CC BY
37
аллергической пробы ППД-туберкулином и равнозначна патологоанатомическому и бактериологическому методам. Причем сроки постановки диагноза в случае применения ХЛ-метода значительно (в 20-40 раз) меньше, чем при бактериологическом методе. А по сравнению с патологоанатомическим методом, при использовании ХЛ-метода не требуется убоя исследуемых животных.
Разработанный во ВНИИБТЖхемшиоминесцен-тный метод обладает необходимой специфичностью и чувствительностью и может быть использован при ранней диагностике туберкулеза у крупного рогатого
скота. Он позволяет в 78...100 % случаев надежно поставить диагноз через 4... 6 часов после доставки в лабораторию проб нитрированной крови или сыворотки крови от животных, подлежащих исследованию.
Хемилюминисцентный метод можно использовать в любых производственных ветеринарных лабораториях, имеющих хемилюминометр. Особенно перспективно его применение для дифференциации «истинных» аллергических реакций на ППД-туберкулин от «неспецифических», часто проявляющихся у крупного рогатого скота на благополучных по туберкулезу фермах.
Литература
1. Наставление по диагностике туберкулеза животных (утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 23.03.2002 г.), Москва, 2002. - 22 с.
2. Донченко А.С., Овдиенко Н.П., Дотенко НА. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота. - Новосибирск, 2004. — 309 с.
3. Донченко В.II., Ионина С.В. Скорость и интенсивность роста М. bovis (шт.8 ВИЭВ) на различных питательных средах/ Материалы Всероссийской научной конференции по проблеме хронических инфекций (16-17 мая 2001г.): Сборник научных трудов. СО РАСXII ВНИИБТЖ. - Омск - 2001. - С.159-160.
4. Найманов А.Х., Овдиенко Н.П., Осипова Е.П. и др. ПЦР при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота// Ветеринария. - 2004. - №10. - С. 19-23.
DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF TUBERCULOSIS WITH APPLICATION OF CHEMILUMINESCENT
METHOD
V.G. Oschepkov, L.A. Taller, G.M. Dyusenova, T.A. Vassimirskaya, E.Yu. Sekin
Summery. There are given results of researches showing high efficiency of application chemiluminescent and «culture-genetic» methods for express-diagnostics of tuberculosis at cattle.
Key words: tuberculosis, diagnostics, pathogenic mycobacterium
УДК 619:616.98
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ НАИММУНОБИОХИМИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
В. В. ХРАМЦОВ, доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией
Н.А. ОСИПОВА, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Т. А. АГАРКОВА, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
Н.Г. ДВОЕГЛАЗОВ, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник ИЭВСиДВ
E-mail: agarkova_t@ngs.ru
Резюме. Изучено влияние биологически активных препаратов (БАП), прежде всего випраксина, на им-мунобиохимическую реактивность животных. Ключевые слова: иммуномодуляторы, биологически активные препараты, альнорин, вестин, корригин, випраксин, иммунобиохимическая реактивность, антигенная нагрузка, интактный, гемопоэз.
В условиях изменения окружающей среды увеличивается влияние биотических и абиотических факторов на адаптивные реакции организма животных, зависящие главным образом от резервов их иммун-
ной системы, основная задача которой — контроль постоянства внутренней среды и защита от экзо- и эндоантигенов [11,12].
Согласно сведениям из специальной литературы, у животных чаще всего встречается функциональная иммунологическая недостаточность, когда организм не в состоянии противодействовать антигенной нагрузке, вызванной, как правило, ассоциациями бактерий, грибов, вирусов и других биологических агентов [3].
При лейкозе крупного рогатого скота также развивается иммунологическая недостаточность, обусловленная влиянием ВЛКРС [5, 6, 9]. Это определяет необходимость количественной или качественной коррекции иммунной системы, в том числе с помощью биологически активных препаратов.
Испытания иммуномодулирующих средств, проведенные ранее при инфекционных и незаразных болезнях животных, показали разную степень их эффективности [1,4, 13].
Цель наших иследований — дальнейшее изучение свойств и характеристик биологически активных препаратов, а также возможности их обоснованного и рационального использования в системе противоэпи-
зоотических мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота для сокращения сроков оздоровления хозяйств.
Условия, материалы и методы. Объект и предмет исследований — клинически здоровый интакт-ный и спонтанно инфицированный вирусом лейкоза крупный рогатый скот, в том числе обработанный иммуномодуляторами. Всего обработано и исследовано серологически в реакции иммунодиффузии (РИД) 60 голов крупного рогатого скота одного возраста, одной породы и физиологического состояния, содержавшихся в равных условиях.
В эксперименте использовали такие препараты, как альнорин, ридостин и корригин общепринятые дозы. Препарат випраксин, который ранее не применяли в ветеринарии, использовали в экспериментально отработанной дозе 2 мл/гол.
