CC BY
53О.М. Хишова, И.Ю. Щербинин,
Н.В. Дубашинская
ИЗУЧЕНИЕ СЕДАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ КАПСУЛ СУХОГО ЭКСТРАКТА КОРНЕВИЩ С КОРНЯМИ СИНЮХИ ГОЛУБОЙ
****************************************
Витебский государственный медицинский университет
Изучена седативная активность твердых желатиновых капсул сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой. Показано, что твердые желатиновые капсулы сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой обладают выраженными седативными свойствами по тесту пролонгирования снотворного действия этаминала натрия в интервале доз от 10 мг/кг до 100 мг/кг; в дозах от 30 мг/кг до 100 мг/кг обладают успокоительным эффектом, уменьшают возбудимость центральной нервной системы и уменьшают степень реакции животных на 7-дневную депривацию парадоксальной фазы сна применительно к крысам.
Ключевые слова: твердые желатиновые капсулы, корневища с корнями синюхи голубой, сухой экстракт, седативная активность.
ВВЕДЕНИЕ
Разработка и совершенствование технологий получения безопасных и эффективных лекарственных средств (ЛС) на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС), расширение их номенклатуры, оптимизация методов оценки их качества и стандартизации - актуальная задача фармацевтической науки и практики.
Одним из видов ЛРС, представляющим интерес для создания на его основе ЛС, является синюха голубая (POLEMONIUM CОERULEUML.).
В научную медицину синюха голубая вошла сравнительно недавно. В 1932 г. М.Н. Вар-лаков установил сапониноносные свойства синюхи голубой и предложил ее как отхаркивающее ЛС для замены импортной сенеги. Отхаркивающие свойства синюхи голубой связаны с присутствием в растении сапони-
нов. Раздражая слизистую бронхов, ЛС синюхи голубой усиливают секрецию и способствуют удалению мокроты [1].
В аптечной практике готовится настой корневищ с корнями синюхи голубой из 6,0 - 180 мл. Приготовленный таким образом настой имеет ограниченный срок годности. Известны таблетки тонко измельченного порошка корневищ с корнями синюхи голубой [2].
Под влиянием сапонинов синюхи голубой содержание холестерина в крови у кроликов с экспериментальным атеросклерозом уменьшалось, вместе с тем понижалось давление. Снижение артериального давления под действием экстрактов синюхи голубой, наблюдаемое у кроликов в хроническом опыте при экспериментальном атеросклерозе, объясняется их тормозящим влиянием на развитие холестеринового атеросклероза [3]. Сапонины уменьшают отложение холестерина в коже и печени, на роговице, склере, аорте. Очень ценной является способность экстрактов корневищ с корнями синюхи голубой регулировать водно-солевой обмен, а также оказывать противовоспалительное действие [3, 4]. Для экстрактов корневищ с корнями синюхи голубой выявлено стимулирующее и адаптогенное действие на организм. Экстракты корневищ с корнями синюхи голубой обладают антибактериальным, антифунгальным и процистоцидным действием. Антибактериальные свойства выражены в отношении кокковой группы микроорганизмов [5]. Гистологические исследования показали, что экстракты корневищ с корнями синюхи голубой уменьшают липоидную инфильтрацию в интиме аорты и отходящих от нее крупных сосудов [6].
Комплекс сапонинов, полученный из синюхи голубой, обладает фунгицидными свойствами. Была доказана чувствительность дрожжевых грибов Candida tropicalis, Candida albicans и Torulopsis glabrata к воздействию сапонинов синюхи голубой в дозе от 0,25 до 8 мг/мл [7]. Выявлено также гипохолестеринемическое свойство сухого экстракта синюхи голубой [8].
