CC BY
27
УДК 576.316.7:582.475.2
КАРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЕЛИ СЕРБСКОЙ [PICEA OMORICA (PANCIC) PURK.]
Е.Н. Муратова, Т.В. Карпюк, О.В. Горячкина
Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, 50, строение 28
Изучена структура кариотипа ели сербской в естественных условиях обитания в западной части Сербии и интроду-цированной в США (штат Вашингтон). Вид является диплоидом (2n=24) с основным числом хромосом 12. Хромосомный набор ели сербской содержит 10 пар метацентрических (I-VIII, X-XI) и 2 пары субметацентрических (IX, XII) хромосом; из них 10 пар содержат вторичные перетяжки. В интерфазных ядрах наблюдается от 1 до 14 ядрышек. Отмечены миксо-плоидия, дицентрическая хромосома, хромосомные фрагменты, кольцевые хромосомы, ацентрические кольца.
Ключевые слова: ель сербская, кариотип, хромосомы, нуклеолярные районы, ядрышки, геномные и хромосомные мутации.
The structure of Picea omorica (Pancic) Purk. karyotype was studied in the natural conditions of west part of Serbia and introduced in USA (Washington). This species is diploid (2n=24) with basic number x=12. The chromosome complement of P. omorica includes 10 pairs of metacentric chromosomes (I-VIII, X-XI) and 2 pairs of submetacentric chromosomes (IX, XII); 10 pairs of chromosomes contain secondary constrictions. In interphase nuclei are observed from 1 to 14 nucleoli. Mixoploidy, dicentric chromosome, chromosome fragments, ring chromosomes, acentric rings are detected.
Keywords: Picea omorica, karyotype, chromosome, nucleolar regions, nucleoli, genome and chromosome mutations.
ВВЕДЕНИЕ
Ель сербская - Picea omorica (Pancic) Purk. - относится к секции Omorica (Бобров, 1971). В естественных условиях данный вид встречается по склонам гор Балканского полуострова, на высоте 630-1300 м над уровнем моря. P. omorica, хотя и занимает небольшой ареал, является одним из самых распространенных видов дикорастущих елей в Европе. Ель сербская применяется в одиночных и групповых посадках при создании зеленых массивов. Представляет интерес в плане генетико-селекционных исследований и является недостаточно изученным видом в этом отношении. В настоящем сообщении представлены материалы по кариологическому изучению ели сербской в естественных древостоях и в условиях интродукции.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
В качестве материала для исследований использовались семена P omorica, из юго-западной части Сербии, собранные в 2005 г. (естественные древо-стои). Кроме того, использовались семена ели сербской, интродуцированной в США, штат Вашингтон, собранные в 2009 г. Семена, предварительно очищенные от крылаток, высевались в чашки Петри на влажную двухслойную фильтровальную бумагу и проращивались при температуре 24-26°С. Кариоло-гический анализ проводился на давленых препаратах по общепринятым для хвойных методикам (Правдин и др., 1972; Муратова, 1995а).
Для кариологических исследований использовали меристематические ткани кончиков корешков проросших семян. Предварительная обработка материала производилась 1% водным раствором колхицина
в течение 4-6 ч. В качестве фиксатора использовали уксуснокислый этанол (3 части 96% этилового спирта и 1 часть ледяной уксусной кислоты). Перед окрашиванием материал протравливали 4% железоаммоний-ными квасцами в течение 20 мин. Окрашивание производили 1% ацетогематоксилином в течение 12-24 ч при комнатной температуре.
После окрашивания материала готовили давленые препараты стандартным способом. Препараты просматривали с помощью микроскопов МБИ-6 и Мик-мед-6. Пластинки с полным набором и хорошим разбросом хромосом фотографировали в иммерсионной системе на негативную фотопленку «Микрат-300» и печатали на бумаге «Унибром». Морфометрический анализ метафазных пластинок проводился на фотографиях. Часть материала была изучена с использованием для микрофотосъемки метафазных пластинок цифровой камеры-окуляра DCM 510.
