (65% мужчины; 63% с генотипом 1 вируса гепатита С — ВГС). 70 пациентов получали лечение препаратами интерферона (№N1 и рибавири-на (RBV). Методом полимеразной цепной реакции определяли единичные нуклеотидные полиморфизмы гена IL28B 39743165T>G (ге8099917), SNP 39738787C>T (к12979860) и гена РНКазы L (1385G>A). Результаты. Частота встречаемости «благоприятных» аллельных вариантов SNP гена IL28B у пациентов с ХГС была ниже, чем в популяции европейского региона. У пациентов с генотипом 1 ВГС чаще встречаются мутантные аллели в SNP 39743165T>G (р=0,045) и 39738787C>T (р=0,005), чем у больных с иными генотипами вируса. Выявлены более высокие значения аланина-минотрансферазы у пациентов с генотипом СС 397387870Т Частоты вариантов SNP генов Ш28Б и РНКазы L не различались в зависимости от скорости прогрессирования заболевания ф>0,5). Ответ на терапию IFN/RBV был выше при «благоприятных» вариантах ТТ (SNP 39743165T>G) и СС (SNP
397387870Г). Заключение. Обследование на SNP 39738787C>T гена IL28B рекомендуется перед
началом терапии IFN/RBV всем пациентам с генотипом 1 ВГС в качестве прогностического фактора ответа на лечение. SNP 1385G>A гена РНКазы L не имеет явного клинического значения при ХГС.
Журн. микробиол., 2014, № 3, С. 30—36
Ключевые слова: полиморфизм гена IL28B, РНКаза L, хронический гепатит С, интерферонотера-пия
V.M.Mitsura1, E.V.Voropaev1, O.V.Osipkina1, S.V.Zhavoronok2, D.V.Tereshkov3, O.Yu.Baranov1
CLINICAL SIGNIFICANCE OF INTERLEUKIN-28B AND RNAse L GENE POLYMORPHISM DETERMINATION IN PATIENTS WITH CHRONIC VIRAL HEPATITIS C
!Gomel State Medical University; 2Belarus State Medical University, Minsk; 3Gomel Regional Infectious Clinical Hospital, Belarus
Aim. Determination of frequency of occurrence and clinical significance of interleukin-28B (IL28B) and RNAse L gene polymorphism in patients with chronic hepatitis C (CHC). Materials and methods. 104 hospital patients with CHC (65% male; 63% with genotype 1 hepatitis C virus — HCV) were examined. 70 patients received therapy with interferon (IFN) and ribavirin (RBV). Single nucleotide polymorphism (SNP) of IL28B gene 39743165T>G (rs8099917), SNP 39738787C>T (rs12979860) and RNAse L gene (1385G>A) were determined by polymerase chain reaction. Results. The frequency of detection of «favorable» SNP allele variants of IL28B gene in patients with CHC was lower than in population of the European region. In patients with genotype 1 HCV, mutant alleles in SNP 39743165T>G (р=0.045) and 39738787C>T (р=0.005) occurred more frequently than in patients with other virus genotypes. Higher values of alanine aminotransferase in patients with genotype CC 39738787C>T were detected. Frequencies ofSNP variants of IL28B and RNAse L gene did not differ depending on the speed of disease progression (p>0.5). Response to IFN/RBV therapy was higher in «favorable» ТТ (SNP 39743165T>G) and СС (SNP 39738787C>T) variants. Conclusion. Examination for IL28B gene SNP 39738787C>T is recommended before the start of IFN/RBV therapy in all the patients with genotype 1 HCV as a prognostic factor on the therapy response. RNAse L gene SNP 1385G>A does not have a clear clinical significance in CHC.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 3, P. 30—36
Key words: IL28B gene polymorphism, RNAse L, chronic hepatitis C, interferon therapy ВВЕДЕНИЕ