Также у синюхи голубой обнаружены выраженные успокаивающие свойства [9,10]. В.В. Николаев и А.А. Цофина установили, что отвар в дозе 0,01 - 0,03 г (в пересчете на сухую массу) вызывал седативный эффект у мышей. Клиническое изучение седативных свойств
синюхи голубой проводились в условиях психиатрического стационара. ЛС назначали возбужденным больным, страдающим бессонницей. После приема ЛС синюхи голубой в течение 2 - 3 недель пациенты становились заметно спокойнее, у них нормализовался сон. Экспериментально установлено, что синюха голубая снижает двигательную активность и рефлекторную возбудимость, угнетает ориентировочную поведенческую реакцию животных [6, 11, 12].
Следует отметить, что по седативной активности ЛС синюхи голубой в 8 - 10 раз превышает аналогичный эффект валерианы лекарственной [11, 12]. При исследовании сапонинов синюхи голубой, выделенных в отделе химии Всесоюзного института лекарственных и ароматических растений, у животных под влиянием сапонинов развивается успокоение, понижается рефлекторная возбудимость и наступает сон. Изучение фармакологических свойств суммы тритерпеновых сапонинов синюхи голубой подтвердило, что биологическая активность растения зависит от количественного содержания в нем вышеуказанных соединений [11].
На кафедре фармацевтической технологии с курсом ФПК и ПК УО "ВГМУ" разработан состав и технология производства твердых желатиновых капсул (ТЖК) сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой.
Целью данного исследования было изучить седативную активность разработанных ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В работе использовались лабораторные животные - крысы линии WISTAR, самцы и самки, массой 180 - 240 г.
Полупродуктом для получения сухого экстракта являлся жидкий экстракт корневищ с корнями синюхи голубой 1:2, полученный методом реперколяции с законченным циклом с делением сырья на неравные части корневищ с корнями синюхи голубой с размером частиц 500 мкм спиртом этиловым 40%. Полученное извлечение упаривали до консистенции густого экстракта и сушили при температуре 70оС. Полученный сухой экстракт инкапсули-
ровали в количестве 16,5 - 28,8 мг в пересчете на р-эсцин, добавляя лактозу до массы содержимого капсулы 300 мг.
Седативную активность ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой оценивали по пролонгированию снотворного действия барбитуратов (этаминала натрия), по методике депривации парадоксальной фазы сна у крыс, по методу Жуве (модель нарушений сна при невротических расстройствах) и по тесту "Открытое поле".
Для исследования дозовой зависимости влияния ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой на снотворное действие этаминала натрия проведены эксперименты с введением ЛС в дозах: 5, 10, 20, 50, 100 мг/кг.
Этаминал натрия вводили животным внут-рибрюшинно до утраты животными рефлекса переворачивания (животные оставались в неудобной позе на спине или на боку, которая обозначалась как наличие бокового положения) [14].
Наиболее универсальной компонентой поведения животных является исследовательская реакция, свойственная всем животным, помещенным в обстановку новизны. Регистрация такой активности является исключительно информативным тестом для характеристики силы и устойчивости мотивационного возбуждения ЦНС и эмоционального состояния животных, для чего влияние ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой на психомоторное поведение изучили в опытах на крысах, помещенных в тест "Открытое поле" [15, 16].
Тест "Открытое поле" представлял собой круглую площадку диаметром 80 см. По всей поверхности открытого поля равномерно расположены 16 отверстий (норок) диаметром 3 см, глубиной 1,5 см. Освещенность поля - 100 Лк. В соответствии с рекомендациями ряда авторов [15] в поведении крыс выделяли следующие элементарные поведенческие акты и состояния: ло-комоция - поступательное перемещение животного в горизонтальной плоскости, обнюхивание, т.е. принюхивание и повороты только головы в позах стоя или сидя; вертикальная стойка на задних лапах; груминг; сидение; движение на месте; заглядывание в норки; стойка с упором передними лапками на стенку.
Тест проводили через 30 минут после введения ТЖК сухого экстракта корневищ с кор-
нями синюхи голубой или плацебо. До посадки в тест "Открытое поле" после введения ЛС (плацебо) крыс содержали раздельно в небольших клетках, ограничивающих возможность проявления исследовательской реакции.
