Каталитические методы определения меди(II) и биологически активных соединений в биологических жидкостях, фармацевтической продукции и объектах окружающей среды Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

наука/ исследования

Каталитические методы определения меди(П) и биологически активных соединений в биологических жидкостях, фармацевтической продукции и объектах окружающей среды

Catalytic determination of copper(II) and biologically active compounds in biological fluids, pharmaceuticals and environmental samples

Руководитель: к.х.н., доцент Ю.Ю. Петрова

Ю.Ю. Петрова, Ю.А. Зольников,

Е.Ю. Бырина, О.Ю. Ветрова, О.С. Долгушина

Yu.Yu. Petrova, Yu.A. Zolnikov,

E.Yu. Birina, O.Yu. Vetrova, O.S. Dolgushina

ГОУВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры», кафедра химии Surgut State University, Chair of Chemisrty

В работе представлены основные результаты исследований, проведенных за последние 10 лет на кафедре химии Сургутского государственного университета в области каталитических методов анализа, которые могут быть использованы в медицине и фармакологии. Представлены методики каталитического определения меди(П) и биологически активных соединений (на примере гистамина и коллагена) в сыворотке крови, слюне и косметической продукции, отличающиеся высокой чувствительностью, широким диапазоном определяемых содержаний, простотой и доступностью. Показаны преимущества сорбционнокаталитического метода, в т.ч. в сочетании с методами планарной хроматографии. Обсуждены перспективы развития этих методов.

The paper presents the main results of studies conducted over the past 10 years at the Chair of Chemistry, Surgut State University in the field of catalytic methods of analysis that can be used in medicine and pharmacology. Techniques of the catalytic

determination of copper (II) and biologically active compounds (for example, histamine and collagen) in the serum, saliva and cosmetic products, characterized by high sensitivity, a wide range of contents, simplicity and accessibility, are presented. The advantages of sorption-catalytic method, including in conjunction with the methods of planar chromatography, are shown. The prospects of development of these methods are discussed.

Каталитические методы анализа отличаются высокой чувствительностью определения как металлов-катализаторов, так и органических соединений, влияющих на их каталитическую активность. Известно, что некоторые амины обладают активирующим действием в индикаторных реакциях, катализируемых медью(П), что открывает возможности их каталитического определения [1].

Содержание меди в организме человека является важнейшим показателем различных патологических состояний, связанных с нарушением метаболической роли меди(П), входящей в состав церулоплазмина и некоторых аминоокси-даз. Так резкое повышение содержания меди(П) в крови человека (в 100-1000 раз) наблюдается у людей, страдающих различными заболеваниями печени (гепатиты В и С, цирроз, опистор-хоз), а также в крови наркоманов и при других состояниях, когда имеется повышенная нагрузка на печень. Исследования обмена меди показывают, что в некоторые периоды жизни человека уровень меди в организме либо резко повышается как, например, при беременности, или же резко снижается - при тяжелых инфекциях, при онкологических заболеваниях. Также показано, что очень низкая концентрация меди в сыворотке крови может быть одной из причин развития атеросклероз [2].

Продукты питания и потребляемая вода являются основными источниками поступления меди в организм человека. Следовательно, их качество может быть причиной появления или развития различных патологических состояний и процессов в организме. Например, население Индии традиционно использует посуду и кухонные принадлежности, выполненные из меди или ее сплавов, отсюда высокие содер-

Содержание меди в организме человека является важнейшим показателем различных патологических состояний, связанных с нарушением метаболической роли меди(П), входящей в состав церулоплазмина и некоторых аминооксидаз.

жания меди(П) в крови этих людей, большой уровень заболеваний печени и генетических патологий, связанных с нарушением обмена меди в организме. В 1984 году в зарубежных научных публикациях впервые появились сообщения о роли меди, поступающей с питьевой водой, в развитии раннего детского цирроза печени у искусственно вскармливаемых детей. В связи с этим, существующий за рубежом с 1982 года стандарт ВОЗ по содержанию меди в питьевой воде,

установленный без учета особенностей метаболизма меди у детей, до настоящего времени является временной величиной [2].

