CC BY
329
за содержанием следовых количеств биологически активных веществ, маркеров, гормонов, лекарственных препаратов, токсинов в крови и других физиологических жидкостях и тканях. В настоящее время основными методами анализа являются относительно традиционные иммунологические и хроматографические, а также сравнительно новые методы хромато-масс-спектрометрии. Основные требования, предъявляемые к методам - сочетание низких пределов обнаружения, широкого диапазона определяемых концентраций, высокой чувствительности и селективности, а также количественного определения с возможностью качественного подтверждения. Метод тандемной жидкостной хромато-масс-спектрометрии, с квадрупольным масс-спектрометром, выступающим в роли масс-анализатора, является методом выбора и обладает всеми перечисленными выше характеристиками. Для масс-спектрометров характерна не только высокая чувствительность и воспроизводимость анализа, но и широкий набор методик, которые позволяют анализировать многие классы соединений в сочетании с различными хроматографическими методами и автоматизированными системами пробо-подготовки.
Наиболее ярким примером применения масс-спектро-метрии является быстрое и одновременное определение большинства стероидных гормонов (включая экзогенного происхождения). Это позволяет контролировать нарушение стероидо-генеза при различных эндокринных заболеваниях, а получение характеристических хроматографических стероидных профилей крайне важно для постановки точного диагноза.
Определение уровней аминокислот и ацилкарнитинов для неонатального скрининга в крови (для исследования используют пробу крови на фильтровальной бумаге) методом тандемной масс-спектрометрии помогает исключить нарушения обмена аминокислот и органических кислот, нарушения цикла мочевины и митохондриальные болезни. Определение ацилкарнитина и ацилглицина требуется, прежде всего, при диагностике дефицита карнитина, нарушений окисления жирных кислот, нарушений метаболизма органических кислот. Ацилкарнитин и ацилглицин образуются при связывании промежуточных продуктов метаболизма с карнитином и глицином и накапливаются чаще всего в период острых метаболических расстройств.
Тандемная масс-спектрометрия как метод скрининга, позволяющий выявлять одновременно широкий ряд врожденных ошибок метаболизма (более 40 нарушений), был введен в ряде западных стран. Массовое обследование новорожденных позволяет рано, на бессимптомной стадии, начать лечение, предупредить необратимое поражение нервной системы и другие тяжелые последствия.
В докладе рассмотрены основные достижения и тенденции последних лет в области клинической масс-спектрометрии. Проведен сравнительный анализ основных современных методов.
Д.Г. Гилязова. Высокочувствительное обнаружение антигенов возбудителей инфекций ЖКТ в кале иммуно-хемилюминесцентным методом. ООО «Текан»
Лабораторная диагностика инфекций ЖКТ преимущественно основывается на идентификации возбудителя в кале культуральным методом или путем обнаружения его генетического материала методом ПЦР или антигенов различными вариантами иммунохимических методов (ИФА, иммуно-хроматография и т.д.). Иммунохроматографические методы, несмотря на свою дешевизну, характеризуются низкой специфичностью. Внедрение ИФА-тестов в лабораторную практику позволило существенно повысить аналитические характеристики выявления антигенов возбудителей инфекций. На смену ИФА-диагностике многих инфекционных и неинфекционных показателей давно пришел иммунохеми-люминесцентный анализ (ИХЛА) как более надежный, с точки зрения получаемых результатов, и удобный в работе. Однако ИХЛА-диагностика кала на наличие инфекционных антигенов до недавнего времени была представлена единичными тестами.
В 2012 г. итальянская компания DiaSorin выпустила свой первый тест для обнаружения антигенов Helicobacter pylori в кале методом ИХЛА с помощью анализатора Liaison, который по своей чувствительности не уступает мочевинному дыхательному тесту, наиболее чувствительному из всех не-инвазивных методов диагностики инфекции H. pilori. С тех пор линейка тестов пополнилась тест-системами для обнаружения глутаматдегидрогеназы (ГДГ), а также токсинов A и B Clostridium difficile, при этом первая тест-система предназначена для скрининга проб на наличие бактерий, так как ГДГ является универсальным индикатором клостридий, а вторая тест-система позволяет дифференцировать токсические формы бактерий. Также среди доступных тест-систем -тесты для выявления ротавируса и токсинов энтерогеморра-гической Escherichia coli. Все тест-системы характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью к выявляемым антигенам, и при этом позволяют получить результаты анализа в течение непродолжительного времени: 30-45 мин в зависимости от параметра.
