Изучение реактогенности, безопасности инактивированной вакцины «ОспаВир» и специфической эффективности двухэтапного метода вакцинации против натуральной оспы с применением на втором этапе живой оспенной вакцины Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 616.988.25-002.454.2

Е.В. Рузавина*, О.В. Шкуратова*,

Н.Х. Ставицкая*, Г.Г. Мальцева*, М.А.Гаврилова**, К.И. Чуйкова**,

Л.Л. Катанахова**

E mail: [email protected]

ИЗУЧЕНИЕ РЕАКТОГЕННОСТИ, БЕЗОПАСНОСТИ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ «ОСПАВИР»

И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДВУХЭТАПНОГО МЕТОДА ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ С ПРИМЕНЕНИЕМ НА ВТОРОМ ЭТАПЕ ЖИВОЙ ОСПЕННОЙ ВАКЦИНЫ

* Филиал ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Томск «НПО «Вирион»;

** ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава, г Томск

ВВЕДЕНИЕ

В связи с успешной ликвидацией натуральной оспы с 80-х годов вакцинация против данного заболевания прекращена. В настоящее время лица в возрасте до 23 лет не имеют иммунитета против натуральной оспы, а среди других возрастных групп населения только 10-15% имеют остаточный иммунитет. В связи с этим доля восприимчивого населения к вирусу оспы сегодня очень высока. Быстро эволюционирующий природный резервуар ортопоксвиру-сов с вовлечением человеческой популяции и опасность использования возбудителей в качестве поражающего агента при биотерроризме обосновывают необходимость поддержания запаса эффективных средств массовой вакцинопрофилактики для противоэпидемических мероприятий и иммунизации лиц повышенного риска.

С учетом современных требований к производству вакцин в НПО «Вирион» усовершенствована имеющаяся технология производства инактивированной оспенной вакцины и разработана вакцина «Ос-паВир», изготовленная из высокоиммуногенного штамма Л-ИВП. При доклиническом исследовании были доказаны безвредность и высокая иммунологическая эффективность созданного препарата.

В соответствии с программой, согласованной с ГИСК им. Л.А. Тарасевича и утвержденной Комитетом медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) и Минздравом России, на базе СибГМУ были проведены клинические исследования инактивированной вакцины «ОспаВир» с применением на II этапе живой оспенной вакцины.

Цель и задачи исследовании - изучение реакто-генности, безопасности и иммуногенности инактивированной вакцины «ОспаВир» при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В клиническом исследовании принимали участие 204 человека обоего пола в возрасте от 18 до 23 лет, ранее не привитые против натуральной оспы, соответствующие критериям включения. Исследование относилось к двойному слепому, рандомизированному, контролированному. Методом рандоменации добровольцы были распределены на 2 группы. По рекомендации ГИСК им. Л.А. Тарасевича с целью изучения реактогенности и токсичности инактивированной вакцины и анализа отдаленных постпрививоч-ных проявлений в условиях эпидемиологической ситуации по вирусным заболеваниям была сформирована контрольная группа из 100 человек, основная

- из 104 волонтеров.

Изучение реактогенности инактивированной вакцины проводилось в два этапа.

На первом этапе вакцинации инактивированную вакцину «ОспаВир» вводили подкожно в область левого плеча. С целью изучения ее реактогенности путем регистрации общих и местных постпрививоч-ных реакций и осложнений за привитыми было установлено медицинское наблюдение с обязательной ежедневной регистрацией постпрививочных проявлений в течение 5 дней. Лица контрольной группы на первом этапе получили референс-препарат (раствор для инъекций изотонический-0,9%), во втором этапе они участие не принимали.

На втором этапе вакцинации волонтерам, получившим вакцину «ОспаВир», ввели живую оспенную вакцину методом скарификации уменьшенной дозой (1 надрез) в область правого плеча. Учитывая, что в ответ на введение живой оспенной вакцины у привитых развивается допустимый вакцинальный процесс, был проведен учет общих и специфических местных реакций на живую вакцину, введенную на фоне вакцинации «ОспаВир».

После проведения второго этапа вакцинации медицинское наблюдение осуществлялось до полного исчезновения всех общих и местных проявлений, до образования корочки на месте вакцинации.

Оценка степени проявления реакций проводилась с учетом допустимых реакций (повышение температуры тела, увеличение регионарных лимфатических узлов и последовательное развитие вакцинального процесса) и разработанных нами критериев.

Безопасность оценивали на основании показателей общего и биохимического анализа крови, общего анализа мочи.

