К изучению бактерицидного действия роданида Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

В. П. УМАНСКАЯ (Москва)

К изучению бактерицидного действия

роданида

(Возможность применения кислого раствора роданида в практике текущей дезинфекции)

Из Московского дезинфекционного института

Физико-химические .и бактерицидные свойства кислого роданида, изученные нами на чистых культурах совместно с химиком Щелку-новой, привели нас к мысли о возможности применения роданида в практике текущей дезинфекции.

По существу наш ассортимент дезинфекционных средств крайне ограничен, и совершенно прав Диккомейт в своем утверждении, что хотя химическая промышленность и выпускает большое количество препаратов с новыми названиями, но их эффективность очень невелика, и в результате дело сводится опять-таки к препаратам сулемы, фенола и крезола, несмотря на ряд их недостатков. Поэтому необходимо использовать всякую возможность получения нового дезинфекционного средства.

В мировой литературе последних двух лет часто сообщается о различных патентованных средствах, действующим началом которых является роданид. Так, например, Leunig и Loch изучили препарат «термовайднерит», который является хорошо устойчивым порошком, прекрасно растворимым в воде и удобным для применения на практике. В 5 г этого порошка содержится 4 950 г MgS04; 0,016 г (NH4)2 S04, 0,019 г NaSCN; 0,015 г Na2S04 NaHS04. Такой порошок растворяется в 10 ,см3 воды.

Испытанию подверглись порошку с различным содержанием NaSCN. Авторы испытывали бактерицидность этого препарата в отношении 'бактерий паратифа В, Вас. coli, Вас. abortus Bang, сибирской язвы, 'Staphyloc. aureus pyogenes.

Другой патентованный препарат, содержащий роданид, «Weidnerit-gel», был испытан Schmidt-Holensdorf и Schünemann при стрептококковом мастите коров. Авторы отмечают способность «Weidnerit-gel» проникать в органическую среду и размягчать ее. Поэтому бактерии, заключенные в хлопьях (как грубых, так и нежных), делаются доступными воздействию данного препарата. Следовательно, роданид ibi этом случае является терапевтическим средством при мастите коров.

Lockemann и Ulrich, испытывая влияние натрия роданида на туберкулезную палочку и туберкулезную мокроту, пришли к выводу, что в данном случае роданиды действуют значительно сильнее других средств.

По мнению Lockemann и Ulrich, бактерицидный эффект кислого раствора роданида зависит от количества водородных ионов.; так, например, сильно диссоциированная соляная кислота резко повышает свое действие на кишечную палочку при прибавлении 0,001% NaSCN, а слабо диссоциированная уксусная кислота при том же количестве роданида действует только через четыре часа. Это не противоречит наблюдениям Spengler, который показал, что прибавление 0,04 pro mille KSCN к соляной кислоте резко повышает ее бактерицидные свойства. Диккомейт доказывает преимущества нового препарата То-nerdo-Rhodan перед другими, так как 0,55% раствор его уничтожает в течение 2 — 3 минут бактерии тифа, стафилококка, пара-

тифа В и др. По данным Диккомейта, влияние белковой среды на дезинфекционный эффект роданида ничтожно или даже равняется нулю, что подтверждается другими авторами (Leunig и Loch, Spengler, Schünemann). В той же работе мы имеем указания, что при дезинфекции шелка, искусственного шелка, шерсти и т. д. 1°/о раствор Tonerdo-Rhodan не оказал никакого вредного влияния на качество тканей. Точно так же изделия из дерева лакированные, из каучука и резины не изменялись под действием 1°/о раствора. Лишь краски дешевых обоев при этом бледнели.

В проведенных опытах мы употребляли химически чистый препарат KSCN в смеси с кислым сернокислым калием в> сочетании, обеспечивающем получение pH—2,0. Эта кислотность в наших предыдущих работах с чистыми культурами показала ¡наилучший бактерицидный эффект.

