CC BY
72
Клиническая фармакокинетика оригинального дипептидного анксиолитика ГБ-115
Жердев В.П.1, Колыванов Г.Б.1, Литвин А.А.1, Смирнов В.В.2, Колик Л.Г.1, Раскин С.Ю.1, Ивашкина Н.Ю.3, Гудашева Т.А.1, Середенин С.Б.1
1 - ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», г. Москва 2 - ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, г. Москва 3 - АО «Малуна-Фарм», г. Москва
Резюме. На здоровых добровольцах проведено фармакокинетическое исследование нового оригинального дипептидного анксиолитика ГБ-115, разработанного на основе эндогенного тетрапептида холецистокинина. ГБ-115 назначали в виде таблеток при однократном применении возрастающих доз 1, 3, 7, 11 и 15 мг. Установлено, что в зависимости от дозы ГБ-115 определялся в плазме крови всех добровольцев в течение 2-6 ч после приёма лекарственного средства. ГБ-115 быстро всасывался в системный кровоток из желудочно-кишечного тракта добровольцев, величины Cmax/AUC0-T для доз 3-15 мг в среднем составляли 0,482-0,552 ч-1. ГБ-115 хорошо распределялся в тканях и жидких средах организма и достаточно быстро выводился из плазмы крови. Среднее значение периода полувыведения препарата изменялось в диапазоне 0,6-1,0 ч. Величины Cmax в среднем изменялись от 7,29±2,83 нг/мл (доза 1 мг) до 44,02±13,23 нг/мл (доза 15 мг). Величина кажущегося объёма распределения ГБ-115 после приёма в дозах 1-15 мг составляла в среднем 2,47 л/кг. На основании полученных результатов, можно говорить о том, что при возрастании дозы ГБ-115 с 1 до 15 мг происходит прямо пропорциональное увеличение дозозависимых фармакокинетических параметров, что указывает на линейный характер фармакокинетики ГБ-115 в изученном диапазоне доз.
Ключевые слова: таблетки ГБ-115, высокоэффективная жидкостная хроматография-масс-спектрометрия, клиническая фармакокинетика
Clinical pharmacokinetics of а new original dipeptide anxiolytic GB-115
Zherdev V.P.1, Kolyvanov G.B.1, Litvin A.A.1, Smirnov V.V.2, KoLik L.G.1, Raskin S.Yu.1, Ivashkina N.Yu.3, Gudasheva T.A.1, Seredenin S.B.1
1 - FSBI «Zakusov Institute of Pharmacology», Moscow 2 - I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow 3 - «Maluna-Pharm», Moscow
Resume. Pharmacokinetic study of а new original anxiolytic drug GB-115, developed on the basis of endogenous tetrapeptide cholecystokinin, in healthy volunteers was performed. Volunteers were received drug as single 1, 3, 7, 11 or 15 mg tablets. The parent drug in the human blood plasma was detected within 2-6 hours after ingestion. Cmax/AUC0-T for doses 3-15 mg were averaged 0,482-0,552 h-1. Cmax were averaged from 7,29±2,83 ng/ml (for dose 1 mg) to 44,02±13,23 ng/ml (for dose 15 mg). Half-life of the drug is changed in the range of 0,6-1,0 h. Vd/F amounted to an average of 2,47 l/kg. Summarizing the obtained results it can be concluded that consistent, linear increase in the dose of GB-115 from 1 to 15 mg there is an increase in dose-dependent pharmacokinetic parameters. In the studied range of doses pharmacokinetics of GB-115 was linear.
