CC BY
146
Химия растительного сырья. 2012. №2. С. 151-154.
УДК 577.13:582.623.2
ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА ФЛАВОНОИДОВ У SALIX ALBA И S. ALBA VAR. VITELLINA МЕТОДОМ ВЭЖХ
© A.A. Петрук
Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, ул. Золотодолинская,
101, Новосибирск, 630090 (Россия), e-mail: [email protected]
Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) впервые изучен состав флавоноидов у Salix alba и S. alba var, vitellina, произрастающих на территории Сибири,
В составе фенольных соединений идентифицированы агликоны кверцетин, кемпферол, лютеолин и гликозид кверцетина рутин,
Ключевые слова: Salix, флавоноиды, кверцетин, кемпферол, лютеолин, рутин, ВЭЖХ,
Род Ива - Salix L. (Salicaceae) - один из крупнейших полиморфных родов арборифлоры России. На территории Сибири род представлен 78 видами [1].
Экстракты из коры ивы белой (S. alba L.) в течение многих лет активно используются как в народной, так и в научной медицине. Имеются сведения о жаропонижающей, дезинфицирующей, вяжущей, ге-мостатической и диуретической активности экстрактивных веществ [2]. Важными терапевтическими свойствами обладает не только кора: листья используются как жаропонижающее средство, мужские соцветия -для лечения тахикардии, листья и соцветия - для лечения неврозов [3]. Лечебные свойства ивы обусловлены наличием в сырье дубильных веществ, а также кверцетина, кемпферола, лютеолина, апигенина нарин-генина, рутина, триандрина, вималина, салицина и др. [4, 5].
Цель нашего исследования - изучение состава флавоноидов в листьях и соцветиях у Salix alba и
S. alba var. vitellina, произрастающих на территории Сибири.
Экспериментальная часть
Материалом для работы послужили сборы (июнь - июль 2010 г.) листьев и соцветий S. alba (мужской и женский экземпляры) из природной флоры Алтайского края (Павловский район, окр. с. Колыван-ское), а также сборы интродуцированной культурной формы S. alba var. vitellina (L.) Stokes (женский экземпляр) на территории дендропарка Центрального сибирского ботанического сада СО РАН (Новосибирск). Образцы соцветий были взяты в фазу полного цветения, а листья - в фазу активного роста.
Анализ гликозидов и агликонов, образующихся после кислотного гидролиза, проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на аналитической ВЭЖХ-системе, состоящей из жидкостного храмотографа «Agilent 1200» с диодно матричным детектором и системы для сбора и обработки хроматографических данных ChemStation. Разделение проводили на колонке Zorbax SB-C18, размером 4,6^150 мм, с диаметром частиц 5 мкм, применив градиентный режим элюирования. В подвижной фазе содержание метанола в водном растворе ортофосфорной кислоты (0,1%) изменялось от 50 до 52% за 18 мин. Скорость потока элюента 1 мл/мин. Температура колонки 26 °С. Объем вводимой пробы 5 мкл.
Введение
Петрук Анастасия Андреевна - младший научный сотрудник, кандидат биологических наук, e-mail: [email protected]
Детектирование осуществляли при X = 360 и 370 нм. Для приготовления подвижных фаз использовали метиловый спирт (ос.ч.), ортофосфорную кислоту (ос.ч.), бидистиллированную воду. Для приготовле-
ния стандартных образцов применяли образцы кверцетина, кемпферола, лютеолина и рутина производства фирмы «Fluka» и «Sigma». Стандартные растворы готовили в концентрации 10 мкг/мл в этиловом спирте.
