CC BY
3
ризующиеся сигмальными отклонениями, получили при вмешательствах в программу другой характер. Характеристика этих кривых «без освоения» сохранилась и после годичного повторения серии исследований.
Ввиду того что в младшем школьном возрасте значительно выделялась группа детей 1-го класса (детей шестилетнего возраста), нас интересовало, как будет отражаться работа детей с реактометром в функциональной системе артериальной моторики. После завершения серии освоения мы сравнивали у детей 1-го и 2-го классов плетизнографические записи при работе с реактометром. Для оценки этой записи применяли критерии, разработанные Burch. При сравнении кратности наличия всех выбранных знаков пле-тизмограммы в период спокойствия не проявилось статистически достоверных различий между обеими группами детей. В записи в период работы с реактометром мы нашли у детей из 2-го класса спорадическую характеристику формирующихся стереотипных отзывов. В записях этого периода у обеих групп преобладали знаки, характерные для неосвоенной и даже стрессовой нагрузки.
Наши данные показывают, что с увеличением возраста детей сокращается время, необходимое для манифестации ответа на световые сигналы. Динамика освоения в каждой из наблюдаемых возрастных групп имеет аналогичный характер. При наличии знаков, характеризующих освоение простой деятельности, в функциональных сферах детей младшего школьного возраста остаются следы выраженной ориентировочной реакции и черты неосвоенной и даже стрессовой нагрузки.
Выводы]
1. Реактивность детского организма в школьном возрасте можно охарактеризовать показаниями ЭЭГ при сопоставлении с показателями школьной зрелости, при помощи скорости проведения возбуждения в нервной ткани в соответствии с тестами статической и динамической координации и тестами тонкой моторики, а также при помощи показателей освоения внешних сигналов.
2. Установлена достоверная связь между результатами теста школьной зрелости и записью параметров ЭЭГ; доказана зависимость выполнения отдельных моторных тестов от скорости проведения активности возбуждения в локтевом нерве; показана зависимость динамики освоения световых сигналов от возрастных особенностей детей младшего школьного возраста.
ЛИТЕРАТУРА. Brown I.D., Poult o'n Е. С., Ergonomics, 1961, v. 4, p. 35. — В u гс h G. E., Digital Plethysmography. New York, 1954. -Huf-chmidt H., Ann. paediat. (Basel), 1963, v. 200, p. 93. — К о m ä r e k L., Pro-vaznikK-, Horäikovä D., Hodnoceni motorickeho vyvoje Deti z materske-skoly. Praha, 1973. c. 29. — О s e r e t s k i N.J., Z. Kindeheilk., 1925, Bd .30, S. 300.
Поступила 27/XI 1974 r
УДК 613.155.3+614. 7]-07:612.35
Канд. мед. наук Т. А. Попов
К ВОПРОСУ В ВЫБОРЕ МЕТОДОВ ДЛЯ'ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ ПРИ ГИГИЕНИЧЕСКОМ НОРМИРОВАНИИ
Институт гигиены, охраны труда и профессиональных заболеваний — Центра гигиены, София
Представители советской школы профилактической токсикологии внесли значительный вклад в определение диагностической ценности печеночных функциональных тестов. В опытах И. П. Улановой, Е. Я. Арзяе-вой, В. Е. Миклашевского и соавт., В. Н. Тугариновой и В. Е. Микла-
шевского, И. П. Улановой и Г. И. Поздняковой, Г. Н. Красовского и соавт., С. Н. Черкинского и Е. Н. Кутепова и др. сравнивалась чувствительность апробированных показателей основных функций печени. Ю. С. Каган и соавт., С. С. Гребенюк исследовали хроническое действие пестицидов на функциональное состояние печени. Каждым из названных выше авторов изучалось от 5 до 15 «печеночных тестов». К сожалению, возможности энзимной диагностики не использовались или использовались ограниченно. Вместе с тем последние годы характеризуются ростом в логарифмическом масштабе ферментных методов в лабораторной диагностике. Успехи ферментной диагностики при различных интоксикациях настолько значительны, что «вызвали особый интерес среди широкого круга ученых к проблеме биохимических механизмов действия ядов» (А. А. Покровский).