Keywords: tablets of GB-115, High-Performance Liquid Chromatography/Mass-Spectroscopy, clinical pharmacokinetics
Автор, ответственный за переписку:
Раскин Сергей Юрьевич - научный сотрудник лаборатории фармакокинетики ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», г. Москва; 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8; +7 (495) 601-21-57; e-mail: sergeyforever@gmaiL.com
Введение
В ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» создан новый ретропептидный аналог эндогенного тетрапептида холецистокинина — амид ^фенил-гексаноил-глицил^-триптофана (шифр ГБ-115) с выраженной анксиолитической активностью, доказанной на моделях тревожности в опытах in vivo при парентеральном и пероральном способах введения [3, 6]. Соединение ГБ-115 принадлежит к труднорастворимым веществам, что определяет отсутствие корреляции дозы и фармакологической активности, обусловленное низкой биодоступностью. Для повышения растворимости ГБ-115 с использованием сверхкритической флюидной технологии была
проведена микронизация субстанции ГБ-115, что позволило уменьшить размер частиц до 10 мкм [10]. При сопоставлении фармакокинетики и фармакологической активности ГБ-115 в виде кристаллической и микронизированной субстанций у беспородных крыс показано, что микронизация способствовала значительному повышению биодоступности [4, 7]. Далее, при анализе соотношения фармакокинетика— фармакодинамика ряда фармацевтических композиций, приготовленных на основе микронизированной субстанции, была отобрана наиболее оптимальная композиция, обладающая лучшими фармакокинетиче-скими параметрами и выраженной анксиолитической активностью, что позволило рекомендовать её для создания твёрдой лекарственной формы [5]. Иссле-
дование фармакокинетики ГБ-115 в плазме крови кроликов после однократного введения таблеток, приготовленных на основе микронизированной субстанции, показало, что относительная биодоступность таблеток ГБ-115 в среднем составила 128,18±36,07% по сравнению с субстанцией [8].
Цель настоящего исследования — изучить фарма-кокинетику разработанной таблетированной лекарственной формы ГБ-115 после однократного приёма в дозах 1, 3, 7, 11 и 15 мг на здоровых добровольцах.
Материал и методы
Фармакокинетика таблетированной формы ГБ-115 изучена в рамках проводимого открытого клинического исследования I фазы препарата по стандартизированному протоколу на 15 добровольцах после однократного приёма внутрь в дозах 1, 3, 7, 11, 15 мг.
Для этого добровольцев разделили на пять групп: 1-я группа — 3 человека, доза ГБ-115 — 1 мг (№/№ 01, 04, 06); 2-я группа — 3 человека, доза ГБ-115 — 3 мг (№/№ 07, 11, 12), 3-я группа — 3 человека, доза ГБ-115 — 7 мг (№/№ 08, 09, 13), 4-я группа — 3 человека, доза ГБ-115 - 11 мг (№/№ 15, 16, 18) и 5-я группа - 3 человека, доза ГБ-115 - 15 мг (№/№ 19, 20, 22). Каждому добровольцу на 8 ч в локтевую вену устанавливали кубитальный катетер. После установки катетера до приёма препарата отбирали контрольную пробу крови («К-проба»). Образцы крови (10,0 мл) отбирали и переносили в гепаринизированные конические поли-
этиленовые пробирки. Отбор образцов крови осуществлялся в дискретные интервалы времени через: 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,5; 2,0; 4,0; 6,0 и 8,0 ч. Количественное определение ГБ-115 проводилось с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией [8].
Полученные данные подвергали математической статистической обработке. В таблице, где приведены фармакокинетические параметры ГБ-115 в плазме крови добровольцев после однократного приёма таблеток ГБ-115 в дозах от 1 до 15 мг, представлены средние арифметические значения (х), соответствующие им стандартные отклонения (SD), коэффициенты вариации (C.V.%). Для расчётов фармакокинетических параметров был использован модельно-независимый метод [1].
Результаты и обсуждение
Хромато-масс-спектрометрический анализ всех образцов плазмы крови добровольцев показал, что в анализируемых образцах присутствует характеристический молекулярный ион, соответствующий неизменённой молекуле ГБ-115, с m/z = 435,5 (протонированный ион). Поэтому дальнейший анализ проб плазмы крови проводили по данному характеристическому иону.
На рис. 1 представлены усреднённые фармакокинетические профили ГБ-115 в плазме крови добровольцев после однократного перорального приёма таблеток ГБ-115 в дозах 1, 3, 7, 11 и 15 мг.
