CC BY
91
УДК 615.225: 238
КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ СОЧЕТАНИЙ РЕЗВЕРАТРОЛА С ОСНОВНЫМИ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ
Белгородский
государственный
университет
В.И. КОЧКАРОВ Л.М. ДАНИЛЕНКО ОА КУЗЬМИЧЕВА
У лабораторных животных при моделировании дефицита оксида азота введением ингибитора NO-синтазы L-NAME изучались миокардиальные нагрузочные пробы (адренореактивность, нагрузка сопротивлением), содержание нитрит ионов сыворотки крови, экспрессия эндотелиальной NO синтазы. Выявлена активизация кардиопротектив-ных эффектов эналаприла, лозартана, амлодипина, ииндапамида и небиволола при сочетанном их введении c резвератролом.
e-mail: kochkarov@bsu.edu.ru
Ключевые слова: L-NAME, резвератрол, эналаприл, лозартан, индапамид, амлодипин, небиволол.
Весьма актуальной задачей современной кардиофармакологии является изыскание кардиопротективных средств. В этой связи очевидную фармакотерапевтиче-скую перспективность представляет вещество резвератрол (3, 5, 4'-тригидрокси-транс-стильбен). Именно данному веществу отводится роль ключевого звена «Французского парадокса». Как показали результаты эпидемиологического исследования уровень сердечно-сосудистых заболеваний населения Франции ниже, чем в других развитых странах, и этот «парадокс» обусловлен регулярным употреблением населения Франции красного вина, содержащего резвератрол. Также, многочисленные экспериментальные исследования выявили у резвератрола гиполипидемическую, антиоксидантную, эстрогенную, антиагрегационную активности, и кардиопротективные и эндоте-лиотропные эффекты в опытах in vitro. [5, 6, 7].
В связи с вышеизложенным целью настоящего исследования явилось изучение кардиопротективных свойств резвератрола в сочетании с основными антигипертензивными препаратами условиях дисфункции эндотелия вызванной блокадой фермента еNOS.
Опыты выполнены на самцах белых нелинейных крыс массой 200-300 г. Ингибитор NO-синтазы N-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир (L-NAME, Sigma) вводился внутрибрюшинно один раз в сутки в дозе 25 мг/кг в объеме 1 мл/кг в течение 7 дней. (п=10 животных). Животным интактной группы вводился физиологический раствор NaCl в том же объеме (п=10 животных) [4].
Резвератрол производства Greensyn™ (Guangzhou).,Ltd КНР вводили внутри-брюшинно в дозе 2 мг/кг/сут., которая была определена нами, учитывая максимальное содержание его в экстраординарных сортах вин (10 мкмоль/л, 600 мл/сут.). Согласно литературных данных именно в этой дозе резвератрол, проявляет максимальные эндо-телио- и кардиотропные эффекты [5, 6, 7]. (п=10 животных).Антигипертензивные препараты вводились внутрижелудочно в дозах: эналаприл (0,5 мг/ кг), лозартан (6 мг/ кг), амлодипин (0,5 мг/кг), индапамид (2 мг/кг); небиволол (0,5 мг/кг) в сутки соответственно. (п=10 в каждой группе животных). При сочетанном применении резвератрола с антигипертензивными препаратами использовались те же дозы и пути введения (n=10 в каждой группе животных).
Исследование показателей гемодинамики в группах животных проводили под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) посредством введения в сонную артерию катетера регистрировали систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС с помощью датчика P23ID "Gould” США, АЦП L-154 и компьютерной программы “Bioshell.
Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании посредством зондирования левого желудочка и регистрацией на аппаратно-программном комплексе «Bioshell». Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида г10-5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г), и нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек) [3].
В качестве биохимических маркеров эндотелиальной дисфункции нами определялись уровень еЫОБ в аорте крыс, и уровень суммарного нитрита в сыворотке крови крыс [1, 2]. При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.
