CC BY
31
3. Кумакшева Е.В., Кушнарева Т.В. Кариология экологических хозяев хантавирусов - возбудителей геморрагической лихорадки с почечных синдромом в Приморье // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2016; 2 (65): 49-51.
Kumaksheva E.V., Kushnareva T.V. Kariologija jeko-logicheskih hozjaev hantavirusov - vozbuditelej gem-orragicheskoj lihoradki s pochechnyh sindromom v Primor'e // Zdorov'e. Medicinskaja jekologija. Nauka. 2016; 2 (65): 49-51.
4. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» СП 1.3.1285-03. 2003. Минздрав России. Режим доступа: http://epidemiolog. ru/law/san/?ELEMENT_ID#3240078 (дата обращения 12.05.2017 г.).
Sanitarno-jepidemiologicheskie pravila «Bezopas-nost' raboty s mikroorganizmami I-II grupp patogen-nosti (opasnosti)» SP 1.3.1285-03. 2003. Minzdrav Rossii. Rezhim dostupa: http://epidemiolog.ru/law/ san/?ELEMENT_ID#3240078 (data obrashhenija 12.05.2017 g.).
5. Громов И.М., Ербаева М.А. Млекопитающие фауны России и сопредельных территорий. Зайцеобразные и грызуны. - СПб.: ЗИН РАН, 1995. -522 с.
Gromov I.M., Erbaeva M.A. Mlekopitajushhie fauny Rossii i sopredel'nyh territorij. Zajceobraznye i gryzu-ny. - SPb.: ZIN RAN, 1995. - 522 s.
6. Орехова Т.П. Семена сосны корейской (Pinus koraiensis Sieb. et Zucc.) (биологическая характеристика, биохимический состав, рекомендации по сборке и длительному хранению). - Владивосток БПИ ДВО РАН, 2004. - 63 с.
Orehova T.P. Semena sosny korejskoj (Pinus koraiensis Sieb. et Zucc.) (biologicheskaja harakteristika, biohi-micheskij sostav, rekomendacii po sborke i dlitel'nomu hraneniju). - Vladivostok BPI DVO RAN, 2004. - 63 s.
7. Симонова Т.Л., Кушнарева Т.В., Симонов С.Б., Компанец Г.Г., Слонова Р.А. Демографическая характеристика популяции мыши Apodemus peninsulae и ее роль в поддержании хантавирусной инфекции на юге Приморского края // ЖМЭИ. 2006; 3. 81-84.
Simonova T.L., Kushnareva T.V., Simonov S.B., Kompanec G.G., Slonova R.A. Demograficheskaja harakteristika populjacii myshi Apodemus peninsulae i ee rol' v podderzhanii hantavirusnoj infekcii na juge Pri-morskogo kraja // ZhMJel. 2006; 3. 81-84.
8. Кушнарева Т.В., Слонова Р.А. Резервуарный потенциал природных хозяев хантавирусов в динамике эпизоотического процесса в экосистемах Приморского края // Сибирский экологический журнал. -2014; 21(1): 27-34.
Kushnareva T.V., Slonova R.A. Rezervuarnyj potencial prirodnyh hozjaev hantavirusov v dinamike jepizo-oticheskogo processa v jekosistemah Primorskogo kraja //Sibirskij jekologicheskij zhurnal. - 2014; 21(1): 27-34.
9. Кушнарева Т.В., Кумакшева Е.В. Оценка эпизоотической активности и эпидемического риска в лесных очагах Геморрагической лихорадки с почечным синдромом Приморского края: In the World of Scientific Discoveries. V Mire Nauchnykh Otkrytiy. 2016; 78(6): 92-108.
Kushnareva T.V., Kumaksheva E.V. Ocenka jepizo-oticheskoj aktivnosti i jepidemicheskogo riska v lesnyh ochagah Gemorragicheskoj lihoradki s pochechnym sindro-mom Primorskogo kraja: In the World of Scientific Discoveries. V Mire Nauchnykh Otkrytiy. 2016; 78(6): 92-108.
Сведения об авторах
Кумакшева (Гуськова) Елизавета Владимировна - младший научный сотрудник лаборатории хантави-русных инфекции ФГБНУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» (НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова); 690087, Владивосток, ул. Сельская, дом 1, раб. тел. 8(423)2441888; е-mail: liza_kumaksheva@mail.ru;
Компанец Галина Геннадиевна - ведущий научный сотрудник хантавирусных инфекций, кандидат медицинских наук ФГБНУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова», 690087, Владивосток, ул. Сельская, дом 1, тел. (423)244-18-88, e-mail: galkom@inbox.ru.