Помимо высоких аналитических показателей данные тест-системы позволяют лаборатории значительно упростить манипуляции с не самым приятным объектом, как кал: все тест-системы снабжены одноразовыми устройствами для экстракции кала и растворами для экстракции. Для получения экстракта достаточно поместить пробу в устройство, добавить соответствующий раствор, тщательно перемешать содержимое с помощью вортекса и дважды центрифугировать его для разделения жидкого экстракта от твердых частиц кала. Часть устройства с экстрактом устанавливается непосредственно в анализатор, подобно обычной пробирке, тогда как часть с остатками кала должна быть утилизирована. Вся процедура пробоподготовки занимает не более 15 минут. Компания DiaSorin планирует расширить панель тестов в кале и в 2014 г. к выпуску заявлены тест-системы на аденовирус и кальпротектин, а затем и тест-системы на Campylobacter, паразитарные инфекции, скрытую кровь в кале и др.
клиническая лабораторная диагностика сердечно-сосудистых заболеваний
И.С. Родюкова. Биомаркеры в неотложной кардиологии: вопросы и ответы. ГБОУ ВПО Московский медико-стоматологический университет; РОТАНА (Меди-Линк)
В условиях высокой коморбидности неотложные состояния в кардиологии требуют дополнительных методов диагностики. Использование современных биомаркеров некроза миокарда (тропонина 1, миоглобина и МВ КФК), сердечной недостаточности (В-натрийуретического пептида), в ряде случаев Д-димера, позволяют своевременно назначить лечение и определить тактику ведения кардиологических
пациентов. В нашем исследовании у пациентов с болевым синдромом в грудной клетке и/или одышкой с предварительным диагнозом ОКС (острый коронарный синдром) была использована мультимерная стратегия экспресс-диагностики Triage,что позволило на 3,6 часа быстрее установить клинический диагноз, уменьшить количество койко-дней непрофильных больных в КРО. Ухудшение функции сердца часто приводит к повреждению почек и развитию острой почечной недостаточности, мультимаркерная стратегия совместно с определением маркера острой почечной недостаточности
NGAL позволяет в кратчайшие сроки определить характер повреждения почек и миокарда и приводит к раннему адекватному лечению и улучшению исходов у кардиологических больных.
ММ. Федорова1, М.Х. Макоева1, А.П. Ройтман1, В.В. Долгов', Н.Н. Абрашкина1, А.Г. Автандилов1, С.П. Семитко2. Динамика и прогностическое значение мозгового натрий-уретического пептида и C-реактивного белка при остром инфаркте миокарда в зависимости от тактики лечения. ТБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования, Москва; ГУЗ ГКБ № 81, ДЗ г Москвы
C-реактивный белок (СРБ) и мозговой натрийурети-ческий пептид (NBP) и его фрагмент - N-концевой неактивный фрагмент мозгового натрийуретического пептида (NT-proBNP) занимают особое место в стратификации риска развития осложнений острого инфаркта миокарда (ОИМ).
Цель исследования - сравнить динамику изменений концентрации NT-proBNP, СРБ и диастолической функции ЛЖ у больных ОИМ после эндоваскулярного вмешательства, тромболитической терапии и их комбинации.
Исследование проведено с участием 102 больных ОИМ с подъемом сегмента ST (ОИМпST) до 6 ч от начала заболевания. Средний возраст составил 48,5 ± 6,9 лет (от 25 до 60 лет). Все больные разделены на 3 группы: в I группу включены 40 больных ОИМпST с первичным стентирова-нием, во II группу - 32 больных ОИМпST с отсроченным стентированием в течение 24 ч после эффективной тром-болитической терапии (ТЛТ), в III группу - 30 больных ОИМпST с эффективной ТЛТ без эндоваскулярного вмешательства.
Всем больным проведено доплер-эхокардиографическое (доплер-ЭХОКГ) исследование с оценкой диастолической функции ЛЖ на 1-е и 7-е сутки ОИМ. Для ее оценки использовалось соотношение максимальных скоростей раннего и позднего наполнения ЛЖ (E/A). В каждой группе у 20 больных (всего 60) на 1-е, 3-и и 7-е сутки ИМ осуществляли взятие крови в стерильных условиях для последующего определения уровня СРБ и NT-proBNP в динамике.