Поведение животных оценивали в течение трех минут, регистрируя горизонтальную двигательную активность (количество пересеченных квадратов), вертикальную активность (число вставаний на задние лапы), исследовательскую активность (число обследованных отверстий), а также количество фекальных болюсов (эмоциональность).
Метод депривации парадоксальной фазы сна у крыс при помещении их на малые площадки, окруженные водой, был предложен Jouvet et al. в 1964 году и получил широкое распространение в исследованиях сна из-за простоты и доступности. Методика используется как модель нарушений сна при невротических расстройствах различной тяжести [16]. Характер электрофизиологических и поведенческих изменений зависит от длительности депривации парадоксальной фазы сна. Показано [14], что 24-часовая депривация не вызывает заметных изменений в поведении животных, но приводит к увеличению (в 1,5 - 2 раза) продолжительности парадоксальной фазы сна после отмены депривации по сравнению с контролем. Семидневная депривация парадоксальной фазы сна вызывает стабильное нарушение структуры сна и существенные поведенческие нарушения, которые выражаются в расторможении эмоционально-мотивационного поведения, усилении агрессивности, нарушении памяти, а также приводит к уменьшению веса тимуса, селезенки и увеличению веса надпочечников.
Депривацию парадоксальной фазы сна проводили в бассейне с водой, в котором находились площадки диаметром 6 - 6,5 см, выступающие на 2 см над уровнем воды, на которых животные могут свободно сидеть. Во время бодрствования, дремоты и медленноволнового сна у крыс сохранялось напряжение мышц, что позволяло животным удерживаться на площадках. Во время парадоксальной фазы сна мышцы расслабляются, и животные падают в воду, при этом происходит избирательная депривация парадоксальной фазы сна. Показано, что этим способом достигается в
среднем 85% депривация парадоксальной фазы сна, в то время как медленноволновой сон уменьшается лишь на 40 - 50 % [14]. В условиях этой модели в результате иммобилизации, изоляции, падений в воду и охлаждения у животного возникает сильный стресс.
При этом варианте эксперимента животных дважды в сутки снимали с площадок в бассейне для кормления на короткий период (15 - 20 мин), не давая им спать в это время. Исследуемое ЛС вводили ежедневно однократно, за 30 минут до помещения животных в бассейн.
Статистическая обработка данных проводилась с помощью пакета программ STAПSTICA 6.0. Исходные данные имели нормальное распределение, что позволило использовать в расчетах двухвыборочный ^тест Стьюдента для независимых выборок.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При введении содержимого ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой в дозах с 10 мг/кг отмечалось достоверное до-
зозависимое увеличение продолжительности бокового положения животного (таблица 1).
Интрагастральное введение содержимого ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, начиная с дозы 30 мг/кг, достоверно увеличивало латентное время первого движения в среднем в три раза, количество пересеченных центральных квадратов снижалось на 45%, вертикальная двигательная активность уменьшалась на 26 %, число обследованных норок - на 38%, количество болюсов снизилось на 45% по сравнению с контрольной группой (рисунок 1).
После 7-дневной депривации парадоксальной фазы сна у животных в группе плацебо, по сравнению с интактными крысами, отмечалось снижение относительной массы селезенки на 23,2%, тимуса на 25,2% и увеличение влажного веса надпочечников на 34,4 %. В группе животных, которым вводили на фоне депривации парадоксальной фазы сна ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой в дозе 30 мг/кг, отмечался стресспро-текторный эффект со стороны ЛС (таблица 2).