Диагностические исследования проводили в соответствии с Методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота (М., 2000).
Иммунологические и биохимические показатели сыворотки и крови животных оценивали на автоматическом спектроанализаторе.
Для дополнительного изучения влияния випрак-сина мы в условиях контролируемого производственного опыта провели комплексные исследования им-мунобиохимических показателей сыворотки и крови крупного рогатого скота разных возрастных групп (коровы, телки перед случкой, молодняк 6 и 12 мес.) до и после (на 1 и 7 сутки) однократной внутримышечной инъекции 1 мл випраксина. Исследования проводили по схеме, представленной на рисунке.
Результаты и обсуждение. Анализируя результаты исследований (см. табл.), можно отметить достоверное увеличение уровня общего белка у животных, обработанных корригином (критерий достоверности — 0,0264) и випраксином (0,018), уровня щелочного резерва — при использовании випраксина (0,0000002), содержания витамина А при обработке альнорином (0,0015), а также уменьшение содержания меди — в случае применения випраксина
(0,0096), альбуминов — у животных обработанных альнорином (0,0099), ридостином (0,001), корригином (0,0003), випраксином (0,0002).
Уровень альфа- и гамма-глобулинов, в сравнении с контролем, был достоверно выше у животных всех опытных групп. При этом критерий достоверности разницы показателей по группе животных обработанных альнорином составлял 0,000000001, ридостином — 0,000002; корригином — 0,000001; випраксином — 0,000000000002. На накопление бета-гло-булинов большой стимулирующий эффект оказывает альнорин — 0,01.
Самое высокое содержание гамма-глобулинов в сопоставлении с контролем зарегистрировано при использовании випраксина (действующее вещество — яд гадюки обыкновенной). Это важный результат, поскольку гамма-глобулярные белки сыворотки крови животных — носители основной массы антител. По сравнению с другими белковыми фракциями сыворотки, именно они во многом определяют величину антительного (гуморального ответа) в том числе и на антигены биотического происхождения.
По содержанию в крови кальция, фосфора и железа математически достоверной разницы между опытными и контрольной группами мы не выявили.
Известно, что основную массу иммуноглобулинов, составляют иммуноглобулины класса О. К ним относятся около 90 % антитоксинов, противобактериаль-ных и противовирусных антител [2, 10].
Анализ результатов исследования показал, что альнорин и ридостин, равно как корригин и випраксин, обладают иммуностимулирующим эффектом, по отношению к общему белку.
Учитывая опубликованные ранее сведения о коррекции иммунного ответа животных при некоторых патологических состояниях такими препаратами, как альнорин,ридостин, корритин, наибольший интерес представляют результаты применения випраксина, поскольку у крупного рогатого скота, обработанного этим препаратом, отмечены наиболее значительные изменения иммуно-биохимических показателей.
У животных всех возрастных групп (коровы, телки перед случкой, молодняк 6 и 12 мес.) на 1 и 7 сутки после однократной внутримышечной инъекции 1 мл випраксина отмечалось увеличение показателя гема-токрита, содержания эритроцитов и гемоглобина, что свидетельствует о так называемом синдроме «сгущения крови». Объяснить его развитие за достаточно короткий период (сутки) можно изменением водно -
I
Показания у крупного рогатого скота, обработанного БАЛ
Альнорин
Ридостин Корригин
Иммуноло- Биохими-
гические ческие
параметры параметры
* V У *
Иммуноло- Биохими- Иммуноло- Биохими-
гические ческие гические ческие
параметры параметры параметры параметры
П
Оценка биохимического статуса крупного рогатого скота обработанного випраксином (в динамике)
Рисунок. Схема исследования крупного рогатого скота, обработанного биологически активными препаратами.
Таблица. Критерий достоверности разницы показателей животных опытных групп в сопоставлении с контролем
Показатель Альнорин (фактор некроза опухолей) (п=10) Ридостин (п=9) Корригин (п=10) Випраксин (п=10)
Общий белок, г/л 0,0246 0,018
Щелочной резерв,% 0,0000002
Витамин А, мкг% 0,0015
Витамин Е,мкг% 0,013 0,0000001
Медь, ммоль/л 0,0096
Альбумины,% 0,0099 0,0001 0,0003 0,0002
а-глобулины,% 0,000000003 0,000003 0,000001 0,000000001
у-глобулины,% 0,000000001 0,000002 0,000001 0,00000000002
солевого обмена организма животного под влиянием препарата (усиление фильтрационной функции почек, либо интракорпоральное перераспределение воды). Изменение концентрации эритроцитов и ге-мобглобина, как наиболее мобильной составляющей гемопоэза имеет, вероятно, с учетом временного интервала (1...7 суток) ареактивный характер. Предположение такой формы увеличения большинства показателей, в том числе общего белка, подтверждает их рост на 1...7 сутки после введения препарата и последующее понижение до уровня относительной нормы и менее. Уменьшение в этот же период (с 1 по 7 дни) щелочного резерва сыворотки крови и содержания сильнейшего антиоксиданта — витамина Е, а также повышение активности щелочной фосфатазы, свидетельствует о развивающемся ацидозе, что согласуется с синдромом «сгущения крови». К 14 дню величины перечисленных показателей возвращаются к уровню нормы. Сильнее всего такие изменения выражены у коров.
