CC BY
49
Электронный научно-образовательный вестник "Здоровье и образование в XXI веке" №6, 2006 г. (Т. 8)
ИЗУЧЕНИЕ РОСТА В ЛАБОРАТОРНЫХ ФЕРМЕНТАТОРАХ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ВАСИЛИСТНИКА МАЛОГО (THALICNRUM MINUS L.) КАК ИСТОЧНИК БЕРБЕРИНА Замахаева А.М., Савина Т.А., Суслина С.Н., ЦыбулькоН.С.
РУДН, Кафедра общей и биомедицинской технологии, Москва, ВИЛАР, отдел биотехнологии, Москва
Василистник малый является ценным источником алкалоидов протоберберинового ряда, в частности берберина. Но в настоящее время более перспективным является получение берберина из клеточной культуры данного растения, так как оно не введено в культуру, а его сбор в дикой природе затруднен.
Целью работы являлось изучение динамики нарастания биомассы суспензионной клеточной культуры василистника малого и накопления биологически активных веществ (берберина) в лабораторных ферментаторах. Для работы использовался штамм, полученный в НПО ВИЛАР в 1990 г. из черешка листа растения киргизской популяции, выращенного в ботаническом саду ВИЛАР (депонировано в ВНИИТИ 11.03.90 №1312-В90) Суспензионная культура василистника выращивалась на среде по Мурасиге-Скугу, содержащей 4% сахарозы, 1 мг/мл 2,4-Д и 0,5 мг/мл кинетина. Суспензию для подготовки инокулята сначала культивировали в колбах на качалке, в темноте, при температуре 26°С. Затем, с достижением возраста культуры 14 суток переносили в лабораторный ферментатор типа Brunswick объемом 10 л и продолжали культивирование в течение 25 суток с забором проб на 5, 10, 15, 20, 25 сутки. Содержание берберина в сухой биомассе и в культуральной жидкости определялось хроматоспектрофотометрическим методом.
В условиях культивирования в колбах на качалке поддерживались условия масопередачи близкие к 30 ч-1 (KLa). При культивировании в ферментаторе создавали нужный КЬа, варьируя оборотами мешалки и расходом воздуха. Кривые роста и накопление берберина в колбах на качалке и в ферментаторе представлены на рисунках №1, 2. Можно видеть, что ростовые процессы в ферментаторе несколько занижены по сравнению с ростом ткани в колбах. Следовательно, условия роста культуры не полностью адаптированы при перенесении из колб в лабораторный ферментатор. Однако, что касается алкалоидной продуктивности, то данный показатель остается на уровне колб, с той разницей, что при выращивании в колбах максимальное значение приходилось на 25 сутки роста, а в ферментаторе на 20 сутки. Следует отметить, что при выращивании в ферментаторе биологическая продуктивность культуры в два раза выше, чем при выращиывании в колбах на качалке. Рис.1. Динамика нарастания сухой биомассы в колбах на качалке и лабораторном ферментаторе:
время культивирования, сутки
-колбы —■—ферментатор
Рис.2. Динамика накопления берберина при культивировании в колбах на качалке и лабораторном ферментаторе:
время культивирования, сутки
колбы —■—ферментатор
Материалы VII Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке»
Стр. [275]
