CC BY
18
УДК 616.36-003.826-036.17-036.3-079.3: 577.21 ЙШ®
DOI: 10.21668/health.risk/2022.1.12 omSta
Научная статья
К ОЦЕНКЕ РИСКА РАЗВИТИЯ И ПРОГРЕССИРОВАНИЯ НЕАЛКОГОЛЬНОГО СТЕАТОЗА ПЕЧЕНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФАКТОРОВ TNF-a, IL-6, VEGF И ПОЛИМОРФИЗМОВ ИХ ГЕНОВ
11 3 1
И.А. Булатова , Л.Д. Пестренин , Т.П. Шевлюкова , А.М. Мифтахова , А.В. Кривцов2, И.Л. Гуляева1
1Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера, Россия, 614990, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26
2Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения, Россия, 614045, г. Пермь, ул. Монастырская, 82
3Тюменский государственный медицинский университет, Россия, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54
Разработана система расчета риска развития и прогрессирования неалкогольного стеатоза печени (НАСП) на основе интерлейкина-6 (1Ь-б), фактора некроза опухоли альфа (ТЫЕ-а), васкулоэндотелиального фактора роста (УБОЕ) и полиморфизма генов 11-6 в регионе -1740/С (™1800795), Т№-а в регионе -3080/А (ю1800629'), и УЕОБА в регионе -6340/С (^2010963).
Обследованы 52 больных НАСП и 65 здоровых доноров. Оценивали уровни цитокинов ТМБ-а, 1Ь-6 и УБОЕ в сыворотке крови. Также изучали полиморфизм генов ТМБ-а в регионе -3080/А, 1Ь-6 в регионе -174О/С и УЕОБА в регионе -634О/С.
Среди больных НАСП преобладают женщины в возрасте от 32 до 54 лет (67 %). В ходе проведенного исследования было установлено, что концентрации провоспалительных цитокинов ТМБ-а, 1Ь-6 и уровень УБОЕ в сыворотке крови были значимо выше у пациентов с НАСП, чем в контрольной группе (р = 0,03; р = 0,00003 и р = 0,001 соответственно), что подтверждает наличие воспалительного синдрома и дисфункцию эндотелия при данной патологии. Упациентов с НАСП в сравнении с донорами значимо чаще регистрировался генотип АА гена ТМБ-а -3080/А (^1800629) (р = 0,04). Гомозигота СС и аллель С гена УЕОЕА (0-634С) в позиции ^2010963 значимо чаще регистрировались в группе с НАСП, чем в группе контроля (р = 0,02 и р = 0,01 соответственно). Статистически значимые различия по полиморфизму гена 1Ь-6 в регионе -1740/С (^1800795) в изучаемых группах не были обнаружены. Полиморфизм гена ТМБ-а -3080/А коррелировал с активацией выработки цитокинов Т№-а и 1Ь-6 (Кг = 0,588; р = 0,043 и Кг = 0,597; р = 0,04 соответственно), что может приводить к развитию иммуновоспалительного синдрома у его носителей. При определении генетического профиля у 51 % доноров риск развития НАСП оценивался как низкий, у 75 % пациентов с НАСП - как высокий.
Риск развития НАСП ассоциирован с носительством генотипа АА гена ТМБ-а -3080/А и генотипа СС гена УЕОЕА -6340/С. Оценка генетического профиля с использованием этих маркеров позволяет оценить риск развития НАСП у здоровых и прогрессирования у больных стеатозом печени.
Ключевые слова: стеатоз печени, цитокины, фактор некроза опухоли альфа, интерлейкин-6, васкулоэндоте-лиальный фактор роста, полиморфизм генов.
© Булатова И.А., Пестренин Л.Д., Шевлюкова Т.П., Мифтахова А.М., Кривцов А.В., Гуляева И.Л., 2022
Булатова Ирина Анатольевна - доктор медицинских наук, заведующий кафедрой нормальной физиологии, профессор кафедры факультетской терапии № 2, профессиональной патологии и клинической лабораторной диагностики (e-mail: [email protected]; тел.: 8 (342) 217-10-31; ORCID: http://orcid.org/0000-0002-7802-4796).
Пестренин Лев Дмитриевич - преподаватель кафедры патологической физиологии (e-mail: [email protected]; тел.: 8 (342) 217-10-31; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-1786-4329).
Шевлюкова Татьяна Петровна - доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии (e-mail: [email protected]; тел.: 8 (922) 394-28-08; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7019-6630).
Мифтахова Альбина Мавлетьяновна - аспирант кафедры патологической физиологии (e-mail: [email protected]; тел.: 8 (963) 871-91-56; ORCID: https://orcid.org/0000-0001-9149-6328).
Кривцов Александр Владимирович - кандидат медицинских наук, заведующий лабораторией иммуногенетики (e-mail: [email protected]; тел.: 8 (342) 236-86-99; ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7986-0326).
Гуляева Инна Леонидовна - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической физиологии (e-mail: [email protected]; тел.: 8 (342) 217-10-31; ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7521-1732).
В структуре патологии печени лидирующее место занимает неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) [1]. Всероссийское исследование DIREG 2 показало, что НАЖБП встречается более чем у одной трети взрослого населения, причем среди этих пациентов неалкогольный стеатоз печени (НАСП) был выявлен в 80 % случаев. По данным некоторых исследователей, НАЖБП в 95 % случаев ассоциирована с метаболическим синдромом, чаще в виде жирового гепатоза [2]. У ряда лиц заболевание осложняется формированием воспаления печени (неалкогольный стеатогепатит). Хроническая воспалительная реакция ведет к развитию фиброза и цирроза, а также предрасполагает к развитию рака печени. Это является стимулом для более внимательного изучения механизмов развития НАЖБП с целью определения факторов риска, в том числе и генетических.
По одним данным, НАЖБП чаще регистрируют у женщин в возрасте 40-50 лет, соотношение мужчин и женщин 1:3, хотя заболевание встречается во всех возрастных группах [3]1. По результатам Всероссийского исследования DIREG 1, которое включало 30 754 человека, женщины с НАЖБП составили 56 %. Согласно этому исследованию наиболее распространенными факторами риска развития НАЖБП были дислипидемия (2-го типа по Фрид-риксену) - у 75,9 % пациентов, артериальная гипер-тензия - у 69,9 % и гиперхолестеринемия - у 68,8 % [4]. По другим данным, факторами риска развития НАЖБП являлись: мужской пол, возраст от 30 до 59 лет, избыточная масса тела и ожирение (индекс массы тела более 25 кг/м2), гипергликемия, гипер-триглицеридемия, гиперхолестеринемия [5].
