CC BY
121
УДК 616.36
A.C. Сергеева, Ю.И. Пивоваров, Т.Е. Курильская, A.A. Рунович
КЛЕТОЧНАЯ ТЕРАПИЯ В ЛЕЧЕНИИ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
ГУ НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН (Иркутск)
Развитие печеночно-клеточной недостаточности, в том. числе в результате цирроза печени, остается серьезной причиной смерти во всем мире. Использование гемодиализа, ультрафильтрации
плазмы и гемосорбции в качестве поддерживающей терапии, к сожалению, не позволяет существенно снизить летальность. Трансплантация ксено- и. аллогенных гепатоцитов, а также экстракорпоральное подключение колонок с гепатоцитами рассматриваются, как наиболее перспективные методы. лечения острой печеночной, недостаточности.
В представленном, обзоре описаны, этапы, становления метода трансплантации гепатоцитов, виды клеток, используемые для. коррекции печеночной недостаточности, перспективы, и. трудности лечения печеночной недостаточности методом, клеточной терапии.
Ключевые слова: печеночная недостаточность, клеточная терапия, гепатоциты, стволовые клетки
CELLULAR THERAPY IN MANAGEMENT OF HEPATIC FAILURE
A.S. Sergeyeva, Yu.I. Pivovarov, T.E. Kurilskaya, A.A. Runovich
SC RRS ESSC SB RAMS, Irkutsk
Hepatic failure, including caused, by cirrhosis, still remains a serious cause of death all around the world. Hemodialysis, ultrafiltration of plasma and. hemosorption as means of supporting therapy do not reduce mortality significantly. Transplantation of xeno- and. allogenic hepatocytes and also extracorporal application of bioreactors with hepatocytes are considered as the most advanced methods of treatment of acute hepatic failure. Key words: hepatic failure, cellular therapy, hepatocytes, stern cells
Практически любые, даже «локальные» патологические изменения печени характеризуются системными проявлениями. Это не удивительно, поскольку трудно найти процессы в организме, в которых не усматривалась бы «заинтересованность» печени. Нарушение ее функции при самых разнообразных ее патологических состояниях невольно затрагивает большой круг обменных, гормональных и гомеостатических расстройств [9].
Развитие печеночно-клеточной недостаточности, в том числе в результате цирроза печени, остается серьезной причиной смерти во всем мире. Использование гемодиализа, ультрафильтрации плазмы и гемосорбции в качестве поддерживающей терапии, к сожалению, не позволяет существенно снизить летальность. Единственным эффективным методом лечения конечных стадий печеночной недостаточности остается трансплантация печени [8]. Однако ежегодно многие пациенты умирают, так и не дождавшись операции, поскольку дефицит донорских органов остается основным лимитирующим фактором такого вида лечения. В связи с этим трансплантацию гепато-цитов все чаще рассматривают как единственную альтернативу пересадке печени или же используют для пролонгации времени поиска гистосовме-стимого трансплантата печени [11]. Трансплантация ксено- и аллогенных гепатоцитов, а также экстракорпоральное подключение колонок с гепатоцитами рассматриваются Национальным институтом здоровья США как перспективные методы лечения острой печеночной недостаточности.
Представленный обзор посвящен проблемам и перспективам использования клеточных технологий в лечении патологий печени.
ЭТАПЫ СТАНОВЛЕНИЯ МЕТОДА ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕПАТОЦИТОВ
Трансплантация гепатоцитов как альтернативный метод пересадки печени берет начало от операций, при которых хирурги экономили объем пересаживаемой ткани для уменьшения реакции отторжения. Сначала добились терапевтического
эффекта пересадкой доли печени, а затем и 10 — 15 % объема органа [7]. Пересадку малых сегментов используют и для временного поддержания больного до подбора донорской печени [14].
В настоящее время ведется разработка и начато практическое применение систем, предназначенных для компенсации и замещения функций печени при ее недостаточности [6]. Такие системы содержат биологически активные донорские клетки печени — гепатоциты, размещенные в биореакторе, через который перфузируется кровь или плазма крови пациента. Предполагается, что гепа-тоциты при этом выполняют тканеспецифические функции и, возможно, стимулируют регенеративные процессы в печени больного [6].
