CC BY
10
УДК 614.777:543.39:576.858.2»
К МЕТОДИКЕ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ ВОДЫ ЭНТЕРОВИРУСОВ
Канд. мед. наук Г. А. Багдасарьян Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
В настоящее время все большее значение приобретает индикация энтеровирусов в объектах внешней среды. Рядом отечественных и зарубежных исследователей установлено, что значительное количество энтеровирусов присутствует в сточных водах, причем полной очистки последних от энтеровирусов на очистных сооружениях не происходит. Следовательно, одним из возможных путей распространения энтерови-русной инфекции может явиться загрязнение открытых водоемов сточными водами.
В связи с этим необходимы разработка чувствительных методов индикации энтеровирусов в водоемах и систематические санитарно-вирусологические исследования в натурных условиях. Что касается энтеровирусов, то они выделяются из сточных вод довольно легко в связи со значительной концентрацией их в этой воде. В то же время санитар-но-вирусологические исследования открытых водоемов сопряжены с большими трудностями.
Для отбора проб сточных вод при санитарно-вирусологических исследованиях сейчас повсеместно применяется метод тампонов по Moore. Этот метод, первоначально предложенный автором для концентрирования из воды патогенных бактерий, позволяет также концентрировать кишечные вирусы в сравнительно небольшом (50—80 мл) объеме пробы в количестве, которое может быть обнаружено при заражении культуры ткани.
Однако ряд особенностей этого метода затрудняет использование его при санитарно-вирусологических исследованиях открытых водоемов. Так, не всегда возможно установить тампоны на берегу реки или другого водоема так, чтобы они в течение длительного времени находились в токе воды; прибрежная полоса реки обычно сильнее загрязнена промышленными выбросами, мусором и нефтяной пленкой; пробы, отобранные при помощи тампонов, являются усредненными и не отражают колебаний в концентрации энтеровирусов в течение суток. В ряде случаев нужен одноразовый отбор воды для анализа на энтеровирусы.
В связи с этим нами разработана модификация тампонного метода для санитарно-вирусологического исследования открытых водоемов. Принцип ее заключается в том, что концентрация энтеровирусов производится из большого объема воды (3—5 л) при помощи тампона, но в лабораторных условиях. Возможность производить в любой точке открытого водоема одноразовый забор воды для санитарно-вирусологического анализа на энтеровирусы позволяет избежать недостатков тампонного метода.
Предлагаемая методика отбора и первичной обработки воды для санитарно-вирусологического анализа заключается в следующем. Отбирают одноразовую пробу воды в объеме 3—5 лив стерильной бутыли транспортируют в лабораторию. Первичную обработку проб желательно начинать в день отбора пробы. Если это невозможно, то. пробу до следующего дня помещают в холодильник при 5—7°. Хранить необработанные пробы воды более 24 часов не рекомендуется, так как титр энтеровирусов при этом может значительно понизиться.
Первичную обработку пробы воды производят так. Взятую для пробы воду переливают в стерильную широкогорлую банку. Заранее готовят тампон из 48 слоев марли размером 10X10 см, прошивают
леской или суровой ниткой и стерилизуют в автоклаве. Тампон прикрепляют к стеклянному шпателю, наносят на него 1 мл нативной бычьей сыворотки и помещают в банку с водой. Стеклянный шпатель другим концом соединяют с электрическим моторчиком, снабженным реостатом. Мотор закрепляют на бун-зеновском штативе и включают в электрическую сеть (см. рисунок). Винт реостата регулируют так, чтобы шпатель (а следовательно, и тампон) вращались со скоростью 25—30 об/мин. При такой скорости достигается равномерное перемешивание всей массы воды. Длительность контакта тампона с пробой составляет 30—40 мин. В течение этого периода происходит адсорбция энтеровирусов, находящихся в исследуемом объеме воды, на тампоне, чему способствует присутствие сывороточных белков. Затем мотор выключают и тампон переносят в стерильный химический стакан, где тщательно отжимают; доводят рН до 8,0 путем добавления 1 н. раствора ЫаОН для полной десорбции энтеровирусов, адсорбировавшихся на поверхности тампона. Пробу переносят в стерильный флакон и до концентрирования хранят при —20°.
Дальнейшую обработку полученной таким образом первично сконцентрированной пробы мы производили по методу Риордана, включающему повторное центрифугирование при 25 000 об/мин, обработку эфиром и антибиотиками. Описанная выше методика была проверена нами в натурных условиях при са-
нитарно - вирусологическом Выделение энтеровирусов из речной воды
исследовании воды Москва-реки (см.таблицу).
Представленные в таблице данные относительно выделения энтеровирусов из
Установка для обработки проб воды.
Способ обработки проб Исследовано проб Количество проб, содержащих энтеровирусы Выделение (в «»)
Без концентрации При помощи тампона 100 102 12 68 12 68
обработки показывают эффективность метода.
Предлагаемая модификация тампонного метода может быть использована для индикации энтеровирусов в воде ввиду ее значительной простоты и достаточной чувствительности.
ЛИТЕРАТУРА
М о о г е В., Л. Нуг. (Ьопё.), 1952, V. 50, р. 137.
Поступила 31/У 1967 г.