Единого хорошо изученного механизма развития НАЖБП не существует. Патогенез НАЖБП многофакторный и включает в себя следующие процессы: главное звено - инсулинорезистентность и изменение профиля гормонов - регуляторов жирового обмена, формирование гиперинсулинемии, активация липолиза в жировой ткани, повышение количества свободных жирных кислот, активация процессов глюконеогенеза в печени, приводящих к гипергликемии, повышение продукции липопротеи-дов очень низкой плотности и снижение захвата триглицеридов с развитием дислипидемии, повышение активности провоспалительных цитокинов и свободных радикалов с развитием воспаления в печени, что в конечном счете ведет к прогрессирова-нию стеатоза в стеатогепатит и фиброз печени с дальнейшим возможным переходом в цирроз [6].
Одним из компонентов сложного патогенеза развития и прогрессирования НАЖБП является воспаление, основными медиаторами которого выступают цитокины. К ключевым цитокинам можно отне-
сти интерлейкин-6 (IL-6) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-a), они стимулируют воспаления, регулируют апоптоз и некроз гепатоцитов, усугубляют инсу-линорезистентность, а также индуцируют фиброз [7].
По данным ряда исследований [8-10], TNF-a коррелирует со степенью жировой дистрофии печени и активирует адгезивные свойства эндотелиальных клеток. Рядом авторов было установлено повышение уровня IL-6 в крови больных НАЖБП [11-13]. При этом концентрация IL-6 в печени имела прямую корреляцию с активностью воспаления, выраженностью фиброза и уровнем этого цитокина в крови, особенно при прогрессировании НАЖБП [14].
Васкулоэндотелиальный фактор роста (VEGF) при воспалительном процессе активирует выработку коллагена звездчатыми клетками печени и механизмы неоангиогенеза. В ряде исследований, проведенных на крысах с НАЖБП и метаболическим синдромом, было показано, что дисфункция эндотелия возникает еще до начала воспаления и развития фиброза в печени [15-18].
В последние годы активно изучают проблему наследственной предрасположенности к развитию НАЖБП. К значимому аспекту следует отнести наличие полиморфизма генов, регулирующих имму-новоспалительные процессы [19]. Гены цитокинов высокополиморфны. Тем не менее количество исследований, направленных на изучение связи полиморфизма генов TNF-a и IL-6 с развитием НАЖБП, невелико, а результаты порой противоречивы. Возможно, это связано с наличием особенностей распределения частот аллелей и генотипов в популяции, обусловлено регионом проживания, расовыми различиями, а также разным методическим подходом. Например, соотношение частот аллелей (А к G) по -308G>A полиморфному маркеру гена TNF у населения Азиатско-Тихоокеанского региона составляет 1,2-7 %, у здоровых жителей Китая - около 3,3 %, а в других популяциях находится в пределах от 12 до 24 %. При этом генотип АА по данному гену у жителей Азиатско-Тихоокеанского региона не встречается, тогда как у представителей других народностей обнаруживается в 1,2-7,9 % [20].
В ряде исследований определялся вклад мутаций в промоторной части гена IL-6 в развитие патологии печени, однако полученные результаты оказались достаточно противоречивыми. По данным литературы, у европейцев с неалкогольным стеато-гепатитом и гепатоцеллюлярной карциномой частота встречаемости аллеля С по -174G>C маркеру гена IL-6 значимо выше, чем в группе здоровых [21, 22]. Также было обнаружено, что носительство аллеля С по -174G>C полиморфизма гена IL-6 ассоциируется с развитием неалкогольного стеатогепатита в рос-
1 Неалкогольная жировая болезнь печени: методические рекомендации / под ред. акад. РАН, д-ра мед. наук,
проф. Г.И. Сторожакова. - М.: Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова, 2015. - 42 с.
сийской популяции [23]. Однако в другом исследовании корреляции данного полиморфизма с развитием патологии печени выявлено не было [24].
Цель исследования - разработать систему расчета риска развития и прогрессирования неалкогольного стеатоза печени (НАСП) на основе интерлейки-на-6 (IL-6), фактора некроза опухоли альфа (TNF-a), васкулоэндотелиального фактора роста (VEGF) и полиморфизма генов TNF-a в регионе -308G/A (rs1800629), IL-6 в регионе -174G/C (rs1800795) и VEGFA в регионе -634G/C (rs2010963).
Материалы и методы. Обследовано 52 больных неалкогольной жировой болезнью печени с клинической формой неалкогольного стеатоза печени (НАСП), из них женщин было 35 (67 %), мужчин - 17 (33 %). Средний возраст пациентов составил 43,0 ± 11,1 г. Наличие стеатоза печени подтверждали путем ультразвукового исследования. В исследование не включали пациентов с жировым гепатозом алкогольной и лекарственной этиологии, которая устанавливалась во время сбора анамнеза, а также не включали больных с неалкогольным стеатогепатитом, который устанавливался оценкой уровня трансаминаз. Анализируемые выборки были одинаково подвержены влиянию факторов, вызывающих развитие НАСП. Преобладание в нашей случайной выборке в Пермском крае лиц женского пола с НАСП сопоставимо с данными более крупных всероссийских исследований [3, 4]1.
В группу контроля вошли 65 практически здоровых человек, сопоставимых по полу и возрасту с основной группой пациентов, без патологии печени и другой патологии, ассоциированной с метаболическим синдромом. Всеми участниками была получена полная информация об исследовании и подписано добровольное информированное согласие.
Уровень цитокинов TNF-a IL-6 и VEGF в сыворотке крови 15 практически здоровых лиц и 40 больных НАСП определяли методом ИФА на спектрофотометре Stat-Fax 2100 (США) с применением наборов фирмы ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).
