CC BY
18
Материалы и методы. В настоящем исследовании мы анализировали мутации 6 меланоцитарных невусов и 29 клинических образцов меланомы. Геномную ДНК выделяли из свежезамороженной ткани опухоли или парафиновых срезов. Анализ мутаций и полиморфизмов в гене CDKN2A проводили с помощью секвенирования на платформе GS Junior (454/Roche). Анализ полиморфизмов rs1805006 (D84E), rs11547464 (R142H), rs1805007 (R151C), rs1805008 (R160W) и rs1805009 (D294H) в гене MC1R проводили с помощью технологии биологических микрочипов.
Результаты. В меланоцитарных невусах были обнаружены терминальные мутации в CDKN2A A148T, G63R. В образцах меланомы мутации и полиморфизмы в гене CDKN2A обнаружены не были. В двух образцах меланомы были обнаружены полиморфизмы rs1805006 (D84E), rs1805007 (R151C), что согласуется с литературными статистическими данными. Заключение. Дальнейшие исследования с использованием секвенирования могут помочь в поиске новых патогенных мутаций на разных стадиях развития опухоли и новых мишеней для терапии. Также, планируется расширить панель диагностических маркеров для анализа нарушений в генах метаболизма меланина за счет новых полиморфизмов. Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (Грант № 14-35-00107).
Современные показания к первичному эндовитреальному удалению меланомы хориоидеи
А. А. Яровой', И.М. Горшков', Е.Н. Коробов', В. А. Яровая' Место работы: 'ФГАУ МНТК «Микрохирургия глаза им. С. Н. Федорова» МЗ РФ e-mail: egorkorobov'99'@mail.ru
Цель. Представить современный подход к первичному эндовитреальному удалению МХ на основе метаанализа литературных данных и собственных результатов. Материалы и методы. Поиск публикаций по первичной эндорезекции МХ был осуществлен в базе данных PubMed, SCOPUS, Umedp до мая 2017 г. Для включения статей в анализ были разработаны критерии включения и исключения. Из 96 статей, выявленных при первоначальном поиске, 9 соответствовали критериям и были включены в метаанализ. Количество наблюдений в статьях варьировало от 13 до 71 пациента и составило суммарно в 9 статьях 302 пациента. Наши собственные данные получены на основании 22 пациентов с МХ, которым проведено первичное эндовитреальное удаление опухоли в МНТК МГ в промежуток времени с 2011 по 2017 гг. Из них 12 (54,5%) мужчины и 10 (45,5%) женщин. Возраст больных по данным литературы был от 21 до 87 лет (в среднем 55,5±5,1), 56% пациентов, включенных в исследования, составили мужчины. Возраст наших больных был от 25 до 84 лет (в среднем 55,36±14,05 лет). Высота и максимальный диаметр основания опухоли (МДО) опухоли по данным метаанализа варьировали от 3,9 до 9,8 мм (в среднем 6,9±1,9) и от 8 до 13 мм (в среднем 10,4±1,6) соответственно, по нашим данным — средняя высота опухоли — 8,28 мм (диапазон от 6,0 до 10,3 мм, стандартное отклонение 1,4 мм), МДО — 10,9 мм (диапазон от 6,4 до 16,8 мм, стандартное отклонение 2,9 мм). Максимальная корригируемая острота зрения в дооперацион ном периоде по данным литературы и нашим собственным данным составила: >0,5—47,5% и 54% пациентов, <0,1<0,5—29,7% и 23% пациентов, <0,1—22,8% и 23% пациентов соответственно.
Дексаметазон снижает чувствительность клеток меланомы к цисплатину путем увеличения уровня экспрессии гена PRAME
В.А. Мисюрин', М.А. Барышникова', Д. В. Калениченко2, А.Е. Мисюрина3, Л. А. Кесаева', Ю.П. Финашутина', О. С. Бурова', А.А. Рудакова', А. В. Мисюрин' Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ФГБОУ ВО МГАВМиБ-МВА им К. И. Скрябина, Москва; 3ФГБУ ГНЦ Минздрава России, Москва e-mail: vsevolod.misyurin@gmail.com
Белок PRAME является одним из антигенов, экспрессирую-щихся в меланоме человека. При нокауте экспрессии PRAME клетки меланомы теряют резистентность к цисплатину и некоторым другим цитостатическим препаратам. Согласно данным, полученным Wadelin et al., экспрессия гена PRAME может быть активирована воспалительными сигнальными путями. Мы предположили, что при блокировании данных сигнальных путей уровень экспрессии гена PRAME может быть снижен, благодаря чему чувствительность клеток мела-номы к цисплатину увеличится.