По данным сравнительного анализа доплер-ЭХОКГ на 1 сут ИМ в I группе пациентов развивался наиболее благоприятный - I тип диастолической дисфункции - замедление релаксации ЛЖ (E/A = 0,9 ± 0,04). Тогда, как во II (E/A = 1,1 ±0,05) и III (E/A = 1,1 ± 0,06) группах уже к концу первых суток ИМ, несмотря на эффективную ТЛТ, формировался «псевдонормальный» тип диастолического наполнения ЛЖ. На 7 сут исследования в I (E/A = 1,17 ± 0,04, (p < 0,01)) и во II(E/A = 1,22 ± 0,09 (p > 0,05)) группах пациентов также регистрировался «псевдонормальный» тип диастолического наполнения ЛЖ. В III группе больных к 7 сут течения ИМ выявлено нарушение диастолической функции миокарда ЛЖ по прогностически неблагоприятному - рестриктивному типу (E/A = 1,5 ± 0,1, (p < 0,001)).
У пациентов I группы значения NT-proBNP в 1-е сутки составили 284 ± 86 пг/мл, на 3-и сутки - 341 ± 136 пг/мл, на 7 сут - 254 ± 134 пг/мл (p > 0,05). Во II группе значения NT-proBNP в 1-е сутки соответствовали 493,5 ± 133 пг/мл, на 3-и сутки 567 ± 110 пг/мл, на 7 сут 511 ± 87 пг/мл (p > 0,05). В III группе значения NT-proBNP в 1-е сутки составили 475 ± 96,4 пг/мл, на 3-и сутки 450 ± 11,9 пг/мл, на 7-е сутки 926 ± 306 пг/мл (p > 0,05).
Динамика NT-proBNP находится в зависимости от способа восстановления коронарного кровотока и соответствует типам диастолической дисфункции ЛЖ. Превышение NT-proBNP более 500 пг/мл может служить критерием появления первых признаков раннего постинфарктного ремодели-рования ЛЖ у больных ОИМ^Т
Высокие значения СРБ и замедленное его снижение у больных с отсроченным стентированием в течение суток могут быть связаны, как с длительной резидуальной ишемией, так и с поддержанием воспалительного ответа из-за механи-
ческого повреждения атеросклеротической бляшки.
В.В. Дорофейков, Ю.П. Милютина, Л.В. Прокопова, М.Ю. Ситникова, Е.В. Щляхто. Современные предикторы оценки тяжести систолической сердечной недостаточности ST2 и BNP у пациентов, жителей Северо-Западного региона России. ФГБУ «ФМНЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта СЗО РАМН, Санкт-Петербург
В каждодневной клинической практике для врача-клинициста одной из основных задач является максимально точная оценка тяжести состояния пациента и дальнейшее своевременное оказание высокотехнологичной медицинской помощи. Выявление достоверно значимых маркеров тяжести течения систолической сердечной недостаточности предшествует разработке региональных шкал прогнозирования.
Цель - оценить вклад современных прогностических показателей в структуре портрета пациента с хронической сердечной недостаточностью (ХСН) - жителя Северо-Западного региона России.
Проспективное исследование 83 пациентов, наблюдающихся кардиологом, специалистом по сердечной недостаточности в Центре им. В.А. Алмазова. Критерии включения -пациенты с ХСН II-IV функционального класса (ФК) с фракцией выброса менее 40%, в возрасте до 65 лет, подписавшие добровольное согласие на участие в исследовании. В ходе обследования проанализирована прогностическая значимость 130 параметров, в том числе концентрация NT-proBNP (Roche, Швейцария), ST2 (Critical Diagnostics, США) в плазме крови, показатели кардиореспираторного теста. Данные о реальной выживаемости пациентов получены в ходе телефонного опроса спустя 1 год после включения в исследование. Полученные данные обработаны с помощью программы STATISTICA 6.
76% (n = 63) составили мужчины, 24% - женщины. Функциональный класс ХСН в среднем достигал 2,7 ± 0,7, распределение по шкале ФК ХСН (I:III:IV) - 34%:55%:13%. Ишемическая этиология ХСН диагностирована у 55% (n = 46) пациентов. Показатели эхокардиографии: фракция выброса по Simpson 25 ± 8,5%, индекс конечно-диастолического объема левого желудочка 126,9 ± 39,4 мл/м2, индекс конечно-систолического объема левого желудочка 91,9 ± 39,4 мл/м2. В течение 1 года летальные исходы зафиксированы у 10% больных (n = 8). Трансплантация сердца выполнена 4 пациентам, двум пациентам имплантирована система EXCOR. Группа умерших пациентов отличалась большей частотой дыхательных движений (p = 0,009), меньшей концентрацией альбумина (p = 0,04), высоким содержанием NT-proBNP (p = 0,03), ST2 (p = 0,005) в крови, более высоким индексом массы миокарда (p = 0,02), низким потреблением кислорода на пике нагрузки (VO2 peak) (p = 0,00001), ST2 коррелировал с уровнем мочевой кислоты, r = 0,38 (p = 0,05), креатинина (r = 0,34, p = 0,05), скоростью клубочковой фильтрации (r = -0,3, p = 0,05), альбумина (r = -0,3, p = 0,05); концентрацией BNP (r = 0,48, p = 0,05); VO2 peak (r = -0,56, p = 0,05).