За последние 4—5 лет проведен ряд исследований, посвященных изменениям активности ферментов при экспериментальной гепатопатии (Л. Л.Гро-машевская и соавт., 1968, 1970; А. А. Покровский и соавт.; А. А. Покровский; Dinman и Bernstein; Allison; Platt и Cocrill; Idéo и соавт., 1970, 1971, и др.). Особого внимания заслуживают специфические для печени ферменты (С. Данев). Активность орнитинкарбамилтрансферазы (ОКТ) определялась только в исследованиях Ю. С. Кагана и соавт. Нет никаких данных о диагностической ценности классической левцинаминопептидазы (ЛАП), хотя это органоспецифический фермент, активность которого явилась более чувствительным показателем при инфекционном гепатите, чем изменения аминотрансфераз (Haschen и соавт.).
В настоящем сообщении приведены результаты исследований некоторых показателей, характеризующих функциональное состояние печени при пероральной интоксикации классическим гепатотропным ядом — четырех-хлористым углеродом (CCI 4). Эксперимент провели на 300 беспородных крысах-самцах и самках весом 180—200 г. Группы животных состояли из 6—8 особей. Значимость выявленных различий оценивали по критерию t Стьюдента. Провели 2 серии опытов. В первой создавали разные уровни поражения печени путем ежедневного введения яда в течение 8 дней в дозах 1,6 8,40 и 200 мг/кг в разведении с подсолнечным маслом. Контрольная группа животных получала равное количество подсолнечного масла. Животных обследовали на 1-й, 2-й, 4-й и 8-й дни (примерно 2 ч после очередной затравки). Эти сроки выбраны на основании литературных данных (И. В. Са-ноцкий и соавт.; Н. И. Габриэлян; Е. И. Люблина и соавт., и др.) о фазовых изменениях ответных реакций организма в начале хронического воздействия ядов в минимальных дозах и концентрациях.
Во II серии 2 опытные группы животных получали СС14 в дозах соответственно 8 и 40 мг/кг в течение 60 дней. Контрольным животным вводили подсолнечное масло. Исследования проводили на 15-е сутки (для выявления поздней компенсации), а также в «классические» сроки — 30-е и 60-е сутки от начала интоксикации.
В обеих сериях опытов функциональное состояние печени оценивали по экскреторной функции — с помощью пробы с нагрузкой бромтнмолового синего (Т. А. Попов, 1971) и по содержанию холевой кислоты в желчи; ферментативной функции — по активности многократно исследованных глутамат-оксалатной (СГОТ) и глутамат-пируватной (СГПТ) трансаминаз и щелочной фосфатазы (ЩФ), а также по активности малоизученных (ОКТ) или вообще не исследованных (ЛАП) органоспецифических ферментов. Обезвреживающую функцию определяли по продолжительности гексена-лового сна (80 мг/кг внутрибрюшинно); белоксинтетическую функцию — по содержанию общего белка в сыворотке крови и соотношению белковых фракций; жировую функцию — по электрофоретическому распределению липопротеинов.
Для оценки способности печени элиминировать из крови чужие организму вещества использовали нагрузку бромтимолового синего (производство «Chemapol», ЧССР). Полученные нами раньше результаты (Т. А. По-
___2
____3
аео
/24 8 и 30 60
Срок интоксикации (6 сутках)
I
0.50 % 0,40 I 0.30 1 0.20 § 0.10 Б
4
24 8 15 30 60
Срок интоксикации (В сутках)
Рис. 1. Динамика коэффициентов ретенции БТБ при пероральной интоксикации четырех хлористым углеродом. 1 — 200 ыг/кг; 2 — 40 кг/кг; 3 — 8 ыг/кг; 4 — 1,6 мг/кг; 5 — контроль.
Рис. 2. Динамика содержания холевой кислоты в желчи белых крыс при пероральной интоксикации четыреххлорис-тым углеродом.
Обозначения те же. что и на рнс. 1.
пов, 1971) показали, что этот метод не уступает по степени чувствительности апробированному тесту с нагрузкой бромсульфалеином. Из рис. 1 видна четкая зависимость «доза —эффект». Известно, что повторное поступление химических веществ в организм вызывает возникновение 2 диалектически связанных противоположных явлений — функциональной кумуляции и привыкания. При равных других условиях преобладание действия (кумуляция) или противодействия (адаптация) зависит от дозы токсического агента. Их взаимодействие обусловливает фазовость реакции при повторном поступлении. Так, еще в первые часы после интоксикации (1-й день) обнаруживается декомпенсация экскреторной функции на всех уровнях воздействия СС14 (при дозе 1,6 мг/кг, Я=0,05). На 2-й и особенно 4-й день компенсаторные реакции превалируют. Следует «обострение» (8-й день) и опять «ремиссия» (15-й день) вплоть до сглаживания различий при воздействии дозы 8 мг/кг. Последующий восходящий ход кривой при той же дозе дает основание думать о срыве адаптации. Ход кривой при дозе 40 мг/кг примерно такой же, причем при всех сроках исследования ретенция бромтимолово-го синего сохраняется на более высоком уровне.