Цель. Изучить воздействие дексаметазона и его комбинации с цисплатином на уровень экспрессии гена PRAME. Материалы и методы. Исследование проводили на клеточной линии меланомы A875, обладающей высоким уровнем экспрессии гена PRAME. В MTT-тесте определили IC50 цис-платина и концентрацию дексаметазона, не оказывающую цитотоксических эффектов на клетки меланомы, а также IC50 комбинации дексаметазон цисплатин. Оценивали изменение уровня экспрессии гена PRAME методом количественной ПЦР в реальном времени в клетках меланомы А875 после инкубации с дексаметазоном, цисплатином (IC50) и декса-метазоном цисплатином (IC50). Для статистического анализа парных измерений использовался критерий Уилкоксона. Результаты. IC50 цисплатина для клеток A875составила 25 мкг/мл. Дексаметазон в исследованных концентрациях не оказывал цитостатического действия на клетки А875. Для дальнейших экспериментов была выбрана концентрация дексаметазона, составляющая 100 мкг/мл. При данной концентрации скорость деления клеток меланомы значимо не изменилась. После инкубирования в течение суток клеток A875 с цисплатином (25 мкг/мл) или дексаметазоном (100 мкг/мл) уровень экспрессии гена PRAME увеличился в 6 и в 1,6 раз, соответственно (p<0,01). После инкубирования A875 с комбинацией цисплатин дексаметазон (25 мкг/мл и 100 мкг/мл) уровень экспрессии PRAME увеличился в 9 раз (p<0,001). Согласно данным MTT-теста, дозировка цисплатина для достижения IC50 должны быть увеличена на 5% при одновременном применении дексаметазона (p=0,0117).
Заключение. Уровень экспрессии PRAME при воздействии цисплатина значительно увеличился. Несмотря на возможную зависимость гена PRAME от стресс-индуцированных сигнальных путей, дексаметазон не снижал активность этого гена в клетках меланомы, а даже несколько увеличивал. Возможно, применение дексаметазона при терапии PRAME-по-зитивных больных онкологическими заболеваниями будет приводить к уменьшению эффективности цисплатина.
Биологические и морфологические параллели увеальных меланом
А. В. Балмуханова, Т. С. Телеуова, А. М. Балмуханова Место работы: 'КазНМУ им. С. Д. Асфендиярова, КазМУНО e-mail: bav_med@mail.ru
Диагностика и лечение злокачественных новообразований — одна из сложных проблем современной медицины. Большое внимание привлекают внутриглазные опухоли, т. к. рост количества новообразований органа зрения в последние годы подтвержден результатами канцеррегистра РК. Независимо от характера роста они приводят к необратимой потере зрительных функций, а такие опухоли, как увеальная меланома (УМ), представляют собой непосредственную угрозу жизни больного. Все это делает актуальной проблему диагностики, лечения, а также поиска прогностических факторов ее течения.
Цель. Определение взимосвязи между биологическими признаками: пигментацией, васкуляризацией и гистотипом уве-альной меланомы.
Материал и методы. 73 больных с УМ, находившихся на лечении в КазНИИГБ и КазНИИОиР. Были выделены 3 степени пигментации и васкуляризации: ослабленная, умеренная и усиленная, определяемые офтальмоскопически и циклоскопически.
