CC BY
55
Al
SSM
Mirskij V.l., Rishhuk S.V. Zabolevanija reproduktivnoj sistemy u detej i podrostkov (andrologicheskie aspekty): rukovodstvo dlja vrachej. SPb.: SpecL.it, 2012. 479 s.
5. Федеральная служба государственной статистики [сайт]. URL: http:// www.gks.ru.
Federal'naja sluzhba gosudarstvennoj statistiki [sajt].
6. Gambone J.C., Segars J.H., Cedars М., Schlaff W.D. Fellowship training and
board certification in reproductive endocrinology and infertility. Fertil Steril. 2015. V. 104 (1). P. 3-7.
7. Zegers-Hochschild F., de Mouzon J. et al. International Committee for Monitoring Assisted Reproductive Technology GD Adamson. World Health Organization. International Committee for Monitoring Assisted Reproductive Technology (ICMART) and the World Health Organization (WHO) revised glossary of ART terminology. Fertil Steril. 2009. V. 92 (1). P. 1520- 1524.
УДК 576.85:615.2
ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ «ВЕЛТОЛЕНА» И ЭТИЛОВОГО СПИРТА НА БИОПЛЕНКИ VIBRIO CHOLERAE ELTOR
С.В. Титова, Л.М. Веркина, О.Д. Кирилова, Л.К. Лысова, Н.А. Селянская, Ж.В. Таркаева,
ФКУЗ «Ростовский-на-Дону противочумный институт»
Титова Светлана Викторовна - e-mail: [email protected]
Цель: экспериментальное изучение дезинфииируюшего действия активных четвертичных аммонийных соединений (в составе препарата «Велтолен») и этилового спирта, на холерные вибрионы эльтор в биоплёночной и планктонных формах. Материалы и методы. Опыты проводили с использованием 8 штаммов Vibriocholerae ElTor различного происхождения и токсигенности; 0,05-0,5% «Велтолена», 10-50% этилового спирта; бактериологического и микроскопического (светового и люминесцентного) методов. Результаты. Продемонстрировано формирование биопленок на покровных стеклах и пластиковых пластинках. Установлено, что на 5-е сутки культивирования на агаре Мартена клетки биопленочной формы холерных вибрионов сохраняли жизнеспособность. Штаммы V. сЬю!егае в форме биопленок проявили устойчивость к воздействию 0,05% «Велтолена», но при концентрации 0,5% и экспозиции 15 минут наблюдалось бактерицидное действие как на биопленочную, так и на планктонную формы вибрионов. Все штаммы в планктонной форме оказались чувствительными к воздействию спирта в концентрациях от 10 до 30% в течение 30 минут, тогда как 50% штаммов в биопленочной форме при этом сохраняли устойчивость. Отмечены межштаммовые различия: штаммы V. сЬю!егае ElTor (ctx+) в обеих формах были чувствительными к воздействию спирта в течение 10 минут; биопленочная форма указанных штаммов проявила устойчивость к 0,5% «Велтолена» при 15-минутной, а планктонная - при 5-минутной экспозиции. Таким образом, токсигенные штаммы более чувствительны, чем атоксигенные, а биопленочная форма V. сЬю!егае ElTor, по сравнению с планктонной формой, была более устойчивой к действию использованных дезинфектантов.
Ключевые слова: Vibriocholerae ElTor, биопленочная форма, планктонная форма, дезинфицирующие средства, «Велтолен», этиловый спирт, токсигенные и атоксигенные штаммы.