Для характеристики кариотипа использовали следующие признаки: соматическое число хромосом (2п); абсолютную длину хромосом (Ьа, мкм); суммарную длину хромосом набора (£Ь\ мкм); относительную длину хромосом (Ьг, % - отношение абсолютной длины хромосомы к суммарной длине набора); цен-тромерный индекс (Iе, % - отношение абсолютной длины короткого плеча к длине всей хромосомы); локализацию вторичной перетяжки ^е, % - отношение расстояния от центромеры до перетяжки к длине плеча). Частоту встречаемости перетяжек определяли во всех изученных пластинках. Классификацию хромосом по центромерному индексу производили в соответствии с рекомендациями В. Г. Грифа и Н. Д. Агаповой (1986). Для анализа ядрышек материал окрашивали 50% азотнокислым серебром при тем-
Хвойные бореальной зоны, XXXII, № 5 - 6, 2014
пературе 40-60°С в течение 3-6 часов. Для усиления контраста материал раздавливали в капле 2% ацето-кармина (Муратова, 19956).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При проведении настоящих исследований было изучено 46 проростков Р. отопса из Сербии и 23 проростка данного вида, интродуцированного в штате Вашингтон, США. Ель сербская в обоих происхождениях содержит 24 хромосомы (2п=24) и является диплоидом с числом хромосом х=12. В некоторых проростках ели сербской, интродуцированной в США, обнаружена миксоплоидия - смесь клеток с разным уровнем плоидности - диплоидных с 2п=24 и тетраплоидных с 2п=48. Добавочные хромосомы в кариотипе данного вида не обнаружены. Метафазная пластинка ели сербской представлена на рисунок 1.
Рисунок - 1. Метафазная пластинка Picea omorica (Pancic) Purk. 2n=24. Окраска ацетогематоксилином. Об. 90х, ок. 10х.
Для изучения морфометрических параметров P. omorica использовались образцы из юго-западной Сербии. Суммарная длина хромосом диплоидного набора (SLa) ели сербской в 25 метафазных пластинках варьирует от 230,4 до 327,7 мкм; средний показатель этой величины составляет 267,8±5,16 мкм. Морфо-метрические данные по 19 метафазным пластинкам в интервале спирализации SLa= 230,0-275,0 мкм использовались для построения поликариограммы. По-ликариограмма была построена по данным относительной длины и центромерного индекса.
Скопление точек на поликариограмме (рис. 2) показало, что хромосомы ели сербской разделяются на четыре группы, соответствующие I-VIII, IX, X-XI и XII парам хромосом. Длинные равноплечие хромосомы I-VIII пар образуют одну группу с близкими параметрами: La= 11,6±0,07 мкм, Lr=4,5±0,03%, Ic=46,5±0,18%. В пределах этой группы нет возможности идентифицировать отдельные пары хромосом.
Области точек, соответствующие IX, X-XI и XII парам, выделяются на поликариограмме отдельно. Параметры этих хромосом следующие: IX пара - Lil=10,3±0,13 мкм; Lr=4,0±0,04%; Ic= 37,3±0,48%;
Х-Х1 пары - Ца= 8,9±0,10 мкм; Ц= 3,5±0,03%; 1С= 43,7±0,36%; XII пара - Ц= 7,8±0,13 мкм; Ц= 3,0±0,04%; 1с= 33,5±0,60%. Хромосомы 1-УШ и Х-Х1 групп относятся к типу метацентрических, а IX и XII пары - являются субметацентрическими. Для выделенных групп хромосом различия достоверны по всем изучаемым параметрам. Коэффициенты вариации хромосомных показателей соответствуют очень низкому и низкому уровням изменчивости. Средняя длина хромосом диплоидного набора составляет 255,6±3,16мкм. Хромосомы ЬУШ группы относятся к типу метацентрических, хромосомы IX и XII- субметацентрические, а хромосомы X-XI - более короткие метацентрические.
7,00
в 6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
I - VIII ,
♦v».