Иммуногенность препарата при двухэтапном методе вакцинации оценивали по данным исследования сывороток крови (процент сероконверсии, серо-протекции) в реакции биологической нейтрализации

(РБН) и реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Концентрацию специфических вируснейт-рализующих антител (титр) в сыворотке крови иммунизированных людей определяли в РБН на хо-рионаллантоисной оболочке (ХАО) развивающегося куриного эмбриона, используя в качестве тест-штамма вирус вакцины ОСО серия 5 производства «НПО «Вирион» (г. Томск) и в РТГА, используя диаг-ностикум оспенный серия 3 и контрольную сыворотку, не содержащую антител к ортопоксвирусам серия 2, производства «НПО «Вирион» (г. Томск).

В ходе исследования все количественные показатели обрабатывались методом вариационной статистики. Статистическую значимость различий определяли по Т-критерию Стъюдента, при этом статистически значимыми считали различия при Р<0,05.

С целью выявления отдаленных постпрививоч-ных проявлений и возможного нарушения иммунной защиты организма вакцинированные находились под медицинским наблюдением в течение 3 месяцев после проведенной вакцинации.

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

После проведения первого этапа вакцинации в 100% случаев не было зарегистрировано повышение температуры тела выше 37,5°С. Слабые температурные реакции (37,1-37,5°С) регистрировались в единичных случаях - у 6 (5,7%) человек.

Повышение температуры отмечалось кратковременно, ее нормализация происходила самостоятельно без медицинского вмешательства.

Симптомы общих реакций, такие как слабость, головная боль, регистрировались в единичных случаях в первый день наблюдения у 10 (9,6%) человек, во второй день - у 2 (1,9%) привитых. Недомогание отмечалось только в первый день наблюдения и регистрировалось у 8 (7,6%) волонтеров. Все симптомы общих реакций проходили самостоятельно к концу вторых суток. Местные реакции в виде слабой болезненности наблюдались у 10 (9,6%) вакцинированных, исчезли самостоятельно в течение 24 часов у 8 привитых и через 2 суток после введения вакцины у 2 привитых. В трех (2,8%) случаях местные реакции сопровождались небольшим кратковременным увеличением подмышечных лимфатических узлов (от 0,5 до 0,8 см), которые на третий день наблюдения сократились, стали мягкими, эластичными, безболезненными.

Гиперемии, припухлости в месте введения и других проявлений местных реакций не наблюдалось ни у одного из привитых за весь период наблюдения. В контрольной группе добровольцев были зафиксированы как местные, так и общие реакции. Местные проявления были расценены как «уколочные». Повышение температуры тела до 37,5°С у пяти человек, недомогание и головная боль в трех случаях яви-

Таблица 1

Частота основных симптомов у добровольцев, вакцинированных инактивированной вакциной «ОспаВир», и добровольцев, получивших плацебо

Симптомы Основная группа («ОспаВир») (п=104) Контрольная группа (натрия хлорид 0,9%) (п=100)

I. Общие реакции абс %±т абс %±т

1. Температурная реакция

Нормальная (36,0-37,0)°С 98 94,3±2,2 95 95±2,1

Легкая степень (37,1-37,5)°С 6 5,7±2,2 5 5,0±2,1

Слабая степень (37,6-38,5)°С 0 0 0 0

Сильная степень (от 38,6°С и выше) 0 0 0 0

Всего лиц с повышенной температурой тела 6 5,7±2,2 5 5,0±2,1

2. Нарушение общего самочувствия

Недомогание 8 7,6±2,6 7 7,0±2,5

Головная боль 10 9,6±2,8 3 3,0±1,7

Всего лиц с нарушением общего самочувствия 18 17,2±3,7 10 10±3,0

II. Местные реакции

Боль в месте инъекции 10 9,6±2,8 9 9,0±2,9

Г иперемия 0 0 0 0

Припухлость 0 0 0 0

Увеличение лимфатических узлов (шейные, подмышечные) 3 2,8±1,6 0 0

Всего лиц с местными реакциями 13 12,5±3,2 9 9,0±2,9

Плацебо - раствор натрия хлорида для инъекций изотонический 0,9%

Статистически значимых различий изучаемых величин в сравниваемых группах не выявлено.