Содержание сахара в крови опытных животных во всех возрастных группах за исключением телят 12 месячного возраста к 3 дню достоверно повышалось на
20...26 %. Наиболее выраженным этот эффект был также у коров.
У особей всех возрастных групп отмечено достоверное снижение концентрации в крови аргинина и аспарагина с 1 по 7 дни. Аналогично изменялось содержание глутамина у коров и телок случного возраста. У телят в возрасте 12 мес. величина этого показателя была достоверно ниже в течение всего периода наблюдений, а у телят 6 мес. она не изменялась. Количество валина достоверно повышалось во всех группах через 7... 14 дней после инъекции. Динамика изменения содержания остальных аминокислот, а также макро- и микроэлементов, за исключением цинка, не имела определенной специфики. Концентрация цинка в крови возрастала у животных всех возрастных групп в течение первой половины опыта, но к 14 дню сравнивалась с контролем.
Содержание каротина, кальция и фосфора в сыворотке крови подопытных особей имело тенденцию к
снижению в течение 1 суток после инъекции, а у животных младших возрастных групп (телята
6...12 мес.) она сохранялась до 7 дня.
Активность АсаТ, АлаТ и креатинкиназы уменьшалась во всех группах в разные сроки, но почти никогда не возрастала. Только у телят в возрасте 6 мес. ак-тивносгьАлаТ повышалась через 24 часа.
При оценке показателей сыворотки крови коров до и после введения препарата установлено достоверное повышение к 7 дню и последующее понижение к 14 дню концентрации общего белка и бактерицидной активности сыворотки крови.
Анализ полученных результатов позволяет предположить, что випраксин оказывает сложное действие на различные системы организма животных. Эта гипотеза согласуется с данными, полученными другими исследователями [7, 8]. Токсические полипептиды змеиного яда оказывают выраженное действие на интегрирующую систему организма — иммунную, легко преодолевая гисто-гематологические барьеры и входя в непосредственный контакт с тканями и органами. Иммуногенез, по современным представлениям, тесно связан с взаимодействием рецепторов им-мунокомпетентных клеток с антигеном. Предполагают, что животные яды могут контактировать с лимфоцитарными рецепторами, влияя на интенсивность иммуногенеза.
Следует отметить, что все исследуемые зоотоксины, независимо от их химической природы, оказывали выраженное действие на активность дегидрогеназ лимфоцитов, прежде всего лактатдегидрогеназы. При этом характер изменений определялся величиной дозы ядов, и эффект такого воздействия на иммунную систему варьировал от стимуляции до подавления иммуногенеза.
Выводы. Все испытанные биологически активные препараты оказывали определенное стимулирующее воздействие на отдельные иммунобиохимические показатели. При этом наибольшее содержание гамма-гло-булинов, по сравнению с контролем, было зарегистрировано у животных, обработанных випраксином. Поскольку гамма-глобулярные белки носители основной массы антител, рассматривается возможность применения випраксина (в перспективе) при диагностике инфекции ВЛКРС, в том числе при её латентном течении. Результаты наших исследований подтверждают сложное и неравнозначное воздействие випраксина на гематологические, иммунологичскиеи биохимические показатели крупного рогатого скота.
Литература.
1. Агаркова Т.А. Эколого-иммунологичеасая характеристика крупного рогатого скота разных территорий Сибири с учетом оздоровления стад от лейкоза: Автореф. дис. ...канд. ветеринар, наук. — Новосибирск, 2000. -23с.
2. Балашов С.Г. Иммунные глобулины в ветеринарии. / С.Г. Балашов. — Минск, 1972. — 43 с.
3. Джупина С.И. Методы эгшзоотологтеского исследования и теория эпизоотического процесса. / С.И. Джупта. — Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1991. — 142 с.
4. Горский А.Н. Изучение формирования иммунитета у cewieu в онтогенезе при применении биологически активш,1х вещеапв: Автореф. дис. ... канд. ветеринар, наук. — Новосибирск, 2001. — 26с.