> ч* ♦
XII "V^lWV*. #
X - XI
25,0
30,0
35,0
40,0
45,0
50,0
Центромерный индекс (Ic),%
Рисунок - 2. Поликариограмма Picea omorica (Pancic) Purk. I-VIII, IX, X_XI, XII - номера хромосом
Характерной чертой структуры хромосом хвойных является наличие большого числа вторичных перетяжек (Муратова, 1995а; Карпюк, 2004; Седель-никова, 2008). Они выявляются как неокрашенные участки хромосом, варьирующие по ширине. Вторичные перетяжки являются дополнительными маркерами и часто позволяют идентифицировать отдельные пары хромосом в кариотипе. У представителей рода Picea, как и у других видов хвойных, вторичные перетяжки локализованы в трех районах хромосом: проксимальном, медиальном и дистальном.
Морфометрический анализ показал, что у ели сербской имеются хромосомы с двумя и большим числом перетяжек на хромосоме; при этом часть перетяжек встречается нерегулярно. Перетяжки могут располагаться как на одном плече, так и на обоих плечах. Одна уникальная хромосома (по средним параметрам это V пара) в некоторых случаях содержала до шести перетяжек; четыре вторичных перетяжки наблюдались у IX хромосомы, три - у IV, две - у XI хромосомы. По одной вторичной перетяжке отмечено у хромосом I, VI, VII, VIII, X, XII.
Вторичные перетяжки являются очень важными в функциональном отношении структурами: в хромосомах эукариот в них находятся ядрышковые организаторы (Кикнадзе, 1972; Челидзе, Зацепина, 1988). Морфологическим выражением активности ядрыш-ковых организаторов являются ядрышки, которые выявляются в интерфазных ядрах. Ядрышковые организаторы ответственны за синтез рибосомной РНК и некоторых этапов формирования рибосом. В связи с этим ядрышки играют важную роль в белковом метаболизме клетки. Прямыми методами флуоресцентной
гибридизации in situ (FISH) установлено, что у хвойных в районах вторичных перетяжек локализованы гены 18S и 25-26S рРНК (Brown et al., 1993; Brown, Carlson, 1997; Siljak-Yakovlev et al., 2002; Квитко и др., 2011; Goryachkina et al., 2013).
Большому числу вторичных перетяжек в хромосомах видов Picea соответствует большое число ядрышек. В интерфазных ядрах ели сербской насчитывалось от 1 до 14 ядрышек; наиболее часто встречались ядра с 5-7 ядрышками (рисунок 3а). На рис. 3б показана связь ядрышек с районами вторичных перетяжек профазных хромосом ели сербской.
Рисунок 3 - Ядрышки Picea omorica (Pancic) Purk.: а - разное число ядрышек в интерфазных ядрах (окраска азотнокислым серебром); б - связь ядрышек с районами вторичных перетяжек профазных хромосом (окраска ацетогематоксилином). Об. 90х, ок. 10х.
Морфометрические параметры хромосом ели сербской и характеристика вторичных перетяжек представлены в таблице. На рис. 4 представлена идиограмма Р. omorica. Идиограмма построена по средним данным абсолютной длины и центромерного индекса. Хромосомы на идиограмме располагаются в порядке уменьшения длины. Номера хромосом даны с учетом мест, которые они занимают по средним статистическим параметрам.
Средняя длина хромосом диплоидного набора (в интервале 230,0-275,5 мкм) составляет255,6±3,16 мкм. При проведении настоящих исследований в образцах ели сербской из юго-западной части Сербии в двух случаях была обнаружена дицентрическая хромосома, в образцах из США (интродукция) отмечены хромосомные фрагменты, кольцевые хромосомы, ацентрические кольца, надетая кольцевая хромосома.
Ml
I II III IV V VI VII VIII IX XI XII
Рисунок 4 - Идиограмма ели сербской. 1-ХП - номера хромосом.
