CC BY
32
3. Зайцев В.Т., Гончаренко Л.И., Щербаков В.И. 6.
и др. Расстройства гемодинамики при острой непроходимости кишечника в раннем послеоперационном периоде и их коррекция //
Клин. хирургия. - 1990. - № 1. - С. 23-25. 7.
4. Кригер А.Г., Андрейцев И.Л., Горский В.А. и др. Диагностика и лечение острой спаечной тонкокишечной непроходимости // Хирургия. - 2001. - № 7. - С. 25-29.
5. Рыбачков В.В., Майоров М.И., Маканов О.А. 8.
Нейрогуморальные изменения при острой кишечной непроходимости // Вестн. хирургии им. И.И. Грекова. - 2005. - Т. 164, № 1. -С. 25-28.
Симоненков А.П., Фёдоров В.Д., Клюжев В.М. и др. Уточнение классификации гипоксиче-ских состояний // Вестн. РАМН. - 2004. -№ 1.- С. 46-48.
Фёдоров В.Д., Симоненков А.П. Концепция клинического применения серотонина адипи-ната при лечении хирургических больных // Вестн. хирургии им. И.И. Грекова. - 1998. -Т. 157, № 3. - С. 15-19.
Шалимов С.А., Радзиховский А.П., Кейсе-вич Л.В. Рук-во по экспериментальной хирургии. - М.: Медицина, 1989. - 272 с.
Экспериментальная биология и медицина УДК 611-018.74:615.256.51]: 616-092.9
К ВОПРОСУ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ГИПОЭСТРОГЕН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ
© Корокин М.В., Покровский M.В., Покровская Т.Г., Артюшкова Е.Б., Гладченко М.П.,
Толмачев Н.Е., Носов А.М.
Кафедра фармакологии Курского государственного медицинского университета; НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета
Проводилось сравнительное изучение эндотелио- и кардиопротективных эффектов фитоэстрогенов (ре-звератрол и фуростаноловые гликозиды из культуры клеток растения Dyoscorea deltoidea (ДМ-05)) и их сочетаний с ингибитором АПФ эналаприлом и блокатором АТ-1 рецепторов лозартаном. В результате исследования эндотелио- и кардиопротективных эффектов комбинаций ДМ-05 и резвератрола с эналаприлом,а также с лозартаном на модели гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции установлено, что указанные комбинации позволяют за счет патогенетически обоснованного воздействия на ренин-ангиотензиновую систему, коррекции утраченной эстроген-продуцирующей функции и восстановления активности фермента eNOS рекомендовать данные комбинации к широкому клиническому изучению.
Ключевые слова: фитоэстрогены, резвератрол, диоскорея, эналаприл, лозартан, эндотелиальная дисфункция.
PHARMACOLOGICAL CORRECTION OF HYPOESTROGEN-INDUCED ENDOTHELIAL
DYSFUNCTION
Korokin M.V., Pokrovsky M.V., Pokrovskaya T.G., Artyushkova E.B., Gladchenko M.P., Tolmachev N.E., Nosov A.M.
Pharmacology Department of the Kursk State Medical University;
SRI of Ecological Medicine of the Kursk State Medical University
The comparative study of endothelio-and cardio-protective effects of phytoestrogens (Rezveratrol and furo-stanole glucosydes from culture of Dyoscorea deltoidea (DM-05) cells) and their combinations with the ACE-inhibitor Enalapril and the blockers of AT-1 receptors Lozartan was carried out. The research of endothelio- and cardio-protective effects of the combinations DM-05 and Rezveratrol with Enalapril as well as with Lozartan on the model of hypoestrogen-induced endothelial dysfunctions has been established that the specified combinations allow recommending the given combinations to comprehensive clinical studying due to the pathogenetically proved influence on the renin-angiotension system, the correction of the estrogen producing function lost and the restoration of enzyme eNOS activity.
Key words: phytoestrogens, Rezveratrol, Dyoscorea, Enalapril, Lozartan, endothelial dysfunction.
