CC BY
53
ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
УДК 619:616-053.31:636.3 П.Н. Скляров
ИЗУЧЕНИЕ ПАТОГЕНЕЗА АНТЕНАТАЛЬНОЙ ГИПОТРОФИИ КОЗЛЯТ
Установлено, что в основе патогенеза антенатальной гипотрофии козлят лежит дефицит витамина А, приводящий к морфофункциональным нарушениям фетоплацентарного комплекса и обусловливающий патологии развития плода.
Ключевые слова: козлята, фетоплацентарный комплекс, дефицит витамина А, антенатальная гипотрофия, плод.
Введение
Развитие животноводства в основном зависит от получения и выращивания здорового молодняка. Это одна из важнейших и сложных задач. Из всех видов потерь в животноводстве наибольший удельный вес - у незаразных болезней молодняка. Наиболее массово и тяжело молодые животные болеют после рождения.
Одна из причин, препятствующих полному сохранению молодняка, - гипотрофия новорожденных животных. Патология широко распространена в хозяйствах, где не уделяют должного внимания правильному кормлению и содержанию беременных животных [1].
Гипотрофия козлят - общесистемное заболевание новорожденных, распространенная патология, наносящая значительный экономический ущерб. У гипотрофиков сниженная жизнеспособность, плохое развитие, низкий прирост массы тела. После гастроэнтеральных и респираторных заболеваний - высокая летальность.
Возникновение антенатальной гипотрофии плода обусловлено нарушением функционирования фетоплацентарного комплекса [2-3]. Фетоплацентарная недостаточность - одна из ведущих причин патологии беременности и родов, значительного уровня перинатальных потерь, выраженных отклонений в развитии новорожденных [8-9].
Несмотря на значительные успехи современной перинатологии, при антенатальной гипотрофии высоки показатели перинатальной заболеваемости и смертности.
В связи с этим цель нашей работы состояла в изучении механизмов развития антенатальной гипотрофии козлят.
Объекты и методы
Исследования проведены на кафедре акушерства, гинекологии и биотехнологии размножения животных Харьковской государственной зооветеринарной академии и ее клинической базы - региональной лаборатории ветеринарной медицины согласно «Методическим указаниям по использованию биохимических исследований биологического материала в государственных лабораториях ветеринарной медицины при диагностике заболеваний инфекционной патологии».
© Скляров П.Н., 2014
Для эксперимента были сформированы две группы коз (по 5 - в каждой). Животных отбирали по принципу аналогов: порода - аборигенная, возраст 3-5 лет, масса 39-47 кг. Содержание - в приспособленном помещении. Для осеменения обеих групп животных использовали одного самца. Рацион в контрольной группе был полноценным по питательным веществам, витаминам, макро- и микроэлементам, в опытной группе - неполноценным по каротину.
Объекты исследований - плацента и плоды, подлежащие морфометрии.
При исследовании плаценты определяли массу последа, количество котиледонов, площадь каждого из них и общую площадь ворсинчатого хориона. Площадь котиледона определяли по формуле S = п r2. Суммировали общую площадь ворсинчатого хориона.
Показатели гомеостаза определяли в количественном и сравнительном процентном соотношении с учетом достоверности цифровых результатов.
Содержание общего белка установлено рефрактометрическим методом (РФУ № 61-197), общего кальция - титрометрическим методом с индикатором мурексидом; неорганического фосфора - по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой, витамина А - по модифицированному методу Ф.А. Рачевского, микроэлементов - с помощью атомно-абсорб-ционного спектрофотометра С-115 М; резервной щелочности - диффузионным методом с помощью спаренных колб по И.П. Кондрахину, гемоглобина - гемоглобинцианидным методом, количество эритроцитов - путем подсчета в камере Горяева.
Пробы сыворотки крови отбирали на третьем месяце беременности. Концентрацию гормонов определяли в условиях лаборатории репродуктивной эндокринологии государственного учреждения «Институт проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского» (г. Харьков) на иммуноферментном анализаторе RT 2100C (Китай) при длине волны 450 нм согласно прилагаемым к тест-системе «Estriol» (Human, Германия).