ST2 - мощный предиктор оценки тяжести систолической сердечной недостаточности у пациентов Северо-Западного региона России, сопоставимый по значимости с уже доказанными предикторами: концентрацией мозгового натрийурети-ческого пропептида и показателем максимального потребления кислорода (VO2 peak).
Е.А. Павловская, А.Г. Автандилов, М.М. Федорова, А.П. Ройтман, В.В. Долгов. Изменение гемодинамики и маркеров системного воспаления при восстановлении ритма у пациентов с пароксизмальной формой фибрилляции предсердий. ГБОУ ДПО Российская медицинская академия последипломного образования, Москва
Фибрилляция предсердий наиболее распространенное нарушение ритма. При фибрилляции предсердий значительно ухудшается качество жизни пациентов, повышается риск развития тромбоэмболических осложнений, снижается толерантность к физической нагрузке. Считается, что
возникновению и поддержанию данного нарушения ритма сердца способствует воспаление, оксидативный стресс, эндотелиально-эндокардиальная дисфункция, ишемия. В некоторых исследованиях показано, что уровень С-реактивного белка (СРБ) тесно коррелирует с объемом левого предсердия, что позволяет предположить связь между воспалением и ремоделированием левого предсердия. Была предложена теория о том, что воспаление влияет на ремоделирование за счет активных форм кислорода. Установлено, что СРБ может способствовать образованию активных форм кислорода за счет изменения гомеостаза антиокислительных ферментов в клетках эндотелия. Свободные кислородные радикалы активируют матриксные металлопротеиназы, что приводит к нарушению баланса между накоплением и разрушением внеклеточного матрикса. Это, в свою очередь, увеличивает фиброз левого предсердия с последующей дилатацией и потерей функции.
Цель работы - оценить изменения гемодинамики и значений маркера системного воспаления после восстановления синусового ритма у пациентов с пароксизмальной формой фибрилляции предсердий.
В исследование были включены 50 пациентов с пароксиз-мальной формой фибрилляции предсердий на фоне ИБС без признаков ХСН. Из исследования были исключены пациенты с заболеваниями, которые могли повлиять на уровень лабораторных маркеров (пневмония, обострение хронических инфекций). Средний возраст составил 65 ± 2 года. Всем пациентам проводилось ЭКГ, эхокардиографическое исследование и суточное мониторирование ЭКГ, динамическое исследование hsCRP и ЫТ-ргоВЫР в момент поступления в стационар с пароксизмом фибрилляции предсердий и после проведенного лечения. После курса проведенного лечения амио-дароном (по стандартной схеме) и триметазидином (35 мг 2 раза в день) через 8 нед пациенты были разделены на 2 подгруппы. В подгруппу «а» вошли пациенты, у которых пароксизмы не регистрировались при повторном суточном мони-торировании ЭКГ (п = 44), а в подгруппу «б» были включены пациенты с продолжающимися пароксизмами фибрилляции предсердий (п = 6).
Исходно среднее значение диаметра левого предсердия составило 43,6 мм. Отмечалось повышение систолического давления в ЛА до 30,5 мм рт. ст. Фракция выброса составила 61,1%. Отмечалось повышение уровня hsCRP до 2,7 мг/л и ЫТ-ргоВЫР до 721 пг/мл. После проведенного курса терапии амиодароном и триметазидином в подгруппе «а» произошло достоверное уменьшение размеров ЛП до 41,7 мм (/> < 0,05), давления в ЛА до 23,8 мм рт. ст. (/> < 0,001), выросла фракция выброса (ФВ) до 62% (/> < 0,05), при этом уровень ЫТ-ргоВЫР составил 124 пг/мл. Уровень hsCRP снизился до 2,1 мг/л (/> < 0,001). У пациентов подгруппы «б» наблюдалась тенденция к уменьшению диаметра ЛП 42 мм, отмечено незначительное снижение давления в ЛА до 28 мм рт. ст., ФВ не изменилась и составила 61%, при этом уровень ЫТ-ргоВЫР снизился до 86 пг/мл (/> < 0,05), а hsCRP имел тенденцию к снижению и составил 2,3 мг/л.