© А.Б. Потт, Г Г. Компанец, 2017 г doi: 10.5281/zenodo.1115481
Удк 578.82/.83-578.72+57.083.223
А.Б. Потт, Г. Г. Компанец
изучение вирулентности штаммов геноварианта AMUR
ортоХАнтАвИрУСА HANTAAN
НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова, Владивосток
Представлены данные о вирулентности штаммов ортохантавируса Amur, выделенных в разные годы и в разных географических районах юга Дальнего Востока России. При экспериментальной хантавирусной инфекции на модели сосунков лабораторных животных показано наличие штаммов с высокой, средней, низкой вирулентностью, а также авирулентного штамма. Все штаммы были иммунногенными и вызывали процесс
Short messages •
антителообразования при всех исходах инфекции. Установлено, что вирулентность штаммов ортохантавируса Amur для сосунков белых мышей значительно выше, чем для сосунков белых крыс. Результаты исследований показали существенную неоднородность биологических свойств штаммов ортохантавируса Amur.
Ключевые слова: ортохантавирус, Amur, биологические свойства, вирулентность. Для корреспонденции: Потт А.Б.; e-mail: pott_a.b@mail.ru
Поступила 13.10.17
A.B. Pott, G.G. Kompanets
THE STUDY OF VIRULENCE OF ORTHOHANTAVIRUS HANTAAN GENOVARIANT AMUR STRAINS
Somov Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Vladivostok, Russia.
The data on the virulence of orthohantavirus Amur strains isolated in different years and in distinct geographical regions of south of the Far East of Russia are presented. The experimental hantavirus infections on the model of suckling laboratory animals showed the strains with high, medium, low virulence as well as avirulent strain. All strains were immunogenic and induced the process of formation of antibodies through different outcomes of infection. It was found that the virulence of orthohantavirus Amur strains for suckling mice is significantly higher than for suckling rats. The results of our study showed the inherent inhomogeneity of biological properties of orthohantavirus Amur strains.
Key words: orthohantavirus, Amur, biological properties, virulence.
For correspondence: Pott A.B., e-mail: pott_a.b@mail.ru
Conflict of interests. The authors are declaring absence of conflict of interests.
Financing. The study had no sponsor support.
Received 13.10.17 Accepted 25.11.17
Ортохантавирусы (род Orthohantavirus в семействе Hantaviridae, порядок Bunyavirales, ранее род Hantavirus, семейство Bunyaviridae) это РНК-содержащие вирусы, широко распространенные во многих регионах мира, вызывают у природных хозяев - грызунов и насекомоядных бессимптомную хроническую инфекцию. В отличие от других членов этого порядка ортохантавирусы не передаются человеку членистоногими, основной путь заражения человека - вдыхание аэрозолей инфицированных выделений грызунов-хозяев [1]. В Евразии ортохан-тавирусы являются возбудителями геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), вызывая ежегодно до 110000 случаев различной тяжести. К настоящему времени, в мире выделено и охарак-
В эксперименте использовали вируссодержащий супернатант, полученный при инфицировании линии клеток Vero E-6 вышеуказанными штаммами.
теризовано более 80 типов ортохантавирусов, роль некоторых из них в патологии человека до конца не установлена. [2] В Приморском крае установлена циркуляция, по меньшей мере, двух патогенных для человека видов ортохантавирусов: вируса Hantaan, генетические варианты Far East и Amur (природные носители - полевая мышь Apodemus agrarius и вос-точноазиатская мышь A. peninsulae, соответственно) и вируса Seoul, генетический вариант Vladivostok (резервуар - серая крыса Rattus norvegicus).
Цель работы - сравнить вирулентность штаммов генетического варианта Amur, выделенных в разные годы на территории Приморского края, для лабораторных животных разных видов.
Материалы и методы.
Титр вируса определяли согласно методике Lee P.W. et al. [3], в нашем эксперименте он составлял не менее 4,0 lg ФОЕ/1,0 мл (табл. 1).