Исследование полиморфизма генов TNF-a в регионе -308G/A, IL-6 в регионе -mG/С и VEGFA в регионе -634G/C у 52 пациентов с НАСП и 65 здоровых доноров осуществляли на амплификаторе Real-time CFX-96 (Bio-Rad Laboratories, Inc., США). Использовали аллель-специфическую ПЦР «SNP-Скрин» (ЗАО «Синтол», г. Москва).
Для определения риска развития и прогресси-рования НАСП проводилась оценка генетического профиля пациентов и доноров в зависимости от встречаемости генотипов и аллелей исследуемых полиморфизмов генов по разработанной нами шкале балльной оценки.
Значение баллов:
0 - по трем полиморфизмам пациент гомозиготен по протективным аллелям;
1 - гетерозиготен по одному из двух генов;
2 - гетерозиготен по двум генам;
3 - обследуемый имеет обе аллели риска по одному гену, гомозиготен по протективным аллелям по другому гену;
4 - по одному гену у обследуемого имеются обе аллели риска, по другому гену обследуемый гетерозиготен;
5 - обследуемый по обоим генам гомозиготен по аллелям риска Т№-а (АА) / (СС).
По предложенной шкале при наличии у здоровых доноров 0-1 балла риск развития НАСП оценивается как низкий, 2-3 баллов - умеренный, 4-5 баллов - высокий. При выявлении у пациентов 0-1 балла риск прогрессирования НАСП оценивается как низкий, 2-3 баллов - умеренный, 4-5 баллов - высокий.
Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы Statistica 7.0. Количественные параметры были представлены в виде медианы и интерквартильного размаха (01-03). Значимость различий независимых групп оценивалась с помощью критерия Манна - Уитни. Для оценки взаимосвязей применяли коэффициент корреляции Спирмена (г) с определением уровней значимости. Метод X использовали для описания соотношения частот генотипов и аллелей исследуемых полиморфизмов генов. По таблице сопряженности (кросс-табуляции) выявляли зависимость между изучаемыми качественными признаками с использованием коэффициента сопряженности Пирсона (К)2. Достоверными считались различия между выборками при р < 0,05.
Результаты и их обсуждение. По результатам обследования у пациентов с НАСП концентрации Т№-а, 1Ь-6 и уровень в сыворотке крови были значимо выше, чем в контрольной группе (р = 0,03, р = 0,00003 и р = 0,001 соответственно) (табл. 1).
Таблица 1
Концентрации цитокинов TNF-a, IL-6 и VEGF в контрольной группе и у пациентов с НАСП
(Me, 25-й и 75-й перцентили)
Показатель Контрольная группа, n = 15 Пациенты НАСП, n = 40 Р
TNF-a, пг/мл 0 (0; 0,02) 1,1 (0; 3,15) 0,03*
IL-6, пг/мл 0 (0; 0) 0,9 (0; 2,2) 0,0003*
VEGF, пг/мл 86,65 (10,7; 132,4) 184,6 (94,7; 291,6) 0,001*
П р и м е ч а н и е : р - значимость различий, * - статистически значимые различия.
Шелудько В.С., Пермь, 2001. - 36 с.
Подлужная М.Я. Теоретические основы медицинской статистики: методические рекомендации.
Повышение уровня исследуемых провоспали-тельных цитокинов в крови больных НАСП характеризует наличие воспалительного синдрома, что было отмечено и рядом других авторов при НАЖБ [8, 11-13]. При этом Т№-а достоверно коррелировал с концентрацией Ш-6 (г = 0,54; р = 0,0001).
Увеличение концентрации в сыворотке
крови пациентов с НАСП может свидетельствовать о развитии дисфункции эндотелия при этой патологии. Полученные нами данные согласуются с результатами ряда других исследований, подтвердивших наличие эндотелиальной дисфункции при стеа-тозе печени не только биохимическими, но и функциональными методами [25, 26].
У 52 пациентов с НАСП и 65 здоровых доноров практически с одинаковой частотой выявлялись генотипы GG гена Т№-а: в 13,46 и 21,54 % соответственно (х2 = 3,23; р = 0,25; ОЯ = 0,57) и GА - в 78,85 и 78,46 % соответственно (х2 = 1,28; р = 0,96; ОЯ = 1,02) полиморфизма гена ТОТ-а в позиции ге1800629. Значимых различий по распределению аллелей G и А гена Т№-а в регионе -308G/A в изучаемых группах не было обнаружено (р = 0,58 и р = 0,58 соответственно) (табл. 2).
Однако генотип АА гена ТОТ-а в регионе -308G/A значимо чаще регистрировался у больных НАСП, чем в популяции здоровых (7,69 и 0 % со-
ответственно; х2 = 6,05; р = 0,04; ОЯ = 1,76), что отмечали другие исследователи у жителей Азиатско-Тихоокеанского региона [20]. Возможно, носи-тельство генотипа АА гена ТОТ-а (ге1800629) значимо в плане генетической предрасположенности к НАСП.
По полиморфизму гена Ш-6 в регионе -174G/С (ге1800795) значимых различий нами не было выявлено. В обеих когортах отмечено преобладание генотипа GС - в 52,31 и 51,92 % соответственно (X2 = 0,36; р = 0,97; ОЯ = 0,98). Аллели G и С также встречались с одинаковой частотой (р = 0,58 и р = 0,50 соответственно) (табл. 3). В работах других исследователей также опубликованы данные об отсутствии связи этого полиморфизма с развитием НАЖБ [24].
При изучении аллельных вариантов гена VEGFA (О-634С) в позиции ге2010963 нами было установлено, что генотип GС преобладал у здоровых в 35,38 % (х2 = 7,71; р = 0,04). Однако гомозигота СС обнаруживалась значимо чаще в когорте больных НАСП - в 28,85 % случаев с высокой вероятностью (ОЯ = 3,36), а у здоровых - лишь в 10,77 % (х2 = 6,18; р = 0,02). Аллель С гена в регио-
не -634G/C у больных НАСП регистрировался в 54,81 % случаев, что было значимо выше, чем у доноров (х2 = 6,83; р = 0,01; ОЯ = 2,00) (см. табл. 2).