Цель настоящей работы выяснить возможность применения KSCN в практике текущей дезинфекции. Для опытов нами были взяты различные выделения человеческого организма и предметы, окружающие больного в быту. Этими объектами служили: моча, испражнения, выделяемое носоглотки скарлатинозных больных, белье., сосуды после обеззараживания мочи и кала и поверхности различных предметов, окружающие больного (стена, пол, мебель и пр.).

В серии опытов по обеззараживанию мочи нами применялась следующая методика. Свежевыпущенная моча заражалась культурой паратифа В типа Breslau, кишечной палочкой и гемолитическим стрептококком, терморезистентность которых колебалась до 50 минут включительно при 62—64®. Фенолоустой-чивость при разведении 1:90 характеризовалась следующими данными: паратифа В от 15 до 35 минут, стрептококка от 10 до 12 минут, кишечной палочки 30 минут, стафилококк больше 45 минут. Моча заражалась до густоты 500 млн. бактерийных тел в 1 см3, в отдельных опытах до 1—2 миллиардов. Рабочие растворы роданида готовились на простой водопроводной воде температурой от 4 до 13°. Полное растворение препарата наступало через 5—8 минут. Посевы производились на чашках Петри в простой агар, агар Эндо и в 7 см3 бульона но 0,1 см3. На каждый высев употреблялось по 2 чашки с агаром и по 2 пробирки с бульоном. Для заражения брались суточные культуры. Эмульсия тотовилась на стерильной водопроводной воде. В опытах со стрептококком высевы производились на чашки с кровяным агаром и в пробирки с сахарным бульоном.

Испытывалась моча свежевыпущенная, кислая и щелочная (pH = 7,4 до 8,4). Для получения щелочной реакции моча подщелачивалась п/10 NaOH. Кром'е того, бралась моча, простоявшая двое суток при комнатной температуре, с резким аммиачным запахом, белковая моча с различным содержанием белка (до 10°/о), когда она походила по внешнему виду на сыворотку, а часто к моче примешивались одновременно кровь и сыворотка.

Во многих случаях проводился последовательный высев из первой пробирки до шестой по 0,2 см3 для повторного решения вопроса о задерживающих рост ■свойствах роданида (как это систематически делалось нами в нашей предыдущей работе с чистыми культурами). Как правило, результаты на чашках и бульоне получались одинаковые. Экспозиции, при которых мы получали даже единичные колонии, мы рассматривали, как давшие рост, и отмечали их знаком +. Результат учитывался на чашках через 48 часов, на бульоне — через 10 суток. С мочой нами было поставлено около 100 опытов. В бытовой обстановке при производстве опытных работ с роданидами после обеззараживания мочи делался лосев тампона, которым тщательно обтирался сосуд, в который мочился больной. Тампон промывался в 2 см3 физиологического раствора и смыв засевался на питательные среды. Параллельно во всех опытах был испытан 3% медицинский лизол , марки «Росси». В качестве контроля бралась моча без дезинфицирующего агента, причем если опыт длился больше часа, то ставился второй контроль из той же мочи без дезинфекционного агента.

Дезинфекция роданидом свежевыпущенной кислой мочи, зараженной паратифом В типа Breslau, показала, что 0,5°/о раствор KSCN не дает нужного эффекта в отношении паратифа В даже при экспозиции в 40 минут, так как при этом единичные колонии выживают. 0,8% роданида через 10 минут дает полную стерилизацию мочи, 1% роданид убивает паратиф В в' 5 минут. 3% раствор лизола не

дает бактерицидного действия даже через 40 минут. Содержание в моче белка и крови от 1 до 10% не изменило этих результатов.

Дезинфекция щелочной мочи, зараженной паратифом В, показывает, что эффективность кислого роданида в щелочной моче снижается; 0,5 и 0,8% раствора не оказывают бактерицидного действия при экспозициях до 40 минут включительно, стерильность посева получается через 10 минут лишь с 1% раствором. Наши данные подтверждают результаты, полученные Lockemann и Ulrich, отметившими, что натриевая соль роданисто-водородной кислоты NaSCN в соединении с N,aOH действует на туберкулезную мокроту в [большие ороки и в более аильных концентрациях, чем кислые растворы.