Эпидемиологические и клинические исследования выявляют различия в развитии атеросклеротического поражения сосудов у человека в зависимости от пола. Наряду с общими факторами риска, такими как наследственный анамнез, питание, ожирение, курение, неблагоприятный липидный профиль, низкая физическая активность, диабет и артериальная гипертензия (АГ), у женщин имеется уникальный фактор риска сердечнососудистых заболеваний - развитие дефицита эстрогенов в постменопаузе [3, 5, 6].
В настоящее время достаточно большое внимание уделяется изучению влияния гормональной заместительной терапии (ГЗТ) на
частоту возникновения сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений у женщин в периоде постменопаузы. Однако изучение применения веществ растительного происхождения, обладающих эстрогеноподобной активностью, и их комбинаций с гипотензивными препаратами, обладающими эндотелио-тропностью (ингибиторы АПФ, блокаторы АТ1-рецепторов), при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции в литературе нами не обнаружено.
Целью настоящего исследования явилось изучение эффектов ДМ-05 (фуростаноловые гликозиды из культуры клеток растения БуоБсогеа ёеко1ёеа), резвератрола, эналапри-
ла, лозартана и их сочетаний на параметры функционирования эндотелия в условиях моделирования гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции (ЭД).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты выполнены на 120 половозрелых самках крыс линии Wistar массой 180-220 г.
С целью моделирования гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции крыс наркотизировали этаминалом натрия (50 мг/кг массы тела животного) и проводили билатеральную овариэктомию (n=10 животных в группе). Животных ин-тактной группы (n=10) подвергали ложной операции без удаления яичников.
ДМ-05 вводили ежедневно, однократно, внутрибрюшинно, в дозах 1 и 2 мг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы животного в течение 6 недель после проведения овариэктомии.
Резвератрол вводили ежедневно, однократно, внутрибрюшинно, в дозах 0,15 и 2 мг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы животного в течение 6 недель после проведения овариэктомии.
Ингибиторы АПФ эналаприла малеат ("Рениприл", производства ОАО "Фармстан-дарт-Лексредства") и лозартан калия ("Блок-тран", производства ОАО "Фармстандарт-Лексредства") использовали в дозах 0,5 мг/кг и 6 мг/кг, соответственно.
Комбинированное использование ДМ-05
1 мг/кг (внутрибрюшинно), резвератрола
2 мг/кг (внутрибрюшинно), эналаприла мале-ата 0,5 мг/кг (внутрижелудочно) и лозартана калия 6 мг/кг (внутрижелудочно) проводилось по вышеописанному протоколу один раз в сутки в течение 42 дней.
На 43 сутки животных наркотизировали (этаминал натрия 50 мг/кг) и измеряли параметры гемодинамики посредством введения в сонную артерию крыс силиконового катетера с внутренним диаметром 0,5 мм. С помощью датчика и компьютерной программы "Bioshell" непрерывно регистрировали следующие показатели: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС).
Помимо измерения артериального давления (АД) проводили ряд функциональных тестов с последующей оценкой изменения параметров гемодинамики (САД, ДАД, ЧСС): эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВД) в ответ на внутривенное введение раствора ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного [7], а также эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНВД) в ответ на внутривенное введение раствора нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного [1, 2].
Степень эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных, а также степень ее коррекции исследуемыми препаратами оценивали по расчетному коэффициенту эндотелиальной дисфункции (КЭД), представляющему собой отношение площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение НП (ЭНВД) к площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение АХ (ЭЗВД) [4].
Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных, находящихся на управляемом дыхании, катетеризировали полость левого желудочка и проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:
1. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида 1х10-5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) [2]. При проведении данной пробы проводилась оценка максимального подъема левожелудочкового давления (ЛЖД) в ответ на введение адреналина.
2. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек. [2]. После проведения данной пробы рассчитывался показатель исчерпания миокардиального резерва (выраженный в процентах), равный отношению прироста ЛЖД на 5 сек. пережатия аорты к приросту ЛЖД на 25 сек. пережатия аорты.
Статистическую обработку результатов исследования токсикологических и фармакологических эффектов препаратов проводили по общепринятым методам, рассчитывая средние значения показателей (М) и ошибку средней арифметической (±т). Достоверность различий между средними определяли по непарному 1-критерию Стьюдента.