Таблица 2
Частота встречаемости аллельных вариантов генов Т№-а в регионе -308G/A (ге1800629), Ш-6 в регионе -174G/С (ге1800795) и в регионе -634G/C (ге2010963) у пациентов с НАСП
и в группе здоровых доноров
Генотип / аллели генов Доноры (п = 65), % ± т НАСП (п = 52), % ± т ОЯ р
ЮТ-а -308G/A ОО, % 21,54 ± 5,1 13,46 ± 4,73 0,57 0,25
GA, % 78,46 ± 5,1 78,85 ± 5,66 1,02 0,96
АА, % 0 ± 0 7,69 ± 3,69 1,76 0,04*
Аллели О-аллель, % 58,46 ± 4,32 52,88 ± 4,89 0,72 0,58
А-аллель, % 39,23 ± 4,28 47,12 ± 4,89 1,38 0,58
1Ь-6 -174G/С ОО, % 32,31 ± 5,8 28,85 ± 6,28 0,85 0,69
ОС, % 52,31 ± 6,2 51,92 ± 6,93 0,98 0,97
СС, % 15,38 ± 4,47 19,23 ± 5,47 1,31 0,59
Аллели О-аллель, % 58,46 ± 4,32 54,81 ± 4,88 0,86 0,58
С-аллель, % 41,54 ± 4,32 45,19 ± 4,88 1,16 0,58
VEGFA -634G/C ОО, % 35,38 ± 5,93 19,23 ± 5,47 0,43 0,04*
ОС, % 53,85 ± 6,18 51,92 ± 6,93 0,93 0,84
СС, % 10,77 ± 3,85 28,85 ± 6,28 3,36 0,02*
Аллели О-аллель, % 62,31 ± 4,25 45,19 ± 4,88 0,50 0,01*
С-аллель, % 37,69 ± 4,25 54,81 ± 4,88 2,00 0,01*
П р и м е ч а н и е : ОЯ - отношение шансов, р - значимость различий, * - различия статистически значимые.
Таблица 3
Генетический профиль доноров и пациентов с НАСП
Группы Баллы
0 1 2 3 4 5
Доноры, % (абс.) 9 (6) 42 (27) 35 (23) 3 (2) 11 (7) -
НАСП, % (абс.) 2 (1) 23 (12) 40 (21) 4 (2) 29 (15) 2 (1)
Нами не было выявлено значимых различий в частотах генов у женщин и мужчин с НАСП. Учитывая тот факт, что гены расположены в ауто-сомах (неполовых хромосомах) и наследуются независимо от пола, мы полагаем, что гендерный фактор не оказывает значимого влияния на риск развития НАСП.
Таким образом, можно предположить, что предиктором развития НАСП является аллель С в локу-се гена VEGFA ^-634С). В наших предыдущих исследованиях была показана его значимость при хро-низации вирусных заболеваний печени [27].
Следовательно, риск развития НАСП ассоциирован с носительством генотипа АА гена Т№-а -308G/A и генотипа СС гена VEGFA -634G/C.
При оценке зависимости по таблице сопряженности в группе с НАСП была выявлена взаимосвязь полиморфизма региона -308G/A гена ТОТ-а с активацией выработки цитокинов Т№-а и ГЬ-6 (Кг = 0,558; р = 0,043 и К = 0,597; р = 0,042 соответственно), что может приводить к прогрессиро-ванию иммуновоспалительного синдрома в группе носителей.
Для определения риска развития и прогрессиро-вания НАСП проводилась оценка генетического профиля здоровых доноров и пациентов в зависимости от встречаемости генотипов и аллелей генов ТМР-а в регионе -308G/A и VEGFA в регионе -634G/C по разработанной нами шкале балльной оценки. По предложенной шкале при наличии у здоровых доноров 01 балла риск развития НАСП оценивается как низкий, 2-3 баллов - как умеренный, 4-5 баллов - как высокий. При выявлении у пациентов 0-1 балла риск про-грессирования НАСП оценивается как низкий, 2-3 баллов - как умеренный, 4-5 баллов - как высокий.
В группе доноров более половины (51 %) имели низкий риск развития НАСП (0-1 балл по шкале), 38 % - умеренный (2-3 балла), 11 % - высокий (4 балла) (табл. 3).
В группе пациентов 25 % имели низкий риск прогрессирования НАСП (0-1 балл), почти половина
больных (44 %) - умеренный (2-3 балла), а треть обследуемых (31 %) - высокий риск (4-5 баллов) по шкале.
Выводы. Среди больных НАСП преобладают женщины в возрасте от 32 до 54 лет (67 %). У больных НАСП выявлены высокие уровни провоспали-тельных цитокинов ТОТ-А и ГЬ-6, а также повышенная концентрация VEGF, что свидетельствует о наличии воспалительного синдрома и эндотелиаль-ной дисфункции при данной патологии.
У пациентов с НАСП в регионе -308G/A гена Т№-а значимо чаще обнаруживалась гомозигота АА, чем в популяции доноров.
При изучении комбинаций аллельных вариантов гена -634G/C в позиции ге2010963 гомозигота СС и аллель С значимо чаще регистрировались в группе больных НАСП, чем у практически здоровых лиц.
По генотипам и аллелям полиморфизма гена ГЬ-6 в регионе -174G/С (ге1800795) не выявлено достоверной разницы. Следовательно, риск развития НАСП ассоциирован с носительством генотипа АА гена ТОТ^а -308G/A и генотипа СС гена \EGFA -634G/C, особенно в сочетании с высоким уровнем провоспалительных цитокинов.
Предлагаемые подходы с применением анализа генетического профиля по генам Т№-а в регионе -308G/A и VEGFA в регионе -634G/C позволяют провести раннюю неинвазивную диагностику риска развития НАСП у здоровых (при наличии 4-5 баллов риск оценивается как высокий) и риска возможного прогрессирования НАСП у больных (при наличии 4-5 баллов риск развития и соответственно прогрессирования оценивается как высокий) и могут быть использованы в практическом здравоохранении.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы статьи заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Список литературы
1. The diagnosis and management of non-alcoholic fatty liver disease: Practice Guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases, American College of Gastroenterology, and American Gastroenterological Association / N. Chalasani, Z. Younossi, J.W. Lavine, A.M. Diehl, E.M. Brunt, K. Cusi, M. Charlton, A.J. Sanyal // Hepatology. - 2012. -Vol. 55, № 6. - P. 2005-2023. DOI: 10.1002/hep.25762
2. Структура поражений печени у больных с ожирением и метаболическим синдромом / А.Г. Курская, Л.В. Чес-нокова, И.А. Трошина, М.Н. Гончарова, И.М. Петров // Медицинская наука и образование Урала. - 2013. - Т. 14, № 1 (73). - С. 34-37.