Результаты. Ослабленная степень пигментации отмечалась у 34,6% больных с веретеноклеточным типом, у 18,5% смешанноклеточного и 20% эпителиоидноклеточного типа опухоли. Умеренная пигментация отмечается у 57,7% веретеноклеточного, у 44,4% смешанноклеточного и 30% эпителиодноклеточного типа. Усиленная степень пигментации — у 7,7% веретеноклеточного, 37% смешанноклеточного и 50% эпителиоидноклеточного типа. Связь между пигментацией и типом опухоли, статистически значима, р<0,05 (х210,948). Для определения взаимосвязи между васкуляри-зацией и гистотипом, были изучены варианты кровоснабжения, в зависимости от клеточного типа опухоли. Ослабленная васкуляризация отмечалась у 34,6% веретеноклеточного типа, у 18,5% — смешанноклеточного и 15% эпителиоид-ноклеточного типа меланомы. Умеренная васкуляризация — у 26,9% больных с веретеноклеточным типом, у 44,4% — со смешанноклеточным типом и у 60% эпителиоидноклеточ-ного типа УМ. Усиленная степень васкуляризации отмечается у 38,5% веретеноклеточного, у 37% — смешанноклеточного и 20% эпителиоидноклеточного типа УМ. Начало формы Связь между васкуляризацией и типом опухоли статистически значима, р>0,05 (х211,934).
Заключение. Анализируя связь биологических признаков УМ с ее гистологическим вариантом, получены следующие данные: наиболее агрессивному типу меланомы — эпителиодно-клеточной опухоли более характерны усиленная пигментация 50%, умеренная васкуляризация 60%. В связи с чем, данные биологические признаки могут рассматриваться как прогностические критерии для определения тактики ведения и лечения данных больных.
Флуоресцентная диагностика и фотодинамическая терапия злокачественной меланомы кожи
С. В. Козлов, О.И. Каганов, А. А. Морятов, А.Е. Орлов, А. В. Копылов, А. А. Андреева
Место работы: ФГОУ ВПО СамГМУ Минздрава России; 2ГБУЗ СОКОД e-mail: ama78@mail.ru
Меланома кожи является одной из наиболее агрессивных опухолей при этом в большинстве стран мира и в России отмечается устойчивый рост заболеваемости ежегодно на 4—7%. Ранняя диагностика меланомы в горизонтальной фазе роста, увеличивает показатели 5-летней выживаемости до 95—98%. Учитывая ограниченные возможности инвазив-
ной верификации меланомы кожи, существует вероятность гипо- или гипердиагностики новообразования с последующим выбором неадекватного объема хирургического лечения. Кроме того, отсутствие альтернативных видов локального паллиативного лечения существенно ухудшает прогноз и качество жизни больных местно-распространенной злокачественной меланомой.
Цель. Изучить возможности методов флуоресцентной диагностики (ФД) и паллиативной фотодинамической терапии (ФДТ) злокачественной меланомы кожи. Материалы и методы. Для дифференциальной диагностики пигментных новообразований кожи использовали методики флуоресцентной дерматоскопии и локальной спектрометрии. Применялись современные отечественные фотосенсибилизаторы (ФС), ФД и локальная спектрометрия выполнены у 32 больных с диагнозом «меланома кожи» и у 16 пациентов с меланоцитарными невусами. Индекс накопления ФС окружающей коже составил 0,6±0,07 ОЕ, а при меланоцитарных невусах — 0,8±0,06, в опухоли индекс накопления составил 2,4±0,10 относительных единиц, что достоверно выше (р<0,05). Показатель чувствительности составил 96,88%, точность исследования — 97,83%. Дополнительную характеристику новообразования кожи можно получить при визуальном анализе флуоресцентной картины, что позволяет уточнить местное распространение меланомы, определить истинные границы опухоли. Высокий уровень накопления ФС в опухоли может служить основанием для проведения ФДТ. Критериями отбора были: невозможность выполнения радикального хирургического лечения, размер очагов — не более 3 см, пролечено 7 пациентов. У всех больных получен локальный ответ в виде стабилизации роста новообразования, частичного или полного лизиса очагов злокачественной меланомы. Максимальное время наблюдения составляет более 24 месяцев, у 3 больных наблюдали раннюю системную прогрессию процесса. Выводы. Проводимое исследование определяет значимость и необходимость применения новых уточняющих методов диагностики. Полученные результаты демонстрируют высокую специфичность, точность и эффективность флуоресцентной диагностики и фотодинамической терапии.