Полученные данные по числу и основным морфологическим типам хромосом согласуются с результата-
ми исследовании ряда авторов для других происхождений (Santamour, 1960; Lakusic R., Medjedovic S. , 1974; Hizume, 1988; Siljak-Yakovlev et al., 1993, 2002; Borzan et al., 1996; Papes et al., 1997; Besendorfer et al., 2000). По данным разных авторов небольшие различия отмечаются по размерам, центромерным индексам хромосом и общей длине диплоидного набора; есть различия также по числу и локализации вторичных перетяжек. М. Хизуме (Hizume, 1988) в кариотипе P. omorica (собрана в культурах Германии и США) также выделил 8 пар длинных хромосом и 4 пары коротких, которые хорошо идентифицируются. В данной работе отмечено, что среди группы длинных хромосом IV пара имела цен-тромерный индекс, близкий к субметацентрическому, а XII пара относилась к коротким ярко выраженным суб-метацентрическим. Исследователи из стран бывшей Югославии (Lakusic R., Medjedovic S., 1974; Вогет et al., 1996) у ели сербской из естественных обитаний и дендрария Университета Загреба обнаружили 10 пар метацентрических и две пары субметацентрических хромосом (IX и XII). Вторичные перетяжки отмечены на длинных плечах хромосом III, V, IX и на коротком плече хромосомы X. Десять пар метацентрических и две пары субметацентрических (X и XII) обнаружено у P. omorica из Боснии и Герцеговины (Papes et al., 1997).
При окрашивании хромосом ели сербской хромо-мицином А3 (CMA), выявляющим специфические гуа-нин-цитозиновые основания, обнаружено 22-24 флуоресцирующих блока, различных по величине и яркости. Блоки локализованы в интерстициальных (предположительно в районах вторичных перетяжек) и центро-мерных районах многих хромосом. Число ядрышек чаще всего 6-8, максимально - 16, что соответствует числу интеркалярных блоков. Краситель Хехст 33258 эти участки не окрашивает. ДАПИ, который, также как и Хехст, выявляет аденин-тиминовые основания, окрашивает блоки в центромерных районах 10 пар хромосом (в том числе двух пар субметацентриков) и некоторые интеркалярные бэнды. Интеркалярные ДА-ПИ-бэнды соответствуют местам локализации СМА-блоков и сайтов 18S-26S и 5S рДНК. Методом FISH у ели сербской выявлено 16 сайтов 18S-26S рДНК; все они расположены в интеркалярных ГЦ-обогащенных районах. Около локусов 18S-26S найден сайт 5S рДНК у одного из метацентриков (Papes et al., 1997; Besendorfer et al., 2000; Siljak-Yakovlev et al., 2002).
Как известно, у многих видов Picea в кари-отипе могут присутствовать добавочные или В-хромосомы (Муратова, 2000). К настоящему времени В-хромосомы найдены более чем у 20 видов ели, включая один межвидовой гибрид. Это составляет около половины кариологически изученных видов рода Picea. У P. omorica добавочные хромосомы до сих пор не обнаружены. Среди пяти видов, входящих в секцию Omorica, к которой относится ель сербская, В-хромосомы найдены только у P. breweriana (Владимирова и др., 2007; Shibata, Hizume, 2008; Муратова и др., 2009) и P. brachytyla (Hizume et al., 1991). Возможно, при дальнейших исследованиях, они будут найдены и у других видов елей-оморик.
Хвойные бореальной зоны, XXXII, № 5 - 6, 2014
Таблица - Морфометрические параметры хромосом Picea omorica (Pancic) Purk.
Номера Абсолютная длина (La), мкм Относительная длина (Lr), % Центромерный индекс (Iе), % Локализация вторичной перетяжки (sc), %
хромосом М+m Cv, % М+m Cv, % М+m Cv, % М+m Cv, %
I 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 34,4+1,13 16,7
II 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 - -
III 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 30,4+1,66 25,6
IV 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 53,0+1,38 72,9+ 1,66 71,5+1,83 52,1+1,53 9,4 8,8 9,9 8,8
V 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 31,8+1,52 32,3+1,56 53,4+1,72 72,4+1,31 24,9 20,4 10,7 8,3
VI 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 70,9+0,81 9,0
VII 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 70,9+0,81 9,0
VIII 11,6+0,07 10,5 4,5+0,03 9,8 46,5+0,18 6,7 53,1+1,03 51,9+2,13 9.1 8.2
IX 10,3+0,13 8,1 4,0+0,04 6,4 37,3+0,48 8,0 35,9+1,98 53,4+1,24 70,6+2,81 6,9 7,3 8,9
X 8,9+0,10 9,7 3,5+0,03 7,7 43,7+0,36 7,2 55,2+1,06 6,9
XI 8,9+0,10 9,7 3,5+0,03 7,7 43,7+0,36 7,2 35,1+1,62 65,3+0,88 16,0 5,0
XII 7,8+0,13 10,4 3,0+0,04 8,0 33,5+0,60 11,1 35,7+1,69 17,7
Средняя суммарная длина диплоидного набора хромосом 255,6 ± 3,16 мкм.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Хромосомный набор ели сербской (2п=24) содержит 10 пар (1-УШ, Х-Х1) метацентрических и 2 пары (IX, XII) субметацентрических хромосом. Добавочные хромосомы в кариотипе данного вида не обнаружены. У многих хромосом имеются вторичные перетяжки различной локализации. В интерфазных ядрах наблюдается от 1 до 14 ядрышек. В единичных случаях были отмечены хромосомные фрагменты, дицентрические хромосомы, кольцевые хромосомы, ацентрические кольца, надетая кольцевая хромосома, зарегистрирована миксоплоидия.