Purpose - experimental study of disinfecting effect of active quaternary ammonium compounds (in composition of disinfecting agent «Veltolene») and ethyl alcohol on cholera vibrios El Tor in biofilm and planktonic forms. Materials and methods - experiments were carried out with the use of 8 Vibrio cholerae ElTor strains of different origin and toxigenicity; 0,05-0,5% of «Veltolene», 10-50% of ethyl alcohol; bacteriological and microscopic (light and luminescent) methods. Results - the biofilm formation on cover-slips and plastic plates was demonstrated. It was found that on the 5th day of cultivation on the Marten agar cells in biofilm form preserved viability. V. cholerae strains in the form of biofilms exhibited resistance to the action of 0,05% «Veltolene», however at concentration 0,5% and 15-minute exposure the bactericidal action both on biofilm and planktonic forms was observed. All strains in planktonic form showed sensitivity to ethyl alcohol in concentration from 10 to 30% for 30 minutes, whereas 50% of strains in the biofilm form retained resistance. Interstrain differences were noted: V. cholerae El Tor (ctx+) strains in both forms were sensitive to ethyl alcohol for 10 minutes; the biofilm form of these strains was resistant to 0,5% «Veltolene» at 15-minute exposure and planktonic form - at 5-minute exposure. Thus, toxigenic strains were more sensitive than non-toxigenic and V. cholerae El Tor in the biofilm form, in comparison with the planktonic form, showed higher resistance to the disinfecting agents used.
Key words: Vibrio cholerae El Tor, biofilm form, planktonic form, disinfecting agents, «Veltolene», ethyl alcohol, toxigenic and non-toxigenic strains.
М*
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Холерные вибрионы обладают способностью к био-пленкообразованию на поверхностях различных объектов биотической и абиотической природы [1-2]. Наряду с этим в поверхностных водоемах биопленки возбудителя холеры могут служить резервуаром и фактором передачи инфекции [3-4]. Как правило, в природных условиях большинство видов патогенных микроорганизмов, заключенных в матрикс синтезированных ими внеклеточных полимерных веществ, проявляют устойчивость к дезинфицирующим средствам [5-6]. Кроме того, известен факт приобретенной устойчивости клинических изолятов к дезинфектантам, в частности к четвертично-аммонийным соединениям (ЧАС) [7]. Вместе с тем устойчивость к дезинфицирующим средствам (ДС) биопленок патогенных бактерий и их планктонных форм в научной литературе освещена недостаточно.
Цель работы: экспериментальное изучение влияния дезинфицирующих средств, содержащих четвертичные аммониевые соединения в составе препарата «Велтолен», а также этилового спирта на холерные вибрионы эльтор, находящиеся в планктонной и биопленочной форме.
Материал и методы
В работе использовали 8 штаммов V. с1"ю1егаеЕ1Тог, из них 6 (с1х-) штаммов, выделенных из поверхностных водоемов, и 2 (с1х+) штамма, изолированных от человека (V. с1"ю!егае Е1Тог 5879) и выделенных из реки Темерник в 2014 г. (V. с1"ю1егае Е1Тог 19613). Штаммы были получены из музея живых культур ФКУЗ «Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора». В качестве ДС применяли «Велтолен» и этиловый спирт, рекомендованные СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 группы патогенности». В качестве ДС применяли 0,05-0,5% «Велтолен» и 10-50%-й этиловый спирт. Получение биопленок проводили способом, который предусматривал формирование биопленки на вертикально расположенныхпокровных стеклах и пластиковых пластинках (10х20 мм) во флаконах с водопроводной кипяченой водой, куда добавляли суспензию исследуемых штаммов холерных вибрионов в концентрации ПХ104 мкл/мл. Из этих флаконов на 4-5-е сутки культивирования стекла, пластинки и планктон (0,5 мл) пере-носиливпенициллиновыефлаконысДС.Экзополисахарид (ЭПС) в составе биоплёнок выявляли модифицированным нами методом [8] путем окрашивания конго-красным с последующим докрашиванием фуксином, используя световую и люминесцентную микроскопию, а также в препаратах «раздавленная капля» с витальным окрашиванием акридиновым оранжевым (АО) в концентрации 20 мкг/мл. Экспозиция в ДС составляла от 5 до 60 мин при комнатной температуре. Для нейтрализации антимикробного действия ДС использовали нейтрализующие вещества (для «Велтолена» - лаурил сульфат, для спирта - кипяченая вода), согласно руководству Р 4.2.2643-10. В контрольном пенициллиновом флаконе вместо ДС использовали стерильную водопроводную воду. Жизнеспособность планктонной и биопленочной форм холерных вибрионов учитывали по наличию роста и по количеству колоний образующих единиц (КОЕ/мл) на пластинках с агаром Мартена (рН 7,7) при 18-часовой инкубации при 37°С.