В опытах с кислой мочой мы пользовались, кроме бактерий паратифа В, гемолитическим стрептококком, кишечной палочкой и золотистым стафилококком. Густота эмульсии во всех случаях—500 млн. микробных тел на ,1 см3. Высевы производились, как и в предыдущих опытах, на элективные среды, агар, а также на бульон. Для стрептококка был использован агар с кровью и сахарный бульон. Результаты получены совершенно такие же, как и при опытах с кислой мочой, зараженной паратифом В типа Breslau.

Дезинфекций сосудов' из-под мочи всегда давала тот же эффект, что и дезинфекция мочи, даже тогда, когда они содержались в грязном состоянии, часто имели большой налет солей ¡и зловонный запах.

Следующая серия опытов была поставлена с испытанием KSCN для дезинфекции испражнений, зараженных бактериями тифозно'-ки-шечной группы. Материалом служили испражнения, полученные от 'больных на дому, с диагнозом дизентерии от детей в возрасте отГУг до 12 лет; в нескольких случаях мы имели бактериологическое подтверждение диагноза. Для опытов мы брали первичные наряды на текущую дезинфекцию, чтобы использовать одновременно бытовую обстановку больного с естественной микрофлорой в окружении.

Пробы мочи и сосудов из-под нее засевались на! месте; дезинфекция белья и испражнений производилась в лаборатории, куда рни доставлялись не позднее чем через час. Испражнения были в большинстве характерными для дизентерии и содержали значительную примесь слизи и крови. Одна часть каждой порции обрабатывалась без искусственного заражения, а другая заражалась паратифом В и дизентерией, соответственно чему каждый раз проводилось по два контроля. Контроль ставился в начале опыта и после него, так как опыт иногда длился три часа. Густота бактериальной эмульсии во всех опытах с калом была 2 млрд.; на 5 см3 .жидких испражнений бралось 0,3 см3 такой эмульсии. Кроме того, искусственно заражались как нормальный кал, превращенный, в жидкое и полужидкое состояние, так и совершенно плотно оформленный, который заражался с поверхности и на глубине от 1 до 3 мм (приблизительно).

Испытывались различные концентрации кислого раствора роданида— 1 и 1,5%. После дезинфекции из жидких испражнений делались высевы на плотные и жидкие среды (как и в предыдущих опытах). Плотные испражнения по окончании обработки разбивались в колбочках с бусами и затем, как обычно, засевались на питательные среды. Учет результатов велся через 48 часов.

Опыты с жидкими испражнениями, а также зараженными с поверхности давали одинаковые результаты. Испражнения, зараженные на глубине 1 мм, обычно давали единичные колонии, причем эффект приближался к полученному при обработке жидкого и полужидкого кала. При этом ясно обнаруживались расслоения и разрыхления кала под влиянием роданида. Более глубокого проникновения в испытанных нами экспозициях времени мы не наблюдали. Все опыты произ-

5 Гигиена и санитария, № 7—S

водились с нестерильным калом. В тех случаях, когда дезинфекции подвергались жидкие испражнения, роданид прибавлялся в количестве, достаточном для получения соответствующей концентрации, как это имело место в опытах с мочой. Плотный кал заливался раствором роданида.

При этом -получены следующие данные. Обеззараживание испражнений дизентерийных больных происходит через 20 минут в 1 %рас-творе или через 50 минут в 0,8% растворе. 1,5% раствор через 15 минут дает стерилизацию кала. Слизь хорошо растворяется, вся масса, делается гомогенной, равномерной. При искусственном заражении полужидких нормальных испражнений полная стерилизация их достигается 1,5% раствором через 20 минут. Все пробы параллельно обрабатывались 3 и 5% раствором медицинского лизола до двухчасовой экспозиции и неизменно давали на чашках рост, мало отличающийся от контроля. По материалам неопубликованной работы д-ра М. Б, Фельдман, испражнения, зараженные брюшнотифозной культурой, при воздействии 3°/о хлорамина обеззараживаются лишь с поверхности через 30 минут. Мы считаем, что эффективность кислого роданида, можно значительно увеличить путем изменения рН его раствора в сторону Повышения кислотности, принимая во внимание щелочную реакцию кала, и тогда получится лучший эффект с меньшей концентрацией, чем 1,5%.