Суточная потребность в меди 40 мкг/кг в сутки. Правда, эта доза сильно варьирует в зависимости от возраста, веса и пола. Причем последние исследования показали, что она колеблется от 30 мкг/кг до 80 мкг/кг. Анализ продуктов питания показал, что следующие продукты являются источниками меди: баранья и телячья печень, устрицы, многие виды рыбы, зеленые овощи (данные продукты имеют в своем составе не менее 100 мкг на 100 ккал). В отличие от них следующие продукты содержат менее 50 мкг на 100 ккал

Для полуколичественного определения меди(П) в сыворотке крови предложена тест-методика с визуальной детекцией, позволяющая определять медь по окраске образующихся на бумажном носителе продуктов реакции окисления гидрохинона пероксидом водорода в широком диапазоне содержаний 1х10"5-0.5 мкг (0.01-500 мкг/мл при аликвоте 1 мкл).

и являются относительно бедными источниками этого элемента: сыр, свежее и сухое молоко, говядина и баранина, белый и черный хлеб, многие крупы [2].

С другой стороны, поступающая с пищей медь имеет низкую усвояемость у большинства населения и в течение всей жизни у таких людей имеется субдефицит меди,

что также отрицательно сказывается на их здоровье [3]. В связи с этим актуальна постановка вопроса о мерах по профилактике экологического медедефицита среди населения всех возрастных групп. В эти меры входит контроль за содержанием меди в организме человека, потребляемых им продуктах питания и воде. Выпускаемые фармацевтической промышленностью медьсодержащие препараты, как правило, содержат медь в комплексе с другими микроэлементами, что отрицательно сказывается на утилизации меди организмом. К тому же, стоимость таких препаратов превышает платежеспособность именно тех слоев населения, которым они необходимы больше всего. Поэтому разработка универсального скринингового экспресс-метода, который может быть успешно использован в медицинской практике, биологических исследованиях, экологической оценке безопасности пищевых продуктов и в дальнейшем получения корректоров при нарушениях функциональной активности печени является актуальной задачей.

Для полуколичественного определения меди(П) в сыворотке крови предложена тест-методика с визуальной детекцией, позволяющая определять медь по окраске образующихся на бумажном носителе продуктов реакции окисления гидрохинона пероксидом водорода в широком диапазоне содержаний 1х10-5 - 0.5 мкг (0.01-500 мкг/мл при аликвоте 1 мкл) [4]. Преимуществами разработанной методики являются ее чувствительность, простота аппаратурного оформления, экспрессность и доступность.

Сорбцию меди(П) из

анализируемых объектов

проводят либо путем пипе-тирования микроколичеств (1-2 мкл) пробы на носитель (биологические объекты) либо путем прокачивания пробы анализируемого раствора (5-20 мл) через бумажный носитель (природная, питьевая или водопроводная вода) (рис. 1). В качестве носителей для проведения индикаторной реакции используют бумажные фильтры на основе фильтровальной бумаги фирмы <^Шгак» (желтая лента) с химически привитыми гексаметилендиамино-группами (ГМДА-фильтры). На ГМДА-фильтрах ранее определяли медь(П)

сорбционно-каталитическим методом [5]. Привитой ГМДА являются комплексообразующим реагентом для сорбционного концентрирования меди(П) и, кроме того, обладает активирующим действием в индикаторной реакции, увеличивая ее скорость в присутствии меди(П).

В качестве индикаторной используют реакцию окисления гидрохинона (Гх) пероксидом водорода в присутствии малононитрила (МН), катализируемую медью(11), которую проводят на выбранном бумажном химически модифицированном носителе. Ранее продукты этой реакции подробно были изучены в растворе (рис. 2). В данной реакции в зависимости от ее скорости, а значит и от концентрации катализатора - меди(П), на фильтре образуются различно окрашенные продукты (от бледно-розового до синего), что используется в полуколи-чественном тест-методе определения меди(П). Проведение цветной индикаторной реакции Гх-медь(П)-пероксид

водорода-МН на фильтровальной бумаге, модифицированной ГМДА, обеспечивает высокую чувствительность

определения меди(П) за счет сорбционного концентрирования на носителе и активирования катализа ГМДА-группами, и упрощает методику за счет проведения индикаторной реакции непосредственно на сорбенте.

Определение меди(П)

в образце сыворотки визуальным методом с помощью цветной шкалы позволяет полуколичественно определять от 1х10-5 до 0.5 мкг меди(П) в 1 мкл образца (рис. 1). Полученная методика была апробирована в клинической лаборатории центральной районной больницы г. Сургута. При анализе сыворотки крови 50 здоровых людей при проведении способа отмечают розовое или оранжевое пятно на фильтре, что,

Анализ крови 40 больных вирусным гепатитом с использованием способа определения меди(П) в сыворотке крови показал, что содержанием меди(П) в сыворотке является одним из диагностических показателей при заболеваниях вирусным гепатитом.