После исследования клинического и морфологического состояния, а также промеров плодов отбирали их органы. Размеры плодов, их органов и плаценты определяли с помощью сантиметра, массу - с использованием электронных весов Aurora - Electronic kitchen scale AU 313.
Опытные образцы органов (или целые органы) для гистологического исследования фиксировали в 10%-ном растворе формалина при температуре +4°С в течение 3-4 сут, в жидкости Карнуа, обезвоживали в спиртах возрастающей крепости (50°, 60°, 70°, 80°, 90°, 95°-ном, I и II абсолютном), выдерживая их по 24 ч в каждом растворе указанного разведения. Просветляли образцы органов в смеси абсолютного спирта и ксилола, а далее - в I и II чистом ксилоле и заливали в парафиновые блоки. Срезы с парафиновых блоков толщиной 5-7 мкм готовили на роторном и санном микротомах.
Окрашивали срезы гематоксилином - эозином.
Исследования срезов проведены при помощи винтового окулярного микрометра (МОВ-1-15 х) не менее чем в 10 местах.
Микрофотографические снимки сделаны с использованием специальной приставки на микроскоп Xiongfa 203СА-1 и компьютера.
Полученные данные обработаны статистическими методами с помощью непараметрического Х критерия Ван дер Вардена и стандартного пакета статистики в программе EXEL 2000 с использованием персонального компьютера IBM-PC/AT. Определяли среднюю арифметическую (М), статистическую ошибку среднеарифметического (m). Достоверность различий между средним арифметическим двух вариационных рядов установили по критерию достоверности Р.
Результаты исследований
В исследованиях мы отталкивались от факта, что в основе развития антенатальной гипотрофии лежит фетоплацентарная недостаточность [2, 3, 6-9], обусловленная у сельскохозяйственных животных преимущественно дефицитом витамина А [1, 4, 5].
Определяли влияние дефицита витамина А на отдельные показатели гомеостаза, мор-фофункциональное состояние фетоплацентарного комплекса, весовые и линейные параметры органов плодов, уровень эстрогенов, макро- и микроструктуру плаценты.
По результатам исследований выявлены отклонения от нормы показателей гомеостаза у животных, имевших дефицитный рацион (табл. 1).
Таблица 1
Показатели гомеостаза котных коз в норме и при дефиците витамина А
Показатель Граничный минимум Группы животных % Р*
Контроль (п = 5) Опыт (п = 5)
Эритроциты, Т/л 12,0 13,18 ± 0,62 11,72 ± 0,56 11,1 0,95
Гемоглобин, г/л 100 116,23 ± 6,31 96,83 ± 5,12 16,7 0,95
Общий белок, г/л 61 63,62 ± 1,64 57,21 ± 1,91 10,1 0,99
Основной резерв, % 48 42,80 ± 2,67 50,60 ± 1,86 15,4 0,95
Общий кальций, ммоль/л 2,50 2,67 ± 0,06 2,43 ± 0,06 8,2 0,95
Неорганический фосфор, ммоль/л 1,94 2,21 ± 0,04 1,87 ± 0,07 15,4 0,999
Витамин А, мкмоль/л 0,70 0,86 ± 0,07 0,64 ± 0,06 25,6 0,999
Цинк, мкмоль/л 15,7 15,95 ± 0,35 14,6 ± 0,35 8,5 0,999
Медь, мкмоль/л 9,4 10,51 ± 0,44 9,12 ± 0,30 13,2 0,999
Кобальт, мкмоль/л 0,40 0,44 ± 0,03 0,38 ± 0,02 13,6 0,999
* Р > 0,999 - критерий высокой достоверности; Р > 0,99 - критерий средней достоверности; Р > 0,95 -критерий низкой достоверности.