Авторы благодарят А.Б. Безделева за любезно предоставленные семена ели сербской.
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ № 11-04-00063.
БИБЛИОГРИФИЧЕСКИИ СПИСОК
Бобров, Е.Г. История и систематика рода Picea A. Dietr. / Е.Г. Бобров // Новости систематики высших растений. -Л.: Наука, 1971. - Т. 7. - С. 5-40.
Владимирова, О.С. Числа хромосом некоторых видов Picea и Larix / О.С. Владимирова, Е.Н. Муратова, Т.В. Кар-пюк // Ботанический журнал. - 2007. - Т. 91, № 5. - С. 781-782.
Гриф, В.Г. К методике описания кариотипов растений / В.Г. Гриф, Н.Д. Агапова // Ботанический журнал. - 1986. - Т. 71, № 4. - С. 550-553.
Карпюк, Т.В. Кариология рода Picea A. Dietr. в азиатской части ареала: Автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.05 / Т.В. Карпюк. - Красноярск, 2004. - 16 с.
Квитко, О.В. Применение молекулярно-цитогенетических маркеров для исследования кариотипов хвойных растений / О.В. Квитко, Е.Д. Бадаева, Е.Н. Муратова // Сохранение лесных генетических ресурсов Сибири. Материалы 3-го международного совещания. - Красноярск, 2011. - С. 71-72.
Кикнадзе, И.И. Функциональная организация хромосом / И.И. Кикнадзе. - Л.: Наука, 1972. - 211 с.
Муратова, Е.Н. Кариосистематика семейства Pinaceae Lindl. Сибири и Дальнего Востока: Автореф. дис. докт. биол. наук: 03.00.05 / Е.Н. Муратова. - Новосибирск, 1995а. - 32 с.
Муратова, Е.Н. Методики окрашивания ядрышек для кари-ологического анализа хвойных / Е.Н. Муратова // Ботанический журнал. - 19956. - Т. 80, № 2. - С. 82-86.
Муратова, Е.Н. В-хромосомы голосеменных / Е.Н. Муратова // Успехи современной биологии. - 2000. - Т. 120, № 5. - С. 452-465.
Муратова, Е.Н. В-хромосомы у представителей рода Picea: распространение и возможное значение / Е.Н. Муратова, Т.В. Карпюк, О.С. Владимирова, Т.С. Седельникова, О.В. Квитко // Факторы эксперим. эволюции организмов. - Сб. науч. тр. V межд. конф., посв. 200-летию со дня рожд. Ч. Дарвина и 125-летию со дня рожд. И. И. Шмальгаузена. - Киев: Логос, 2009. - Т. 7. - С. 36-41.
Правдин, Л.Ф. Методика кариологического изучения хвойных пород / Л.Ф. Правдин, В.А. Бударагин, М.В. Кру-клис, О.П. Шершукова // Лесоведение. - 1972. - № 2. -С. 67-75.
Седельникова, Т.С. Дифференциация болотных и суходольных популяций видов семейства Pinaceae Lindl.: Автореф. дис. ... д-ра биол. наук: 03.00.05 / Т.С. Седельникова.- Томск, 2008. - 35 с.
