CC BY
157
УДК 615.622’451.234:582.628:581.45].07:543
ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА ЛИПОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИИ ЛИСТЬЕВ ОРЕХА ГРЕЦКОГО, ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В КАВКАЗСКИХ МИНЕРАЛЬНЫХ ВОДАХ
© Ж.В. Дайронас , И.В. Пшукова
Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава, пр. Калинина, 11, Пятигорск, 357532 (Россия) e-mail: daironas@mail.ru
Приведены сведения об изучении состава липофильной фракции листьев ореха грецкого (Juglans regia L.), произрастающего в окрестностях Кавказских Минеральных Вод. Установлено, что основными биологически активными соединениями являются хлорофилл, юглон, Р-каротин, кумарин. Для экспресс-анализа компонентов липофильной фракции предложен метод денситометрии.
Ключевые слова: орех, Juglans regia L., биологически активные соединения, юглон, каротин, хлорофилл, кумарин.
Введение
Орех грецкий (Juglans regia L.) - известное лекарственное растение. Его листья были включены в I-IV издания отечественной фармакопеи, являются официнальными в некоторых южно-американских и западноевропейских странах. Препараты из листьев и околоплодника ореха обладают фитонцидными, протистоцид-ными и бактерицидными свойствами, используются при лечении гнойных и грибковых поражений кожи и заболеваний, вызванных простейшими [1].
Химический состав липофильной фракции листьев ореха грецкого хорошо изучен и представлен различными классами соединений: эфирным маслом - 0,008-0,3% (в его составе кариофиллен, лонгифолен, а-пинен, а-терпинеол и др.), Р-каротином, хинонами (юглон, глюкозид а-гидроюглона, а-гидроюглон, р-гидроюглон) [1]. Для анализа содержания Р-каротина и юглона в листьях ореха используются методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), УФ-спектроскопии, высокоэффективной жидкостной хроматографии [2-5].
Для анализа окрашенных и дающих флуоресценцию соединений широко применяется метод ТСХ с последующей компьютерной обработкой хроматограмм [6, 7]. Таким образом, целью настоящей работы явилось изучение состава липофильной фракции листьев грецкого ореха на содержание различных биологически активных соединений методом денситометрии.
Материалы и методы исследований
Объектом исследования служили листья ореха грецкого Juglans regia L., выращиваемого в Пятигорске (Ставропольский край). Образцы сырья были заготовлены в июне-июле 2008 г. Исследование заключалось в качественном и полуколичественном определении основных биологически активных соединений (хлорофилла, юглона, каротиноидов, кумаринов). Качественное определение проводили в извлечениях, полученных с помощью различных растворителей, методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках Sorbfil [8]. Соотношение окрашенных компонентов липофильной фракции выявляли с использованием метода денситометрии и программного обеспечения Sorbfil TLC Videodensitometer (Demo-версия, доступная на официальном сайте www.sorbfil.com).
* Автор, с которым следует вести переписку.
92
Ж.В. Дайронас, И.В. Пшукова
Результаты и их обсуждение
Высушенные и измельченные (размер частиц около 3 мм) листья ореха грецкого экстрагировали в аппарате Сокслета хлороформом, спиртом этиловым 95% и гексаном. Качественный анализ биологически активных соединений (БАС) в каждом из полученных извлечений проводили методом тонкослойной хроматографии (табл. 1).
Подтверждали идентификацию веществ методом препаративной ТСХ. Сорбент каждой зоны удаляли и элюировали хлороформом, полученное извлечение изучали методом УФ-спектроскопии в диапазоне длин волн 250-700 нм (табл. 2).
Соотношение компонентов липофильной фракции определяли с использованием метода денситометрии. Хлороформное извлечение из листьев ореха грецкого хроматографировали на пластинках Sorbfil в системе растворителей петролейный эфир - диэтиловый эфир (10 : 3,5). Хроматограммы сканировали и данные графических файлов подвергали обработке программой Sorbfil TLC Videodensitometer (рисунок), получая в результате площади пиков (S), отношение площади каждого пика к сумме площадей всех пиков в треке (S%), высоты пиков (H), отношение высоты каждого пика к сумме высот всех пиков в треке (%H) (табл. 3).
Аналогичный анализ проводили с использованием гексанового и спиртового извлечений из листьев ореха грецкого. Результаты полуколичественного анализа основных БАС представлены в таблице 4.