При создании «искусственной печени» стремятся достичь максимального числа гепатоцитов в единице объема. Это достигается выращиванием монослоев гепатоцитов с двух сторон искусственного фильтра. Трехмерная структура «искусственной печени» приближается к строению печеночной дольки: монослои гепатоцитов отделяет от кровотока полупроницаемая мембрана, через которую осуществляется активный и пассивный транспорт веществ между наружным и внутренним пространствами. В культуре с высокой плотностью клеток и гепатоциты, и эндотелиоциты демонстрируют хорошую выживаемость и сохранность специализированных функций в течение 25 суток [7].
Параллельно работе над экстракорпоральной «искусственной печенью» стали осваивать технику микротрансплантации печеночной ткани для коррекции острой печеночной недостаточности. Здесь предпочтение отдавалось фетальным гепато-цитам: они лучше выживали и пролиферировали, а признаки отторжения были минимальны. Так, введение фетальных гепатоцитов крысы или свиньи в сальник животным с летальной формой острой печеночной недостаточности увеличивало выживаемость к 7-м суткам после трансплантации. Особенно эффективным было введение фрагментов фетальной печени объемом около 0,5 см3 [14]. Инокуляция донорских гепатоцитов в брюшную полость
крыс с летальным повреждением печени также предотвращала гибель животных [7]. Введение син-генных гепатоцитов в брюшную полость также повышало выживаемость крыс с острой печеночной недостаточностью, вызванной D-галактозамином. У 25 % выживших животных отмечалось улучшение биохимических показателей крови. Наилучший эффект давала суспензия свежеизолированных ге-патоцитов; те же клетки, помещенные в гель, давали гораздо менее выраженный эффект [16].
В настоящее время трансплантация ксено- и аллогенных гепатоцитов является общепризнанным перспективным методом коррекции печеночной недостаточности. Однако существует еще слишком много проблем, требующих тщательного изучения данного метода. В частности, принципиальным аспектом успешной трансплантации становится исследование и подбор донорских клеток.
КЛЕТКИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ
ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ПРИ ПАТОЛОГИЯХ ПЕЧЕНИ
Для трансплантации гепатоцитов с целью лечения печеночной недостаточности необходимо выполнение двух взаимоисключающих условий: нужно множество дифференцированных и одновременно способных к пролиферации клеток. В настоящее время известно четыре вида клеток, используемых для коррекции печеночной недостаточности:
• эмбриональные стволовые клетки печени, которые в зависимости от условий культивирования могут превращаться в гепатоциты или клетки желчных ходов;
• зрелые гепатоциты, к которым иногда возвращается способность пролиферировать;
• овальные клетки (печеночные клетки непаренхиматозной природы с выраженной способностью к пролиферации);
• стволовые клетки непеченочного происхождения [7].
Эмбриональные стволовые клетки печени происходят из эндодермальных клеток, образующих так называемый печеночный дивертикул — зачаток, появляющийся на 22-й день внутриутробного развития на брюшной стороне передней эндодермы человеческого зародыша [9]. Данный вид клеток обнаруживается в печени эмбриона человека с конца 4-й недели, а у крысы, видимо, с 10—12-го дня [12]. Эти клетки, иногда называемые гепатоб-ластами, пролиферируют и становятся либо гепа-тоцитами, либо клетками желчных протоков (у человека в течение последующих месяцев, а у крысы — в конце второй недели). На этом этапе, однако, дифференцировка гепатоцитов и клеток желчных ходов еще обратима: из гепатобластов могут возникать клетки протоков, а из последних — овальные клетки, недифференцированные элементы, способные превращаться в гепатоциты, клетки желчных ходов и клетки других органов [7].
Чтобы использовать стволовые клетки печени для борьбы с печеночной недостаточностью, эти
клетки можно изолировать при прерывании беременности по медицинским показаниям. Но данная методика встречает очень много возражений по причинам этического порядка. Кроме того, эмбриональные гепатоциты отличаются от зрелых гепатоцитов: глюконеогенез в печени человека начинается лишь на 4-й месяц эмбрионального развития, у крыс через несколько недель после рождения пропадает полярность эпителия гепатоцитов, наконец, в эмбриональной печени экспрессируется а-фетопротеин, а не альбумин [7]. Таким образом, эмбриональные стволовые клетки печени — материал особого рода: эти клетки способны пролиферировать, но функций органа не заменяют.