Таблица 2

Картина периферической крови у добровольцев, принимающих участие в клинических исследованиях инактивированной вакцины «ОспаВир» при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы (п=104)

Период наблюдения Изучаемые показатели

Статисти- ческие показатели НЬ г/л Эритро- циты Х1012/л Лейкоциты Х 109/л Сегменто- ядерные, % Эозино-филы, % Лимфоциты, % Моноциты, % Э /ч OS См

Норма Х 125 4,05 5,4 64 2,0 21,0 7,0 10,0

m 5,3 0,25 1,6 4,0 1,7 7,0 0,1 5,0

До проведения Х 129 4,19 5,47 67,98 2,05 21,0 7,86 14,2

вакцинации m 1,44 0,03 0,15 0,49 0,17 0,39 0,25 0,75

На 7-е сутки после Х 125,4 4,05 6,11 64,96 3,1 23,24 6,81 13,46

вакцинации m 1,42 0,03 0,18 0,3 0,29 0,57 0,27 0,78

Колебания показателей периферической крови не выходят за пределы физиологической нормы.

лись, по-видимому, следствием респираторно-вирусных заболеваний.

При сравнительном анализе количества и степени проявления общих и местных реакций как в основной, так и в контрольной группах статистически значимых отличий отмечено не было.

Результаты гематологических и биохимических анализов крови после вакцинации статистически значимо не изменялись по отношению к фоновым величинам и не выходили за пределы физиологической нормы. Было установлено, что вакцинация оказывает слабое воздействие на уровень гемоглобина в крови вакцинированных. Среднее значение концентрации гемоглобина до вакцинации составляло (129,0±1,44) г/л, на 7-е сутки после вакцинации содержание гемоглобина незначительно уменьшилось до (125,4±1,42) г/л. Со стороны красной крови наблюдалось небольшое снижение количества эритроцитов на 7-е сутки после вакцинации относительно фоновых значений с (4,19±0,03)х 1012/л до (4,05± 0,03)х1012/л. На 7-е сутки после вакцинации отмечалось повышение лейкоцитов с (5,47±0,15)х 109/л до (6,11±0,03)х 109/л. Наблюдались изменения со стороны сегментоядерных лейкоцитов спустя 7 дней после вакцинации. Процентное содержание сегментов до вакцинации составило (67,98±0,49)%, на 7-е сутки после прививки это количество уменьшилось до (64,96±0,3)%.

Содержание эозинофи-лов до вакцинации было (2,05±0,17)%, после проведения первого этапа вакцинации количество эозино-филов увеличилось до (3,1±

0,29)%. Со стороны лимфоцитов отмечалась тенденция к незначительному увеличению на 7-е сутки наблюдения - с (21,0±0,39)% до

(23,24±0,57)%. Количество моноцитов имело тенденцию к снижению с (7,86±0,25)% до (6,81±0,27)%. Изменений со стороны СОЭ отмечено не было, до вакцинации СОЭ соответствовала (14,2±0,75) мм/ч, после - (13,2±0,75) мм/ч. Незначительные изменения в периферической крови привитых свидетельствуют об активации системы неспецифической резистентности организма.

С целью изучения действия инактивированной вакцины «ОспаВир» на функцию печени, миокарда и почек было проведено исследование биохимических показателей крови привитых.

При изучении сывороточных трансаминаз - ас-партатаминотрансферазы (АСТ) и аланинамино-трансферазы (АЛТ) - на 7-е сутки после вакцинации наблюдалось умеренное изменение уровня транс-аминаз. Отмечалось незначительное увеличение активности АЛТ с (7,3±0,48) млмоль/л до (8,8± 0,43) млмоль/л (при норме до 11,3 млмоль/л), показатели активности АСТ на 7-е сутки фактически оставались стабильными. До вакцинации активность фермента АСТ составляла (6,6±0,39) млмоль/л, на 7-е сутки после прививки (6,2±0,41) млмоль/л (при норме до 7,5 млмоль/л) (рис. 1).

Изменения (сывороточных трансаминаз), воз-

10

АЛТ (млмоль/л) ACT (млмоль/л)

■ до вакцинации ■ после вакцинации

Рис. 1. Изучение уровня АЛТ и АСТ в сыворотке крови привитых на 7-е сутки после введения инактивированной вакцины «ОспаВир».

- Показатели АЛТ и АСТ не выходят за пределы физиологической нормы

никшие в ответ на введение вакцины, не превышали физиологических норм, не приводили к нарушениям метаболизма гепатоцитов, не вызывали субклиниче-ских реакций со стороны основных, функциональных систем организма.

В ходе исследования три добровольца самостоятельно отказались от дальнейшего участия в качестве волонтеров, поэтому во втором этапе вакцинации принял участие 101 человек.