Для извлечения флавоноидов проводили исчерпывающую экстракцию 70% этанолом при нагревании на водяной бане. Кислотный гидролиз осуществляли следующим образом: к 0,5 мл водно-этанольного извлечения прибавляли 0,5 мл HCl (2 н) и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 ч. После охлаждения гидролизат разбавляли бидистиллированной водой до объема 5 мл и пропускали через концентрирующий патрон Диапак С16 (ЗАО «БиоХимМак») для освобождения от примесей гидрофильной природы. Агликоны смывали 96% этанолом, измеряли объем элюата и пропускали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Количественное определение индивидуальных гликозидов и свободных агликонов в элюатах проводили по методу внешнего стандарта. Содержание индивидуальных компонентов (QX) вычисляли по формуле (в %):
C _ CCT х S1 х V1 x V2 x 100 x _ S2 x M x (100 - B) ,
где Ccm - концентрация соответствующего раствора флавонола, мкг/мл; S¡ - площадь пика флавонола в анализируемой пробе, е.о.п.; S2 - площадь пика стандартного флавонола, е.о.п.; V¡ - объем элюата после вымывания флавонолов с концентрирующего патрона, мл; V2 - общий объем экстракта, мл; М - масса навески, мг; В - влажность сырья, %.
Обсуждениерезультатов
Проведено исследование состава флавоноидов в экстрактах и гидролизатах, полученных из листьев и соцветий Salix alba и S. alba var. vitellina. Сопоставление времен удерживания пиков веществ на хроматограммах анализируемых образцов со временами удерживания пиков стандартных образцов позволило идентифицировать четыре соединения флавоноидной природы: рутин, кверцетин, кемпферол и лютеолин.
В листьях и соцветиях S. alba и S. alba var. vitellina наблюдался одинаковый состав по идентифицированным агликонам и гликозидам, что подтверждает их несомненную таксономическую близость. Следует отметить, что не обнаружено существенных различий по составу флавоноидов между растениями мужского и женского пола у S. alba, о чем свидетельствуют и исследования А.Ю. Кулагина и О.Э. Оразова [6].
В составе экстрактов (табл. 1) из листьев и соцветий почти всех изученных экземпляров преобладал рутин, в экстракте из листьев женского экземпляра S. alba - кемпферол. В гидролизатах (табл. 1), полученных из экстрактов листьев и соцветий женского экземпляра (рис. 1) S. alba, преобладал также кемпферол, а у мужского экземпляра (рис. 2) S. alba - лютеолин. Для S. alba var. vitellina преобладающего компонента в гидролизатах выявлено не было.
Таблица 1. Содержание свободных агликонов и рутина в спиртовых экстрактах
Образцы Дата Рутин Кверцетин Кемпферол
S. alba var, vitellina (женский экземпляр)
Соцветия 9,06 0,56 0,05 0,01
Листья 23,06 1,57 0,07 0,03
S. alba (женский экземпляр)
Соцветия 13,06 0,47 0,14 0,07
Листья 15,07 0,001 0,001 0,31
S. alba (мужской экземпляр)
Соцветия 13,06 1,5 0,57 0,17
Листья 15,07 1,9 0,24 0,38
Таблица 2. Содержание агликонов в гидролизатах
Образцы Дата Лютеолин Кверцетин Кемпферол
S. alba var, vitellina (женский экземпляр)
Соцветия 9,06, 0,04 0,04 0,04
Листья 23,06, 0,04 0,03 0,02
S. alba (женский экземпляр)
Соцветия 13,06, 0,1 0,01 0,15
Листья 15,07, 0,16 0,16 0,3
S. alba (мужской экземпляр)
Соцветия 13,06, 0,24 0,07 0,03
Листья 15,07, 0,47 0,16 0,09
Рис. 1. ВЭЖХ-хроматограмма гидролизата экстракта листьев S. alba (женский экземпляр). По оси абцисс -время удерживания (мин.), по оси ординат - оптическая плотность (mAU): 1 - кверцетин, 2 - лютеолин, 3 - кемпферол, остальные пики - неидентифицированные вещества
Рис. 2. ВЭЖХ-хроматограмма гидролизата экстракта листьев S. alba (мужской экземпляр). По оси абцисс -время удерживания (мин.), по оси ординат - оптическая плотность (mAU): 1 - кверцетин, 2 - лютеолин, 3 - кемпферол, остальные пики - неидентифицированные вещества
Выводы
1. В составе флавоноидов у Salix alba и S. alba var. vitellina идентифицированы агликоны кверцетин, кемпферол, лютеолин и гликозид кверцетина рутин.