Первые клинические попытки применения трансплантации эмбриональных гепатоцитов были предприняты для лечения острой печеночной недостаточности и по понятным причинам успеха не имели, хотя введение аллогенных гепа-тоцитов и сопровождалось временным улучшением биохимических показателей крови [13]. Однако применение пересадки 20 млн. донорских аллогенных гепатоцитов в селезенку пяти больным с острой печеночной недостаточностью на фоне тяжелой энцефалопатии позволило спасти жизнь трем пациентам. В данном случае трансплантация донорских клеток обеспечила двухнедельное улучшение биохимических показателей крови, что позволило врачам подготовиться к операции по трансплантации печени.
Несмотря на большой интерес и интенсивные исследования данной проблемы, использование эмбриональных стволовых клеток в лечении печеночной недостаточности остается по-прежнему крайне трудной задачей.
Зрелые гепатоциты — медленно делящиеся клетки. В нормальной печени в состоянии митоза находится 0,1—0,01 % клеток [9]. Это так называемые унипотентные клетки: они дифференцируются только в один тип клеток. На моделях трансгенных мышей с тяжелыми поражениями печени, длительно стимулдирующими ее регенерацию, показано, что подсадка нормальных взрослых гепатоци-тов в печень мышей может обеспечить почти полное заселение пораженного органа [20]. В таких условиях взрослые гепатоциты способны к пролиферации, подсчитано, что они могут делиться до 77 раз, что сравнимо с кроветворными стволовыми клетками [20]. Этот подход был испытан и на модели приобретенной болезни печени. Полная репопуляция печени взрослыми гепатоцитами успешно идет у крыс, когда клеточный цикл гепатоцитов подавлен введением алкалоида ретрозина при удалении части печени [17]. Пересаженные зрелые гепатоциты могут контактировать с гепатоцитами по всей дольке печени, а также с клетками желчных ходов. Кроме того, пересаженные гепатоциты морфологически и функционально сохраняют свойства нормальных взрослых гепатоцитов и не превращаются в протоковые или опухолевые клетки [17].
Эти интересные результаты ставят множество вопросов. Неясно, например, все ли взрослые ге-
патоциты способны к пролиферации или лишь некоторые. Работы по фракционированию клеток показывают, что гепатоциты среднего и крупного размера (в отличие от мелких) весьма склонны к пролиферации. Из-за перипортального расположения мелких гепатоцитов некоторые авторы называют их «взрослыми стволовыми клетками печени» [7]. Однако результаты, полученные на экспериментальной модели регенерации печени после частичной резекции, показали, что к пролиферации способны гепатоциты из любой части печеночной дольки [12].
Факторы, индуцирующие пролиферацию гепатоцитов, требуют дальнейшего изучения. Важная роль принадлежит ростовым факторам: у мышей постоянная перфузия фактора роста гепатоцитов ведет к увеличению массы печени, пролиферации гепатоцитов и к увеличению продолжительности жизни гепатоцитов, несущих экзогенные конструкции [17].
Овальные клетки — мелкие клетки непаренхиматозной природы со скудной цитоплазмой, объемистым ядром и крупным ядрышком; они обнаруживаются после хронического введения животным печеночных канцерогенов или токсинов [9]. Овальные клетки появляются сначала в пери-портальном пространстве, а затем заполняют всю печеночную дольку, причем скорость инвазии зависит от гепатотоксичности [7]. Овальные клетки обладают высокой способностью к пролиферации и могут давать (in vivo или при культивировании) как гепатоциты, так и протоковые клетки [23]. Благодаря этой способности данный вид клеток может оказаться хорошим источником для пересадки в пораженную печень. Однако попытки осуществить это на практике приводят к развитию хо-лангио- или гепатокарцином [22].
Использование специфических маркеров подтвердило присутствие овальных клеток у человека при многих хронических заболеваниях печени [7, 10, 21]. Установлено, что численность этих элементов прямопропорциональна тяжести поражения печени [18]. Таким образом, возможно, что замещение пораженных гепатоцитов происходит за счет факультативных стволовых клеток, а не за счет унипотентных коммитированных элементов, то есть зрелых гепатоцитов [7].