Таблица 1. Результаты идентификации биологически активных соединений в листьях ореха грецкого хроматографическими методами
Класс БАС Система растворителей Детектирование Результат
Каротиноиды петролейный эфир - диэтиловый эфир (10 : 3,5) собственная окраска, раствор фосфорно-молибденовой кислоты желтые пятна; синее окрашивание
Кумарины Бензол - этилацетат (2 : 1); петролейный эфир - диэтиловый эфир (10 : 3,5) пары аммиака, спиртовый раствор калия гидроксида 10%, раствор диазо-тированной сульфаниловой кислоты свечение пятен фиолетового цвета
Нафтохиноны петролейный эфир - диэтиловый эфир (10 : 3,5) собственная окраска бурые пятна
Хлорофилл петролейный эфир - диэтиловый эфир (10 : 3,5) собственная окраска, УФ-свет зеленые пятна, свечение пятен красного цвета
Таблица 2. Идентификация БАС методом препаративной хроматографии
Rf Максимум экспериментальный, нм Максимум по данным литературы, нм Идентифицированное вещество
0,2 320 - Неидентифицированный кумарин
0,3 330 335 Юглон
0,5 640 640 Хлорофилл
0,9 470 465 Каротин
Денситограмма хлороформного извлечения из листьев ореха грецкого
Таблица 3. Результаты денситометрического определения компонентов липофильной фракции листьев ореха грецкого в хлороформном извлечении
Пик Rf S %S H %H NTP
1 0 18бб284 31,4 4022б 38,4
2 0,1б б47904 10,9 98б9 9,4
3 0,34 14б5194 24,7 19113 18,2 107
4 0,48 1883393 31,7 33474 32 479
5 0,88 75250 1,3 2054 2 1390
Сумма 5938025 10473б
Таблица 4. Результаты анализа БАС листьев ореха при использовании различных растворителей
Растворитель Содержание в сумме липофильных соединений, %
Кумарин Юглон Хлорофилл Каротин
Хлороформ 10,9 24,7 31,7 1,3
Гексан 19,2 14,8 28,б 8,7
Этиловый спирт (9б%) 7,б 7,9 21,3 -
Таким образом, преобладающим компонентом липофильной фракции листьев ореха грецкого является хлорофилл. В меньшем количестве в исследуемом сырье содержатся юглон, Р-каротин, кумарин.
Выводы
В результате проведенных исследований установлено, что основными биологически активными веществами липофильной фракции листьев ореха грецкого, произрастающего на Северном Кавказе, являются хлорофилл, юглон, Р-каротин, кумарин. Исходя из химического состава, можно прогнозировать возможность получения антимикробных, противовоспалительных и ранозаживляющих лекарственных средств на основе изученной фракции.
Список литературы
1. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Magnoliaceae-Limoniaceae. Л., 1984. 460 с.
2. Дороднева В.И. Идентификация каротиноидов листьев грецкого ореха Juglans regia L. методами спектрофото-метрии и тонкослойной хроматографии // Растительные ресурсы. 1967. Т. 3, вып. 2. С. 266-268.
3. Еникеева Р.А. Исследование по фармакогностическому изучению и стандартизации сырья и препаратов ореха грецкого (Juglans regia L.): автореф. дис. ... канд. фарм. наук. М., 2008. 21 с.
4. Ходжибаева С.М., Филатова О.Ф., Тыщенко А.А. Новые аспекты получения и контроля юглона // Химия природных соединений. 2000. №3. С. 227-229.
5. Babula P., Mikelovab R., Potesilb D., Adamb V., Kizekb R., Haveld L., Sladkya Z. Simultaneous determination of 1,4-naphtoquinone, lawsone, juglone and plumbagin by liquid chromatography with UV detection // Biomed. Papers. 2005. V. 149. Pp. 25-28.
6. Герасимов А.В. Качественная и количественная интерпретация тонкослойных хроматограмм синтетических пищевых красителей в условиях неполного разделения // Журнал аналитической химии. 2000. Т. 55, №12. С. 1292-1297.
7. Герасимов А.В. Метод определения цветовых параметров растительного сырья при получении пищевых красителей // Химия растительного сырья. 2000. №4. С. 81-83.
8. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский и др. М., 1993. 464 с.
Поступило в редакцию 1S июня 2009 г.