Результаты и их обсуждение
Формирование биопленки, находящейся в третьей стадии с характерными признаками формирования внеклеточного матрикса, фиксировали на 4-5-е сутки от начала культивирования (рис. 1).
1с
РИС. 1.
Микроскопическиие препараты клеток V. ^о1егае Е1Тог 5879 после окрашивания АО 1а и конго-красным с фуксином (1Ь, 1с, 1ё).
РИС. 2.
Оценка жизнеспособности штаммов холерных вибрионов эльтор (№№ 19613 и 18904) в биоплёночной (1) и планктонной формах (2) после пятых суток культивирования.
РИС. 3.
Устойчивость планктонной и биопленочной форм V. сЬо1егае Е1Тог 19670 (с^-) к воздействию этилового спирта.
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
РИС. 4
Эффективность действия «Велтолена» на биопленочную и планктонную формы штамма V. сholerae Е1Тог 19613. Примечание: столбики диаграммы - наличие/отсутствие роста вибрионов в планктонной (голубой цвет), в биопленке (красный цвет).
РИС. 5.
Эффективность действия «Велтолена» на биопленочную и планктонную формы штамма V. ^о1егае Е1Тог 5879. Примечание: столбики диаграммы - наличие/отсутствие роста вибрионов впланктонной (голубой цвет), в биопленке (красный цвет).
РИС. 6.
Устойчивость планктонной (1) и биопленочной (2) форм V. ^о1егае Е1Тог19670 (сЬх-) при воздействии этилового спирта в разных концентрациях и при различных экспозициях.
Как видно из рисунка 1, при витальном окрашивании АО (1а) микропрепарат выглядел многослойным, состоял из скоплений клеток в основном оранжевого цвета, а также конгломератов из слипшихся друг с другом клеток, между которыми находилось аморфное вещество, окрашенное в мутно-оранжевый цвет. Подвижность клеток сохранялась и в области скоплений. Также визуализировались одиночные клетки холерных вибрионов, окрашенные в оранжевый цвет, находящиеся между скоплениями
в так называемых «каналах». При окрашивании конго-красным на фоне однородно окрашенного розовым цветом слоя после докрашивания микропрепарата фуксином клетки холерных вибрионов визуализировались как красные (1Ь; 1 с; Ш
На 5-е сутки от начала культивирования отпечатки пластинок с биопленками холерных вибрионов на агаре Мартена выглядели в виде сплошного слива колоний, концентрация холерных вибрионов в планктонной фазе составляла 1*105-1*106 КОЕ/мл (рис. 2).
По результатам проведенных экспериментов было установлено, что бактерицидный эффект исследуемых ДС в разных концентрациях при экспозиции 5-60 минут оказался различным в отношении планктонной и биопленочной популяций токсигенных и атоксигенных штаммов (таблица).
В результате исследования действия «Велтолена» на холерные вибрионы определены штаммы с разной устойчивостью. Так, при действии 0,05% раствора планктонные формы водных (С:х-) штаммов V. с1"ю!егае Е1Тог Р 5392, 19645, 19666 оказались чувствительными к действию дезинфектанта, поскольку рост колоний отсутствовал уже при 5-минутной экспозиции. Биопленочная форма этих штаммов была устойчива к действию дезинфектанта, а штамм V. с1"ю!егае Е1Тог Р 5392 сохранял устойчивость и после 15-минутной экспозиции. Планктонные формы остальных штаммов проявили устойчивость к действию дезинфектанта в течение 15 минут. Биопленочные формы штаммов, в том числе и токсигенных, оказались устойчивыми к 30-минутному воздействию дезинфектанта, что подтверждалось регистрацией роста колоний в отпечатках на агаре Мартена.