Таблица 1
Сведения о штаммах ортохантавирусов использованных в исследовании
№ Источник выделения штамма Номер штамма в коллекции НИИ ЭМ Географическое происхождение Дата выделения
1. Apodemus peninsulae 17476-1994 Приморский край, Спасский р-он Сентябрь 1994
2. Apodemus peninsulae 19788-2000 Приморский край, Надеждинский р-н Март 2000
3. Apodemus peninsulae 25776-2004 Приморский край, Надеждинский р-н Декабрь 2004
4. Apodemus peninsulae 25786-2004 Приморский край, Надеждинский р-н Декабрь 2004
5. Apodemus peninsulae 27191-2004 Приморский край, Надеждинский р-н Декабрь 2004
6. Apodemus peninsulae 25795-2004 Приморский край, Надеждинский р-н Декабрь 2004
В эксперименте проводили заражение сосунков белых лабораторных мышей в возрасте 24-48 часов, и белых лабораторных крыс в возрасте 24 часа, 3 дня и 14 дней. Животных (1 самка и новорожденное потомство в отдельной клетке) содержали в стандартных условиях вивария: в пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой, стандартный рацион и питьевой режим предоставлен в соответствии с нормами, утвержденными приказом Министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966 г. № 163 и приказом Минздрава СССР от 10.10.83 № 1179 (пункт 4.1). Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г. Уход за инфицированными животными и работу с ними, осуществляли в условиях вивария с уровнем безопасности Р-3 (BSL-3).
Вирулентность выбранных штаммов ортохантави-руса изучали, заражая однократно интрацеребраль-но (сосунков мышей и крыс в возрасте 24 часа) и внутрибрюшинно (крыс в возрасте 3 дня и 14 дней). Доза вируса составила 2 lg ФОЕ/0,01 мл для мышей, для сосунков крыс дозу вируса увеличивали в три раза. Для белых крыс при внутрибрюшинном пути введения вируса доза составила 2,3 lg ФОЕ/0,04 мл. Группы животных, зараженных разными штаммами ортохантавируса, содержали в отдельных помещениях, для исключения возможности перекрестной аэрогенной контаминации.
Однако степень вирулентности исследованных штаммов существенно отличалась. Наиболее высоко вирулентным оказался штамм 25776-2004, показатель летальности при заражении этим штаммом составил 77,5%, что статистически достоверно выше (1=1,991, р<0,05), чем для штаммов 19788-2000, 25786-2004 (1=1,998, р<0,05), 25795-2004 (1=2, р<0,05), при введе-
Начиная с 13-14 дня после заражения (p.i.) дважды в день наблюдали за общим состоянием животных, отмечая признаки инфекции, и при выраженных клинических симптомах, свидетельствующих о терминальной фазе инфекции, проводили вскрытие под общим наркозом эфиром. Для исследования на наличие специфических антител отбирали образцы крови. При отсутствии симптомов заболевания животных обескровливали под общим наркозом на 35-40 день после заражения и также отбирали образцы для исследований
Для выявления титра антител в сыворотках крови экспериментально инфицированных животных использовали НМФА, постановка которого осуществлялась согласно методическим рекомендациям с помощью тест-системы «Диагностикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) культуральный поливалентный» (ФГБНУ «Федеральный научный центр исследований и разработки иммунологических препаратов имени М П. Чумакова», РАН).
Для статистической оценки полученных в ходе работы данных использовалась программа BioStat.
Результаты. При анализе вирулентности штаммов, выделенных от A. peninsulae, получены следующие результаты: все штаммы, за исключением 27191-2004, были вирулентными для сосунков белых мышей в возрасте 24 часа, вызывая клинические признаки заболевания (вялость, потягивание конечностей и т.д.), начиная, в среднем с 15 дня от инфицирования (p.i) (табл. 2).
нии которых показатель летальности составил 43,3%, 15% и 38%, соответственно, тогда как разница с показателями летальности других штаммов была статистически не достоверна. В то же время при увеличении возраста животных при заражении до 48 часов вирулентность штамма 19788-2000 уменьшилась, животные не болели. Средняя продолжительность
Таблица 2
Вирулентность штаммов геноварианта Amur для лабораторных животных
Название штамма Вид и возраст животного Средний показатель летальности (%) Начало заболевания (p.i.) Средний день гибели животных (p.i.)
19788-2000 Белые мыши, 24 часа 43,3±6,4 18 23
17476-1994 57,1±18,7 14 14
25786-2004 15,0± 3,99 21 25
25776-2004 77,5±4,96 19 20
27191-2004 - - -
25795-2004 38±10,6 14 17
19788-2000 Белые мыши, 48 часов - - 30
19788-2000 Белые крысы, 24 часа - - 35
25786-2004 - - 27
25776-2004 Клиника без гибели 19 32
27191-2004 0 - 42
19788-2000 Белые крысы, 3-14 дней - - 35
жизни инфицированных животных с клиническими симптомами составила 20 дней.