Челидзе, П.В. Морфофункциональная классификация ядрышек / В.П. Челидзе, О.В. Зацепина // Успехи современной биологии. - 1988. - Т. 105, Вып. 2. - С. 252-268.
Besendorfer, V. Karyotype analysis of Picea omorika (Pane.) Purk. in vivo and in vitro with a special emphasis on nucleolar organizer regions / V. Besendorfer, S. Siljak-Yakovlev, S. Mihaljevic, S. JeleniC, S. Jelaska, D. Papes // Cytogenetic Studies of Forest Trees and Shrubs - Review, Present Status, and Outlook on the Future. Proceedings of the Second IUFRO Cytogenetics Working Party S2.04-08 Symposium. - Graz, 2000. - P. 27-31.
Вока^ Z. Standardization of gymnosperm karyotypes using Picea omorica as an example / Z. Вока^ M. Idzojtic, H. Guttenberger // Forest Genetics. - 1996. - Vol. 3, N 3. - P. 127-136.
Brown, G.R. Preliminary karyotype and chromosomal localization of ribosomal DNA sites in white spruce using fluorescence in situ hybridization / G.R. Brown, V.
Amarasinghe, G. Kiss, J.B. Carlson // Genome. - 1993. -Vol. 36, N 2. - P. 261-267.
Brown, G.R. Molecular cytogenetics of the genes encoding 18s-5. 8s-26s rDNA and 5s rRNA in two species of spruce (Picea) / G.R. Brown, J.E. Carlson // Theoretical and Applied Genetics. -1997. -Vol. 95, № 1-2. - P. 1-9.
Goryachkina, O.V. Molecular cytogenetic analysis of Siberian Larix species by fluorescence in situ hybridization / O.V. Goryachkina, E.D. Badaeva, E.N. Muratova, A.V. Zelenin // Plant Systematics and Evolution. - 2013. - Volume 299, Issue 2. - P. 471-479.
Hizume, M. Karyomorphological studies in the family Pinaceae / M. Hizume // Mem. Fac. Educ. Ehime Univ. Ser. III. Natural Sci. - 1988. - Vol. 8, N 2. - P. 1-108.
Hizume, M. Variation of fluorescent chromosome band in Picea brachytyla var. complanata collected in Yunnan, China / M. Hizume, N. Kitazawa, Z. Cu, K. Kondo // La Kromosomo. Ser. II. - 1991. - N 63-64. - P. 2149-2158.
Lakusic, R. Ecological and genetical study of Picea omorica (Pancic) Purkine / R. Lakusic, S. Medjedovic. Proceedings of Symposium of South Eastern Dinarides flora and vegetation. Tokovi, 1974. - P. 101-110.
Papes, D. Fluorescent chromosomal banding in Picea omorica and P. abies / Papes D., Jelenic S., Cerbah M., Siljak-Yakovlev S. // Cytogenetic Studies of forest trees and shrub species. Proceedings of the First IUFRO Cytogenetics Working Party S2.04-08 Symposium. - Zagreb, 1997. -P. 103-109.
Santamour, F.S. New chromosome counts in Pinus and Picea / F.S. Santamour // Silvae Genetica. - 1960. - Bd 9, Hf. 3. - S. 87-88.
Shibata, F. Comparative FISH analysis of 11 Picea species / F. Shibata, M. Hizume // Cytologia. - 2008. - Vol. 73, № 2. - P. 203-211.
Siljak-Yakovlev, S. Nuclear DNA content, base composition, heterochromatin and rDNA in Picea omorika and Picea abies / S. Siljak-Yakovlev, M. Cerbah, J. Coulaud, V. Stoian, S. Brown, V. Zoldos, S. Jelenic, D. Papes // Theoretical and Applied genetics. - 2002. - Vol. 104, N 203. - P. 505-512.
Siljak-Yakovlev, S. Fluorescence and molecular analysis of Picea omorica (Pancic) Purkine chromosomes / S. Siljak-Yakovlev, M. Cerbah, D. Ugarkovic, S. Jelenic, D. Papes // Abstracts of the First IUFRO Cytogenetics Working Party S2.04-08 Symposium. - Brijuni Nat. Park, 1993. - P. 22.
Поступила в редакцию 15.06.14 Принята к печати 20.12.14