Инфекция вирусом гепатита С (ВГС) представляет собой важную проблему современности. Комбинированная терапия пегилированным интерфероном альфа и рибави-рином (PegIFN/RBV) является во многих странах стандартом помощи пациентам с хроническим гепатитом С (ХГС). Стойкий вирусологический ответ (СВО) на лечение в настоящее время достигает 54 — 63% в общем, составляя 40 — 50% для пациентов с генотипом 1 ВГС [4]. Определенное влияние на результат лечения, а также возможность самостоятельного выздоровления при заражении ВГС оказывает полиморфизм гена интерлейкина 28В (IL28B) [11]. Было показано, что единичные нуклеотидные замены (SNP) в гене IL28B коррелировали с ответом на лечение пациентов препаратами PegIFN/ RBV [3, 5, 14]. Два из этих SNP имеют более высокую прогностическую ценность ответа на лечение у ВГС-инфицированных пациентов с генотипом 1 ВГС: rs12979860 и rs8099917. Аллель С в rs12979860 ассоциируется с повышенной вирусной нагрузкой, со спонтанным клиренсом ВГС и вирусологическим ответом во время лечения [3, 5]. Демонстрируется, что С аллель rs12979860 является предиктором быстрого снижения вирусной нагрузки и достижения быстрого вирусологического ответа на 4 неделях лечения [7]. Другим по значимости является SNP rs8099917, отражающий СВО у пациентов с генотипом 1 ВГС [5, 12]. Предполагается, что генотипирование IL28B позволит выбрать оптимальную продолжительность лечения у пациентов с генотипом 1 ВГС. Рибонуклеаза L (РНКаза L) является ключевым компонентом врожденного клеточного иммунитета, расщепляя вирусные и клеточные одноцепочечные РНК. РНКаза L лока-
лизуется в цитоплазме и ядре и расщепляет вирусную РНК в области UA и UU дину-клеотидов на фрагменты длиной 200 — 500 п.н. [2, 13]. Доказано влияние полиморфизма РНКазы L 1385G>A на риск развития рака простаты (генотип GA повышает риск на 50%, а генотип АА — на 100% по сравнением с «нормальным» генотипом GG) [2]. Клиническое значение РНКазы L для ответа на терапию ХГС интерфероном альфа (IFN) не известно. ВГС первого генотипа имеет меньшее количество UA и UU сайтов рестрикции и, таким образом, более резистентен к действию РНКазы L [9]. Эти результаты позволяют предположить, что чувствительность ВГС инфекции к терапии IFN может коррелировать с эффективностью, с которой РНКаза L расщепляет РНК ВГС. Однако ответ на терапию IFN не объясняется различиями в сайтах расщепления РНКазы L [15].
Цель работы — определение частоты встречаемости и клинического значения полиморфизмов гена интерлейкина 28B и РНКазы L у пациентов с ХГС. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Были обследованы 104 пациента с хронической ВГС-инфекцией, госпитализированных в отделение хронических гепатитов Гомельской областной инфекционной клинической больницы. Из них были 70 мужчин (65,1%) и 34 женщины (34,9%) в возрасте от 16 до 75 лет (средний возраст 39,7±1,6 лет). У 17 пациентов (16,3%) имелись признаки цирроза печени. Генотип вируса определяли у 91 пациента, у большинства (62,6%) выявлен генотип 1 ВГС. Получали противовирусную терапию 70 пациентов с ХГС: 50 с использованием стандартного интерферона (IFN) и RBV, 20 — PegIFN/RBV. Некоторые пациенты еще продолжают лечение, поэтому эффект терапии оценен у 57 пациентов.
Для выявления SNP 39743165T>G (rs8099917) и SNP 39738787C>T (rs12979860) гена IL28B (классификация NCBI) использовали метод ПЦР-ПДРФ (полиморфизм длин ре-стрикционных фрагментов) с применением технологии миссматч-праймеров по методике [1]. Для выявления точечной мутации гена РНКазы L 1385G>A (rs486907) у 89 из пациентов обследованной группы был также применен метод ПЦР-ПДРФ с применением технологии миссматч-праймеров. В качестве материала для исследований использовалась ДНК, выделенная из лейкоцитов периферической крови с использованием реагентов для выделения ДНК из клинического материала «Цитолизин» фирмы «АмплиСенс» (Россия). Используемые праймеры были синтезированы по нашему заказу фирмой «Primetech» (Беларусь). Для проведения ПЦР, электрофоретической детекции и рестрикционного анализа использовали реагенты фирмы «Fermentas» (Литва). Детекцию продуктов ПЦР проводили с помощью гель-электрофореза, достоверность полученных данных подтверждена с помощью мелтинга (плавления) рестрикционных фрагментов.