Таблица 1 - Влияние ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой на пролонгирование
снотворного действия этаминала натрия (М±ст , п=8)
Доза ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, мг/кг Продолжительность бокового положения, мин Удлинение снотворного действия этаминала натрия
мин %
Контроль 38,8±6,2
5 46,4±5,8 - -
10 62,8±7,4 * 24 161
20 82,6±8,7 * 43,8 212
50 95,2±10,3 * 56,4 245
100 102,2±12,7 * 63,4 263
Примечание * - p < 0,05 по отношению к группе контроль (непарный t -тест Стьюдента)
Таблица 2 - Влияние ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой в сравнении с плацебо при внутрижелудочном введении на стрессиндуцированные изменения массы органов -
мишеней по методу Жуве (М±с , п=8)
Относительная масса, ^(мг/100 г ■—-^ассы тела) Органы-мишени ^ Контроль Плацебо ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой 30 мг/кг
Надпочечники 12,21±0,72 16,41±0,42* 12,82±1,02**
Тимус 143,61±7,38 107,41±8,74* 138,24±9,54**
Селезенка 438,12±22,18 336,47±10,81* 424,50±16,51**
Примечание *- p < 0,05 по отношению к группе контроль; ** - в группе плацебо
(непарный t -тест Стьюдента)
Ф
5
Ы
О
Ш
т
X
ш
Ч
ш
ш
о
с
ф
2
2
:!*
5?
ц
о
о
25
20
15
5
£
3
10
5
0
* т
Т
* ят * * Л ^
І 1сі,а,[к0гсь,ь,
4 5 6
группы животных
1
2
3
7
8
9
□ плацебо
■ синюха
*- p < 0,05 по сравнению с интактными животными
1. Латентный период первого движения 2. Количество пересеченных центральных квадратов 3. Количество пересеченных периферических квадратов 4. Количество актов обнюхивания 5. Количество актов груминга 6. Количество стоек с упором на стенку 7. Количество вертикальных стоек 8. Количество обследованных норок 9. Количество дефекаций и уринаций
Рисунок 1 - Влияние ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой на спонтанную двигательную активность и поведение крыс в тесте "Открытое поле"
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой начиная с дозы 30 мг/кг, применительно к крысам, обладают успокоительным эффектом, уменьшают возбудимость центральной нервной системы, что проявляется в изменении двигательного и эмоционального статуса животных. ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой в дозе от 30 мг/кг уменьшают степень реакции животных на 7-дневную депривацию парадоксальной фазы сна, что проявляется в меньшей реакции со стороны исследуемых органов - мишеней на стресс.
ВЫВОДЫ
1. ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой обладают выраженными седативными свойствами по тесту пролонги-
рования снотворного действия этаминала натрия, в интервале доз от 10 мг/кг до 100 мг/кг, применительно к грызунам.
2. ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой в дозах от 30 мг/кг до 100 мг/кг, применительно к крысам, обладают успокоительным эффектом и уменьшают возбудимость центральной нервной системы, что проявляется в изменении двигательного и эмоционального статуса животных в тесте "Открытое поле".
3. ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой в дозах от 30 мг/кг до 100 мг/кг снижают степень реакции животных на 7-дневную депривацию парадоксальной фазы сна.
Работа выполнена в рамках Государственной научно-технической программы "Развитие сырьевой базы и переработки лекарственных и пряно-ароматических растений ", утвержденной Приказом председателя Комитета по науке и технологиям при Совете Министров Республики Беларусь на 2000 - 2006 гг. № 1319.
SUMMARY O.M. Khishova, I.Yu. Shcherbinin,
N.V Dubashynskaya STUDY OF SEDATIVE ACTIVITY OF POLEMONIUM COERULEUM DRYEXTRACT
Sedative activity of firm gelatinous capsules of a dry extract of rhizomes with roots polemonium coeruleum was studied. It was shown, that firm gelatinous capsules of a dry extract of rhizomes with roots of polemonium coeruleum possess the expressed sedative properties under the test of prolongation of somnolent action ethaminal sodium in the range of doses from 10 mg/kg to 100 mg/kg, in doses from 3 0 mg/kg to 100 mg/kg possess soothing effect, reduce excitability of the central nervous system and reduce degree of reaction of animals on 7-day deprivation of paradoxical phase of a dream with reference to rats.
Keywords: firm gelatinous capsules, rhizomes with roots of polemonium coeruleum, dry extract, sedative activity.