При сравнительном исследовании штаммов холерных вибрионов йх-и йх+ в экспериментах по воздействию этилового спирта в концентрациях от 10 до 30% и при экспозиции от 5 до 60 минут было установлено, что в течение 5 минут как планктонная, так и биопленочная формы проявляли устойчивость к воздействию этилового спирта в концентрации от 10 до 30%. Штаммы холерных вибрионов (С:х+), как в планктонной, так и в биопленочной формах, оказались чувствительными к ДС при экспозиции в течение 10 минут. Водные штаммы в планктонной и биопленочной формах при действии 30% раствора спирта, начиная с экспозиции 10 минут, проявляли различную чувствительность к ДС. Биопленочные формы всех С:х- штаммов проявляли устойчивость к действию спирта (15 минут), т. е. регистрировался рост в отпечатках на пластинах агара Мартена. При этой же экспозиции 50% С:х- штаммов в планктонной форме оказались чувствительными к воздействию спирта. Воздействие спирта в течение 30 минут приводило к ингибиции роста 100% исследуемых штаммов в планктонной форме, в то время как 50% штаммов в биопленочной форме сохраняли жизнеспособность, так как в отпечатках на агаре Мартена наблюдался рост по краю пластинок, а также единичных колоний.
На рисунке 3 показана эффективность действия 20% (при экспозиции 30 минут) и 30% этилового спирта (при экспозициях 15 и 30 минут) на планктонную (1) и биопленочную (2) формы штамма V. сЬо1егае Е1Тог 19670 (йх-). Отмечена устойчивость биопленочной формы испытуе-
NK
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
мого штамма при максимальном времени действия указанного ДС.
Возможно, устойчивость к «Велтолену» и этиловому спирту связана с фенотипической устойчивостью, т. е. со способностью бактерий образовывать биопленки, фиксированные на пластике. К холерным вибрионам, находящимся во внутренних слоях пленки, доступ молекул ДС ограничен. Кроме того, возможно химическое взаимодействие между ДС и биопленкой, в результате которого происходит нейтрализация активно действующих веществ. Имеются данные, что четвертичные аммониевые соединения повреждают фосфолипиды цитоплазмы внутренних мембран микробной клетки [9, 10].
В следующей серии экспериментов при повышении концентрации и увеличении экспозиции воздействия дезин-фектантов на биопленочные и планктонные формы холерных вибрионов были также обнаружены межштаммовые различия. Особый интерес вызывала устойчивость к «Велтолену» штамма V. с1ю!егае Е1Тог 19613 (йх+), выделенного в 2014 году из реки Темерник (рис.4), а также V. с1ю!егае Е1Тог 5879 (йх+) (рис. 5), биопленочные формы которых были устойчивы к воздействию 0,5% раствора дезинфектанта в течение 15 минут, а планктонные формы этих штаммов сохранялись только при 5-минутной экспозиции (рис. 5).
При повышении концентрации «Велтолена» до 0,2% в отношении остальных исследуемых штаммов отмечалось следующее: биопленочные формы штаммов V. с1ю!егаеЕ!Тог (йх-) 18904, 18973 проявили устойчивость в течение 15 минут действия указанного ДС, а биопленочные формы штаммов V. с1ю!егае Е1Тог (йх+) 19613, 5879 и (йх-) 18904, 18973, 19670 были устойчивыми к воздействию «Велтолена» 0,5% концентрации в течение 5 минут, а биопленки штаммов 19613, 5879, 19670 - в течение 15-минутного воздействия ДС.