Моделирование патологии блокадой ЫО-синтазы, аналогом 1_-аргинина — 1_-ЫАМБ, приводила к артериальной гипертензии (АГ) (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9 мм рт. ст.). Коррекция данной АГ монотерапией вышеуказанными препаратами, в том числе и резве-ратролом в разной степени снижала АД, но не в одном случае не приводила его уровень к целевым значениям. Вместе с тем результаты комбинированной терапии резвератрола с данными препаратами обнаружила положительное фармакодинамическое взаимодействие. При чем, использование сочетаний резвератрола с лозартаном и резвератрола с ам-лодипином приводило значения АД к целевому уровню. Значения соответственно составили САД - 144,1±4,9, ДАД - 117,2±3,4 и САД - 166,2±7,3, ДАД - 138,8±5,6.
В дальнейшем согласно протокола исследований нами было проведено изучение функционального состояния миокарда с помощью нагрузочных проб.
Проба на адренореактивность у животных с 1_-МАМБ-индуцированным дефицитом оксида азота на фоне применения монотерапии и комбинаций резвератрола с антигипер-тензивными препаратами обнаружила снижение максимальных цифр левожелудочкового давления. Однако сравнительный анализ показал, что достоверные значения наблюдаются при использовании комбинаций резвератрола с лозартаном и индапамидом по сравнению с монотерапией этими препаратами. У интактных животных - 199,2+8,3, у животных с 1_-ЫАМ Б-индуцированном дефицитом оксида азота - 247,3±4,8, у резвератрола - 211,9±12,3, лозартан - 242,7±4,7, лозартан + резвератрол - 208,4±7,5, индапамид - 254,8±7,3, индапа-мид + резвератрол - 217,3±8,9мм рт.ст. (табл.).
Таблица
Влияние эналаприла, лозартана, амлодипина, индапамида и небиволола в комбинации с резвератролом на функциональные и биохимические показатели при моделирования дефицита оксида азота введением 1_-нитро-аргинин-метилового эфира (Ь-МДМБ) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно
(в мм рт. ст., М±т, п=10)
Г руппы животных АДр еNOS, в % от контроля NOx total, мкМоль
Интактные 199,2±8,3 72,9±3,8 114,1±10,5
L-NAME 247,3±4,8* 21,4±4,7* 61,2±8,5*
L-NAME +резвератрол 211,9±12,3** 30,2±3,6** 107,2±5,3 **
L-NAME +эналаприл 216,2±10,8** 42,2±3,6** 67,8±7,3
L-NAME+эналаприл+ резвератрол 210,9+13,6**х 39,1±3,3** 97,6±7,5**х
L-NAME+ лозартан 242,7±4,7 43,3±3,8** 68,9±5,5
L-NAME +лозартан+ резвератрол 208,4±7,5**х 37,3±3,5**х 88,5±6,3 х
L-NAME+амлодипин 201,3±14,4** 45,7±6,7** 61,3±3,7**
L-NAME+амлодипин+ резвератрол 201,0±12,5** 49,8±5,3** 73,7±8,1**
L-NAME+индапамид 254,8±7,3 30,5±3,2 57,3±2,7
L-NAME+индапамид+ резвератрол 217,3±8,9**х 35,7±3,6** 65,9±4,7**
L-NAME +небиволол 206,6±15,6** 51,7±3,5** 99,1±7,7**
L-NAME +небиволол + резвератрол 215,4±14,2** 50,7±3,2** 112,8±5,5**
Примечание: 1) АДр данные пробы на адренореактивность представлены в абсолютных значениях; 2) eNOS — экспрессия эндотелиальной NO-синтазы; 3) NO% total — концентрация нитрит-ионов в сыворотке крови; 4)* — при р < 0,05 в сравнении с интактной группой; 6) ** — при р < 0,05 в сравнении с группой — L-NAME-дефицита NO; х — р < 0,05 в сравнении с монотерапией.