Холевая кислота, составляющая 80% всех желчных кислот, считается единственным компонентом желчи, образующимся исключительно в полигональных клетках печени (А. Фишер, 1961). Тот факт, что изменения в содержании холевой кислоты явились самым чувствительным показателем функционального состояния печени в исследованиях Н. И. Габриэляна, послужил основанием для использования этого теста. Желчь получали из общего желчного протока путем дренирования его полиэтиленовой канюлей.
Из рис. 2 виден фазовый характер изменений содержания холевой кислоты в желчи. Самая высокая доза (200 мг/кг) вызывает четко выраженную функциональную кумуляцию (накопление эффекта) между 2-м и 4-м днем с последующим равновесием (8-й день). Значительное подавление экскреции холевой кислоты, однако, дает основание думать, что продолжение интоксикации привело бы к срыву равновесия с последующим углублением изменений. Такое предположение подтверждается динамикой кривой при дозе 40 мг/кг. Как видно, за стадией первичной декомпенсации (2—4-й день) следует продолжительная компенсация патологического процесса (8—15-й день, Р>0,05) и опять декомпенсация, сохраняющаяся до конца эксперимента. Статистически достоверное снижение экскреции холевой кислоты в начале и конце исследований при воздействии СС14 в дозе 8 мг/кг можно рассматривать как первнчную декомпенсацию (2-й день) и истощение компенсаторно-приспособительных возможностей организма (60-й день). Отсюда следует, что отсутствие достоверных различий на 8, 15 и 30-е сутки было за счет напряжения компенсаторных механизмов. Повышенная секреция холевой кислоты при воздействии СС14 в дозе 1,6 мг/кг
124 8 /5 00 60
Срок интоксикации (6 сутках)
Рис. 3. Динамика активности левцина-минопептидазы в сыворотке крови белых крыс при пероральной интоксикации че-тыреххлористым углеродом. Обозначения те же, что н на рнс. I.
(8-й день), вероятно, служит проявлением адаптации к повторному воздействию химического агента и связанной с нею стимуляцией защитных механизмов.
Большая популярность определения активности трансаминаз в сыворотке (СГОТ и СГПТ) является причиной их выбора в качестве эталонов сравнения с другими методами энзимной диагностики функционального состояния печени: с ОКТ (Truhaut и соавт.), с аминопептидазами (Р. Хашен), с рядом ферментов и изоферментов (Idéo и соавт., 1971). Такая жероль отведена в значительной мере и ЩФ (Jacobs; Idéo и соавт., 1971). Хотя ее значение для диагностики токсической гепатопатии оспаривается некоторыми авторами (В. А. Тугаринова и В. Е. Миклашевский, 1964), данные цитированных выше авторов, как и ряда других (Т. А. Попов; С. С. Гребенюк; Ю. С. Каган и соавт., и др.), свидетельствуют о том, что по степени чувствительности этот показатель не уступает трансаминазам. СГОТ, СГПТ и ЩФ включены во все энзимные костеляции для диагностики повреждения печени (С. Данев).
Динамика активности СГОТ, СГПТ и ЩФ в условиях нашего опыта была примерно одинакова.
Доза 200 мг/кг вызывает декомпенсированную патологию с накоплением эффекта. На фоне декомпенсации клеточного пермеабилитета при воздействии дозы 40 мг/кг зарегистрировано 2 «ремиссии» — на 4-й и 15-й дни (при СГПТ — на 8-й и 15-й дни). Особый интерес представляет ход кривых при воздействии дозы 8 мг/кг. После первичной декомпенсации (при СГОТ и ЩФ на 2-й день, при СГПТ на 4-й день) следует волнообразный ход кривых, что подтверждает сказанное И. В. Саноцким о чередовании компенсации и декомпенсации патологического процесса. Вместе с тем полученные результаты подтверждают, что существует реальная возможность принять такую дозу как недействующую при исследовании в классические сроки (конец каждого месяца).