3. Павлов Ч., Бакулин И. Неалкогольный стеатогепатит: клинические особенности и принципы лечения // Врач. - 2007. - № 10. - С. 24-28.
4. Драпкина О.М., Ивашкин В.Т. Эпидемиологические особенности неалкогольной жировой болезни печени в России (результаты открытого многоцентрового проспективного исследования-наблюдения DIREG L 01903) // РЖГГК. - 2014. - Т. 24, № 4. - С. 32-38.
5. Комова А.Г., Маевская М.В., Ивашкин В.Т. Принципы эффективной диагностики диффузных заболеваний печени на амбулаторном этапе // РЖГГК. - 2014. - Т. 24, № 6. - С. 36-41.
6. Клинические рекомендации по диагностике и лечению неалкогольной жировой болезни печени Российского общества по изучению печени и Российской гастроэнтерологической ассоциации / В.Т. Ивашкин, М.В. Маевская, Ч.С. Павлов, И.Н. Тихонов, Е.Н. Широкова, А.О. Буеверов, О.М. Драпкина, Ю.О. Шульпекова [и др.] // РЖГГК. - 2016. - Т. 26, № 2. - С. 24-42.
7. Role of cytokines and chemokines in non-alcoholic fatty liver disease / V. Braunesreuther, G.L. Viviani, F. Mach,
F. Montecucco // World J. Gastroenterol. - 2012. - Vol. 18, № 8. - P. 727-735. DOI: 10.3748/wjg.v18.i8.727
8. TNF-a is an inflammatory marker of cardiovascular risks in non-alcoholic fatty liver disease / R. Khan, S. Quaiser, S.F. Haque, A. Ahmad // Journal of Clinical and Diagnostic Research. - 2011. - Vol. 5, № 6. - P. 1237-1240.
9. Роль фактора некроза опухоли в развитии метаболического синдрома / Н.С. Юбицкая, М.В. Антонюк, Л.В. Ве-ремчук, К.К. Ходосова // Терапевтический архив. - 2009. - Т. 81, № 11. - С. 59-63.
10. Similarities and differences in outcomes of cirrhosis due to nonalcoholic steatohepatitis and hepatitis C / A.J. Sanyal, C. Banas, C. Sargeant, V.A. Luketic, R.K. Sterling, R.T. Stravitz, M.L. Shiffman, D. Heuman [et al.] // Hepatology. - 2006. -Vol. 43, № 4. - P. 682-689. DOI: 10.1002/hep.21103
11. Systemic inflammation in nonalcoholic fatty liver disease is characterized by elevated levels of CCL2 / J.W. Haukeland, J.K. Damas, Z. Konopski, E.M. L0berg, T. Haaland, I. Goverud, P.A. Torjesen, K. Birkeland [et al.] // Journal of Hepatology. - 2006. - Vol. 44, № 6. - P. 1167-1174. DOI: 10.1016/jjhep.2006.02.011
12. Cytokines and NASH: a pilot study of the effects of lifestyle modification and vitamin E / M. Kugelmas, D.B. Hill,
B. Vivian, L. Marsano, C.J. McClain // Hepatology. - 2003. - Vol. 38, № 2. - P. 413-419. DOI: 10.1053/jhep.2003.50316
13. Serum cytokine and soluble cytokine receptor levels in patients with nonalcoholic steatohepatitis / S. Abiru, K. Migita, Y. Maeda, M. Daikoku, M. Ito, K. Ohata, S. Nagaoka, T. Matsumoto [et al.] // Liver Int. - 2006. - Vol. 26, № 1. - P. 39-45. DOI: 10.1111/j.1478-3231.2005.01191.x
14. Increased hepatic and circulating interleukin-6 levels in human nonalcoholic steatohepatitis / A. Wieckowska, B.G. Pa-pouchado, Z. Li, R. Lopez, N.N. Zein, A.E. Feldstein // Am. J. Gastroenterol. - 2008. - Vol. 103, № 6. - P. 1372-1379. DOI: 10.1111/j.1572-0241.2007.01774.x
15. Angiogenesis-independent endothelial protection of liver: role of VEGF / J. LeCouter, D.R. Moritz, B. Li, G.L. Phillips, X.H. Liang, H.P. Gerber, K.J. Hillan, N. Ferrara // Science. - 2003. - Vol. 299, № 5608. - P. 890-893. DOI: 10.1126/science.1079562
16. Vascular endothelial growth factor promotes fibrosis resolution and repair in mice / L. Yang, J. Kwon, Y. Popov,
G.B. Gajdos, T. Ordog, R.A. Brekken, D. Mukhopadhyay, D. Schuppan [et al.] // Gastroenterology. - 2014. - Vol. 146, № 5. -P. 1339-1350.e1. DOI: 10.1053/j.gastro.2014.01.061
17. Драпкина О.М., Деева Т.А., Ивашкин В.Т. Оценка эндотелиальной функции и степени апоптоза у пациентов с метаболическим синдромом и неалкогольной жировой болезнью печени // Терапевтический архив. - 2015. - Т. 87, № 5. -
C. 76-83. DOI: 10.17116/terarkh201587576-83
18. Hepatic endothelial dysfunction and abnormal angiogenesis: New targets in the treatment of portal hypertension / J. Bosch, J.G. Abraldes, M. Fernández, J.C. García-Pagán // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53, № 3. - P. 558-567. DOI: 10.1016/j.jhep.2010.03.021
19. Lewis J.R., Mohanty S.R. Nonalcoholic fatty liver disease: a review and update // Dig. Dis. Sci. - 2010. - Vol. 55, № 3. - P. 560-578. DOI: 10.1007/s10620-009-1081-0
20. Influence of polygenetic polymorphisms on the susceptibility to non-alcoholic fatty liver disease of Chinese people / Y.-J. Zhou, Y.-Y. Li, Y.-Q. Nie, H. Yang, Q. Zhan, J. Huang, S.L. Shi, X.-B. Lai, H.-L. Huang // J. Gastroenterol. Hepatol. -
2010. - Vol. 25, № 4. - P. 772-777. DOI: 10.1111/j.1440-1746.2009.06144x
21. Genetic polymorphisms in non-alcoholic fatty liver disease: interleukin-6-174G/C polymorphismis associated with non-alcoholic steatohepatitis / L. Carulli, I. Canedi, S. Rondinella, S. Lombardini, D. Ganazzi, S. Fargion, M. De Palma, A. Lonardo [et al.] // Dig. Liver Dis. - 2009. - Vol. 41, № 11. - P. 823-828. DOI: 10.1016/j.dld.2009.03.005
22. IL-6-174G/C polymorphism and IL-6 serum levels in patients with liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma / L. Giannitrapani, M. Soresi, A. Giacalone, M.E. Campagna, M. Marasá, M. Cervello, S. Marasá, G. Montalto // OMICS. -
2011. - Vol. 15, № 3. - P. 183-186. DOI: 10.1089/omi.2010.0093
23. Курбатова И.В., Дуданова О.П., Топчиева Л.В. Роль полиморфизма rs4537545 (C>T) гена IL6R в развитии неалкогольного стеатогепатита // Медицинский академический журнал. - 2016. - Т. 16, № 4. - С. 59-61.