Вероятно, примененные концентрации «Велтолена» вызвали менее глубокие изменения в структуре цитоплаз-матической мембраны изученных биопленочных форм, так как при повышении концентрации и удлинении экспозиции биопленочные формы проявляли жизнеспособность, в том числе и йх+ штаммы. В то же время нельзя
отрицать природную/ естественную устойчивость изученных штаммов, так как естественная устойчивость к ЧАС характерна для грамотрицательных бактерий [11]. В литературе показано, что средства на основе ЧАС оказались неэффективны против биопленок, образованных Escherichiacoli, Pseudomonasaeruginosa, Listeriamonocytog enesStapfylococcusaureus, даже в высоких концентрациях, поскольку отрицательно заряженные углеводы экзополи-сахаридного матрикса способны связывать положительно заряженные молекулы четвертично-аммонийных соединений, защищая, таким образом, биопленку от уничтожения [11].
При сравнительном исследовании штаммов холерных вибрионов ctx-и ctx+ в опытах по воздействию этилового спирта в концентрациях от 10 до 50%, при экспозиции от 5 до 60 минут было установлено, что все штаммы имели различную картину устойчивости планктонной популяции и биопленок. Необходимо отметить, что биопленочная форма атоксигенного штамма V. diolerae ElTor 19670 проявляла устойчивость к 40% спирту при экспозиции 15 минут, а к 30% спирту даже при экспозиции 30 минут (рис. 6Б).
Воздействие 50° спирта сопровождалось отсутствием роста всех штаммов Vibrio ^^гае при всех испытуемых режимах. Это особенно важно, так как в производстве композиционных дезинфицирующих средств используют 55° спирт, потому что при увеличении концентрации возрастает взрывоопасность и его разрушающее действие на поверхности. Тем не менее, известно, что микроорганизмы могут приобретать устойчивость к дезинфектантам при многократном их воздействии, как в низких концентрациях, так и при использовании бактерицидных концентраций [3]. В литературе есть данные по изучению бактерицидного действия различных концентраций этилового спирт на разные микроорганизмы в экспозиции от 10 секунд до 1 часа. Так, синегнойная палочка погибала в течение 10 секунд при условии использования 30% концентраций-этилового спирта. Микроорганизмы Serratiamarcescens и Salmonella typhi были ингибированы в течение 10 секунд при 40% концентрации этилового спирта, тогда как S. aureus и S. pyogenes погибают при экспозиции 10 секунд
ТАБЛИЦА.
Оценка эффективности действия «Велтолена» и этилового спирта на штаммы холерных вибрионов эльтор, находящихся в форме биоплёнок и планктона
№№ штаммов «Велтолен»0,05% Спирт этиловый 300
Экспозиция (мин)
5 10 15 30 60 5 10 15 20 30 60
БП П БП П БП П БП П БП П БП П БП П БП П БП П БП П БП П
5879 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + - - + +
19613 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + - - - + +
18904 ++ ++ ++ + + + + - - +++ ++ ++ + + - + - + - - -
18973 ++ ++ ++ + + + + - - - ++ ++ + + + + + - - - - -
5392 ++ - + - + - - - - - +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - -
19645 + ++ + + - + - - - - - - -
19666 + ++ + + - + - - - - - - -
19670 +++ +++ +++ ++ +++ + + - - +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - -
Примечание: БП биопленка, П - планктон, «-» отсутствие роста на пластинах агара, «+» наличие роста (от 1-10 КОЕ/мл), «++» наличие роста (от 10-100 КОЕ/мл), «+++» наличие роста (от 100 и более Е/мл).
Al
SSM
при 60% концентрации этилового спирта [2, 13]. Cуществует вероятность мутагенного действия ДC на бактерии и опасность «селекции» более патогенных с повышенной резистентностью в окружающей среде. В настоящее время мутационный механизм генотипической устойчивости ^AC выявлен у P. аeruginosa [14]. Отдельные исследователи обращают внимание на то, что в большинстве случаев устойчивость микроорганизмов к биоцидам возникает как результат неправильного применения (уменьшение концентраций) или хранения последних (снижение биоцид-ной активности) [1]. В целом ряде публикаций отмечается, что рост резистентности происходит за счет селекции устойчивых вариантов под действием низких концентраций биоцидов, у которых наблюдаются изменения поверхностных структур клетки под действием ДC [15, 16].