Для сравнения частоты выбранных вариантов полиморфизма генов IL28B и РНКазы L с популяцией Европейского региона были взяты частоты полиморфизмов из базы данных GenBank NCBI. Контрольной группой для РНКазы L послужили 77 человек без признаков заболевания печени или наличия маркеров вирусного гепатита, проживающие в Гомельском регионе.
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы STATISTICA v.6.0. Использовали критерий Манна-Уитни для сравнения в независимых группах, критерий %2 или точный критерий Фишера для сравнения частот. Для описания данных применялись медиана (Ме) и интерквартильный размах (25 — 75%). Статистически значимой считалась 95% вероятность различий (р<0,05). Для расчета 95% доверительного интервала (95% ДИ) в оценке долей использован откорректированный метод Вальда. РЕЗУЛЬТАТЫ
Определена частота встречаемости SNP 39743165T>G гена IL28B у 104 пациентов. Для сравнения частоты носительства мутантного аллеля G с литературными данными нами проанализирована база данных GenBank, найдено исследование 226 лиц в Европейском регионе [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref. cgi?rs=8099917]. Результат представлен в табл. 1.
Различие в частоте носительства мутантного аллеля G в сравниваемых группах статистически значимо (%2=15,2; р=0,0001).
Анализ SNP 39738787C>T [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref. cgi?rs=12979860] проводился у 102 пациентов (в двух образцах наблюдали ингибирование
Таблица 1. Частоты генотипов и аллелей по SNP 39743165T>G гена IL28B в группе пациентов с ХГС и контрольной группе из базы данных GenBank
Группа Частоты генотипов (%, 95% ДИ) Частоты аллелей (%, 95% ДИ)
ТТ ТО ОО Т О
Группа пациентов с ХГС (п=104) 52,9 (43,4—62,2) 38,5 (29,7—48,1) 8,7 (4,4—15,8) 72,1 (65,7—77,8) 27,9 (22,2—34,4)
НарМар-СЕи 8844192664 (п=226) 72,6 (66,4—78,0) 24,8 (19,6—30,8) 2,7 (1,1—5,8) 85,0 (81,4—88,0) 15,0 (12,0—18,7)
Таблица 2. Частоты генотипов и аллелей по SNP 39738787С>Т гена IL28B в группе пациентов с ХГС и группе сравнения
Группа Частоты генотипов (%, 95% ДИ) Частоты аллелей (%, 95% ДИ)
СС СТ ТТ С Т
Пациенты с ХГС 37,3 46,1 16,7 60,3 39,7
(п=102) (28,5—47,0) (36,7—55,7) (10,6-25,2) (53,5-66,8) (33,2-46,6)
Европейская популяция 52,4 39,7 7,9 72,3 27,7
(п=642) (48,5—56,2) (36,0—43,6) (6,1—10,3) (69,7—74,6) (25,4—30,2)
ПЦР). Так как в GenBank нами не найдена информация о частоте генотипов в европейской популяции, то в качестве группы сравнения была взята группа обследованных европейцев (642 человека) из исследования зарубежных авторов [14]. Результат представлен в табл. 2.
Различия в частоте встречаемости аллелей в сравниваемых группах статистически значимы (х2=12,0; р=0,0001).
Сравнивали результаты исследования частоты SNP 39743165T>G и 39738787С>Т. Совпадение «благоприятных» генотипов ТТ и СС соответственно было у 37 чел. (36,3%), гетерозиготных вариантов TG и СТ — у 33 чел. (32,4%), мутантных вариантов GG и ТТ - у 8 (7,8%). У 13 пациентов (12,7%) «благоприятный» генотип ТТ ^Р 39743165Т>О) сочетался с генотипом СТ (SNP 39738787С>Т). «Неблагоприятный» генотип ТТ (SNP 39738787С>Т) у 6 пациентов (5,9%) сочетался с генотипом Ш ^Р 39743165Т>О) и у 3 (2,9%) — с генотипом ТТ.