24. The role of interleukin-6 and interleukin-8 gene polymorphisms in non-alcoholic steatohepatitis / M. Cengiz,
D.G. Yasar, M.A. Ergun, G. Akyol, S. Ozenirler // Hepat. Mon. - 2014. - Vol. 14, № 12. - P. e24635. DOI: 10.5812/hepatmon.24635
25. Пивторак Е.В. Нарушения функции эндотелия у больных неалкогольной жировой болезнью печени // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2014. - Т. 102, № 2. - С. 63а.
26. Evaluation of endothelial dysfunction in patients with nonalcoholic fatty liver disease: Association of selenoprotein P with carotid intima-media thickness and endothelium-dependent vasodilation / I. Cetindagli, M. Kara, A. Tanoglu, V. Ozalper, S. Aribal, Y. Hancerli, M. Unal, O. Ozari [et al.] // Clin. Res. Hepatol. Gastroenterol. - 2017. - Vol. 41, № 5. - P. 516-524. DOI: 10.1016/j.clinre.2017.01.005
27. Булатова И.А. Васкулоэндотелиальный фактор роста и полиморфизм гена VEGF (rs2010963) в патогенезе хронического вирусного гепатита С [Электронный ресурс] // Современные проблемы науки и образования. - 2013. -№ 6. - URL: http://www.science-education.ru/113-11340 (дата обращения: 07.02.2021).
К оценке риска развития и прогрессирования неалкогольного стеатоза печени с использованием факторов TNF-a, IL-6, VEGF и полиморфизмов их генов / И.А. Булатова, Л.Д. Пестренин, Т.П. Шевлюкова, А.М. Мифтахова, А.В. Кривцов, И.Л. Гуляева // Анализ риска здоровью. - 2022. - № 1. - С. 114-122. DOI: 10.21668/health.risk/2022.1.12
И.А. Булатова, Л.Д. Пестренин, Т.П. Шевлюкова, А.М. Мифтахова, А.В. Кривцов, И.Л. Гуляева UDC 616.36-003.826-036.17-036.3-079.3: 577.21 Read ¡ШШ
DOI: 10.21668/health.risk/2022.1.12.eng online ¡-™
EiSHS"
Research article
ON ASSESSING RISKS OF DEVELOPING AND PROGRESSING NON-ALCOHOLIC FATTY LIVER DISEASE USING TNF-A, IL6, AND VEGF FACTORS AND POLYMORPHISMS OF THEIR GENES
1 1 з
I.A. Bulatova , L.D. Pestrenin , T.P. Shevlyukova ,
A.M. Miftakhova, A.V. Krivtsov2, I.L. Gulyaeva1
:Perm State Medical University named after Academician E.A. Wagner, 26 Petropavlovskaya Str., Perm, 614990, Russian Federation
2Federal Scientific Center for Medical and Preventive Health Risk Management Technologies, 82 Monastyrskaya Str., Perm, 614045, Russian Federation
3Tyumen State Medical University, 54 Odesskaya Str., Tyumen, 625023, Russian Federation
Our research aim was to develop a system for calculating risks of development and progression of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). The system would be based on interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-alpha (TNF-a), vascular endothelial growth factor (VEGF) and TNF-a gene polymorphism in the region -308G/A (rs1800629), IL-6 in the region -174G/C (rs1800795), and VEGFA in the region -634G/C (rs2010963).
We examined 52 patients with NAFLD and 65 healthy donors. The examination involved estimating levels of cytokines TNF-a, IL-6 and VEGF in blood serum. We also studied the polymorphism of the TNF-a genes in the -308G/A region, IL-6 in the -174G/C region, and VEGFA in the -634G/C region.
Women aged from 32 to 54 years prevailed among patients with NAFLD (67 %). We established in this research that concentrations of the pro-inflammatory cytokines TNF-a, IL-6 and the level of VEGF in the blood serum were significantly higher in patients with NAFLD than in the reference group (p = 0.03; p = 0.00003 and p = 0.001 accordingly). This confirms an occurring inflammatory syndrome and endothelial dysfunction that are typical for this pathology. Patients with NAFLD tended to have the AA genotype of the TNF-a -308G/A gene (rs1800629) significantly more frequently than healthy donors (p = 0.04). Homozygote CC and allele C of the VEGFA gene (G-634C) in the position rs2010963 were significantly more often detected in the test group (patients with NAFLD) than in the reference one (p = 0.02 and p = 0.01 respectively). We didn't detect any statistically significant differences in the IL-6 gene polymorphism in the -174G/C (rs1800795) region in the analyzed groups. TNF-a -308G/A gene polymorphism correlated with activating production of TNF-a and IL-6 cytokines (Ki = 0.588; p = 0.043 and Ki = 0.597; p = 0.04, respectively), which can lead to developing immune-inflammatory syndrome in its carriers. When determining genetic profiles, we established that 51 % donors had low risks of NAFLD development whereas the risk was high for 75 % of patients with the disease.
The risk of developing NASP is associated with carrying the AA genotype of the TNF-a -308G/A gene and the CC genotype of the VEGFA -634G/C gene. Assessment of a genetic profile using these markers provides an opportunity to assess risks of developing NAFLD in healthy people and to predict its progression in patients with the disease.