При анализе результатов функциональных проб было обнаружено, что КЭД в группе животных с моделированной ЭД на фоне введения исследуемых препаратов и их комбинаций практически соответствовал данному показателю у интактных животных. Наименьшая эффективность обнаружена при применении резвератрола в дозе 0,15 мг/кг и лозартана 6 мг/кг (табл. 1).
Уровень АД в группах животных с моделированной ЭД на фоне введения ДМ-05, ре-звератрола 2 мг/кг, эналаприла и лозартана достоверно отличался от такового в контрольной группе животных. Применение рез-вератрола в дозе 0,15 мг/кг не привело к достоверному снижению цифр артериального давления (табл. 1).
Для оценки функциональных возможностей миокарда проводились нагрузочные пробы. Результаты экспериментов с проведением нагрузочных проб представлены в табл.
2.
Таблица 1
Влияние ДМ-05, резвератрола, эналаприла, лозартана и их комбинаций на показатели
эндотелиальной функции у крыс (М±т)
Группа животных САД, мм рт.ст ДАД, мм рт.ст ЭЗВД, Отн. ед. энвд, Отн. ед КЭД, Отн. ед
Интактные 128,1±6,0 95,7±4 1673,6±132,4 1338,1±121,1 0,8±0,11
Овариэктомия (контроль) 160,0±6,2 а 124,9±5,5 а 1022,5±131 а 2157,3±167 а 2,1±0,2а
+ДМ-05 (1 мг/кг) 144,5±5,9 ь 114,9±5,4 1501,2±189,3 ь 1779,6±253,2 1,2±0,1ь
+ДМ-05 (2 мг/кг) 138,3±4,1 ь 111,7±3,2 1560,4±201,4 ь 1872,5±201,2 1,2±0,09ь
+резвератрол (0,15 мг/кг) 152,1±6,4 120,1±6,1 1329,4±181,1 1861,1±184,7 1,4±0,2 ь
+резвератрол (2 мг/кг) 142,3±5,3 ь 109,8±3,2 ь 1420,1±135,4 ь 1562,1±201,2 ь 1,1±0,09 ь
+эналаприл (0,5 мг/кг) 139,6±7,3 ь 107,4±4,9 ь 1573,6± 82,0 ь 1984,0±262,2 1,3±0,1 ь
+лозартан (6 мг/кг) 140,1±7,0 ь 107,5±5,2 ь 1323,6±166,7 1984,5±247,2 1,5±0,2 ь
+ДМ-05 (1 мг/кг)+ эналаприл (0,5 мг/кг) 125,8±5,7 ь 93,5±6,8 ь 1438,0±159,8 ь 1528,7±180,3 ь 1,1±0,2 ь
+резвератрол (2 мг/кг)+ эналаприл (0,5 мг/кг) 128,4±4,1 ь 92,1±4,3 ь 1560,0±141,8 ь 1716,2±131,3 ь 1,1±0,2 ь
+ДМ-05 (1 мг/кг)+ лозартан (6 мг/кг) 130,7±8,2 ь 92,1±6,4 ь 1490,2±89,4 ь 1788,6±127,4 ь 1,2±0,2 ь
+резвератрол (2 мг/кг)+ лозартан (6 мг/кг) 134,4±6,2 ь 98,4±4,3 ь 1602,0±138,2 1762,2±144,8 1,1±0,2 ь
Примечание: а р<0,05 по сравнению с интактными; ь р<0,05 по сравнению с овариэктомией.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Моделирование эндотелиальной дисфункции путём проведения билатеральной овариэктомии через 6 недель приводило к достоверному увеличению артериального давления (табл. 1). При проведении эндотелийза-висимой вазодилатации обнаружено снижение площади над реакцией восстановления артериального давления после введения аце-тилхолина до 1022,5±131 усл. ед., по сравнению с интактной группой животных. Напротив, эндотелийнезависимая вазодилатация, являющаяся отражением реакции на введение НП, увеличилась у животных с экспериментальной патологией по сравнению с интакт-ными до 2157,3±167 усл. ед. Коэффициент эндотелиальной дисфункции у интактных животных составил 0,8±0,11, у животных через 6 недель после проведения билатеральной овариэктомии - 2,1±0,2 (табл. 1).