ЛИТЕРАТУРА
1. Варлаков, М.Н. Избранные труды / М.Н. Варлаков; под ред. Туровой А.Д. - М., 1963. - 172 с.
2. Пат. 6990 РБ А 61 К 35/78, 9/20, А 61 Р 25/20. Состав таблетки синюхи / О.М. Хишо-ва, В.И. Ищенко - N° а 20000939 заявл. 16.10.00; опубл. 30.06.05 // Официальный бюллетень "Изобретение, Полезные модели. Промышленные образцы". - 2005. - №2. - С. 45.
3. Лагерь, А.А. Фитотерапия заболеваний внутренних органов / А.А. Лагерь. - Красноярск, 1985. - 144 с.
4. Виноградов, В.М. Лекарственные растения в лечении заболеваний сердечно-сосудистой системы / В.М. Виноградов, В.К. Мартынов, В.В. Чернакова. - Л., 1990. - 112 с.
5. Пронин, И.В. К изучению антибактериальных свойств некоторых растений флоры Западной Сибири / И.В. Пронин, Н.Ф. Гофш-тадт // Тр. Томск. научно-исслед. института вакцин и сывороток. - 1959. - Т. 10. - С. 294 - 296.
6. Пастушенков, Л.В. Фармакотерапия с основами фитотерапии / Л.В. Пастушенков, Е.Е. Лесиовская. - СПб.: СПХФИ, 1995. - 250 с.
7. Hiller, K. Zur Hemmwirkung von Polemonium-saponin gegenuber Pilzen / K. Hiller, A. Paulick, E. Friedrich // Pharmazie. - 1981. - № 36. - S. 133 -134.
8. Bodigheimer, K. Wirksamkeit von Weissdorn-Extrakt in der Dosierung 3/100 mg täglich. Multizentrische Doppelblind-Studie mit 85 herzinsuffizienten Patienten im Stadium NYHA II / K. Bodigheimer, D. Chase // Münchener Medizinische Wochenschrift. - 1994, 136 (Suppl. 1). - P18-21.
9. Скляровский, Л.Я. Фитотерапия психосоматических расстройств / Л.Я. Скляровский, И.А. Губанов. - М., 1986. - 68 с.
10. Кудрин, Л.Н. Определение нейротроп-ной активности препаратов из растений / Л.Н. Кудрин, Л.Г. Родина // Фармация. - 1985. - №
3. - С. 51 - 55.
11. Geppert, B. Pharmacological evaluation of medicinal plant preparations for sedative action / B. Geppert, J. Iwaszkiewicz // Herba Pol. - 1985. -Vol. 31, № 1-2. - P. 67-75.
12. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям. Фитотерапия / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. - М.: Медицина, 1989. - 512 с.
13. Буреш, Дж., Электрофизиологические методы исследования в биологии / М. Пет-рань, Д. Захар. - М., 1964. - 551с.
14. Изменение мембранных белков в стволе головного мозга крыс при лишении их парадоксальной фазы сна и продолжительность этой фазы при последующем свободном поведении / Н.Н. Демин [и др.] // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 1986. - Т. 72.- № 6.- С. 723-727.
15. Буслович, С.Ю. Интегральный метод оценки поведения белых крыс в открытом поле / С.Ю. Буслович, А.Н. Котеленц, Р.М. // Фридлянд. журн. высш. нервн. деят. - 1989. -Т. 39. - № 3. - С. 168 - 171.
16. Забродин, И.Ю. Индивидуально - типологические особенности поведения крыс в условиях открытого поля / И.Ю. Забродин, Е.С. Петров, Н.С. Лазаренко // Журн. высш. нервн. деят. - 1989. - Т. 39. - № 4. - С. 14-21.
Адрес для корреспонденции:
210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27,
Витебский государственный медицинский университет, кафедра фармацевтической технологии с курсом ФПК и ПК, тел. раб.: 8 (0212) 37-00-13 Дубашинская Н.В.
Поступила 06.09.2010 г.