На 8-й день после первого этапа был проведен второй этап вакцинации - живой оспенной вакциной методом скарификации в область наружной поверхности верхней трети правого плеча (1 надрез). В ходе наблюдения у 98 (97%) привитых постприви-вочная реакция протекала по типу первичной вакцинальной реакции, с ускоренным формированием и развитием кожных элементов. У трех (2,9%) вакцинированных развитие постпрививочной реакции произошло по ускоренному типу. Вакцинация двухэтапным методом с применением на втором этапе живой оспенной вакциной сопровождалась последовательным развитием клинических и местных проявлений.

Периоды течения вакцинального процесса:

1) скрытый;

2 ) последовательное развитие вакцинального процесса (папула, везикула, пустула, образование ореолы) с 2-го по 8-й день;

3) подсыхание и обратное развитие с 8-го по 12-й день;

4) образование рубцов на 8-й-13-й дни.

В каждом из этих периодов наблюдались характерные для них местные, общие и температурные реакции. Максимально выраженные местные и общие проявления постпрививочных реакций приходились в период развития оспин - с 5-го по 8-й день после вакцинации, период пустулообразования. С 9-го дня после вакцинации отмечалась регрессия всех клинических проявлений (рис. 2).

В ходе анализа и оценки реактогенности вакцины при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы с использованием на первом этапе вакцинации инактивированной вакцины «ОспаВир» были выявлены допустимые реакции.

Течение вакцинального процесса с нормальной температурой (36-37)°С наблюдалось в 55 (54,5%)

Таблица 3

Частота основных симптомов у добровольцев основной группы после проведения второго этапа вакцинации против натуральной оспы

Симптомы Абс. %±т

I. Общие реакции

1. Температурная реакция

Нормальная (36-37)°С 55 54,5%±4,9

Легкая степень (37,1-37,5)°С 22 21,8%±4,1

Средняя степень (37,6-38,5)°С 19 18,8%±3,9

Сильная степень (от 38,6°С и выше) 5 4,9%±2,1

Всего с повышенной температурой 46 45,5%±4,9

2. Нарушение общего самочувствия

Недомогание 57 56,4±4,9

Головная боль 58 57,4%±4,9

II. Местные реакции

Боль в месте инъекции 72 71,2%±4,5

Гиперемия 100 99%±0,9

Припухлость 96 95,0%±2,1

Папула 100 99%±0,9

Везикула 100 99%±0,9

Пустула 98 97,0%±1,6

Увеличение лимфатических узлов 99 98,0%±1,4

случаях, температурные реакции легкой степени выраженности (37,1-37,3°С) были зарегистрированы у 22 (21,8%) человек. У 19 (18,8%) добровольцев регистрировалось кратковременное повышение температуры тела до 38°С и лишь в 5 (4,9%) случаях температура тела превышала 38°С, регистрировалась в период пустулообразования - на 5-8-й дни после проведения вакцинации и была кратковременной (1-2 дня). Нормализация температурной реакции происходила самостоятельно без медицинского вмешательства (табл. 3).

Из местных реакций чаще других регистрировалась болезненность в месте введения вакцины, которая отмечалась у 72 (71,2%) человек. Гиперемия и припухлость в месте скарификации наблюдались у 100 (99%) и 96 (95%) привитых соответственно. Все местные реакции были расценены как легкой и средней степеней проявления и не всегда сопровождались

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

дни наблюдения

—♦—недомогание —головная боль —£— боль в месте инъекции

-♦-гиперемия -ж-припухлость увеличение лимф, узлов

Рис. 2. Динамика клинических симптомов, наблюдаемых у волонтеров после введения живой оспенной вакцины при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы

Рис. 3. Анализ уровня специфических антител к ортопоксивирусам в сыворотке крови в реакции биологической нейтрализации на ХАО

титр 1:2 титр 1:8 титр 1:16 титр 1:32 титр 1:64 титр1:128

Рис. 4. Анализ уровня специфических антител к ортопоксвирусам в сыворотке крови в РТГА

нарушением общего состояния. Течение вакцинального процесса сопровождалось умеренным увеличением подмышечной группы лимфатических узлов справа. Наибольшее количество случаев увеличения лимфатических узлов подмышечной группы справа регистрировалось в период с 6-го по 10-й день со дня вакцинации. Реакция лимфоидной ткани была умеренно выраженной: в 98 (97%) случаях размеры лимфатических узлов не превышали 2 мм, увеличение лимфатических узлов от 2,1 и более мм отмечалось у 1 (0,9%) привитого. В ходе наблюдения каких-либо осложнений и атипичных прививочных реакций не отмечалось.

