CC BY
9УДК578.42 (470.67)
12 1 А.Р. Мустафаев ' , К.С. Бекшоков
К вопросу о барьерах специфичности вируса бычьего лейкоза в эксперименте
с белыми крысами линии <<'^81аг»
1 Дагестанский государственный университет
2Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт; mustafaev_arkif@mail. ги
Поставлен опыт на белых крысах линии «Wistar» с введением человеческой крови больных лейкозом. По истечению двух и шести месяцев были получены сыворотки крови крыс. Сыворотку исследовали в реакции иммунодиффузии на выявление антител к вирусу бычьего лейкоза (BLV).
Ключевые слова: вирус бычьего лейкоза, человек, крыса.
Введение
В мировой практике пока нет доказательств заражения или носительства человеком вируса бычьего лейкоза (БЦУ) или вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), хотя работы в этом направлении проводились на культурах клеток фибробластов эмбриона человека, клеток глиомы, нейробластомы и тетракарциномы яичника человека, которые были подвержены заражению ВЛКРС [1, 3, 4, 5]. В исследованиях ряда авторов по выявлению антител в сыворотке крови больных лейкемией людей реакции иммунодиффузии (РИД) к вирусу бычьего лейкоза не дали положительных результатов [2, 3, 6]. Возможно, человеческий организм не выделяет достаточно количества антител к вирусу бычьего лейкоза, а крысы являются более чувствительными к данному вирусу и при инфицировании показывают высокие титры антител [3].
Цель работы: показать в эксперименте преодоление межвидовых барьеров вируса бычьего вируса с применением крови больных лейкозом человека и белых крыс линии «Wistar».
Материалы и методы
Основным материалом для исследования служила человеческая кровь в количестве шести проб от больных лейкозом людей (хронический миелолейкоз, хронический лим-фолейкоз, острый миелолейкоз - 2 пробы, миелодиспластический синдром - 2 пробы), а также для заражения в опыте использовались крысы линии «Wistar», содержащихся в виварии Дагестанского государственного университета (ДГУ) в количестве 12 особей. Серологические исследования проводились в реакции иммунодиффузии (РИД). Принцип РИД заключается в том, что антигены и антитела, помещенные в лунки, диффундируют в геле агара и при взаимодействии образуют комплекс, который проявляется в линии преципитации.
Результаты исследований
На первом этапе гематологического отделения из республиканской больницы была получена человеческая кровь от больных лейкозом в количестве 2 проб с антикоагулянтом трилон Б (ЭДТА - динатриевая соль этилендиаминтетрауксусная кислота). Данная кровь в течение 1 часа была введена подопытным крысам внутрибрюшинно в
количестве 0,5 мл. На втором этапе получили кровь с антикоагулянтом в количестве 4 проб, которая также ввелась в течение 1 часа внутримышечно крысам в количестве от 0,5 до 1 мл. При транспортировке и во время введения крови крысам соблюдались все санитарно-гигиенические и асептические правила. Подопытные крысы в количестве 6 особей содержались в виварии ДГУ в отдельных клетках под особым наблюдением. Во время проведения опыта крысы подвергались общему клиническому осмотру, никаких внешних физиологических отклонений от нормы не наблюдалось. Параллельно в другой клетке держали крыс контрольной группы в количестве 6 особей, где тоже не отмечено никаких отклонений от нормы во время опыта.
Опыт I: через 2 месяца была получена интактная кровь путем обескровливания крыс из подопытной и контрольной групп (в каждой группе по 3 особи). Во время взятия крови соблюдались правила асептики. Кровь держали при температуре 25-30 0С, чтобы получить сыворотку. Сыворотку крови крыс исследовали в РИД на чувствитель-
Примечание: С 1 по 3 пробы сыворотка крови от подопытных крыс, пробы 4, 5, 6 - контрольные крысы.
Учет реакции проводили через 48 ч по линии преципитации, все пробы оказались отрицательными.
Опыт II: после 6 месяцев мы обескровили 3 подопытных и 3 контрольных оставшихся крыс с соблюдением всех правил асептики. Пробы сыворотки крови крыс были исследованы в тест-системе РИД к ВЛКРС. Учет реакции был проведен по линии преципитации через 48-72 ч (рис. 2).
При учете реакции одна проба под № 3 подопытной группы крыс дала слабоположительную реакцию в контрольной линии преципитации.
Для достоверности реакции было решено титровать сыворотку крови крыс с физиологическим раствором (0,85 % №С1) 1:2; 1:4 и заново поставить реакцию иммуно-диффузии (рис. 3).
контрольная сыворотка испытуемая сыворотка антиген
линия преципитации
► КС I
КС
проба № 3
5
m
#С
КС I
А
H
8
Рис. 3. Постановка РИД с титрованием сыворотки 1:2 и 1:4 Примечание: титры 1:2 (7-12), 1:4 (13-18), проба под № 3 (3, 9, 15)
При повторном РИД проба № 3 в титрах 1:4 оказалась слабоположительной, а в остальных случаях пробы дали отрицательный результат.
В третьем случае мы поставили реакцию иммунодиффузии с изменением соотношения проб (рис. 4).
КС
3 С 11
В)
2
проба № 3_
- 3
КС
Рис. 4. Постановка РИД с изменением соотношения проб сыворотки крови крыс
Проба № 3 в одной лунке дала слабоположительную реакцию, а в других случаях оказалась отрицательной. Все остальные пробы сыворотки крови крыс отрицательны.
Заключение
В исследованиях на чувствительность к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в сыворотки крови крыс в пробе № 3 мы получили слабоположительную реакцию в отдельных случаях. Из этого опыта можно предположить, что содержание антител в сыворотке очень низкое для реакции иммунодиффузии или вирус мутирует при преодолении межвидовых барьеров. Преодоление барьера чувствительности к вирусу лейкоза крупного рогатого скота еще полностью не изучено, и наш опыт показывает, что исследования в этом направлении должны быть продолжены.
Литература
1. Альтштейн А.Д. и др. Общая и частная вирусология. - М.: Медицина, 1982. -520 с.
2. Бурба Л.Г. и др. Лейкозы и злокачественные опухоли животных. - М.: Агропро-миздат, 1988. - 400 с.
3. Гулюкин М.И. и др. Научные основы профилактики и борьбы с лейкозом крупного рогатого скота // Труды ВИЭВ. - 1999. - Т. 72. - С. 38-47.
4. Мустафаев А.Р., Будулов Н.Р., Салихов Ю.С. Особенности распространения лейкоза по природным зонам Дагестана // Вестник ДГУ. - 2013. - № 6. - С. 132-135.
5. Altaner C. et all. Human cell neural origin are permissive for bovine leukemia virus // Neoplasma. - 1989. - V. 6, № 6. - P. 691-695.
6. Altanerova V. et all. Infection of rats with bovine leukemia virus: establishment of a virus - producing rat cell line // J. Gen. Virol. - 1989. - V. 70, № 7. - P. 1929-1932.
Поступила в редакцию 6 ноября 2013 г.
Bovine leukemia virus specificity limits in a white rats experiment
17 /
A.R. Mustafaev12, K.S. Bekshokov1
1Dagestan State University
2Caspian Area Veterenarian Reseach Institute; www.mustafaev_arkif@mail.ru
The experiment on white rats of Wistar type involved administration of blood of leucemic patients. Upon eighteen months, blood serum of rats was obtained. The serum was investigated in immunodiffusion test for bovine leukemia virus antibodies.
Keywords: bovine leukemia virus, man, rat.
Received November 6, 2013