согласно цветной шкале, соответствует содержанию 0.01 -0.10 мкг/мл. Это содержание характеризуют как нормативный показатель по меди(П).

При анализе сыворотки крови больных вирусным гепатитом отмечают серое или зеленое пятно на фильтре, что соответствует содержанию 1 - 10 мкг/мл меди(П). Анализ крови 40 больных вирусным гепатитом с использованием способа определения меди(П) в сыворотке крови показал, что содержанием меди(П) в сыворотке является одним из

диагностических показателей при заболеваниях вирусным гепатитом.

В случае количественного определения на бумажный носитель после стадии сорбции меди(11) из анализируемой пробы наносят микроколичества реагентов и момент добавления последнего (Гх) считают началом реакции. Измеряют коэффициент отражения ^) цветного пятна на бумажном фильтре с помощью фотоколориметра-рефлектометра «УНИФОТ-СПЕКТР 8С-405» (светодиод 525 нм). За скорость реакции кинетическим методом принимают тангенс угла наклона кинетической кривой (зависимость R от времени) в начальный период времени (метод тангенсов). Содержание меди(П) в анализируемой пробе рассчитывают методом градуировочного графика или методом добавок (для сложных биологических объектов).

Кроме того, изучено сочетание разделения металлов методом тонкослойной хроматографии с сорбционнокаталитическим определением меди(П) в сочетании с тонкослойной хроматографией. Показано, что добавление гексаметилендиамина в подвижную фазу (тонкослойная хроматография) и импрегни-рование им бумаги (бумажная хроматография) повышают эффективность разделения металлов модельной смеси:

Си(11), ^(П), Cd(II) и РЬ(11). Выявлено активирующее действие гексаметилендиамина в индикаторной реакции восстановления железа(Ш) тиосульфатом натрия, катализируемой медью(11) и проводимой на пластинах Сорбфил после проведения на них хроматографирования с добавлением более 1 мг/мл гексаме-тилендиамина в подвижную фазу. Разработаны методики сорбционно-каталитического определения меди(11) на пластинах Сорбфил, в т.ч. в сочетании с тонкослойной хроматографией, в широком диапазоне концентраций 0,005 -10 мкг/мл с пределом обнаружения 4 нг/мл, что примерно на порядок ниже, чем в растворе (табл. 1). Сочетание тонкослойной хроматографии с кинетическим определением меди(П) позволило повысить селективность анализа. Методики апробированы в анализе сточной и речных вод, а также могут быть использованы в анализе питьевой воды и биологических жидкостей.

Коллаген - фибриллярный белок соединительной и костной ткани, сухожилий, хрящей, обладающий свойствами стимулировать фибриллообразование и регенерацию повреждённых тканей (рис. 3). Гистамин (Hisam) - биогенный амин, образующийся в организме при декарбоксилировании

___________________Таблица 1

Метрологические характеристики определения меди(П) сорбционнокаталитическим методом в сочетании с тонкослойной хроматографией (ТСХ)

г* Предел обнаружения: с . , нг/мл шт7 ' Нижняя граница определяемых концентраций: сн, нг/мл (относительное стандартное отклонение: sг) Интервал определяемых концентраций, мкг/мл

Без ТСХ

0,999 2,8 5,0 (0,09) 5,0х10-3 - 10,0

В сочетании с ТСХ

0,998 4,0 5,0 (0,06) 5,0Х10-3 - 10,0

* г - коэффициент корреляции градуировочного графика

аминокислоты гистидина под влиянием гистидиндекарбок-силазы, является одним из медиаторов, участвующих в регуляции жизненно важных функций организма и играющих важную роль в патогенезе ряда болезненных состояний [6]:

Гистамином пользуются фармакологи и физиологи для экспериментальных исследований. Коллаген широко используют как пластический материал в различных областях медицины и косметологии, а также в фармацевтической технологии в качестве основы, пролонгирующее действие лекарственных средств. Широкое применение гистамина и коллагена в медицинской и фармацевтической практике обуславливает необходимость совершенствования способов их определения в биологических объектах и с целью аналитического контроля фармацевтической продукции.