Доза 1,6 мг/кг, бесспорно, считается подпороговой по этим показателям
ОКТ является ферментом мочевинного цикла Кребса и катализирует превращение орнитина в цитрулин. Исключительная локализация в клетках паренхимы печени обусловливает его органоспецифичность (Zelvan). Митохондриальная локализация ОКТ дает возможность судить о топической диагностике печеночных повреждений (С. Данев). Этим можно объяснить более поздние и более стойкие пиковые значения активности ОКТ по сравнению с цитоплазматическими ферментами в наших исследованиях. Кривая активности ОКТ на всех исследованных уровнях воздействия СС14 напоминает кривые активности СГОТ, СГПТ и ЩФ (хотя и сдвинута во времени). Дозу 8 мг/кг можно считать «критическим уровнем», а дозу 1,6 мг/кг — подпороговой.
В отличие от ОКТ активность второго исследованного нами органо-специфического фермента (ЛАП) явилась очень чувствительным показателем функционального состояния печени. Как уже было отмечено выше, мы исследовали «классическую» левцинаминопептидазу (КФ 3.4.1.1), которую часто путают с аланинаминопептидазой (КФ 3.4.1). Последнюю обозначают тоже как ЛАП. «Классическая» ЛАП — органоспецифический энзим печени, тогда как аланинаминопептидаза является органоспецифической для почек.
Показатель
Нагрузка БТБ
Содержание холевой кислоты в желчи Активность СГОТ Активность СГПТ
Активность ШФ в сыворотке крови Активность ЛАП в сыворотке крови Активность ОКТ в сыворотке крови Продолжительность гексеналового сна Содержание общего белка в сыворотке крови
Распределение белковых фракций Распределение липидных фракций
Пороговые дозы СС14 по изменению различных 3 РИС- ^ ВИДНО, ЧТО
показателей функционального состояния печени при СС14 В дозе 200 МГ/КГ ВЫ-2-месячной пероральной интоксикации белых крыс зывает выраженную куму-
- ляцию эффекта (повыше-
п^аГО(Ввая ние активности ЛАП на *"^кг> 8-й день примерно в 9 раз).
Следует подчеркнуть, что 1,6~8 на фоне значительного ' 8 действия дозы 40 мг/кг 8 (2, 4 и 60-й дни) выявилась 8 почти полная компенса-цияна30-е;сутки(Р>0,05). 8 Хотя в общем динамика активности ЛАП при дейст-
200 вии СС14 в дозе 8 мг/кг ооп
™ напоминает кривые, полученные при определении активности других энзимов, существуют и значительные различия: во-первых, в степени выраженности декомпенсации (более чем на 200%ша 2-й и 60-й дни), а во-вторых, во времени адаптации (15-й день). Эти факты дают основание считать, что истинный критический уровень активности ЛАП ниже 8 мг/кг. Доказательством этого служит выявленная на 2-е сутки декомпенсация при действии дозы 1,6 мг/кг.
О состоянии детоксической функции мы судили по продолжительности гексеналового сна. Продолжительность сна оценивали во времени восстановления бокового рефлекса. Следует подчеркнуть значение точного учета конца сна, так как наш опыт показывает, что это не всегда соблюдается. Результаты исследования показали заметные ухудшения и «ремиссии» в способности печени обезвреживать гексенал. Накопление эффекта в первые 2 дня интоксикации привело к удлинению сна на 700% (доза 200 мг/кг) и 300% (доза 40 мг/кг).
Особый теоретический интерес представляет сильно выраженная ремиссия на 4—8-й день, приводящая к полной адаптации при дозе 40 мг/кг (Р>0,05, 8-й день). Повторное поступление привело к срыву адаптационных механизмов (15-й день и до конца исследований).
Критический уровень действия СС14 по обезвреживающей функции печени соответствует дозе 8 мг/кг. Доказательством этого служат первичная декомпенсация в начале интоксикации (1—2-й день), быстрое восстановление (4-й день) и волнообразный ход кривой (с «ремиссиями» и «обострениями») до конца опыта.
Компенсаторные возможности белоксинтезирующей функции печени исключительно велики. Этим объясняется тот факт, что ряд авторов обнаруживает нарушения только при воздействии высоких доз (Ю. С. Каган и соавт., и др.).
В условиях нашего опыта не выявлено статистически достоверных отличий от контроля как в содержании общего белка, так и в распределении белковых фракций. Несущественными (Р>0,05) были и различия при определении липидных фракций.
Пороговые дозы СС!4 по всем использованным нами показателям представлены в таблице. Как видно из таблицы, самые низкие пороговые дозы определены по содержанию холевой кислоты в желчи и по активности ЛАП в сыворотке (1,6 мг/кг). Находящиеся на грани достоверности (/>2*0,05) нарушения в клиренсе БТБ при воздействии дозы 1,6 мг/кг наряду с выраженной задержкой индикатора при дозе 8 мг/кг дают основание считать, что критический уровень по этому показателю находится в интервале 1,6—8 мг/кг.