Рис. 1. Усреднённые фармакокинетические профили ГБ-115 в плазме крови добровольцев после однократного приёма различных доз таблеток ГБ-115 (±SD; п = 3 для каждой дозы)
Фармакокинетические параметры ГБ-115 в плазме крови добровольцев после однократного перорального приёма различных доз таблеток ГБ-115
№ C нг/мл T ч AUC0-T, мкг/мл x ч AUC0-„, мкг/мл x ч AUCr-„, % Kil, ч-1 t1/2, ч MRT, ч Cl/F, л/ч/кг) Vd/F, л/кг
1 мг
01 4,54 1,00 4,63 5,77 19,76 1,1981 0,58 1,44 2,919 2,43
04 10,19 0,75 10,85 12,24 11,36 1,3870 0,50 1,18 1,355 0,98
06 7,13 0,75 6,97 12,21 42,92 1,0814 0,64 1,16 1,688 1,56
x 7,29 0,83 7,48 10,07 24,68 1,2222 0,57 1,26 1,987 1,65
SD 2,83 0,14 3,14 3,73 16,34 0,1542 0,07 0,16 0,824 0,73
CV% 38,81 17,32 41,98 37,00 66,24 12,62 12,25 12,40 41,47 44,24
3 мг
07 8,57 1,00 16,68 18,33 9,00 0,6975 0,99 1,86 1,893 2,71
11 7,02 1,00 13,83 18,29 24,38 0,6348 1,09 1,85 3,099 4,88
12 12,32 0,75 20,07 27,49 26,99 0,6226 1,11 1,56 1,590 2,55
x 9,30 0,92 16,86 21,37 20,13 0,6516 1,06 1,76 2,194 3,38
SD 2,73 0,14 3,12 5,30 9,72 0,0402 0,06 0,17 0,798 1,30
CV% 29,29 15,75 18,53 24,80 48,30 6,17 6,05 9,70 36,37 38,46
7 мг
08 14,77 1,00 28,75 31,59 8,99 0,6979 0,99 1,86 3,382 4,85
09 21,04 1,50 46,53 48,98 5,00 0,9152 0,76 1,78 2,245 2,45
13 17,89 0,75 36,09 38,32 5,82 0,7332 0,95 1,77 2,657 3,62
x 17,90 1,08 37,12 39,63 6,60 0,7821 0,90 1,80 2,761 3,64
SD 3,14 0,38 8,93 8,77 2,11 0,1166 0,12 0,05 0,576 1,20
CV% 17,51 35,25 24,07 22,13 31,90 14,91 13,65 2,74 20,86 32,97
11 мг
15 54,57 0,75 98,46 103,81 5,15 0,5460 1,27 2,08 1,346 2,47
16 18,17 1,00 35,36 38,86 9,01 0,6972 0,99 1,86 4,444 6,37
18 23,57 1,50 52,12 54,86 4,99 0,9151 0,76 1,79 2,574 2,81
x 32,10 1,08 61,98 65,84 6,38 0,7194 1,01 1,91 2,788 3,88
SD 19,64 0,38 32,69 33,84 2,27 0,1856 0,26 0,15 1,560 2,16
CV% 61,19 35,25 52,73 51,39 35,58 25,79 25,37 7,92 55,95 55,67
15 мг
19 55,89 1,50 115,53 122,47 5,67 0,5925 1,17 2,38 1,367 2,31
20 46,46 0,75 71,73 73,12 1,90 0,7289 0,95 1,56 3,734 5,12
22 29,72 2,00 65,88 67,12 1,85 0,8381 0,83 2,18 2,828 3,37
x 44,02 1,42 84,38 87,57 3,14 0,7198 0,98 2,04 2,643 3,60
SD 13,25 0,63 27,13 30,37 2,19 0,1231 0,17 0,43 1,194 1,42
CV% 30,11 44,41 32,16 34,68 69,77 17,09 17,54 20,96 45,17 39,44
Из рис. 1 видно, что снижение концентраций исследуемого лекарственного вещества носит монофазный характер. В зависимости от дозы ГБ-115 определялся в плазме крови всех 15 добровольцев в течение 2—6 ч после однократного приёма лекарственного средства.
В таблице представлены фармакокинетические параметры ГБ-115 в плазме крови добровольцев после однократного приёма таблеток ГБ-115 в дозах от 1 до 15 мг.
Как видно из таблицы, большинство рассчитанных фармакокинетических параметров представляют собой сильно вариабельные величины. Так, коэффициент вариации (С.У.%) для Стах (максимальная концентрация) колебался от 17,51% для дозы 7 мг до 61,19% для дозы 11 мг. С.У.% Ттах (время достижения максимальной концентрации) для дозы 3 мг составил 15,75% и для дозы 15 мг — 44,41%. Фармакокинетические параметры независящие от дозы — ке1 (константа скорости элими-
54
ФШШШШ И ФШЩШМШ
Рис. 2. Проверка гипотезы линейности фармакокинетики ГБ-115 в плазме крови добровольцев по изменению значения АиС0-Т в зависимости от дозы
нации из плазмы крови), T1/2 (период полувыведения), MRT (среднее время удержания в организме) были менее вариабельны. Так, C.Y% MRT изменялся от 2,74% для дозы 7 мг до 20,96% для дозы 15 мг.