При проведении пробы на нагрузку сопротивлением сочетанное использование резвератрола оказалось предпочтительнее монотерапии. Значение ЛЖД к 25 секунде пе-
режатия восходящей аорты в группе с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита NO, составило 66,0%±2,3% по отношению к 5-й секунде, тогда как у интактных животных 83,6±2,1%. Наилучшей эффективностью обладали сочетания резвератрола с эна-лаприлом (89,1±4,3%) и лозартаном (81,7±6,2%). Значения остальных групп животных занимали промежуточное положение между интактными и животными с патологией.
Результаты проведенных нагрузочных проб указывают на сохранение значительного миокардиального резерва у животных, леченных комбинацией резвератрола с антигипертензивными препаратами по сравнению с монотерапией.
Исследование биохимических маркеров в сериях экспериментальных животных, подтвердили увеличение кардиопротективной активности препаратов при сочетанном использовании с резвератролом.
Показатель экспрессии еКОБ под воздействием указанных препаратов основных антигипертензивных групп достоверно увеличивался, в наибольшей степени у амло-дипина и небиволола (таблица).
Концентрация нитрит-ионов (NOx total) наиболее значимо увеличивалась в группе с резвератролом, комбинаций резвератрола с эналаприлом, лозартаном и неби-вололом, а в остальных группах прирост был ниже.
Выводы
1. Резвератрол в дозе 2 мг/кг проявляет выраженное кардиопротективное действие на модели L-NAME- индуцированного дефицита оксида азота.
2. Выявлено положительное фармакодинамическое взаимодействие при сочетанном применении резвератрола с эналаприлом, лозартаном, амлодипином, индапа-мидом и небивололом при данной модели патологии.
Литература
1. Марков, Х.М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия / Х.М. Марков // Кардиология. - 2005. - Т. 45, №12. - С. 62-80.
2. Метельская ВА Возможности лабораторной оценки NO-продуцирующей функции эндотелия / Клинич. и лаб. диагностика. - 2004. - №9. - С. 86.
3. Пичугин, В.В. Биохимические и функциональные аспекты экспериментальной терапии расстройств кровоснабжения и биоэнергетики миокарда в острой стадии регионарной ишемии сердца: Автореф. дис. д-ра мед. наук./ В.В.Пичугин. - М., 1979. - 25 с.
4. Покровский М.В. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М.В.Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г.Покровская и др. // Кубанский научномедицинский вестник. Краснодар. - 2006. - №10. - С.72-77.
5. Jager, U. Relaxant effect of trans-resveratrol on isolated porcine coronary arteries / U. Jager, H. Nguyen-Duong //Arzneimittelforschung. - 1999. - Vol. 49 - P. 207-211.
6. Leikert, J.F. Red Wine Polyphenols Enhance Endothelial Nitric Oxide Synthase Expression and Subsequent Nitric Oxide Release From Endothelial Cells / J. F. Leikert, T. R. Rathel, P. Wohlfart // Circulation.- 2002 -Vol. 106, N13. - P. 1614 - 1617.
7. Naderali, E.K. Resveratrol induces vasorelaxation of mesenteric and uterine arteries from female guinea-pigs / E.K. Naderali, P.J. Doyle, G. Williams //Clin. Sci. - 2000 - Vol. 98 - P. 537-543.
CARDIOPROTECTIVE EFFECTS OF COMBINATIONS OF REZVERATROL WITH MAJOR ANTIHYPERTENSIVE DRUGS IN THE EXPERIMENTAL ENDOTHELIAL DYSFUNCTION
In laboratory animals in nitric oxide deficiency modelling introduction of NO-syntase inhibitor L-NAME functional and biochemical markers endothelial dysfunctions - factor endothelial dysfunctions, myocardial loading tests (adrenoreactivity, loading by resistance), the nitrite ions content in blood whey, expression endothelial NO-syntase investigated. Cardioprotective effects activization of enalapril, lozartan, amlodipine, indapamide and nebivolol is revealed in their introduction in combination with rezveratrole.
Keywords: L-NAME, resveratrol, enalapril, lozartan, indapamid, am-lodipin, nebivolol.
V.I. KOCHKAROV LM DANILENKO О.А. KUZMICHEVA
Belgorod State University e-mail: kochkarov@bsu.edu.ru