Нами был выявлен активирующий эффект коллагена в реакции окисления 3,3’,5,5’-тетраметилбензиди-на (ТМБ) персульфатом аммония на уровне концентраций 10-8 - 10-7 М, катализируемой медью(П) в растворе, возможно связанный с наличием доступных концевых аминогрупп остатков лизина. Изучено влияние концентраций меди(П), ТМБ, персульфата аммония и рН на скорость выбранной индикаторной реакции в присутствии коллагена. Эффект активирования наблюдали в интервалах 0,01 -0,05 мкг/мл меди(П), 5Х10"7 -5Х10-5 М ТМБ, 7,5Х10-6 -7,5х10-5 М (NH4)2S2O8 и 3,5 -4,6 рН. В оптимизированных условиях (0,04 мкг/мл Си(11), 1,25Х10-5 М ТМБ, 3,75Х10-5 М (NH4)2S2O8, рН 4,35, 10-15% этанола по объему) разработана методика определения

коллагена в широком диапазоне концентраций 5,0хю-1з -5,0Х10-7 М (сн 5,0х10-13 М, зг 0,12; с 2,3х10-13 М), отлича-

’ ’ Ш1П

ющаяся высокой чувствительностью, воспроизводимостью и простотой аппаратурного оформления (табл. 2). Оценена правильность полученной методики методом «введено-найдено». Полученные результатні демонстрируют хорошую сходимость результатов, с погрешностью 4% для 1х10-11 и 5х10-12 М и 10% для

Разработана методика определения коллагена в широком диапазоне концентраций 5,охіо'13 —

5,охіо'7 М (сн 5,охіо-13 М, sr 0,12; стіп 2,зхіо-13 М), отличающаяся высокой чувствительностью, воспроизводимостью и простотой аппаратурного оформления.

1.10-14 М коллагена. Проведено

определение коллагена ката-

литическим методом в креме «Вао». Результат двух после-

довательных определений со-

ставил з,25х10-12 М и з,48х10'

12 М коллагена.

Возможность селективно обнаруживать и определять биогенные амины требуется при исследовании их роли в биологических процессах. Известно достаточное число методов определения гистамина, некоторые из них избирательны и высокочувствительны [7]. Так ИФА как чувствительный и простой по технике исполнения метод, несмотря на его ограниченные возможности по сравнению с хроматографическими методами, получил наибольшее распространение в лабораторной практике. Однако для многих из указанных

методов можно выделить такие недостатки, как трудоемкость и/или дороговизна. Хроматографические методы, а также ультрафильтрация и электродиализ сложны для использования в клиникодиагностических лабораториях. Поэтому разработка чувствительной, селективной, простой и экспрессной методики определения гистамина является актуальной задачей, которая была решена с использованием сорбционнокаталитического метода.

Ранее [7] обнаружен ингибирующий эффект гистамина в реакции, проводимой в растворе, и его активирующий эффект - на бумажных носителях. Наибольший активирующий эффект наблюдается на медьсодержащих бумажных фильтрах с химически привитыми гексаметилендиамино-группами. На основе теории

о промежуточном активном комплексе сделано предположение о причинах ингибирующего и активирующего действия гистамина в реакции окисления гидрохинона пероксидом водорода. Выяснены оптимальные условия проведения реакции и разработана методика определения (з-9)х10-13 М гистамина на медьсодержащих бумажных фильтрах с привитыми гексаметилендиамино-

группами. Изучены правильность и селективность определения гистамина. Наибольшее мешающее влияние оказывают диэтиламин и триэтиламин. Методика использована для сорбционнокаталитического определения гистамина в слюне человека на уровне нМ. В анализируемом образце слюны, разбавленной в 104 раз, найдено (3.55 ± 0.03)х10-9 М гистамина при норме содержания гистамина в слюне в свободном (не связанном с базофилами) состоянии 0.2-0.4 нг/мл, или (1.8-з.6)х10'9 М [8].

С целью повышения селективности определения нами был предложен гибридный вариант, в котором сочетается разделение методом бумажной хроматографии с последующим сорбционнокаталитическим определением непосредственно на бумажном носителе [9]. Гистамин активирует каталитическую реакцию на фильтровальной бумаге в широком диапазоне содержаний на фильтре 10-14 -10-1 мкмоль, в то время как в растворе в диапазоне концентраций от 10-10 до 10-3 М наблюдали только ингибирование, а в отсутствие катализатора слабое собственное акти-вирущее действие, усиливающееся в присутствии небольших количеств этанола. Были

Таблица 2

Метрологические характеристики каталитического определения

коллагена и гистамина

г* Предел обнаружения: с . , М шт’ Нижняя граница определяемых концентраций: сн, М (относительное стандартное отклонение: sг) Интервал определяемых концентраций, М