Новые технологии дифференциальной неинвазивной диагностики новообразований кожи
С. В. Козлов, В.П. Захаров, О. И. Каганов, А. А. Морятов, А.Е. Орлов., И. А. Братченко, Д.Н. Артемьев, А. В. Копылов, А. А. Андреева
Место работы: 'ФГОУ ВПО СамГМУ Минздрава России; 2ФГОУ ВПО Самарский университет; ГБУЗ СОКОД e-mail: ama78@mail.ru
Злокачественные новообразования кожи остаются лидерами в структуре и динамике роста онкологической заболеваемости, при этом от меланомы кожи, погибает более 90% всех заболевших опухолями кожи.
Цель. Снизить смертность от меланомы кожи за счет повышения показатели ранней диагностики и новых подходов уточняющей диагностики.
После изучения существующих методов диагностики было решено изучить диагностические возможности гиперспектрального анализа изображения (ГВ) и спектроскопии комбинационного рассеяния (СКР). Для разработка собственной методики был проведен экспериментальный этап — анализ образцов тканей опухолей человека, полученных после хирургического лечения, далее исследование новообразований у пациентов непосредственно перед хирургическим
лечением. Работу выполняли путем регистрации отраженного от изучаемой поверхности кожи пучка мало интенсивно лазерного излучения видимого диапазона (СКР) и регистрации изображения камерой ГВ. Анализ изображения проходит автоматически по заранее разработанному алгоритму. Таким образом, был разработан и предложен новый способ неин-вазивной дифференциальной диагностики новообразований кожи. После анализа результатов исследования в котором приняли участие 212 пациентов с различными опухолями (меланома и рак кожи, доброкачественные новообразования) получены показатели чувствительности и специфичности метода СКР до 95% и 92%; ГВ с компьютерным анализом изображения также показала потенциальные возможности в активной и дифференциальной диагностики в том числе пигментных новообразований. Предложенные методы диагностики отличаются безопасностью, не требуют инвазивных вмешательств, лишены субъективных критериев и показывают высокие разрешающие способности.
Особенности диагностики и выживаемость пациентов с меланомой кожи в краснодарском крае
С. В. Шаров', C. А. Яргунин', Л.Г. Тесленко' Место работы: 'ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер № ¡», г. Краснодар, Россия e-mail: tsokur@kkod.ru
Цель. Проанализировать особенности диагностики и показатели выживаемости пациентов с меланомой кожи в Краснодарском крае (КК) за период 2012—2016 гг. Материалы и методы. С использованием автоматизированной информационно-аналитической системы Популя-ционного ракового регистра КК (ПРР КК) проведен анализ 2 365 случаев меланомы кожи, впервые выявленных с 2012 по 2016 гг.
Результаты и Заключение. В КК в 2012—2016 гг. наблюдается увеличение численности заболевших и показателей заболеваемости населения меланомой кожи на 6,2% (с 8,1 до 8,6 на 100 тыс.). За 5-летний период отмечается достоверное (p<0,05) увеличение среднего возраста заболевших мужчин (с 56,8±0,7 до 60,5±0,7 лет) и женщин (с 57,5±0,5 до 61,3±0,6 лет). В КК при подозрении на меланому пациент с направлением из первичного онкокабинета проходит обследование в онкодиспансере. Обязательными методами для диагностики меланомы кожи являются: физикальный осмотр, дерматоскопия, рентгенография органов грудной клетки, УЗИ всех групп лимфоузлов, морфологическая верификация. При осмотре все пигментные новообразования кожи осматриваются по одной из общепринятых систем (правила АБЦД, ФИГАРО и др.). При ранних формах меланомы, когда кожный рисунок над опухолью не изменен, волосяной покров сохранен, опухоль симметрична и не всегда разнородна по окраске и характеризуется неправильностью границ или при наличии на поверхности кожи множественных диспластических неву-сов применяется эпилюминисцентная дерматоскопия в Клиническом онкодиспансере. Доля больных с меланомой кожи, выявленной в III—IV стадиях, за 5 лет снизилась до 15,6%, снизилась и одногодичная летальность с 14,0% в 2012 г. до 8,9% в 2016 г. По данным ПРР КК показатель 5-летней наблюдаемой выживаемости (НВ) больных с меланомой кожи в 2016 г. составил 61,6±2,6%, при I стадии заболевания — 85,9±3,8%, при II — 74,4±4,2%, при III — 37,2±6,8%, а при IV стадии — 16,4±7,0%. Отмечена положительная динамика однолетней НВ за 5 лет с учетом всех стадий и при I-III стадиях отдельно, что говорит о значимости онкопрофилактической направ-
ленности диагностической программы «Кубань против рака» и правильной тактике проводимого специального противоопухолевого лечения в КК. Скорректированная выживаемость за 5 лет выше, чем НВ (при I—III стадиях), что связано с влиянием неонкологических причин на уровень НВ. Таким образом, показатель выживаемости при меланоме кожи достоверно зависит от стадии заболевания: чем выше стадия, тем показатель выживаемости ниже.