Key words: non-alcoholic fatty liver disease, cytokines, tumor necrosis factor alpha, interleukin-6, vascular endothe-lial growth factor, gene polymorphism.
© Bulatova I.A., Pestrenin L.D., Shevlyukova T.P., Miftakhova A.M., Krivtsov A.V., Gulyaeva I.L., 2022
Irina A. Bulatova - Doctor of Medical Sciences, Head of the Department for Normal Physiology, Professor at the Department of Faculty Therapy No. 2, Occupational Pathology and Clinical Laboratory Diagnostics (e-mail: [email protected]; tel.: +7 (342) 217-10-31; ORCID: http://orcid.org/0000-0002-7802-4796).
Lev D. Pestrenin - lecturer at the Department of Pathological Physiology (e-mail: [email protected]; tel.: +7 (342) 217-10-31; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-1786-4329).
Tatyana P. Shevlyukova - Doctor of Medical Sciences, Professor at the Obstetrics and Gynecology Department (e-mail: [email protected]; tel.: +7 (922) 394-28-08; ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7019-6630).
Albina M. Miftakhova - post-graduate student at the Department of Pathological Physiology (e-mail: [email protected]; tel.: +7 (963) 871-91-56; ORCID: https://orcid.org/0000-0001-9149-6328).
Aleksandr V. Krivtsov - Candidate of Medical Sciences, Head of the Immune Genetics Laboratory (e-mail: [email protected]; tel.: +7 (342) 236-86-99; ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7986-0326).
Inna L. Gulyaeva - Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Department of Pathological Physiology (e-mail: [email protected]; tel.: +7 (342) 217-10-31; ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7521-1732).
References
1. Chalasani N., Younossi Z., Lavine J.W., Diehl A.M., Brunt E.M., Cusi K., Charlton M., Sanyal A.J. The diagnosis and management of non-alcoholic fatty liver disease: Practice Guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases, American College of Gastroenterology, and American Gastroenterological Association. Hepatology, 2012, vol. 55, no. 6, pp. 2005-2023. DOI: 10.1002/hep.25762
2. Kurskaya A.G., Tchesnokova L.V., Troshina I.A., Goncharova M.N., Petrov I.M. The structure of the liver lesions in patients with obesity and metabolic syndrome. Meditsinskaya nauka i obrazovanie Urala, 2013, vol. 14, no. 1 (73), pp. 34-37 (in Russian).
3. Pavlov Ch., Bakulin I. Nealkogol'nyi steatogepatit: klinicheskie osobennosti i printsipy lecheniya [Non-alcoholic steatohepatitis: clinical features and treatment principles]. Vrach, 2007, no. 10, pp. 24-28 (in Russian).
4. Drapkina O.M., Ivashkin V.T. Epidemiologicheskie osobennosti nealkogol'noi zhirovoi bolezni pecheni v Rossii (rezul'taty otkrytogo mnogotsentrovogo prospektivnogo issledovaniya-nablyudeniya DIREG L 01903) [Epidemiologic features of non-alcoholic fatty liver disease in Russia (Results of open multicenter prospective follow-up study DIREG L 01903)]. RZhGGK, 2014, vol. 24, no. 4, pp. 32-38 (in Russian).
5. Komova A.G., Maevskaya M.V., Ivashkin V.T. Printsipy effektivnoi diagnostiki diffuznykh zabolevanii pecheni na ambulatornom etape [Principles of effective diagnostics of diffuse liver diseases at out-patient stage]. RZhGGK, 2014, vol. 24, no. 5, pp. 36-41 (in Russian).
6. Ivashkin V.T., Maevskaya M.V., Pavlov Ch.S., Tikhonov I.N., Shirokova E.N., Bueverov A.O., Drapkina O.M., Shul'pekova Yu.O. [et al.]. Klinicheskie rekomendatsii po diagnostike i lecheniyu nealkogol'noi zhirovoi bolezni pecheni Ros-siiskogo obshchestva po izucheniyu pecheni i Rossiiskoi gastroenterologicheskoi assotsiatsii [Clinical guidelines for the diagnosis and treatment of non-alcoholic fatty liver disease of the Russian Society for the Study of the Liver and the Russian Gastroenterological Association]. RZhGGK, 2016, vol. 26, no. 2, pp. 24-42 (in Russian).
7. Braunesreuther V., Viviani G.L., Mach F., Montecucco F. Role of cytokines and chemokines in non-alcoholic fatty liver disease. World J. Gastroenterol., 2012, vol. 18, no. 8, pp. 727-735. DOI: 10.3748/wjg.v18.i8.727
8. Khan R., Quaiser S., Haque S.F., Ahmad A. TNF-a is an inflammatory marker of cardiovascular risks in non-alcoholic fatty liver disease. JCDR, 2011, vol. 5, no. 6, pp. 1237-1240.
9. Yubitskaya N.S., Antonyuk M.V., Veremchuk L.V., Khodosova K.K. Role of tumor necrosis factor in the development of metabolic syndrome. Terapevticheskii arkhiv, 2009, vol. 81, no. 11, pp. 59-63 (in Russian).