Коллаген:

0,999 2,3Х10-13 5,0Х10-13 (0.10) 5,0Х10-13 - 5,0Х10-7

Гистамин:

Без бумажной хроматографии

0,987 9,5Х10-15 1,0Х10-14 (0,13) 1,0Х10-14 - 1,0Х10-11

В сочетании с бумажной хроматографией

0,988 6,9Х10-15 1,0Х10-14 (0,03) 1,0Х10-14 - 1,0Х10-1°

* г - коэффициент корреляции градуировочного графика

оптимизированы условия разделения гистамина на полосках фильтровальной бумаги и проведения реакции на них. В выбранных условиях предложена методика, которая позволяет определять гистамин в интервале концентраций 1x10" 14 - 1х10-10 М (табл. 2) из 2 мкл анализируемого раствора с сшМ 7х10"15 М (сн 1х10"14 М, sr 0,03). Сочетание бумажного хроматографирования практически не влияет на чувствительность и воспроизводимость определения, но улучшает селективность определения (табл. 3), что позволяет определять гистамин в таких сложных препаратах как гистаглобулин, при этом белок не мешает определению.

Большинство а-амино-кислот обладают широким спектром биологической активности. Так, лизин, треонин, фенилаланин, тирозин, аспарагин, глутамин, глицин, се-рин, аргинин являются исходными веществами для синтеза антител, гормонов, ферментов и других веществ. Они участвуют в метаболизме сахаров и органических кислот (а-аланин), способствуют снижению уровня холестерина в крови (метионин, триптофан, лизин, аргинин), выведению тяжелых металлов из организма (метионин, цистеин), росту

и восстановлению тканей (гистидин, изолейцин, лейцин, глицин, серин, пролин). а-Аминокислоты могут служить источником энергии на клеточном уровне (валин, лейцин, изолейцин, глутамин). Серусодержащие аминокислоты (метионин, цистеин) являются донорами серы, которая предотвращает нарушения формирования волос, кожи и ногтей. Они также играют важную роль в создании вторичной структуры белков за счет образования дисульфид-ных мостиков [10]. Свободные аминокислоты, входящие в состав физиологических жидкостей, имеют важное функциональное значение. Изменение их концентрации часто связано с метаболическими нарушениями, которые свидетельствуют о развитии того или иного заболевания (сахарный диабет, остеопороз и др.).

В настоящее время для разделения и идентификации аминокислот используют хроматографические методы -ионообменную, обращено-фазовую высокоэффективную жидкостную и газовую хроматографию. Данные методы требуют достаточно сложного аппаратурного оформления и дорогостоящих реактивов [11]. Поэтому поиск новых экономичных и не менее точных

Таблица3

Мешающее влияние а,а’-дипиридила, пиридина и гистидина на определение гистамина (Hisam) сорбционно-каталитическим методом в сочетании с бумажной хроматографией (БХ) по реакции Гх - Си(11) - Н202 - МН (Т — повышение скорости индикаторной реакции, 4 — понижение скорости)

Вещество (X) Концентрация X, вызывающая заметное изменение скорости реакции, М Порог мешающего влияния Х:Шэаш

В отсутствие Шэаш В присутствии Шэаш - БХ + БХ

- БХ + БХ

а,а’-Дипиридил 10'12 - 10'2 (Т) 10-9 - 10-2 (Т), 10-10 - 10-12 (|) 10-4 - 10-2 (Т) 1 : 1 108 : 1

Пиридин 10-12 - 10-2 (Т) 10-9 - 10-2 (Т), 10-12 - 10-10 (|) 10-3 - 10-2 (Т) 1 : 1 109 : 1

Гистидин 10-3 - 10-2 (4), 10-12 - 10-4 (Т) 10-11 - 10-2 (Т), 10-2 (Т) 10 : 1 109 : 1

ЛИТЕРАТУРА

1. М. К. Беклемишев, Ю.Ю. Петрова, О.М. Абрамова, И.Ф. Долманова. Сорбционно-каталитический метод определения азотсодержащих органических соединений // Вестн. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 2003. Т.44. № 2. С.115-122.

2. С.Д. Подымова. Болезни печени. Изд. 2-е. - М.: Медицина, 1993. С. 41

3. С.М. Котова, Л.В. Пучкова, Е.В. Чихун и др. Оценка некоторых показателей метаболизма меди при остеопорозе // Материалы Российского конгресса по остеопорозу. - Москва, 2003. С. 34.

