CC BY
8Проблемы медицинской микологии. 2020, Т.22. №3
ИЗУЧЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ МУКОРОМИЦЕТОВ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ НА ЖИВОТНЫХ
Васильева Н.В., Босак И.А., Степанова А.А., Выборнова И.В., Чилина Г.А., Богомолова Т.С.
Научно-исследовательский институт медицинской микологии им. П.Н. Кашкина Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
VIRULENCE STUDY OF MUCOROMYCETES IN AN EXPERIMENTAL ANIMAL MODEL
Vasilyeva N.V., Bosak I.A., Stepanova A.A., Vybornova I.V., Chilina G.A., Bo-gomolova T.S.
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
Мукормикоз - инвазивный микоз, обусловленный низшими грибами порядка Mucorales. В последние десятилетия частота случаев такой патологии существенно увеличилась. По данным аутопсий, в стационарах лечебных учреждений экономически развитых стран мукормикоз выявляют в i-5 случаях на 10 GGG вскрытий. У больных с факторами риска частота этого инвазивного микоза существенно выше. Так, у реципиентов трансплантатов аллогенного костного мозга частота возрастает до 2-3%.
Цель работы - изучение вирулентности различных представителей мукоро-вых грибов в экспериментальной модели на животных.
Материалы и методы. В качестве экспериментальных животных были выбраны самцы беспородных белых мышей с массой тела 18-20 г по 10 в каждой группе. Для введения животных в состояние нейтропении внутрибрюшинно вводили циклофосфан в дозе 150 мг/кг четырёхкратно (-3, 0, 4 и 8 день). Из НИЛ «Российская коллекция патогенных грибов» были получены следующие штаммы: Lichtheimia ramosa РКПГ F 1456, L. corymbifera РКПГ F 1493, L. ornata РКПГ F 1507, L. corymbifera РКПГ F 1568, L. corymbifera РКПГ F 1601, Rhizopus oryzae РКПГ F 1537, R. microsporus РКПГ F 1538 и Rhizomucorpusillus РКПГ F 1545. Все штаммы были выделены от пациентов с мукормикозом. Заражение мышей проводили путем интраназального введения животным 5G рл взвеси грибов в G,9% растворе NaCI концентрацией i - i G7 ШЕ мл. Наблюдение за животными проводили в течение 25 дней после заражения. Оценку наличия гриба в ткани легких мышей выполняли путем посева части легких погибших животных на среду Сабуро агар, а также при гистологическом исследовании. Окраску срезов осуществляли по методу Гомори-Грокотт и гематоксилин-эозином.
Результаты. При анализе выживаемости лабораторных животных в экспериментальных группах штаммы Lichtheimia spp. были распределены на две группы: сильно- и слабовирулентные. K сильновирулентным были отнесены штаммы, вызвавшие гибель всех мышей в группе, а к слабовирулентным - с гибелью части животных, достоверность различий составила p=G,Gi. В группах мышей, зараженных L. ramosa РЮГ F i456, гибель всех животных отмечали на i5 день после заражения, штамм L. corymbifera РЮГ F i6Gi также проявил высокую вирулентность для лабораторных мышей с полной гибелью на iB-е сутки после заражения. В остальных экспериментальных группах гибели всех животных отмечено не было. На день окончания наблюдения в группах, зараженных L. ornata РИТ F 1507, R. oryzae РШГ F i 537 и R. microsporus РШГ F i 53B, выжило по одному животному, R. pusillus РШГ F i545 и L. corymbifera РШГ F 1493 - по 2, L. corymbifera РШГ F i56B - 6 мышей. При культуральном исследовании всех животных, погибших в сроки до iG суток, был получен рост возбудителя. При гистологическом исследовании срезов лёгких погибших мышей, зараженных L. ornata РШГ F i5G7 и R. microsporus РШГ F i53B, обнаружен несептированный мицелий шириной 5-iG мкм, ветвящийся под прямым углом, характерный для мукоромице-тов.
Заключение. В результате исследования была изучена вирулентность представителей мукоровых грибов, выявлены различия вирулентности как внутри одного рода, так и между представителями различных родов.
ИЗУЧЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ CANDIDA AURIS В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ НА ЖИВОТНЫХ
Васильева Н.В., Босак И.А., Степанова А.А., Выборнова И.В., Чилина Г.А., Богомолова Т.С
Научно-исследовательский институт медицинской микологии им. П.Н. 1<ашкина Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
STUDY OF CANDIDA AURIS VIRULENCE IN AN EXPERIMENTAL ANIMAL MODEL
Vasilyeva N.V., Bosak I.A., Stepanova A.A., Vybornova I.V., Chilina G.A., Bo-gomolova T.S.
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
Новый вид дрожжевых грибов рода Candida (C. auris) впервые выделен в Японии из среднего уха пациентки в 2009 г. Впоследствии изоляты C. auris были обнаружены как возбудители внутрибольничного кандидоза во всем мире. Характерной особенностью штаммов этого вида является резистентность к современным противогрибковым препаратам.