К вопросу о частоте и спектре мутаций гена BRAF при меланоме кожи у пациентов Алтайского края
А.А. Иванов', А.М. Авдалян', С.Ю. Бахарев2, Д.В. Ракуть2, А.Ф. Лазарев'
Место работы: 'ФГБУ Алтайский филиал «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава РФ, Барнаул; 2КГБУЗ «Алтайский онкологический диспансер», Барнаул e-mail: Anatolij0i99@yandex.ru
Встречаемость мутаций в гене BRAF при меланоме кожи достаточно вариабельна и по данным литературы достигает от 40 до 70%. Наиболее частым генетическим повреждением данного гена среди всех типов BRAF-мутаций, по данным разных авторов, является замена c. 1799T>A (V600E) с частотой 80—90%. Второй по частоте является мутация c. 1798_1799GT>AA ^600К) с долей до 30%, другие поломки данного гена встречаются еще реже. Большинство лабораторий довольно успешно используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в реальном времени для выявления генетических повреждений, но данный метод не обнаруживает весь известный спектр соматических мутаций данного гена. В связи с этим возникает потребность в секвенировании 15-го экзона гена BRAF для покрытия недостающего спектра анализируемых мутаций. Цель. Определение частоты и спектра мутаций в гене BRAF при меланоме кожи в Алтайском крае. Материалы и методы. В исследовании участвовали 47 больных с меланомой кожи запущенных стадий (IIIB—IV), проживающих в Алтайском крае. Материалом для исследования послужила операционная ткань, фиксированная в 10% нейтральном забуференном формалине от 6 до 24 часов и заключенная в парафин. Ткань, из которой выделялась ДНК, верифицировалась патоморфологом, проводилась оценка характера опухоли, количества опухолевой ткани в материале. Выделение ДНК из ткани производили с помощью набора FFPE QIAGEN по протоколу производителя на автоматической станции для выделения нуклеиновых кислот и белков QIAcube (QIAGEN). Мутация V600E гена BRAF определялась набором Real-time — PCR-BRAF — V600E «Биолинк» (Россия). 25 образцов, которые по результатам ПЦР были отрицательны на наличие BRAF V600E, подвергались секвенированию. Секвенирование по Сэнгеру 15 экзона гена BRAF проводилось на генетическом анализаторе Applied Biosystems 3 500 (США). Результаты. В нашей группе пациентов мутации гена BRAF выявлены в 26 случаях (55,3%). Замена c. 1799T>A (V600E) составляла подавляющее большинство мутаций и была обнаружена в 22 случаях, что составило 46,8% от всей выборки. Мутация c. 1789_1790CT>TC (L597S) гена BRAF выявлена в 2 случаях (4,25%), c. 1803A>T (K601N) в 2 образцах (4,25%). Заключение. Таким образом, мутантный статус гена BRAF выявлен у 55,3% больных. Мутация V600E обнаружена у 46,8% пациентов, L597S и K601N встречались с одинаковой частотой 4,25%. Полученные данные показывают, что спектр и частота встречаемости относительно редких аллелей гена BRAF при меланоме кожи в Алтайском крае несколько отличается от других регионов России.