Восстановление синусового ритма сопровождается снижением уровня hsCRP, что косвенно может свидетельствовать о снижении уровня воспаления в сосудистой стенке и миокарде ЛП и позволяет судить о более благоприятном прогнозе. Восстановление синусового ритма сопровождается снижением перегрузки левых отделов сердца и снижением давления в ЛА, что приводит к улучшению инотропной функции сердца и нормализации уровня ЫТ-ргоВЫР.
Л.Б. Гайковая, Т.В. Вавилова, А.Т. Бурбелло. Разработка компьютерной программы для мультимаркерной оценки эффективности и безопасности лекарственных препаратов с множественным действием. ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова Минздрава РФ, Санкт-Петербург
В современных стандартах лечения нередко рекомендуется одновременное назначение нескольких лекарственных средств, которое приводит к потенцированию действия различных лекарственных препаратов и, следовательно, требует лабораторного контроля. В настоящее время количество лабораторных исследований прогрессивно возрастает и, одновременно, увеличивается перечень требований к подготовке пациентов к сдаче анализов, срокам забора крови, транспортировки и хранения биологического материала, что важно для качества лабораторного анализа. В связи с этим создание компьютерных программ для оптимизации взаимодействий между клиницистами и лабораторией является актуальной проблемой. С помощью компьютерной программы, в которую включены требования по преаналитическому этапу, «напоминания» для клиницистов по срокам выполнения лабораторных исследований для оценки эффективности и безопасности лекарственных препаратов, интерпретация полученных результатов и дальнейшие рекомендации по тактике лечения, достигается снижение ошибок на преаналити-ческом этапе и улучшение качества лабораторного анализа и лечения. Стратегии лабораторных исследований с комбинацией большого количества биомаркеров являются перспективным направлением лабораторной диагностики не только в оценке состояния больного и прогноза течения болезни, но и для определения эффективности и безопасности препаратов с многофакторным действием.
Цель - разработка компьютерной программы мультимаркерной стратегии по оценке различных действий омега-3 полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) у пациентов, перенесших инфаркт миокарда (ИМ), и ее внедрение в клиническую практику.
В исследование было включено 123 пациента (возраст 55,7 ± 7,5 лет), перенесших ИМ. Все пациенты получали стандартную терапию ф-адреноблокаторы, ингибиторы АПФ, антиагреганты, статины), из них 64 человека - дополнительно омега-3 ПНЖК. Определяли различные маркеры, характеризующие механизмы действия омега-3 ПНЖК, для выявления наиболее оптимальных сроков их действия: воспаления, апоп-тоза, окислительно-восстановительного равновесия, функциональной активности тромбоцитов, показатели липидного обмена на 3 сут, 14 сут, через 1, 2, 6 и 12 мес после ИМ.
Для практического использования была создана компьютерная программа на основе Access с фиксированным заданием пользователю - исследовать лабораторные показатели в определенной последовательности и заданные сроки. Программа способна формировать базу данных с последующим доступом к выборкам по любым заданным параметрам и характеристикам больных. Внедрение компьютерной программы включало несколько этапов. 1 этап
- введение паспортных данных пациента, диагноза и даты начала терапии омега-3 ПНЖК и напоминание по датам о проведении лабораторных исследований. 2 этап - введение результатов, полученных через определенные сроки терапии. Программа позволяет оценить эффективность и безопасность действия омега-3 ПНЖК и дает рекомендации по дальнейшему мониторингу применения препарата (коррекция дозы, дополнительные исследования, напоминание о следующем лабораторном исследовании). 3-й этап - это коррекция терапии по результатам исследований, полученным через 1 мес терапии, 4-й этап - через 2 мес и 5-й этап
- через 6 мес терапии.
Мультимаркерная стратегия по лабораторному контролю, реализованная в компьютерной программе, позволит улучшить качество терапии, облегчить организацию работы врачей (своевременность выполнения комплекса исследований, оценки результатов и рекомендаций по дальнейшей тактике лечения), снизить экономические затраты на неэффективную терапию и лишние дорогостоящие лабораторные исследования.