Для обеззараживания выделяемого носоглотки скарлатинозных больных мы получали материал от больных детей в возрасте от 2 до> 12 лет в больничной обстановке.

Материал собирался непосредственно перед опытом. Носоглотка больных не подвергалась предварительной дезинфекции. Выделяемое мы получали до утреннего завтрака, а иногда через 2 часа после него. Дети поочередно откашливались в общий стерильный стакан. Для одного опыта нам удалось получить не больше 20—25 см3 материала. Обычно это была муциноподобная слизистая масса, опалесцирующая с примесью гнойно-фибринозных комков различной величины, иногда в большом количестве. Микроскопия мазков содержимого неизменно давала однообразную картину. Во всех пробах обнаруживалось наличие стрептококка long-us (не всегда гемолитического), диплококка, спирохет, палочки: Винцента, стафилококк обнаруживался не во всех случаях. Часто материал содержал много гноя и клеточные элементы.

На контрольных чашках с кровяным агаром выделялся стрептококк, иногда в чистой культуре, при очень обильном росте. Полученный материал делился на две порции: одна подвергалась дезинфекции без искусственного заражения, другая до дезинфекции заражалась смывом' культуры гемолитического стрептококка или 5 см3 бульонной культуры.

Густота эмульсии была 100 млн. Такого инфицирования в Жизни мы не имеем, но на это мы шли сознательно, чтобы создать наиболее отягощающие условия для испытуемого вещества,

В нашем распоряжении были три штамма гемолитического стрептококка. Со всеми штаммами мы получали одинаковые результаты. Всего подверглось испытанию 20 проб. Высевы производились на кровяной агар и сахарный бульон.

Все гнойно-фибринозные сгустки и пленки после воздействия роданида последовательно отмывались в физиологическом растворе дважды и целиком засевались в сахарный бульон.

Кроме того, первая и вторая промывные воды также засевались в сахарный бульон. Мы ни разу не наблюдали расхождения результатов посева на чашках и в соответствующих пробирках с бульоном.

При прибавлении роданида к выделяемому носоглотки очень быстро, в течение первой минуты, наступает растворение слизи. Выделения из тягучих, слизистых делаются водянистыми, а сгустки и пленки имеют вид хорошо отмытых. Все испытываемые объекты превращаются в гомогенную, слегка мутноватую, жидкость.

Полная .стерилизация выделяемого с 0,5% раствором KSCN получается через 6 минут, на чашках же с кровяным агаром1 мы имеем единичные колонии и в более короткие сроки.

Выделяемое без .искусственного заражения дает стерильный посев через 4 минуты с 0,5% раствором и через 2 минуты с 0,8%. По-видимому, в данной серии опытов более высокий бактерицидный эффект по сравнению с мочой, зараженной тем же стрептококком, объясняется тем, что в выделяемом полости рта есть большая до|ля слюны с естественным содержанием KSCN и, следовательно, за его счет мы несколько повышаем бактерицидное действие роданида.

Методика работы по обеззараживанию тряпок из хлопчатобумажной ткани была следующая. Белые тряпки из бязи и более грубых тканей величиной в 25 см2 стерилизовались в автоклаве. Стерильный материал пропитывался двухмиллиардной бульонной культурой непосредственно перед опытом.

Для заражения мы употребляли те же штаммы, что во всех предыдущих опытах. После пропитывания культурой отжатые от излишней жидкости тряпки подвергались обеззараживанию. После окончания воздействия роданида они промывались последовательно дважды в стерильной водопроводной воде и 0,1 см3 последней пдомывню(й воды зёсевадось' на чашки и, кррме того, в. (бульон. Точно так же каждая тряпка после обработки роданидом тщательно протиралась с двух сторон стерильным тампоном, который в течение 2 минут промывался в 2 см3 физиологического раствора и 0,1 см3 промывной воды засевалось на чашки, а также в бульон (в том же количестве).