Анализ полиморфизма гена РНКазы L проводили у 84 пациентов с ХГС, у 77 лиц контрольной группы и в двух группах сравнения из базы данных GenBank (популяция Центрально-Европейского региона). Результаты представлены в табл. 3.
Генотип GG по сравнению с иными вариантами у лиц контрольной группы встречался несколько чаще, чем у пациентов с ХГС (%2=3,62; р=0,057). Частота нормального генотипа GG была также несколько выше в популяции НарМар-СЕи 8848422436 по сравнению с пациентами с ХГС (%2=3,51; р=0,061), однако значимо не отличалась от контрольной группы и двух групп сравнения.
Проанализированы генотипы вируса ВГС (1 или не 1) у лиц с различными вариантами генов ^28В и РНКазы L у 73 пациентов. Представляется интересным, что у лиц с различными генотипами вируса частота вариантов SNP гена ^28В различается, причем у пациентов с 1 генотипом ВГС чаще встречаются мутантные аллели SNP 39743165T>G (Х2=3,64, р=0,045) и SNP 39738787С>Т (х2=7,81, р=0,005). Различий в частоте выявления
Таблица 3. Полиморфизм гена РНКазы L у пациентов с ХГС, лиц контрольной группы и в двух популяциях Центрально-Европейского региона
Популяции Полиморфизм гена РНКазы L 1385 О/А, % (95% ДИ)
ОО ОА АА
Пациенты с ХГС (п=84) 25,0 (16,9— 35,3) 58,3 (47,7— -68,3) 16,7 (10,1- —26,2)
Контрольная группа (п=77) 39,0 (28,8— -50,1) 52,0 (41,0— -62,8) 9,1 (4,2— 17,9)
НарМар-СЕи 8848422436 (п= =226) 36,3 (30,3— 42,7) 50,4 (44,0— -56,9) 13,3 (9,4— -18,4)
НарМар-СЕи 8868786496 (п= 120) 31,7 (24,0— -40,5) 55,0 (46,1 — -63,6) 13,3 (8,3— 20,7)
3. ЖМЭИ 4 № 32
33
нормального генотипа GG гена РНКазы Ь у лиц с 1 и не 1 генотипами вируса не обнаружено (х2=0,41; р=0,52).
Сравнивали различные варианты SNP в 2 группах: с прогрессированием ХГС (развитие выраженного фиброза или цирроза) — 22 чел. и отсутствием прогрессирования (при наблюдении свыше 10 лет прогресии фиброза не отмечено) — 22 чел. Частота генотипов SNP 39743165Т^ и SNP 39738787С>Т не различалась (х2=0,37; р=0,54 и х2=0,05; р=0,83 соответственно). Различий в частоте генотипа GG SNP 1385G>A гена РНКазы Ь у лиц с различной скоростью прогрессирования ХГС также не выявлено (%2=1,56; р=0,21).
Сравнение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) в группах с различными генотипами SNP 39743165T>G с помощью метода Манна-Уитни не выявило значимых различий (р=0,22). Выявлены более высокие значения АЛТ (Ме 114 Е/л, 25-75% 69 — 180,6) в группе с генотипом СС (SNP 39738787С>Т) по сравнению с генотипами СТ и ТТ (Ме 69,8 Е/л, 25—75% 54,1—111), статистически значимые (тест Манна-Уитни р=0,016). Вирусная нагрузка ВГС при обоих полиморфизмах гена 1Ь28В значимо не различалась (р=0,85 и р=0,59 соответственно). Генотип GG SNP 1385G>A гена РНКазы Ь в сравнении с генотипами GA и АА не оказывает влияния на уровень АЛТ и вирусной нагрузки ВГС (тест Манна-Уитни, р=0,52 и р=0,79 соответственно).