5. Итэсь Ю.В. Результаты ком/ыексньсх иммунобиохимических исследований крупного рогатого скота разной породной принадлежности и степени компрометации к лейкозу: Aemopeip. дис. ... канд. биал. наук. — Новосибирск, 2002. — 22 с.
6. Крикун В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность. — Ветеринария, 2002. — № 6— С. 6-9.
7. Романовой Е.Б. Иммунофармакологическое исследование зоотоксинов: Автореф. дис. ... канд. биол наук. — М., Купавна, 1983. — 22 с.
8. Сейфула РД., Орлов Б.Н., Романова Е.Б. Иммунофармакологическая активность токсинов животного происхождения фармакологического и токсикологического. Рига, 1982. № 2. — С. 238-244.
9. Проблемы лейкоза животных./!!. Н. Смирнов, А.Г. Незавитин.В. В. Смирнова, В. В. Храмцов. //Под ред. П. Н. Смирнова. — Новосибирск, 1992. - 468 с.
10. Чекишев В.М. Иммунологические аспекты резистентности телят: Дис. ... д-ра. ветеринар, наук. — Новосибирск, 1983. — 344 с.
11. Hadden J.WIn vitro analisis of immunomodulators. //Stand.Immunopharmacol. Natur. and Synth.-immunomodul.: Proc. Symp., Annecy, 15-17 May, 1992. - P. 93-95.
12. Raitiard P. Immunostimulation et controle de mammites:perspective ou realie. //Bull. Soc. Vet. Prat. De France,1986. — T.70, NslO.-P. 595-606.
13. Weiss F.R. Herbal Medicine. 8h German edition, F English edition. // Translated by A.R Meuss. Portland, OR: Medicina Biologica, 1988.
THESTADYINFLUENCE BIOLOGICALLY ACTIVE PREPARATIONS, MAINLYVIPRACSIN ON IMMUNOBIOCHEMICALRESPONSIVENESSOF ANIMALS
V.V. Khramtsov, N.A. Osipova, T.A. Agarkova, N.G. Dvoeglazov
Summary. Learn influence biologically active preparations, first of all vipracsin onresponsivenese animals.
Key words: immunomodulator, biologically active preparations, alnorin, vestin, corrigin, vipracsin, immunobiochemical responsiveness, immunocompetente cells, antigenic capacity, intact, hemopoiesis, biochemical status.
УДК 619:676.807.7
ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА КОНЪЮГАТОВ, ИЗГОТОВЛЕННЫХ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНОВ БЦЖ С ПОЛИВИНИЛПИРРОЛИДОНОМ
B.C. ВЛАСЕНКО, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Е.М. ШУЛИКО, младший научный сотрудник
C.Ю. ПЕТРОВ, аспирант
М. А. БАЖИН, доктор ветеринарных наук, заведующий сектором
А.Н. НОВИКОВ, кандидат ветеринарных наук ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных E-mail: vniibtg@rambler.ru
Резюме. Представлены результаты исследований, свидетельствующие о том, что конъюгат, изготовленный из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином и конъюгированный с поливинилпирро-лидоном, обладает способностью восстанавливать нарушенную иммунологическую реактивность и усиливать протективные свойства вакцины БЦЖ. Ключевые слова: вакцина БЦЖ, иммунитет, комплекс антигенов БЦЖ, иммуностимулятор, иммунный статус.
Развитие средств иммунологической защиты людей и животных идет по нескольким направлениям: поиск в области традиционного вакцинного дела; создание искусственных вакцинных макромолекул, не имеющих аналогов в природе; регуляция иммунологической реактивности с помощью неспецифической
стимуляции; создание препаратов иммуностимулирующей, иммуномодулирующей активности и адъювантных свойств синтетических и естественных средств [1, 2, 3].
Сегодня для профилактики туберкулеза используется живая вакцина БЦЖ- Однако у нее имеется ряд таких негативных свойств, как остаточная вирулентность, наличие большого количества балластных, в том числе токсичных, компонентов из микробных клеток с высокими аллергизирующими свойствами.
Цель нашей работы — изучить иммуностимулирующие свойства конъюгатов, приготовленных на основе антигенов вакцинного штамма БЦЖ и синтетических полиэлектролитов.
Для ее достижения были поставлены задачи: изучить на морских свинках иммуностимулирующие и протективные свойства конъюгатов;
испытать конъюгат на молодняке крупного рогатого скота.
Условия, материал и методы. Работа выполнена в секторе иммунитета и специфической профилактики туберкулеза животных ВНИИБТЖ
Объект исследования — морские свинки, привитые противотуберкулезными конъюгантами. Комплекс антигенов для конъюгации с полиэлектролитами выделяли из вакцинного штамма БЦЖ, разрушенного ультразвуком. На их основе сконструированы и исследованы следующие средства: комплекс антиге-