Выводы
1. При изучении воздействия дезинфицирующих средств на возбудителя холеры необходимо учитывать возможность формирования биопленочных форм этих микроорганизмов.
2. Биопленочные формы взятых в исследование разных по происхождению и токсигенности штаммов холерных вибрионов эльтор имеют более выраженную устойчивость по сравнению с их планктонными формами по отношению к действию различных концентраций «Велтолена»и этилового спирта, то есть к дезинфицирующим средствам различных классов.
3. Установлено, что атоксигенные штаммы холерных вибрионов эльтор более устойчивы к использованным в работе с дезинфектантам. Однако это требует дальнейшего изучения на более широком наборе штаммов.
ЛИТЕРАТУРА
1.YoshimatsuT.,HiyamaK.Mechanismoftheactionofdidecyldimethylammonium chloride (DDAC) against Escherichia coli and morphological changes of the cells. BiocontrolSci. 2007. Vol. 12 (3). P. 93-99.
2. Pуководство по дезинфекции и стерилизации в медицинских учреждениях, 2008, William A. Rutala, Ph.D., M.P.H., David J. Weber, M.D., M.P.H. и Консультативный комитет по методам инфекционного контроля в медицинских учреждениях (HICPAC). C. 170.
Rukovodstvo po dezinfekcii i sterilizacii v medicinskikh uchrezhdeniyakh, 2008, William A. Rutala, Ph.D., M.P.H., David J. Weber, M.D., M.P.H. i Konsul'tativniy komitet po metodam infekcionnogo kontrolya v medicinskikh uchrezhdeniyakh (HICPAC). S. 170.
3. Марамович A.C., Урбанович Л.Я., Куликалова E.C. и др. Pоль и значение поверхностных водоемов в становлении и развитии VII пандемии холеры. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2009. № 2. C.132-138.
Maramovich A.S., UrbanovichL.Ja., Kulikalova E.S. idr. Rol' i znachenie poverhnostnih vodojomov v stanovlenii i razvitii VII pandemii holeri / Epidemiologija i infekcionnie bolezni. 2009. № 2. S.132-38.
4. Куликалова E.C., Урбанович Л.Я., Cаппо C.r. и др. Биопленка холерного вибриона: получение, характеристика и роль в резервации возбудителя в водной окружающей среде. Журн. микробиол. 2015. № 1. C. 3-11.
Kulikalova E.S., Urbanovich L.Ja., Sappo S.G. i dr. Bioplionka holernogo
vibriona: poluchenie, harakteristika i rol' v rezervacii vozbuditelja v vodnoy okrujajuschey srede. J. Mikrobiolgii. 2015. № 1. S. 3-11.
5. Николаев Ю.А., Плакунов В.К. Биопленка - «город микробов» или аналог многоклеточного организма? Микробиология. 2007. Т. 76. № 2. С. 149-163.
Nikolaev J.A., Plakunov V.K. Bioplionka - «gorod mikrobov» ili analog mnogokletochnogo organizma. Mikrobiologija. 2007. T. 76. № 2. S.149-63.
6. Шкарин В.В., Ковалишина О.В., Благонравова А.С. и др. Формирование устойчивости бактерий к четвертичным аммониевым соединениям в экспериментальных условиях. Медицинский альманах. 2012. № 3 (22) август. С. 129-133.
Shkarin V.V., Kovalishina O.V., Blagonravova A.S. i dr. Formirovanie ustoichivosti bakteriy k chetvertichnim ammonievim soedinenijam v eksperimentalnih uslovijah. Medicinskiy al'manakh. 2012. № 3 (22) avgust. S. 129-133.