Приводим данные результатов посева только тампонов, так как промывные воды после прополаскивания тряпок иногда не давали роста там, где соответствующий тампон давал рост. Повидимому, таким способом удавалось извлечь тампоном бактерии из более глубоких слоев ткани.

Дезинфекция роданидом хлопчатобумажных тряпок дала такие результаты. Стерилизация тряпок происходит через 30 минут в 1,5% растворе при заражении их паратифом; очень часто 1% раствор оказывал такое же действие, как и 1,5%. Тряпки, зараженные стрептококком, дают со всеми концентрациями стерильность посевов через 40 минут, при более коротких экспозициях получаются лишь единичные колонии на чашках от 1 до 8.

Ряд опытов был поставлен с бельем1, которое инфицировалось жидкими испражнениями, зараженными' паратифом, причем получались такие же данные, как и при дезинфекции тряпок. В трех случаях мы делали опыты с детским бельем (трикотажным и хлопчатобумажным), свежеиспачканным с л изи Ст о - кр овав ы м и испражнениями; 1,5®/о раствор обеспечил стерилизацию этого белья через 30 минут. В одном случае нам разрешили отрезать кусок одеяла, испачканного испражнениями; 1% раствор роданида позволил простерилизовать одеяло через 30 минут. Дезинфекция медицинским лизолом тряпок, зараженных паратифом, дает хорошие результаты при применении 3% раствора его только через 2 часа.

Мы произвели также дезинфекцию обстановки, окружающей больного с ее естественной микрофлорой. Число этих опытов* незначительно (обследовано 26 квартир) и выводов из них мы не делаем, но считаем нелишним описать их для дополнения общей характеристики роданида.

Методика этой серии опытов была следующей: микрофлора снималась стерильным ватным тампоном, которым протиралась поверхность в 10 см2 в течение 1 минуты до и после дезинфекции (после того как поверхность становилась сухой). Для стен, стола, ручек дверей, кровати было достаточно 15-минутной экспозиции. Поверхность пола требовала в среднем 30 минут, а часто также не более 15. Стены были обычно покрыты обоями, часто куском фанеры, иногда клеевой

побелкой. Стены дезинфицировались у постели больного, где они обычно более всего загрязнены. Поверхность стола чаще всего была клеенчатая, реже деревянная. Спинка кровати — обычно железная. После дезинфекции бралась внутренняя ручка двери, наружная же служила контролем. В этой серии опытов употреблялся 2% раствор роданида.

В таблице мы приводам средние цифры числа колоний до и после дезинфекции поверхности каждого предмета и процент гибели бактерий после обеззараживания

Дезинфекция 2% роданидом поверхностей различных предметов в комнате

больного

Число колоний Процент

-

Название объекта до дезин- после де- гибели

фекции зинфекции бактерий

1 145 105 91,7

569 47,5 91,6

419 15,5 96,3

Стена у кровати больного......... 233 8,5 96,4

13^ 10,6 91,9

108,4 3,87 92,2

Ковер . ................. 600 43 92,8

Из таблицы ясно, что стерилизации поверхностей мы не получаем ни в одном случае. Процент гибели бактерий при употреблении 2% раствора значительный, он сохраняет определенную закономерность, несмотря на различный характер предметов, подвергавшихся обеззараживанию. Выживание определенного количества бактерий идет за счет устойчивых споровых форм.

В нашем распоряжении было также 15 различных кукол (как из резины, так и в одежде из различного хлопчатобумажного материала), полученных в детских яслях во время проведения опыта. Их микрофлора состояла главным образом из кишечной флоры: Вас. coli, faecalis alcaligenes и др., а также из различных еапрофитов воздуха. Куклы подвергались обработке 1% раствором роданида—одни погружением, другие обтиранием сильно увлажненной тряпкой. Результаты во всех опытах были одинаковые и через 30 минут во всех случаях получается стерильный посев.