Для исследования роли вариантов SNP гена 1Ь28В в эффективности противовирусного лечения ХГС обследованы 70 пациентов, которые получали препараты IFN и ЯВУ Из них генотип 1 ВГС имели 45 человек (64,3%), генотип 2 или 3 — 25 человек (35,7%). Проанализированы результаты лечения препаратами интерферона (СВО или вирусологический ответ в конце курса лечения) у 57 пациентов. На терапию ответили 13 из 43 (30%) пациентов, получавших IFN и ЯВУ и 6 из 14 (43%) пациентов, получавших PegIFN/RBV Учитывая, что частота ответа в этих двух группах различалась несущественно (р=0,52, точный критерий Фишера), для дальнейшего анализа они были объединены.
Проанализирована частота ответа на противовирусное лечение у пациентов с ХГС с различными аллельными вариантами гена 1Ь28В и РНКазы Ь в общей группе пациентов и у лиц с 1 генотипом ВГС (табл. 4). Ответ на терапию был ниже у лиц с 1 генотипом ВГС по сравнению с иными генотипами (%2=12,7, р=0,0004).
При сравнении частоты «благоприятных» гомозиготного носительства ТТ и СС у ответивших и не ответивших на интерферонотерапию выявлено, что частота генотипа ТТ (SNP 39743165T>G) была несколько выше у ответивших (68,4%), чем у не ответивших (44,7%, %2=2,8, р=0,09). Частота СС ^ОТ 39738787С>Т) у ответивших (57,9%) была значительно выше, чем у не ответивших (18,4%, %2=9,1; р=0,003). Ни у одного из ответивших на терапию пациентов не встречались гомозиготные «неблагоприятные» варианты GG ^ОТ 39743165Т^) или ТТ фОТ 39738787С>Т).
Рассчитывали отношение шансов (ОЯ, 95% ДИ) ответа на терапию у пациентов с «благоприятным» генотипом ТТ (SNP 39743165T>G) по сравнению с генотипами TG или GG, ОЯ = 2,7 (0,8 — 8,5). Для генотипа СС 39738787С>Т), по сравнению с генотипами СТ или ТТ, ОЯ = 6,1 (1,8 — 20,7). Это доказывает более высокую прогностическую
ценность определения SNP 39738787С>Т по сравнению с SNP 39743165ТЖ.
Для исследования роли вариантов SNP 1385G>A гена РНКазы Ь в эффективности противовирусного лечения ХГС обследованы 46 пациентов. Из них генотип 1 ВГС имели 29 человек (63,0%). На терапию ответили 18 пациентов, у 3 из которых был выявлен «нормальный» вариант (GG), у 7 пациентов — генотип GА, у 5 — генотип АА. Не ответили на терапию 22 па-
Таблица 4. Частота ответа на противовирусное лечение у пациентов с ХГС с различными аллельными вариантами гена IL28B и РНКазы L
SNP генов IL28B и РНКазы L Варианты генотипов Ответ, % (95% ДИ) Ответ, % (95% ДИ) пациенты с генотипом
(П) все пациенты 1 ВГС
IL28B SNP 39743165T>G ТТ 43,3 (27,4—60,8) 29,4 (13,0—53,4)
(n=57) те 27,3 (12,9—48,4) 11,1 (1,9—34,1)
GG 0 (0—48,9) 0 (0—48,9)
IL28B 39738787C>T СС 61,1 (38,5—79,8) 50,0 (21,5—78,5)
(n=57) СТ 27,6 (14,5—45,9) 13,6 (3,9—34,2)
ТТ 0 (0—32,1) 0 (0—32,1)
РНКаза L, 1385G>A GG 12,5 (0,1—49,2) 0 (0—48,9)
(n=46) GA 37,9 (22,6—56,1) 21,1 (8,0—43,9)
AA 66,7 (35,1—88,3) 40,0 (11,6—77,1)
циента, из которых 4 имели генотип GG, 16 — генотип GT, 2 — генотип GG. В группах пациентов, ответивших и не ответивших на терапию интерфероном, частота нормального генотипа GG не различалась (р=0,61, точный критерий Фишера). Несколько чаще выявляли мутантный вариант АА у лиц, ответивших на терапию (р=0,079, точный критерий Фишера). Наличие «нормального» генотипа GG не является прогностическим фактором ответа на терапию: отношение шансов (OR, 95% ДИ) ответа на терапию у пациентов с генотипом GG по сравнению с генотипами GA или AA: OR = 1,15 (0,24 —5,54). ОБСУЖДЕНИ Е
У пациентов с ХГС мутантный аллель G SNP 39743165T>G выявляли чаще, чем в общей популяции Европейского региона (27,9% и 15%; р=0,0001). Аналогичным образом, мутантный аллель Т SNP 39738787C>T выявлен чаще в обследованной группе (39,7%), чем в группе сравнения (27,7%; р=0,0002). Частота аллеля С, который ассоциируется с более частым спонтанным клиренсом ВГС (самопроизвольным выздоровлением от инфекции) в общей популяции России составляет 61,4—64,1% [14], в общей европейской популяции — 72,3%, а у пациентов с ХГС — 60,3% (р=0,0005). Это можно объяснить спецификой исследованных лиц — в нашем исследовании обследованы пациенты с хроническими формами ВГС-инфекции, в то время как существуют данные о том, что му-тантные аллели чаще встречаются у пациентов с хронизацией инфекции по сравнению с реконвалесцентами [12,14].