Анализ фармакокинетических параметров показал, что ГБ-115 быстро всасывается в системный кровоток из желудочно-кишечного тракта добровольцев. Так, время достижения Cmax — Tmax ГБ-115 в плазме крови в среднем изменялось от 0,83±0,14 ч (доза 1 мг) до 1,42±0,63 ч (доза 15 мг). Изучаемое соединение всасывается из желудочно-кишечного тракта после однократного перорального приёма различных доз таблеток ГБ-115 (3, 7, 11 и 15 мг) примерно с одинаковой скоростью (Cmax/AUC0_T (ч—1) — параметр, характеризующий скорость всасывания препарата в системный кровоток). Величины Cmax/AUC0_T составили 0,482—0,552 ч—1. Исключение составляет величина Cmax/AUC0_T после однократного перорального приёма таблеток ГБ-115 в дозе 1 мг (0,975 ч—1).
Величины Cmax в среднем изменялись от 7,29± ±2,83 нг/мл (доза 1 мг) до 44,02±13,23 нг/мл (доза 15 мг). При этом индивидуальные значения Tmax колебались от 0,75 до 2,0 ч.
ГБ-115 достаточно быстро выводится из плазмы крови. Так, период полувыведения (Ti/2) исследуемого вещества в среднем колебался от 0,57±0,07 ч для дозы
I мг до 1,06±0,06 ч для дозы 3 мг.
Площадь под фармакокинетической кривой (AUC0 T) ГБ-115 возрастала с увеличением дозы: для дозы 1 мг — 7,48±3,14; 3 мг — 16,86±3,12; 7 мг — 37,12±8,93;
II мг — 61,98±32,69 и для 15 мг — 84,38±27,13 нг/мл х ч.
Обобщая полученные результаты, можно говорить о том, что при последовательном, линейном увеличении дозы ГБ-115 с 1 до 15 мг происходит увеличение дозозависимых фармакокинетических параметров. Данный тезис подтверждается рис. 2, где представлена графическая зависимость логарифма исследуемых доз (lg доза — ось абсцисс) от логарифма площади под фармакокинетической кривой (lg AUC — ось ординат). Из уравнения на рис. 2 видно, что показатель b, характеризующий наклон кривой, приближается к 1 (0,8995).
Общий плазменный клиренс (Cl/F) ГБ-115 в диапазоне доз 1—15 мг изменялся от 1,987±0,824 до 2,788+1,560 л/ч/кг.
Параметром, характеризующим степень проникновения лекарственного вещества в ткани, является кажущийся объём распределения (Vd/F). Его величина для ГБ-115 после перорального введения в дозах 1—15 мг составила в среднем 2,47 л/кг. Кажущийся объём распределения обычно неэквивалентен анатомическому объёму, а отражает распределение препарата и степень его связывания в организме. Так, если препарат связывается преимущественно белками крови, Vd/F будет меньше, чем реальный объём жидкости. С другой стороны, преимущественное связывание препарата во внесосудистом пространстве приводит к превышению значения Vd/F над реальным объёмом жидкости [9, 12]. В нашем случае расчёт величин Vd/F дал значительно большие результаты, указывающие, что ГБ-115 распределяется во всех жидких средах организма и, возможно, накапливается в тканях.
Сравнение дозонезависимых фармакокинетических параметров ГБ-115 и других дипептидных препаратов, таких как дилепт, ноопепт, у добровольцев, выявило следующие различия: дилепт достигает максимальной концентрации в плазме крови в среднем через 0,4 ч после приёма препарата, для ноопепта этот параметр составил в среднем 0,5 ч [2, 11]. В то же время для ГБ-115 средняя величина Tmax составила 0,85 ч.
Сопоставление величин параметров, характеризующих скорость выведения, показало, что Ti/2el дилепта в 3 раза превышал аналогичный параметр, полученный для ГБ-115 (1,9 и 0,6 ч, соответственно). MRT дилепта у добровольцев было в 1,7 раза больше, чем после однократного приёма таблеток ГБ-115 (3,1 и 1,8 ч, соответственно). Таким образом, лекарственные средства, относящиеся к группе дипептидов, достаточно быстро всасываются из ЖКТ добровольцев и в то же время продолжительно циркулируют в системном кровотоке.