7. Smith K., Hunter I.S. Efficacy of common hospital biocides with biofilms of multi-drug resistant clinical isolates. J. Med. Microbiol. 2008. № 57. Р. 966-973.
8. Титов Л.П., Игнатьев Г.М., Петкевич А.С. и др. Инфекционные заболевания и микробиологические технологии.
Titov L.P., Ignatiev G.M., Petkevich A.S. i dr. Infekcionnie zabolevanija i mikrobiologicheskie tehnologii.
9. Gilbert P., BarderJ., Ford J. Interaction of biocides with model membranes and isolated membrane fragments. Soc. Appl. Bacteriol. Tech. Ser., 1991. V. 27. P. 155-170.
10. Salt W., Wiseman D. Biocide uptake by bacteria. Appl. Bacteriol. Tech. Ser. 1991. V. 27. P. 65-86.
11. Khunkitti W., Lloyd D., Furr J.R., Russell A.D. The lethal effects of biguanides on cysts and trophozoites of Acanthamoebacastellanii. J. Appl. Bacteriol. 1996. № 81 (1). Р. 73-77.
12. Сергевнев В.И., Клюкина Т.В., Волкова Э.О. и др. Формирование устойчивости Enterobactercloacae к дезинфектантам под воздействием бактерицидных концентраций четвертично-аммонийных соединений в эксперименте. Журн. микробиол. 2014. № 5. С. 95-98.
SergevnevV.I., KljukinaT.V, VolkovaE.O. i dr. Formirovanie ustoichivosti Enterobactercloacae k dezinfektantam pod vosdeistviem bakterecidnih chetvertichno-ammoniinih soedineniy v eksperimente. J. Mikrobiol. 2014. № 5. S. 95-98.
13. Ali Y., Dolan M.J., Fendler E.J., Larson E.L. Alcohols. In: Block SS, ed. Disinfection, sterilization, and preservation. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2001. Р. 229-254.
14. Jones M.V., Herd T.M., Christie H.J. Resistance of Pseudomonas aeroginoza to amphoteric and quaternary ammonium biocide. Microbios. 1989. № 58. P. 49-61.
15. Титова С.В., Кушнарева Е.В. Оценка способности холерных вибрионов к образованию биопленок invitro с помощью нового методического подхода. Фундаментальные исследования. 2014. № 10. С. 375-379.
Titova S.V., Kushnaryova E.V. Ocenka sposobnosti holernih vibrionov k obrazovaniju bioplionok invitro s pomoschju novogo metodicheskogo podhoda. Fundamentalnii issledovanija. 2014. № 10. S. 375-379.
16.Gomez Escalada M., Harwood J.L. Triclosan inhibition of fatty acid synthesis and its effect on growth of E. coli and P. aeruginosa. J. Antimicrob. Chemother. 2005. Vol. 55. P. 879-882.
17. Алексеева Л.П., Чемисова О.С., Мазрухо Б.Л. и др. К вопросу о способности холерных вибрионов эльтор продуцировать экзополисахарид. Холера и патогенные для человека вибрионы. 2007. № 20. С. 77-80.
Alekseeva L.P., Chemisova O.S., Mazrukho B.L. i dr. K voprosu o sposobnosti holernih vibrionov eltorproducirovat ekzopolisaharid. Holera ipatogennie dlja cheloveka vibrioni: Materiali problemnoi komissii. 2007. № 20. S. 77-80.
18. Тец В.В. Бактериальные сообщества / В кн.: Клеточные сообщества / под ред. В. Теца. СПб.: Изд-во СПб ГМУ, 1998. С. 15-73.
Tec V.V. Bakterialnie soobschestva / V kn.: Kletochnie soobschestva / pod red. Teca V.V. SPg.: IzdatelstvoSPb GMU, 1998. S. 15-73.
ш