Стволовые клетки непеченочного происхождения, используемые для заместительной терапии многих заболеваний, могут быть выделены из эмбриона, плода, а также получены у взрослого человека. Общепризнано, что эмбриональные и фетальные стволовые клетки обладают более высокой способностью к самоподдержанию. Тем не менее, их клиническое использование имеет ограничение в связи с этическими проблемами, риском развития тератом и контаминации клеточного материала патогенной флорой [8]. Поэтому использование стволовых клеток взрослого человека представляется более доступным и безопасным. Стволовые клетки у взрослого человека получают либо из костного мозга в результате трепанобиопсии крыла под-
вздошной кости, либо из периферической крови после их мобилизации из костного мозга [8]. У новорожденного источником стволовых клеток также может служить пуповинная кровь.
Проведенные в настоящее время исследования убедительно свидетельствуют о возможности диф-ференцировки стволовых клеток костного мозга в гепатоциты in vitro [8]. Интересно, что способность стволовых клеток к дифференцировке в гепатоци-ты не ограничена какой-либо одной субпопуляцией. Таким потенциалом обладают, по меньшей мере, кроветворные, мезенхимальные стволовые клетки и мультипотентные предшественники костного мозга и периферической крови [8]. Какая из них является идеальным «кандидатом» для трансплантации
— пока остается неясным. Кроме того, несмотря на достигнутый прогресс в осмыслении роли стволовых клеток в регенерации печени, очень много вопросов остается невыясненными. Например, какова роль стволовых клеток костномозгового происхождения в регенерации печени в физиологических и патологических условиях? Каковы механизмы мобилизации стволовых клеток из костного мозга в кровоток, их миграции в печень и дифференцировки в гепатоциты? Являются ли гепатоциты костномозгового происхождения функционально полноценными? До сих пор продолжаются споры по поводу адекватности методов, доказывающих трансдифферен-цировку стволовых клеток в гепатоциты. Отсюда остается открытым и вопрос, действительно ли стволовые клетки дифференцируются в гепатоциты или же появление гепатоцитов костномозгового происхождения может быть результатом слияния стволовых клеток со зрелыми клетками печени?
НУЖНА ЛИ ЦЕЛАЯ КЛЕТКА?
Много нерешенных проблем в клеточной транспланталогии связано с вопросами сохранения функциональной активности трансплантируемых клеток в процессе их хранения, возможности их доставки к месту лечения и определения оптимальной массы клеток, необходимой для получения положительного саногенетического эффекта. Кроме того, наличие иммунологического барьера при пересадке алло- и ксеногенных гепатоцитов, хотя и меньшего, чем при трансплантации печени, остается одним из вопросов, требующего детального изучения. Относительно механизмов действия трансплантируемых клеток в настоящее время нет ни одного достаточно убедительного сообщения. Многие авторы считают, что положительный эффект клеточной трансплантации обусловлен продуцированием клетками биологически активных веществ [4]. Известны данные о наличии в трансплантате регуляторных компонентов, за счет которых в поврежденном органе происходит активация собственных эндогенных механизмов регуляции восстановительных процессов [2]. Указанные компоненты, по-видимому, оказывают стимулирующее воздействие на региональные стволовые клетки и регенераторные резервы поврежденного органа [3]. Более того, в последнее время стали появляться
работы, отмечающие, что стволовые клетки костного мозга не трансформируются в клетки поврежденного органа. Так, J. Nygren et al. в 2004 г. при пересадке гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в зону экспериментального инфаркта миокарда у мышей отметили, что хотя ГСК и приживались в миокарде мышей, большинство пересаженных клеток не удавалось обнаружить уже через 28 дней [19]. Все пересаженные клетки спустя 28 дней экспрессировали маркеры ГСК и клеток крови, но не маркеры кардиомиоцитов. Даже по морфологическим признакам пересаженные клетки не отличались от обычных клеток крови. На основании этого авторы пришли к заключению, что улучшение выживаемости и функции сердца после пересадки клеток костного мозга у мышей с инфарктом миокарда никак не может быть объяснено дифференциацией стволовых клеток в кардиомиоциты. В другой работе D. Hess et al. (2003) вводили клетки костного мозга здоровых мышей в поджелудочную железу мышей с диабетом в надежде, что стволовые клетки костного мозга будут превращаться в бета-клетки, вырабатывающие инсулин [15]. Исследователи отметили снижение и нормализацию уровня сахара у больных мышей после трансплантации, однако это явление возникало за счет активной регенерации собственных клеток поджелудочной железы. Авторы полагают, что восстановление собственных клеток, вырабатывающих инсулин, происходило благодаря особым молекулам, которые содержат в себе донорские клетки.