Таблица 2
Влияние ДЫ-05, резвератрола, эналаприла, лозартана и их комбинаций на функциональные возможности миокарда при проведении нагрузочных проб на фоне моделирования гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции (M±m, n=iG)
Группа животных Адренореактивность (ЛЖД, мм рт.ст.) Исчерпание миокардиального резерва (%)
Интактные самки 2G3,4±9,i S9,3±4.2
Овариэктомия (контроль) 244,2±5,ia б7,9±4,4a
+,3M-G5 (І мг/кг) 2i2,3±4,ib 79,3±3,8b
+,3M-G5 (2 мг/кг) 2i4,7±6,2b 81,1±2,4b
+резвератрол 0,15 мг/кг 22G,7±6,i b 75,4±2,S
+резвератрол 2 мг/кг 2G6,4±4,6 b S2,3±5,i b
+эналаприл 0,5 мг/кг 2i8,7±4,2 b Si,6±4,7 b
+лозартан б мг/кг 232,G±5,4 74,9±6,2
+ДЫ-05 1 мг/кг+ эналаприл 0,5 мг/кг І97,2±3,7 b S5,2±3,6 b
+резвератрол 2 мг/кг+ эналаприл 0,5 мг/кг І96,3±5,9 b S5,4±3,S b
+ДЫ-05 1 мг/кг+ лозартан б мг/кг 2Gi,S±6,2 b S5,2±3,9 b
+резвератрол 2 мг/кг+ лозартан б мг/кг 2G6,7±5,2 b S4,6±4,7 b
Примечание: a р<0,05 по сравнению с интактными; b р<0,05 по сравнению с овариэктомией.
Динамика показателей кардиогемодинамики при проведении пробы на адренореак-тивность характеризовалась выраженным повышением инотропной реакции, что проявлялось в более высоких значениях ЛЖД, скоростных показателей и интенсивности функционирования структур. При анализе абсолютных цифр максимального ЛЖД в ответ на внутривенное введение адреналина обнаружена способность ДМ-05, резвератрола, эналаприла и их комбинаций предотвращать гипоэстроген-идуцированное повышение ад-ренореактивности. При применении лозарта-на имела место тенденция к снижению максимального левожелудочкового давления в указанной пробе, однако достоверных отличий в ЛЖД, по сравнению с контрольной группой животных, не обнаружено (табл. 2).
Проба на нагрузку сопротивлением отражала двухфазную реакцию сердца. В течение первых секунд резко увеличивалось ЛЖД и его прирост на 5 -й сек. окклюзии составил +129,6±11,2%. Обращает на себя внимание развивающаяся брадикардия. Вторая фаза характеризовалась постепенным ослаблением инотропного ответа, так к 25-й сек. уровень систолического напряжения снижался, и усиливалась брадикардия.
При проведении пробы на нагрузку сопротивлением ДМ-05, резвератрол 2 мг/кг, эналаприл, а также комбинации ДМ-05 и резвератрола с эналаприлом и лозартаном предотвращали снижение исчерпания миокардиального (инотропного) резерва. Так, показатель исчерпания миокардиального резерва на 25 сек. проведения пробы у интактных животных составил 89,3±4,2%. В контрольной группе (гипоэстроген-индуцированная ЭД) - 67,9±4,4%. Результаты у животных, получавших исследуемые препараты, оказались в промежуточном положении (табл. 2).
Необходимо отметить, что сравнение результатов эндотелио- и кардиопротективного действия ДМ-05 в дозах 1 и 2 мг/кг при данной экспериментальной модели не выявляет наличие четкого дозозависимого фармакологического эффекта. В то же время четкий дозозависимый эффект выявлен при анализе результатов эндотелио- и кардиопротектив-ного действия резвератрола в дозах 0,15 и
2 мг/кг. Данные факты могут быть обусловлены механизмом действия препаратов при гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции [6]. Так, по нашему мнению, в основу эффективности фуростаноловых гликозидов основной вклад вносит эстроген-