10. Sanyal A.J., Banas C., Sargeant C., Luketic V.A., Sterling R.K., Stravitz R.T., Shiffman M.L., Heuman D. [et al.]. Similarities and differences in outcomes of cirrhosis due to nonalcoholic steatohepatitis and hepatitis C. Hepatology, 2006, vol. 43, no. 4, pp. 682-689. DOI: 10.1002/hep.21103
11. Haukeland J.W., Damás J.K., Konopski Z., L0berg E.M., Haaland T., Goverud I., Torjesen P.A., Birkeland K. [et al.]. Systemic inflammation in nonalcoholic fatty liver disease is characterized by elevated levels of CCL2. J. Hepatol., 2006, vol. 44, no. 6, pp. 1167-1174. DOI: 10.1016/jjhep.2006.02.011
12. Kugelmas M., Hill D.B., Vivian B., Marsano L., McClain C.J. Cytokines and NASH: a pilot study of the effects of lifestyle modification and vitamin E. Hepatology, 2003, vol. 38, no. 2, pp. 413-419. DOI: 10.1053/jhep.2003.50316
13. Abiru S., Migita K., Maeda Y., Daikoku M., Ito M., Ohata K., Nagaoka S., Matsumoto T. [et al.]. Serum cytokine and soluble cytokine receptor levels in patients with nonalcoholic steatohepatitis. Liver Int., 2006, vol. 26, no. 1, pp. 39-45. DOI: 10.1111/j.1478-3231.2005.01191.x
14. Wieckowska A., Papouchado B.G., Li Z., Lopez R., Zein N.N., Feldstein A.E. Increased hepatic and circulating interleukin-6 levels in human nonalcoholic steatohepatitis. Am. J. Gastroenterol., 2008, vol. 103, no. 6, pp. 1372-1379. DOI: 10.1111/j.1572-0241.2007.01774.x
15. LeCouter J., Moritz D.R., Li B., Phillips G.L., Liang X.H., Gerber H.P., Hillan K.J., Ferrara N. Angiogenesis-independent endothelial protection of liver: role of VEGF. Science, 2003, vol. 299, no. 5608, pp. 890-893. DOI: 10.1126/science.1079562
16. Yang L., Kwon J., Popov Y., Gajdos G.B., Ordog T., Brekken R.A., Mukhopadhyay D., Schuppan D. [et al.]. Vascular endothelial growth factor promotes fibrosis resolution and repair in mice. Gastroenterology, 2014, vol. 146, no. 5, pp. 1339-1350.e1. DOI: 10.1053/j.gastro.2014.01.061
17. Drapkina O.M., Deeva T.A., Ivashkin V.T. Evaluation of endothelial function and estimation of the degree of apop-tosis in patients with metabolic syndrome and non-alcoholic fatty liver disease. Terapevticheskii arkhiv, 2015, vol. 87, no. 5, pp. 76-83. DOI: 10.17116/terarkh201587576-83 (in Russian).
18. Bosch J., Abraldes J.G., Fernández M., García-Pagán J.C. Hepatic endothelial dysfunction and abnormal an-giogenesis: New targets in the treatment of portal hypertension. J. Hepatol., 2010, vol. 53, no. 3, pp. 558-567. DOI: 10.1016/j.jhep.2010.03.021
19. Lewis J.R., Mohanty S.R. Nonalcoholic fatty liver disease: a review and update. Dig. Dis. Sci., 2010, vol. 55, no. 3, pp. 560-578. DOI: 10.1007/s10620-009-1081-0
20. Zhou Y.-J., Li Y.-Y., Nie Y.-Q., Yang H., Zhan Q., Huang J., Shi S.-L., Lai X.-B., Huang H.-L. Influence of poly-genetic polymorphisms on the susceptibility to nonalcoholic fatty liver disease of Chinese people. J. Gastroenterol. Hepatol., 2010, vol. 25, no. 4, pp. 772-777. DOI: 10.1111/j.1440-1746.2009.06144x
21. Carulli L., Canedi I., Rondinella S., Lombardini S., Ganazzi D., Fargion S., De Palma M., Lonardo A. [et al.]. Genetic polymorphisms in non-alcoholic fatty liver disease: interleukin-6-174G/C polymorphismis associated with non-alcoholic steatohepatitis. Dig. Liver Dis., 2009, vol. 41, no. 11, pp. 823-828. DOI: 10.1016/j.dld.2009.03.005
22. Giannitrapani L., Soresi M., Giacalone A., Campagna M.E., Marasà M., Cervello M., Marasà S., Montalto G. IL-6-174G/C polymorphism and IL-6 serum levels in patients with liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. OMICS, 2011, vol. 15, no. 3, pp. 183-186. DOI: 10.1089/omi.2010.0093
23. Kurbatova I.V., Dudanova O.P., Topchieva L.V. Rol' polimorfizma rs4537545 (C>T) gena IL6R v razvitii nealkogol'nogo steatogepatita [The role of the rs4537545 (C>T) polymorphism of the IL6R gene in the development of non-alcoholic fatty liver disease]. Meditsinskii akademicheskii zhurnal, 2016, vol. 16, no. 4, pp. 59-61 (in Russian).
24. Cengiz M., Yasar D.G., Ergun M.A., Akyol G., Ozenirler S. The role of interleukin-6 and interleukin-8 gene polymorphisms in non-alcoholic steatohepatitis. Hepat. Mon., 2014, vol. 14, no. 12, pp. e24635. DOI: 10.5812/hepatmon.24635
25. Pivtorak E.V. Narusheniya funktsii endoteliya u bol'nykh nealkogol'noi zhirovoi bolezn'yu pecheni [Endothelial dysfunction in patients with non-alcoholic fatty liver disease]. Eksperimental'naya i klinicheskaya gastroenterologiya, 2014, vol. 102, no. 2, pp. 63a (in Russian).
26. Cetindagli I., Kara M., Tanoglu A., Ozalper V., Aribal S., Hancerli Y., Unal M., Ozari O. [et al.]. Evaluation of endo-thelial dysfunction in patients with nonalcoholic fatty liver disease: Association of selenoprotein P with carotid intima-media thickness and endothelium-dependent vasodilation. Clin. Res. Hepatol. Gastroenterol., 2017, vol. 41, no. 5, pp. 516-524. DOI: 10.1016/j.clinre.2017.01.005
27. Bulatova I.A. Vaskuloendotelial'nyi faktor rosta i polimorfizm gena VEGF (rs2010963) v patogeneze khronicheskogo virusnogo gepatita C [Vasculoendothelial growth factor and VEGF gene polymorphism (rs2010963) in the pathogenesis of chronic viral hepatitis C]. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya, 2013, no. 6. Available at: http://www.science-education.ru/113-11340 (07.02.2021) (in Russian).
Bulatova I.A., Pestrenin L.D., Shevlyukova T.P., Miftakhova A.M., Krivtsov A. V., Gulyaeva I.L. On assessing risks of developing and progressing non-alcoholic fatty liver disease using TNF-a, IL-6, and VEGF factors and polymorphisms of their genes. Health Risk Analysis, 2022, no. 1, pp. 114-122. DOI: 10.21668/health.risk/2022.1.12.eng
Получена: 28.01.2022 Одобрена: 04.03.2022 Принята к публикации: 11.03.2022