4. Ю.Ю. Петрова, М.К. Беклемишев, А.Г. Гиновкер.

методов разделения и определения а-аминокислот в различных объектах анализа является актуальной проблемой.

Весьма перспективна разработка сорбционно-каталитического метода определения а-аминокислот в сочетании с их предварительным разделением методом тонкослойной хроматографии. С этой целью ведутся исследования, в которых в качестве индикаторной используют известную реакцию восстановления железа(Ш) тиосульфатом натрия, катализируемую медью(П), в присутствии фенантролина с образованием ферроина, имеющего розовую окраску. В качестве оптимального носителя были выбраны пластины «Сорбфил» для тонкослойной хроматографии 100 x100мм («Сорбполимер», Россия), на которых индикаторная реакция протекала с наибольшей скоростью при незначительной размытости. За скоростью данной реакции наблюдают методом спектроскопии диффузного отражения.

Скорость реакции характеризуют методом фиксированного времени или методом тангенсов, как тангенс угла наклона зависимости коэффициента отражения от времени на начальном участке через 30 секунд после начала реакции. Нами был выявлен ингибирующий эффект а-аланина на каталитическую активность меди(П) и оптимизированы условия проведения реакции на носителе, на котором предполагается проводить разделение модельных а-аминокислот методом тонкослойной хроматографии.

Таким образом, в данной работе показаны преимущества использования каталитических методов, отличающихся высокой чувствительностью, экспрессностью, простотой методического и аппаратурного оформления, в анализе биологических объектов, фармацевтических препаратов и других объектов, имеющих отношение к медицине и фармакологии, а также обсуждены перспективы их развития. |

Пипетирование

Нанесение: 0.5 мкл буфера, 1 мкл Н2О2

1 мкл МН, 1.5-2 мкл Гх

Индикаторная реакция гидрохинон (Гх) — Н2О2 — малонодинитрил (МН) на носителе

Цветная шкала для определения меди в сыворотке крови (патент)

Цвет продукта реакции:

Едва заметный розовый Светло-розовый Розовый Серый Светло-зеленый Зеленый

Содержание Си(11) на бумажном носителе, мкг

0 1x10-5 1x10-4 1x10-3 1X10-2 0.1 - 0.5

Нормальное содержание Си(11)

в сыворотке 10-5 - 10-4 мкг/мкл

Рис. 1. Способ определения меди(П) в сыворотке крови

Малононитрил (недостаток) N=C-CH2-ON

(350, 500 нм)

Рис. 2. Продукты реакции окисления гидрохинона пероксидом водорода в присутствии малононитрила, катализируемой медью(П), в растворе

о

н

Рис. 3. Правозакрученная спираль коллагена, состоящая из трёх а-цепей

Способ определения

меди(П) в сыворотке крови. Патент на изобретение № 2225618, заявка № 2001117034, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской федерации 10.03.2004г.

5. M. K. Beklemishev, Yu.Yu. Petrova, I.F.Dolma-nova. Sorption-catalytic testing of copper on a paper-based sorbent with attached alkylamino groups // Analyst. 1999. V.124. № 10. P.1523-1527.

6. В.С.Камышников. Клиникобиохимическая лабораторная диагностика. — Минск: Интерпрессервис, 2003. С. 439.

7. Ю . Ю . Петрова. Сорбционно-каталитический метод определения гистамина // Журн. ана-лит. химии. 2010. Т. 65. №

5. С. 538-547.

8. Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. Биология полости рта. - М.: Медицина, 1991. 303 с.

9. Ю.Ю. Петрова, Е.Ю. Бы-

рина, О.Ю. Ветрова,

Д.Р. Гимранов, Ю.В. Мов-чан. Каталитические методы определения гистамина и коллагена для аналитического контроля фармацевтической продукции // Тезисы докладов I Всероссийской конференции «Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции». М.: Издательский Дом МИ-СиС, 2009. С. 96-97.

10. А.В. Симонян, А.А. Сала-матов, Ю.С. Покровская, А.А. Аванесян. Использование нингидриновойреакции для количественного определения а-аминокислот в различных объектах: Методические рекомендации. - Волгоград, 2007.

11. А.Г. Мосина, И.О. Мельни-

ков, И.В. Назимов //Журн.

аналит. химии. 2009. Т. 64

№ 6. С. 655.

Вестник СурГУ. Медицина. 13

№ 4, 2010 г.