Генотип GG SNP 1385G>A гена РНКазы L по сравнению с иными вариантами у лиц контрольной группы встречался несколько чаще, чем у пациентов с ХГС, что можно объяснить восприимчивостью лиц с мутантной аллелью гена РНКазы L к хроническому течению вирусных инфекций, в частности, ВГС-инфекции. Теоретически, риск развития рака простаты должен быть выше у пациентов с ХГС, что подтверждается в недавнем проспективном исследовании Lee M.H. et al. [6].
У пациентов с генотипом 1 ВГС чаще встречаются мутантные аллели в SNP 39743165T>G (р=0,045) и SNP 39738787C>T (р=0,005). Эти факторы являются взаимно отягощающими и уменьшают вероятность ответа на терапию у пациентов с 1 генотипом вируса. Такая же зависимость была выявлена Neukam K. et al. у пациентов с ХГС на фоне ВИЧ-инфекции [10]. Причины этого пока не установлены.
Исследованные варианты SNP гена IL28B, по-видимому, не оказывают влияния на скорость прогрессирования ВГС-инфекции. Это согласуется с данными недавнего исследования Marabita F. et al. [8].
Выявление повышенных значений АЛТ у лиц с генотипом СС SNP 39738787C>T, возможно, свидетельствует о более эффективном иммунном ответе, сопровождающемся большей выраженностью синдрома цитолиза. Вирусная нагрузка ВГС по нашим данным не различалась при исследованных полиморфизмах, хотя в литературе имеются указания на более высокую вирусную нагрузку при генотипе СС SNP 39738787C>T [3].
Ответ на противовирусную терапию был выше при наличии у пациентов «благоприятных» вариантов ТТ (SNP 39743165T>G) и СС (SNP 39738787C>T), при гомозиготном носительстве «неблагоприятных» вариантов GG (SNP 39743165T>G) и ТТ (SNP 39738787C>T) ни один из больных на терапию не ответил. Можно отметить, что большую прогностическую ценность имеет определение SNP 39738787C>T по сравнению с SNP 39743165T>G. Установлено, что тестирование на полиморфизмы гена IL28B позволяет точнее прогнозировать эффективность терапии PegIFN/RBV и «тройной» терапии с ингибиторами протеазы у больных ХГС с генотипом 1 ВГС [4].
Тестирование SNP 1385G>A гена РНКазы L не позволяет прогнозировать ответ на интерферонотерапию, данный полиморфизм не имеет явного клинического значения у пациентов с ХГС.
ЛИТЕРАТУРА
1. Мицура В.М., Воропаев Е.В., Осипкина О.В., Жаворонок С.В. Полиморфизм генов интерлейкина-28B и клиническое значение его выявления у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С. Лабораторная диагностика. Восточная Европа. 2012, 2: С. 86-97.
2. Bisbal C., Silverman R.H. Diverse functions of RNase L and implications in pathology. Biochimie. 2007, 89 (6-7): 789-798.
3. Ge D., Fellay J., Thompson A.J. et al. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance. Nature. 2009, 461: 399-401.