Постпрививочные реакции имели только легкую и среднюю степени выраженности. Специфическую активность препарата, обусловленную активным компонентом - антигеном вируса вакцины, оценивали по способности вызывать у вакцинированных образование вирус-нейтрализующих антител к вирусу вакцины. При исследовании сывороток крови привитых двухэтапным методом вакцинации против натуральной оспы установлено, что процент лиц, ответивших выработкой специфических антител в РБН и РТГА, составил 100, процент серопротективных волонтеров в РБН и РТГА - 98.

Так как в качестве защитного титра вируснейтра-лизующих антител в РБН был принят титр 1:40, при анализе результатов уровень образования специфических антител к ортопоксвирусам в РБН распределился следующим образом (рис. 3): только один (0,9%) вакцинированный имел уровень антител менее защитного - 1:10; в сыворотке крови еще у одного (0,9%) добровольца обнаружены антитела в титре 1:80; 10 добровольцев (9,9%) имели уровень антител в титре 1:160; 24 (23,8%) - 1:320.

Наибольшее количество - 32 (31,8%) привитых

- имели титр антител 1:640, а у 25 (24,8%) добровольцев антитела определялись в разведении 1:1280. Семь человек (6,9%) в ответ на вакцинацию выработали антитела в титре 1:2560 и один (0,9%) - 1:5120. Средний геометрический титр специфических антител в РБН составил (2,804139±0,04) ^, то есть 636,99 (580,95-698,46).

При анализе результатов образования специфиче-

ских антител к ортопоксвирусам в РТГА было установлено, что титр антител 1:2 наблюдался у 1 (0,9%) привитого, 11 (10,9%) вакцинированных имели антитела в титре 1:8; 24 (23,8%) привитых - 1:16; 31 (30,7%) человек имел титр антител 1:32 и 30 (29,7%)

- 1:64. Высокий уровень специфических антител -1:128 наблюдался у 4 (4%) привитых (рис. 4). Средний геометрический титр специфических антител в РТГА составил (1,484078±0,03) ^, то есть 30,48 (28,45-32,66).

Таблица 4

Сравнительный анализ инфекционной и соматической заболеваемости добровольцев основной и контрольной групп в течение 3 месяцев после проведения второго этапа вакцинации против натуральной оспы

Основная группа (n=101) Контрольная группа (n=100)

Вирусные заболе- вания 04.05 г - 10 человек 05.05 г. - 3 человека 06.05 г - 7 человек 07.05 г - 1 человек 04.05 г - 12 человек 05.05 г. - 5 человек 06.05 г - 6 человек 07.05 г. - 1 человек

Всего заболевших лиц: 21 24

Кожные и аллергические болезни 0 1

СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ № 22009 (выпуск 2)

При анализе полученных данных процент серо-конверсии оставил 100, а процент серопротекции равнялся 98. Проведенный корреляционный анализ выявил положительную статистическую линейную взаимосвязь между данными РБН и РТГА - коэффициент корреляции г = 0,638426, с уровнем значимости Р<0,001.

Учитывая то, что вакцинация против натуральной оспы проводилась в весенний период, нами было изучено влияние вакцинации на иммунную систему организма. С целью анализа заболеваемости проводилось наблюдение за лицами основной и контрольной групп в течение трех месяцев. В ходе наблюдения было установлено, что заболеваемость среди вакцинированных была аналогична заболеваемости лиц контрольной группы (табл. 4).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенных клинических исследований показали, что инактивированная вакцина «ОспаВир» ареактогенна и безвредна. Применение ее при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы сопровождается образованием грунд-иммунитета, что приводит к снижению степени проявления вакцинального процесса и не влияет на снижение общего иммунитета.

На основании данных, полученных в ходе клинического исследования, была утверждена инструкция по применению. Вакцина «ОспаВир» прошла реги-

страцию, а двухэтапный метод вакцинации против натуральной оспы рекомендован Росздравнадзором РФ для практического применения в здравоохранении.

STUDYING REACTOGENEITY AND SAFETY OF INACTIVATED VACCINE «OSPAVIR»

AND THE ANALYSIS OF SPECIFIC ACTIVITY OF 2-STAGE VACCINATION METHOD AGAINST VARIOLA USING LIVING VARIOLA VACCINE ON THE 2-ND STAGE

Ye.V. Rouzavina, O.V. Shkouratova,

N.Kh. Stavitskaya, G.G. Maltseva, M.A. Gavrilova, K.I. Chouikova, L.L. Katanakhova

SUMMARY

Inactivated vaccine «^spaVir» which was created in the NPO «VIRION» based upon high immunogenic vaccine virus strain of L-IVP is proved to be safe and having high immunologic activity. The vaccine does not decrease total immunity.

Key words: vaccination, reactogeneity, harmlessness, specific activity, clinical investigations.