2. Не обнаружено существенных различий по составу флавоноидов между растениями мужского и женского пола у S. alba.
Список литературы
1. Байков К.С. Род Salix // Конспект флоры Сибири: сосудистые растения. Новосибирск, 2005. C. 83-88.
2. Зузук Б.М., Куцик Р.В., Недоступ А.Т., Хоменец И.З., Пермяков В.В., Федущак Н.К Ива белая Salix alba L. Аналитический обзор // Провизор. 2005. №15-17.
3. Буданцев А.Л., Лесиовская Е.Е. Дикорастущие полезные растения России. СПб., 2001. 663 с.
4. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. Т. 2: Семейства Actinidiaceae - Malvaceae, Euphorbiaceae - Halorogaceae / отв. ред. А.Л. Буданцев. СПб., 2009. 513 с.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства
Paeoniaceae-Thymelaeaceae / отв. ред. П.Д. Соколов. Л., 1986. 336 с.
6. Кулагин А.Ю., Оразов О.Э. Характеристика и адаптивное значение флавоноидного комплекса растений (на примере видов рода Salix L.) // Вестник Башкирского университета. 2001. №2(II). С. 87.
Поступило в редакцию 28 марта 2012 г.
Petruk A.A. HPLC DETERMINATION OF THE COMPOSITION AND DYNAMICS OF THE FLAVONOID CONTENT IN SALIX ALBA AND S. ALBA VAR. VITELLINA
Central Siberian Botanical Garden, SB RAS, Zolotodolinskaya st., 101, Novosibirsk, 630090 (Russia), e-mail: [email protected]
By high performance liquid chromatography (HPLC) was first studied the composition of the content of the flavonoids in Salix alba and S. alba var. vitellina, growing on the territory of Siberia.
In the content of phenolic compounds identified quercetin, kaempferol, luteolin and rutin.
Keywords: Salix, flavonoids, quercetin, kaempferol, luteolin, rutin, HPLC.
References
1. Baikov K.S. Konspekt flory Sibiri: sosudistye rasteniia. [Synopsis of Siberian flora: vascular plants]. Novosibirsk, 2005, pp. 83-88. (in. Russ.).
2. Zuzuk B.M., Kutsik R.V., Nedostup A.T., Khomenets I.Z., Permiakov V.V., Fedushchak N.K. Provizor, 2005, no. 15-17. (in. Russ.).
3. Budantsev A.L., Lesiovskaia E.E. Dikorastushchie poleznye rasteniia Rossii. [Wild useful plants of Russia]. St. Peterburg, 2001, 663 p. (in. Russ.).
4. Rastitel'nye resursy Rossii: Dikorastushchie tsvetkovye rasteniia, ikh komponentnyi sostav i biologicheskaia aktivnost'. T. 2. Semeistva Actinidiaceae - Malvaceae, Euphorbiaceae - Halorogaceae / otv. red. A.L. Budantsev. [Plant Resources of Russia: The wild flowering plants and their component structure and biological activity. T. 2. Family Actinidiaceae - Malvaceae, Euphorbiaceae - Halorogaceae / Ed. A.L. Budantsev.]. St. Peterburg, 2009, 513 p. (in. Russ.).
5. Rastitel'nye resursy SSSR: Tsvetkovye rasteniia, ikh khimicheskii sostav, ispol'zovanie. Semeistva Paeoniaceae-Thymelaeaceae / otv. red. P.D. Sokolov. [Plant Resources of the USSR: Flowering plants, their chemical composition, the use. Family Paeoniaceae-Thymelaeaceae / Ed. P.D. Sokolov]. Leningrad, 1986, 336 p. (in. Russ.).
6. Kulagin A.Iu., Orazov O.E. VestnikBashkirskogo universiteta, 2001, no. 2(II), p. 87. (in. Russ.).
Received March 28, 2011