Выводы
1. На 15 добровольцах изучена фармакокинетика ГБ-115 после однократного приёма таблеток ГБ-115 в дозах 1, 3, 7, 11 и 15 мг. Лекарственное вещество быстро всасывается в системный кровоток. Величины Стах/АиС0-т для доз 3—15 мг в среднем составили 0,482 — 0,552 ч-1. Величина кажущегося объёма распределения ГБ-115 после приёма доз 1-15 мг составила в среднем 2,47 л/кг, что указывает на его хорошее распределение в тканях и жидкостях организма; ГБ-115 достаточно быстро выводится из плазмы крови, на что указывает среднее значение периода полувыведения препарата (0,6-1,0 ч).
2. В изученном диапазоне доз фармакокинетика ГБ-115 имеет линейный характер.
Литература
1. Агафонов А.А., Пиотровский В.К. Программа M-ind системы параметров фармакокинетики модельно-независимым методом статистических моментов. Хим.-фарм. журн. 1991; 25: 10: 16—19.
2. Бойко С.С., Короткое С.А., Жердее В.П., Гудашееа Т.А., Островская Р.У., Воронина Т.А. Межвидовые различия фармакокинетики дилепта. Экспер. и клин. фармакол. 2004; 67: 1: 40—43.
3. Гудашееа Т.А., Лезина В.П., Кирьянова Е.П., Деееа О.А., Колик Л.Г., Середенин С.Б. Исследование биологически активной конформации ГБ-115, ддипептидного аналога холецистокинина-4. Биоорг. химия. 2013; 39: 3: 293.
4. Жердее В.П., Бойко С.С., Блынская Е.В., Турчинская К.Г., Гудашееа Т.А., Иеанникоеа Е.В. Доклиническое изучение фармакокинетики нового анксиолитика дипептидной структуры ГБ-115. Фармакокинетика и фармакодинамика. 2015; 1: 52—59.
5. Жердее В.П., Бойко С.С., Константинопольский М.А., Раскин С.Ю., Алексеев К.В., Гудашееа Т.А., Мартьяное В.А., Колик Л.Г. Фармакокинетика и фармакодинамика фармацевтических композиций дипептид-ного анксиолитика ГБ-115. Хим.-фарм. журн. 2016; 50: 5: 42—46.
6. Колик Л.Г., Константинопольский М.А., Рыбина И.В., Поеарнина П.Ю., Гудашееа Т.А., Середенин С.Б. Анксиолитическая активность дипепти-
да ГБ-115 при пероральном введении. Бюл. экспер. биол. и мед. 2013; 155: 2: 163-166.
7. Колик Л.Г., Жердев В.П., Бойко С.С., Константинопольский М.А., Раскин С.Ю., Гудашева Т.А., Мартьянов В.А., Середенин С.Б. Экспериментальная фармакокинетика и фармакодинамика субстанций ддипептидного анксиолитика ГБ-115. Экспер. и клин. фармакол. 2015; 78: 11: 30-34.
8. Раскин С.Ю., КолывановГ.Б., Литвин А.А, Смирнов В.В., Бочков П.О., Шевченко Р.В., Жердев В.П. Фармакокинетическая оценка таблетиро-ванной лекарственной формы нового дипептидного анксиолитика ГБ-115. Биофарм. журн. (в печати).
9. Сергиенко В.И., Джеллифф Р., Бондарева И.Б. Прикладная фармакокинетика: основные положения и клиническое применение. М.: Издательство РАМН, 2003; 208.
10. Турчинская К.Г. Разработка состава и технологии лекарственных форм амида ^(6-фенилгексаноил)гексил^-триптофана. Автореф. канд. фарм. наук. М.: 2015.
11. Шевченко Р.В., Литвин АА., Колыванов Г.Б., Бойко С.С., Жердев В.П., Сереброва С.Ю., Ивашкина Н.Ю., Незнамов Г.Г., Сюняков С.А. Клиническая фармакокинетика нового антипсихотического средства дилепта. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2013; 76: 6: 35-37.
12. Rowland M., Tozer T.N. Clinical Pharmacokinetics. Concepts and applications. Third ed. A Lea and Febiger Book, 1995, p. 601.
56
ФАРМАКОКИНЕТИКА И ФАРМАКОДИНАМИКА