Выводы
1. Для ранней и точной диагностики функционального состояния печени при вызванных экспериментально повреждениях необходимо оценить 2 основные функции — экскреторную и ферментную. При этом на современном этапе предпочтение следует отдать нагрузке бромсульфалеином (или БТБ), определению содержания холевой кислоты в желчи и активности ЛАП в сыворотке.
2. При использовании таких широко известных показателей функциональной диагностики печени, как активность СГОТ, СГПТ и ЩФ, а также распределение белковых фракций, надо иметь в виду, что они менее чувствительны.
3. Изучение выбранных показателей функционального состояния печени в хронических экспериментах лучше всего проводить на 1, 2, 4, 8 и 15-е сутки (или хотя бы на 2, 4 и 15-е) и в конце каждого месяца. Такая схема позволяет выявить первичные реакции организма при воздействии химических веществ в минимальных дозах (концентрациях).
4. Исследование нескольких уровней доз в хронических экспериментах, поставленных с целью установления предельно допустимых концентраций, открывает возможность более полной интерпретации полученных результатов и дает больше уверенности в пороговое™ выявленных изменений.
ЛИТЕРАТУРА. АрзаеваЕ. Я. Гиг. и сан., 1966, № 3, с. 24.— Габриэлян Н. И. Изучение внешнесекреторной функции печени при воздействии профессиональных веществ в минимальных дозах и концентрациях. Дисс. канд. М., 1970. — Гребенюк С. С. В кн.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений. Киев, 1970, в. 8, с. 166. — Громашевская Л. Л. В кн.: Проблемы медицинской энзимологии. М., 1970, с. 195. — Громашевский Л. Л. и др. Бюлл. экспер. биол., 1968, № II, с. 42. — Д а и е в С. В кн.: Новости в медицинс-ката техника и диагностика. София, 1972, т. 2, с. 115. — К а г а и Ю. С. и др. Гиг. и сан., 1970, № 9, с. 36.—Люблина Е. И. и др. Адаптация к промышленным ядам как фаза интоксикации. Л., 1971.—Миклашевский В. Е. и др. В кн.: Промышленные загрязнения водоемов. М., 1967, в. 8, с. 272. — Покровский А. А. В кн.: Проблемы медицинской энзимологии. М., 1970, с. 26.—Саноцкий И. В. и др. В кн.: Методы определения токсичности и опасности химических веществ. М., 1970, с. 29. — Саноцкий И. В. В кн.: Научные основы современных методов гигиенического нормирования химических веществ в окружающей среде. М., 1971,с. 5. — Тугарин о в а В. Н., Миклашевский В. Е. В кн.: Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточными водами. М., 1964, в. 6, с. 301. —Они же. В кн.: Моделирование, методы изучения и экспериментальная терапия патологических процессов. М., 1967, ч. 3, с. 75. — У л а н о в а И. П. В кн.: Гигиена и токсикология пестицидов и клиника отравлений. Киев, 1965, с. 518. — Уланова И. П., Позднякова Г. И. В кн.: Токсикология новых промышленных химических веществ. Л.,
1967, в. 9, с. 43. — Фишер А. Физиология и экспериментальная патология печени. Будапешт, 1961. — Хашен Р. В кн.: Проблемы медицинской энзимологии. М., 1970, с. 210. — Черкинский С. Н., КутеповЕ. Н. В кн.: Промышленные загрязнения водоемов. М-, 1969, в. 9, с. 246. — А 1 1 i s о п А. С. В кн.: P. Campbell (Ed) Symposium on the Interaction of Drugs and Subcellular Components in Animal Cells. London, 1968, p. 225. — D i n m a n B. D., Berstein L. A., Arch, environm. Hlth.,
1968. v. 16, p. 770. —Haschen R. J. et al. Z. klin. Chem. klin. Biochem., 1968, Bd 6, S. 11. — I d é о G. et al. Experientia, 1970, v. 26, p. 487. — I d é о G. et al. Enzyme, 1971, v. 12, p. 242.—J a с o b s W., Clin. chim. Acta, 1972, v. 38, p. 49.— Platt D.S., Cocrill B. L., Biochem. Pharmacol., 1969, v. 18, p. 445. — T r u-haut R. et al. Arch. Mal. Prof., 1967, v. 28, p. 425. — Z e 1 v a n G., Ann. biol. clin., 1964, v. 22, p. 334.
Поступила 29/X 1974 г.