Учитывая вышесказанное, целесообразным является вопрос: так ли необходима при трансплантации целостность клетки? Высокий эффект использования для лечения болезней печени не целых гепатоцитов, а их ферментных микросомальных систем отмечен в ряде публикаций [1, 4]. Полученные результаты позволяют сделать вывод об отсутствии необходимости строгого подхода к определению целостности трансплантируемых гепатоци-тов, ввиду включения их ферментных систем в общий метаболизм. Интересным также является тот факт, что новым подходом при создании «вспомогательной печени» явилась разработка системы экстракорпоральной детоксикации и нормализации обменных процессов с помощью цитозоля печени, содержащего митохондриальную и микросо-мальную фракции, контактирующего с кровью через полупроницаемую мембрану [5]. Результаты исследований на животных показали достаточно высокую терапевтическую эффективность этого метода, что проявлялось в увеличении активности цитохром-Р-450-зависимых реакций, понижении интенсивности процессов ПОЛ, нормализации обменных процессов и снижении токсических свойств крови. Изучив результаты стендовых и модельных опытов данной системы, Фармкомитет РФ пришел к заключению о возможной безопасности использования лиофилизированного цитозоля печени в аппаратах типа «вспомогательная печень».
Таким образом, перспективным представляется изучение влияния на патологический процесс
при печеночной недостаточности не только целых клеток, но и отдельных их органелл, мембран, биологически активных веществ и т.д. Возможно, это позволит решить ряд проблем, ограничивающих широкое внедрение в клинику современных методов клеточной трансплантации, а также приведет к более полному пониманию механизмов действия трансплантируемых клеток.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Непосредственной причиной печеночно-клеточной недостаточности является массивный апоптоз гепатоцитов, вызванный действием различных токсических агентов, бактериальных метаболитов или персистирующей вирусной инфекцией [8]. Снижение количества гепатоцитов ниже критического уровня диктует необходимость их восполнения. При этом в ситуации, когда собственные резервы регенерации оказываются несостоятельными, перспективы клеточной терапии выглядят достаточно заманчиво [7, 8]. Трансплантация гепатоцитов, вот уже более 20 лет являющаяся предметом лабораторных исследований, в настоящее время нашла клиническое применение. Следует отметить, что данный подход позволил получить ряд обнадеживающих результатов [7, 17, 22]. Сегодня идет активное изучение применения при печеночной недостаточности так называемых стволовых клеток [8]. И в этой области тоже достигнуты немалые результаты [16, 17, 20].
Таким образом, несмотря на многие нерешенные вопросы относительно оптимального источника клеток, их количества, путей и кратности введения и прочее, исследование эффектов и механизмов действия клеточной терапии при патологии печени имеет весомое экспериментальное обоснование, а также четкие перспективы и направления для дальнейших разработок. Учет определенных преимуществ и недостатков различных методов клеточной и эфферентной терапии печеночной недостаточности позволит не только оценить существующий опыт, но и подойти к разработке новых, более эффективных методов лечения заболеваний печени.
ЛИТЕРАТУРА
1. Атеросклероз и клеточная терапия / А.А. Ру-нович, В.К. Войников, Ю.И. Пивоваров и др. — Иркутск, 2005. — 304 с.
2. Бельков А.В. Живые изолированные клетки печени, их свойства и клиническое применение / А.В. Бельков, А.А. Писаревский // Анестезиология и реаниматология. — 1991. — №3. — С. 75 — 77.
3. Берсенев А.В. Клеточная терапия дислипи-демий и атеросклероза (аналитический обзор) / А.В. Берсенев, М.Е. Крашенинников, А.Н. Онищенко // Вестн. трансплантол. и искусств. органов. - 2001. - №2. - С. 46-53.
4. Классификация хронического гепатита, диагностика, определение степени тяжести и стадии течения / J.H. Hoofnagle, V. Desmet, M. Gerber et al. // Обзор. Росс. журн. гастроэнтерологии, гепа-тологии. - 1995. - Т. 5, № 2. - С. 38-45.
5. Корочкин Л.И. Стволовые клетки в нейрогенетике / Л.И. Корочкин // Генетика. — 2004. — №6. - С. 787-793.
6. Рябинин В.Е. Материал В.Е. Рябинина для искусственной печени, способ его использования и искусственная печень / В.Е. Рябинин, М.М. Асыл-гужин, С.С. Уставщиков. — Патент на изобретение №2135194. — 1999.