4. Ghany M.G., Nelson D.R., Strader D.B. et al. An Update on Treatment of Genotype 1 Chronic Hepatitis C Virus Infection: 2011 Practice Guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases. Hepatology. 2011, 54 (4): 1433-1444.
5. Grebely J., Petoumenos K., Hellard M. et al. Potential role for Interleukin-28B genotype in treatment decision-making in recent hepatitis C virus infection. Hepatology. 2010, 52: 1216-1224.
6. Lee M.H., Yang H.I., Lu S.N. et al. Chronic hepatitis C virus infection increases mortality from hepatic and extrahepatic diseases: a community-based long-term prospective study. J. Infect. Dis. 2012, 206 (4): 469-477.
7. Lin C.Y., Chen J.Y., Lin T.N. et al. IL28B SNP rs12979860 Is a critical predictor for on-treatment and sustained virologic response in patients with hepatitis c virus genotype-1 infection. PLoS ONE. 2011, 6 (3): e18322.
8. Marabita F., Aghemo A., De Nicola S. et al. Genetic variation in the interleukin-28B gene is not associated with fibrosis progression in patients with chronic hepatitis C and known date of infection. Hepatology 2011, 54: 1127-1134.
9. Mihm U., Ackermann O., Welsch C. et al. Clinical relevance of the 2'-5'-oligoadenylate synthetase/RNase L system for treatment response in chronic hepatitis. J. Hepatol. 2009, 50 (1): 49-58.
10. Neukam K., Nattermann J., Rallon N. et al. Different distributions of hepatitis C virus genotypes among HIV-infected patients with acute and chronic hepatitis C according to interleukin-28B genotype. HIV Medicine. 2011, 12: 487-493.
11. Rau M., Baur K., Geier A. Host genetic variants in the pathogenesis of hepatitis C. Viruses. 2012, 4: 3281-3302.
12. Rauch A., Kutalik Z., Descombes P. et al. Genetic variation in IL28B is associated with chronic hepatitis C and treatment failure: a genome-wide association study. Gastroenterology. 2010, 138: 1338-1345.
13. Silverman R.H. Viral encounters with 2',5'-oligoadenylate synthetase and RNase L during the interferon antiviral response. J. Virol. 2007, 81 (23): 12720-12729.
14. Thomas D.L., Thio C.L., Martin M.P. et al. Genetic variation in IL28B and spontaneous clearance of hepatitis C virus. Nature. 2009, 461: 798-801.
15. Washenberger C.L., Han J.Q., Kechris K.J. et al. Hepatitis C virus RNA: dinucleotide frequencies and cleavage by RNase L. Virus Res. 2007, 130 (1-2): 85-95.
Поступила 18.06.13
Контактная информация: Мицура Виктор Михайлович, к.м.н.,
246000, Беларусь, Гомель, ул. Ланге, 5, р.т. (+375-232)51-67-28
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Н.В.Бренева1, М.В.Афанасьев1, М.Б.Шаракшанов1, А.С.Остяк1, Е.Ю.Киселева1, А.П.Самсонова2, Е.М.Петров2, Е.В.Викторова3, С.В.Балахонов1
MALDI-TOF МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КЛЕТОЧНЫХ БЕЛКОВ В ИДЕНТИФИКАЦИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА LEPTOSPIRA
1Иркутский научно-исследовательский противочумный институт; 2НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи; 3Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, Москва
Цель. Разработка методологических подходов идентификации лептоспир с использованием технологии прямого белкового профилирования MALDI-TOF. Материалы и методы. Проведен анализ клеточных белков 34 штаммов лептоспир на приборе Microflex LT с использованием программного обеспечения «MALDI Biotyper 3.0 для идентификации и классификации микроорганизмов». Результаты. Сгенерированы и импортированы в базу данных MALDI Biotyper 3.0 19 референсных спектров эталонных штаммов лептоспир 7 видов. Проведена идентификация 6 штаммов с неопределенным таксономическим положением. Заключение. Апробированная методика позволяет определять вид лептоспир с достоверностью, зависящей от адаптации их к питательным средам, способа подготовки и условий хранения образцов для масс-спектро-метрии.