Выводы

1. Кислый раствор роданистого калия оказывает сильное бактерицидное действие на бактерии тифозно-кишечной группы, а также на гемолитический скарлатинозный стрептококк.

2. Среда, богатая органическими веществами, не препятствует проявлению высокой бактерицидное™ роданида.

3. Стерилизация кислой мочи достигается 0,8% раствором роданида через 10 минут. Стерилизация щелочной мочи происходит с 1% раствором KSCN через 10 минут.

4. Стерилизация испражнений, зараженных дизентерией при наличии крови и слизи, достигается с 1% раствором через 20 минут. Стерилизация жидких и полужидких испражнений при заражении их паратифом и гемолитическим стрептококком достигается 1,5% раствором через 20 минут. Твердый оформленный кал, зараженный с поверхности, стерилизуется с теми же результатами, как и жидкий.

5. Стерилизация выделяемого носоглотки больных скарлатиной,

богатого стрептококком, происходит с помощью 0,5% раствора через 6 минут.

Белье из хлопчатобумажной ткани обеззараживается 1,5% раствором через 30 минут, а тряпки — через 40 минут.

Л. Е. РОХЛИНА (Москва)

Применение модифицированной среды Климмера—среды агар-бромтимолблау для бактериологического исследования сточной воды

Из Московского дезинфекционного института

До сих пор нет точного подсчета числа колоний кишечной па-, дочки. Поиски таких способов продолжаются давно, но пока не дали вполне удовлетворительных результатов.

Еще в 1909 г. Марман предложил метод непосредственного счета колоний В. coli на среде Эндо. Этот метод проверялся на Рублевской опытной станции в> течение нескольких лет и показал, что посевы на плотной среде дают более точное число колоний кишечной палочки, чем на жидких средах (Булира, Эйкмана).

На Рублевской опытной станции была модифицирована среда Эндо (эндоглюкоза+фенол) с заменой лактозы глюкозой и добавлением 0,1% фенола для более успешного выделения палочек В, рага-соИ и coli и для угнетения споровых палочек. Кроме того, там же был введен способ фильтрации определенного объема воды через мембранный фильтр нитроцеллюлозы, который накладывается на среду Эндо. На поверхности фильтра развиваются красные колонии кишечной палочки, которые соответствуют числу колоний В. coli в пропущенном через фильтр объеме воды. Этот метод считается удачным для питьевых вод, но для сточных и других загрязненных жидкостей является неприемлемым в силу того, что густой рост колоний трудно поддается подсчету.

Вопросам перехода на твердые среды при санитарном исследовании молочных продуктов уделяли и уделяют много внимания в ряде стран. Климмер, Гейпт и Борхерс предложили определять титр coli aerogenes в молоке на агаре с лактозой, бромтимолблау и триптофла-вином (эмпирическая формулабромтимолблау: C27H28Or,Br2S). Рюмкорф тоже использовал среду (Климмера для определения титра coli aero-geines в молоке. Он увеличил концентрацию водного раствора трипо-«флавина для задержки роста молочнокислых бактерий и получил весьма хорошие результаты. Деметер для определения титра coli aerogenes Bi/молоке пользовался несколькими твердыми средами, в том числе средой агар-бромтимолблау с триптофлавином, причем получил наибольшой эффект на среде Климмера. Бурке Гафней провел интересную работу с водой на определение В. coli и coli aerogenes на рекомендованной им среде — глюкозофосфатный агар с бромтимолбау и получил хорошие результаты.

У нас в СССР среда агар-бромтимолблау проверялась Н. И. Каю-ковой во Всесоюзном научно-исследовательском холодильном институте в Москве на мороженых продуктах. Одновременно с этим велась работа и на других твердых средах. Наиболее подходящей оказалась модифицированная среда Климмера. Каюкова провела второе исследование работы на этой же среде с молочными продуктами в лабо-