7. Соловьев В.В. Исследование функциональной активности гепатоцитов в тканевых фрагментах в новом биореакторе «биологическая искусственная печень» / В.В. Соловьев, В.С. Акатов,
Э.И. Лежнев // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. — 2000. — Т. 129, № 6. — С. 698 — 700.
8. Сухих Г.Т. Трансплантация эмбриональных гепатоцитов: экспериментальное обоснование нового подхода к лечению недостаточночти печени / Г.Т. Сухих, А.А. Штиль // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. — 2002. — Т. 134, № 12. — С. 604 — 610.
9. Черных Е.Р. Стволовые клетки в регенерации печени: новые подходы к лечению печеночной недостаточности / Е.Р. Черных, А.А. Останин, А.И. Пальцев // Гепатология. — 2004. — №5. —
С. 24 — 33.
10. Шулутко Б.И. Болезни печени и почек / Б.И. Шулутко. — СПб.: Изд-во Санкт-Петербургского санитарно-гигиенического мединститута, 1993. — 480 с.
11. Crosby H.A. Adult liver stem cells: bone marrow, blood, or liver derived / H.A. Crosby,
S.G. Hubscher, L. Fabris // Am. J. Pathol. — 1998. — Vol. 152. — P. 771 —779.
12. Dixit V. Transplantation of
microencapsulated hepatocytes for liver function replacement / V. Dixit, G. Gitnick // J. Biomater. Sci. Polym. Ed. — 1995. — Vol. 7. — Р. 343 — 357.
12. Fausto N.T. The liver, biology and pathobiology / N.T. Fausto // Eds. I.M. Arias et al.
— 3rd ed. — N.Y., 1994. — 158 p.
13. Habibullah C.M. Hepatocyte transplantation / C.M. Habibullah, I.H. Syed, A. Qamar // Transplantation. — 1996. — Vol. 58. — P. 951 —952.
14. Hagihara M. Expression of HLA-DP antigen on peripheral blood mononuclear cells of HLA-DP transgenic pigs / M. Hagihara, T. Shimura, K. Takebe et al. // Cell Transplant. — 1994. — Vol. 3.
- P. 283-290.
15. Bone marrow-derived stem cells initiate pancreatic regeneration / D. Hess, L. Li, M. Martin et al. // Nature Biot. - 2003. - Vol. 21. - P. 763-770.
16. Hirai S. Encapsulated hepatocyte transplantation for the treatment of D-galactosamine-induced acute hepatic failure in rats / S. Hirai, S. Kasai, M. Mito // Eur. Surg. Res. - 1993. - Vol. 25. - P. 193-202.
17. Laconi E. Hepatocyte ploidy in regenerating livers after partial hepatectomy, Drug-induced necrosis, and cirrhosis / E. Laconi, R. Oren,
D.K. Mukhopadhyay // Am. J. Pathol. - 1998. -Vol. 153. - P. 319-329.
18. Lowes K.N. Oval cell numbers in human chronic liver diseases are directly related to disease severity / K.N. Lowes, B.A. Brennan, G.C. Yeoh, J.K. Olynyk // Am. J. Pathol. - 1999. - Vol. 154. -P. 537-541.
19. MI stem cell therapy dealt further blow / J. Nygren et al. // Nature Med. - 2004. - N 10. -P. 494-504.
20. Overturf K. Hepatocytes corrected by gene therapy are selected in vivo in a murine model of hereditary tyrosinaemia type I / K. Overturf, M. Al-Dhalimy, R. Tanguay // Nat. Genet. - 1996. -Vol. 12. - P. 266-273.
21. Sell S. Cancer stem cells and differentiation therapy / S. Sell // Tumour Biol. - 2006. - Vol. 12 (2). - P. 59-70.
22. Steinberg P. Oval cell lines OC/CDE 6 and OC/CDE 22 give rise to cholangio-cellular and undifferentiated carcinomas after transformation / P. Steinberg, R. Steinbrecher, S.A. Radaeva // Lab. Invest. - 1994. - Vol. 71. - P. 700-709.
23. Yasui O. Isolation of oval cells from Long-Evans Cinnamon rats and their transformation into hepatocytes in vivo in the rat liver / O. Yasui, N. Miura, K. Terada et al. // Hepatology. - 1997. -Vol. 25. - P. 329-334.