Вирулентность исследованных штаммов для сосунков белых крыс в возрасте 24 часа и больше была значительно ниже: при заражении штаммами 19788-2000, 25795-2004 и 25786-2004 клинических признаков заболевания не выявлено, все животные были здоровы до 35-40 дня, показатель летальности составил 0%. Тогда как у сосунков крыс, инфицированных штаммом 25776-2004, начиная с 19 дня p.i., отмечали признаки и симптомы, характерные для экспериментальной ортохантавирусной инфекции, однако состояние животных далее не ухудшилось в течение периода наблюдения до 40 дня.
Все штаммы, кроме 17476-1994, вызывали образование специфических антител: диапазон титра антител в НМФА в сыворотках погибших мышей сосунков составил 1:8-1:32 для 19788-2000 и 1:160 для 25795-2004, диапазон антител в сыворотках выживших животных, вскрытых на 35-40 день, составил 1:32-1:512 для 19788-2000, 1:16-1:128 для 257862004, 1:4-1:128 для 27191-2004. В сыворотках крыс, зараженных штаммом 25776-2004, у которых наблюдалась клиника заболевания без гибели животных, диапазон титра антител составил от 1:128 до 1:1024, у крыс без симптоматики титры антител были в диапазоне от 1:16 до 1:64.
Сосунки белых лабораторных мышей и крыс в возрасте 24 часа, инфицированные штаммом 271912004, не болели, летальность составила 0%, а титр антител в пуле сывороток животных 1:128.
Обсуждение. По данным Роспотребнадзора за последние 10 лет, в Российской Федерации ежегодно регистрируется, в среднем, около 8000 случаев ГЛПС, из них 98,5% на европейской территории страны. В дальневосточном регионе заболеваемость связана с ортохантавирусами Hantaan и Seoul, которые также циркулируют и в соседних странах (Китае и Южной Корее). [4] Заболевание, обусловленное вирусом Hantaan характеризуется наличием тяжелых форм, нередко заканчивающихся летально, причем в Приморском крае в отдельные годы показатель летальности при ГЛПС, связанный с этими серотипами, составлял до 16%. На территории Дальнего Востока вирус Amur был идентифицирован в 1999 году по результатам молекулярно-генетическо-го анализа образцов крови больных ГЛПС как самостоятельный генотип ортохантавируса. [5] В 2004 году Lokugamage и соавт. было проведено исследование генетических, антигенных и биологических характеристик двух штаммов H5 и B78, выделенных в Китае от больного ГЛПС и Apodemus peninsulae, соответственно, и результаты исследования показали значимое отличие от штаммов вируса Hantaan, соответствующее критериям отдельного типа [6]. Однако, в 2016 году решением Международного ко-
Short messages •
митета по таксономии вирусов (МКТВ) произошло изменение таксономии ортохантавирусов, и вирус Amur расценен как один из представителей вида (ге-новариант) ортохантавируса Hantaan.
Полученные нами результаты не согласуются с данными Lokugamage и соавт. о более высокой вирулентности штаммов геноварианта Amur для сосунков белых мышей, в сравнении с вирусом Hantaan, так как в наших экспериментах средний показатель летальности для исследованных штаммов составил 38,8% для сосунков белых мышей, а для штамма 76-118 вируса Hantaan - 100%. [7] Однако штаммы вируса Hantaan, выделенные от восточноазиатской мыши (Amur), как и штаммы вируса Hantaan, выделенные от полевой мыши (Far East) в предыдущем исследовании, были авирулентными в отношении сосунков крыс, за исключением штамма 25776-2004, вызывающего нелетальную симптоматическую инфекцию, что делает его сходным со штаммами геноварианта Far East. [7]
В нашей работе мы проанализировали различия вирулентности штаммов геноварианта Amur, выделенных от природного хозяина, отловленного в разные годы на нескольких очаговых территориях Приморского края - в Надеждинском и Спасском районах. Полученные результаты свидетельствуют о неоднородности группы исследованных штаммов, что согласуется с данными о генетической неоднородности изолятов, носимых восточноазиатской мышью. Так на территории Дальнего Востока и в ареале данного грызуна на территориях Китая и Кореи выделяют, по меньшей мере, четыре географических генова-рианта Amur, при этом в кладе «Приморье» изоляты из Спасского района на филогенетическом древе располагались отдельно от ветви изолятов из Надеждин-ского района. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о существенных различиях вирулентности штаммов серотипа Amur ортохантавируса Hantaan для лабораторных животных разных видов.