Цель - разработка экспериментальной модели диссеминированного кандидоза, обусловленного C. auris, и изучение вирулентности штаммов этого вида, выделенных от больных в России.
Материалы и методы. В качестве экспериментальных животных использовали самцов беспородных белых мышей весом 18-20 г. Штаммы C. auris РКПГ Y 1821 (из мочи пациента с постоянным уретральным катетером), C. auris РКПГ Y 1945 (из мочи пациента ОРИТ) и РКПГ Y 1955 (из мочи пациента с кистой почки) были получены из «Российской коллекции патогенных грибов» (РКПГ). Из суточных культур в 0,9% растворе NaCI готовили взвесь концентрацией 4 ЕД по стандарту мутности Мак Фарланда. Заражение животных проводили путем внутривенного введения 0,5 мл приготовленных взвесей микромицетов через латеральную хвостовую вену. Наблюдение за животными выполняли в течение 30 суток после заражения. Для получения пассированной через организм животного культуры C. auris мышей умерщвляли через 5 дней после заражения и стерильно извлекали почки для посева на питательную среду. В результате получена трехкратно пассированная культура C. auris. Для моделирования состояния нейтропении на -3, 0, 4 и 8-й день эксперимента животным внутрибрюшинно вводили раствор эндокса-на (циклофосфамид) в концентрации 100 мг/кг. Заражение мышей осуществляли взвесями микромицетов в концентрации 2 ЕД по Мак Фарланд. Органы погибших животных (мозг, почки, печень) стерильно извлекали для культурального и гистологического исследований. Посев производили на среду Сабуро агар, а гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином, PAS-методом и по Гомори-Гроккоту. Выделенные культуры идентифицировали методом MALDI-TOF масс спектрометрии.
Результаты. В группах иммунокомпетентных (без предварительного введения эндоксана) гибели зараженных животных не отмечали. Трехкратный пассаж не повлиял на вирулентность C. auris. Через 30 дней после заражения из всех органов был получен рост возбудителя на питательной среде, а в гистологических срезах почек выявлены дрожжевые почкующиеся клетки.
В группах зараженных животных, с нейтропенией выживаемость к 20-му дню после заражения составила: шт. 1945 - 1 %, шт. 1955 - 30%, шт. 1821 - 60%. При культуральном исследовании всех органов погибших животных получен рост возбудителя. При гистологическом исследовании срезов почек погибших животных, зараженных C. auris РКПГ Y 1945, обнаружены дрожжевые почкующиеся клетки возбудителя.
Заключение. Внутривенное введение взвесей штаммов C. auris в изученной концентрации не вызывает гибели иммунокомпетентных животных. Штаммы C. auris РКПГ Y 1821, C. auris РКПГ Y 1945 и РКПГ Y 1955 различаются по вирулентности для беспородных белых мышей в состоянии нейтропении.
СЛУЧАИ ПРИОБРЕТЕННОМ ЛИМФАНГИЭКТАЗИИ
Вашкевич А.А., Разнатовский К.И., Резцова П.А., Котрехова Л.П., Корнишева В.Г., Клибсон С.К., Мирзоян В.Л., Чаплыгин А.В.
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
CASE OF ACQUIRED LYMPHANGIECTASIA
Vashkevich A.A., Raznatovskiy K.I., Reztsova P.A., Kotrekhova L.P., Kornisheva V.G., Klibson S.K., Mirzoyan V.L., Chaplygin A.V.
North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
Лимфангиэктазия (ЛАЭ) - стойкое резкое расширение лимфатических сосудов. Приобретённые ЛАЭ развиваются на фоне травм, воспалительных процессов, опухолей в малом тазу, подвергшиеся хирургическому и/или радиологическому лечению, ЗППП, рецидивирующих бактериальных инфекций, крупных миом, болезни Крона, филяриоза, скрофулодермы. За счет повреждения путей лим-фооттока на уровне магистральных лимфатических коллекторов или узлов создаются условия для повышения давления в лимфатических сосудах, застоя лимфы, развития фиброзно-склеротических изменений в тканях вплоть до развития слоновости, появления лимфорей или хилорей. К развитию лимфангиэктазий чаще предрасположены пациентки в возрасте 50-70 лет. Поверхностные ЛАЭ развиваются в лимфатических сосудах и капиллярах кожи - в сосочковом слое дермы формируются полости, наполненные лимфой, которые оказывают давление на эпидермис, вызывая его атрофию, нередко вплоть до полного исчезновения. Рядом с очагами атрофии эпидермиса обнаруживаются гиперкератоз и акан-тоз. Очаги ЛАЭ, соединяясь друг с другом, в сосочковом и сетчатом слоях кожи образуют пещеристые полости, напоминающие лимфангиомы. В полостях чётко определяется эндотелиальная выстилка, просвет их заполнен лимфой. Вокруг и рядом с ними образуются крупные лимфоидно-клеточные инфильтраты. Заболе-