Следует отметить, что исследования по изучению вирулентности на разных лабораторных животных и моделированию ортохантавирусной инфекции были начаты с момента обнаружения данного вируса [8], [9]. Моделирование хантавирусного легочного синдрома (ХЛС) при инфекции вирусом Andes у сирийских хомяков (Mesocricetus auratus) показало некоторое сходство симптомов экспериментальной инфекции и заболевания человека (отек легких, плевральный выпот и.т.д.) [10]. Симптомы острого респираторного дистресс-синдрома, напоминающие ХЛС у людей, получены при заражении макак-резус (Macaca mulatta) вирусом Sin-Nombre. При заражении ортохантавирусом Puumala макак (Cynomolgus macaques) отмечено, что такие характеристики, как распределение антигена по органам животного и патологические изменения в почках, выявленные у экспериментально зараженных жи-
вотных, были аналогичны наблюдениям у больных ГЛПС, вызванной вирусом Puumala. [10]. Однако, до настоящего времени не создано универсальной живой модели, пригодной для исследования биологических свойств ортохантавирусов и имитации клинического заболевания у человека
Вывод. Вполне возможно, что используемая в данных исследованиях экспериментальная модель менее чувствительна к ортохантавирусам серотипа Amur,
а полученные результаты не так репрезентативны, как при моделировании ортохантавирусной инфекции на природных хозяевах, однако такие эксперименты сопряжены с существенными трудностями содержания изолированной колонии диких грызунов.
Конфликт интересов отсутствует.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Сведения об авторах
Потт Анастасия Борисовна. Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г. П. Сомова», младший научный сотрудник лаборатории хантавирусных инфекций, аспирант; 690087, Владивосток, ул. Сельская, дом 1, тел. (423)244-18-88, e-mail: pott_a.b@mail.ru;
Компанец Галина Геннадиевна. Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова», ведущий научный сотрудник лаборатории хантавирусных инфекций, кандидат медицинских наук; 690087, Владивосток, ул. Сельская, дом 1, тел. (423)244-18-88, e-mail: galkom@inbox.ru. Библиография - в редакции.
© Коллектив авторов, 2017 г. doi: 10.5281/zenodo.1115483
Удк 61:355
И.А. Соловьев, Н.В. Рухляда, А.П. Уточкин, А.В. Колунов, О.В. Балюра
применение новых медицинских технологий
в практике корабельного хирурга - важнейшее положение концепции оказания медицинской помощи при комбинированных поражениях хирургического профиля на вмф
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, г. Санкт-Петербург
На кафедре военно-морской хирургии Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова разработана концепция оказания медицинской помощи при комбинированных поражениях хирургического профиля на Военно-морском флоте. Важнейшим положением является внедрение новейших медицинских технологий на всех этапах оказания медицинской помощи, а на этапах квалифицированной и специализированной помощи-это, прежде всего, минимально инвазивные методы диагностики и лечения заболеваний и повреждений органов живота. Внедрение в практику корабельных хирургов лапароскопических технологий позволяет улучшить качество диагностики патологических состояний организма пациентов и минимизировать травматичность операций, а также уменьшить сроки лечения больных на корабле.
Ключевые слова: морская медицина, корабельная хирургия, новые медицинские технологии. Для цитирования: Соловьев И.А., Рухляда Н.В., Уточкин А.П., Колунов А.В., Балюра О.В. Применение новых медицинских технологий в практике корабельного хирурга - важнейшее положение концепции оказания медицинской помощи при комбинированных поражениях хирургического профиля на ВМФ // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2017; 5: С. 86-88. doi: 10.5281/zenodo.1115483.
Для корреспонденции: Соловьев И.А., д.м.н., профессор; e-mail: ivsolov@yandex.ru
Поступила 15.10.17
I.A. Soloviev, N.V. Rukhlyada, A.P. Utochkin, A.V. Kolunov, O.V. Balyura APPLICATION OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES IN THE PRACTICE OF A SHIP SURGEON IS THE MOST IMPORTANT POSITION OF THE CONCEPT OF RENDERING MEDICAL CARE FOR COMBINED DEFECTS OF THE SURGICAL PROFILE IN THE NAVY
Military Medical Academy named C.M. Kirova, St. Petersburg, Russia
At the Department of Naval Surgery of the Military Medical Academy named after S.M. Kirov developed the concept of medical care for combined lesions of the surgical profile in the Navy. The most important position is