Отмечено снижение количества эритроцитов (на 1,46 Т/л, или 11,1%), содержания гемоглобина (на 19,4 г/л, или 16,7%), общего белка (на 6,41 г/л, или 10,1%), общего кальция (на 0,24 ммоль/л, или 9,0%), неорганического фосфора (на 0,34 ммоль/л, или 15,4%), витамина А (на 0,22 мкмоль/л, или 25,6%), цинка (на 1,35 мкмоль/л, или 8,5%), меди (на 1,39 мкмоль/л, или 13,2%) и кобальта (на 0,06 мкмоль/л, или 13,6%), увеличение щелочного резерва (на 7,8%, или 18,2%).
Основное внимание при проведении исследования уделяли определению влияния витамина А на массу плодов в целом, абсолютную и относительную массу их органов и морфофункциональные изменения в плаценте (хориальной части).
По результатам работы установлено, что исследуемые последы не имели патологических отклонений (изменений цвета, наслоений и т.п.), были блестящими и хорошо васкуляризованными. Однако в плацентах животных с дефицитом витамина А (опыт) наблюдались морфологические и функциональные изменения, нарушения их структуры, атрофия и разрушение концевых ворсин, дистрофия и десквамация эпителия ворсин. Плаценты контрольных животных (показатели гомеостаза - в пределах нормы) имели четкую структуру, а явления дистрофии и десквамации эпителия ворсинок не выявлены.
Масса плодов, весовые и линейные параметры плаценты животных с нормальными показателями гомеостаза и дефицитом витамина А приведены в табл. 2.
Таблица 2
Масса плодов, весовые и линейные параметры плаценты коз с нормальными показателями гомеостаза
и дефицитом витамина А
Показатель Группы животных ± % Р*
с нормальными показателями гомеостаза (п = 5) с А-витаминным дефицитом (п = 5)
Масса плодов, г 3704,8 ± 59,91 3160,2 ± 86,22 +544,6 +17,2 < 0,95
Масса последов, г 304,8 ± 5,59 250,2 ± 4,93 +54,6 +21,8 < 0,95
Площадь плаценты, см2 407,6 ± 7,67 363,4 ± 8,22 +44,2 +12,2 < 0,95
Количество котиледонов 82,6 ± 3,88 80,4 ± 2,87 +2,2 +2,7 < 0,95
* Р > 0,95 - критерий низкой достоверности.
Масса последов у животных контрольной группы составляла 304,8 г, опытной группы -250,2 г, т.е. выше на 54,6 г (21,8%).
Установлено (табл. 3), что у козлят, полученных от коз с нормальными показателями гомеостаза, масса всех исследуемых органов выше: сердца (на 1,7 г, или 3,6%), легких (на 5,24 г, или 5,7%), желудка с кишечником (на 32,56 г, или 13,8%), печени (на 19,74 г, или 20,9%), почек (на 2,54-2,9 г, или 8,9-10,3%), селезенки (на 1,75 г, или 27,1%), мозга (на 7,39 г, или 7,8%), щитовидной железы (на 0,17 г или 21,0%) и надпочечников (на 0,31 г, или 16,7%), матки с яичниками (на 0,15 г или 6,4%).
Таблица 3
Масса плодов и их органов у коз с показателями гомеостаза в норме и с дефицитом витамина А
Масса, г
желудка и кишечника Почек « X ы « о ■
Группа животных сердца легких печени левой правой и н е з е ч е с мозга надпочечн желез щитовидн железы матки с яи никами
С нормальными показателями го- 46,50 92,10 235,82 94,62 28,56 28,14 6,44 63,77 1,85 0,81 2,35
меостаза (п = 5)
М ± т 3,68 3,71 9,21 5,20 2,97 2,08 0,43 2,73 0,06 0,05 0,06
С дефицитом витамина А (п = 5) 44,80 86,86 203,26 74,88 26,02 25,24 4,69 58,78 1,54 0,64 2,20
М ± т 2,13 3,09 5,10 2,35 1,35 1,23 0,26 4,99 0,05 0,07 0,05
± -1,7 -5,24 -32,56 -19,74 -2,54 -2,90 -1,75 -7,39 -0,31 -0,17 -0,15
% -3,6 -5,7 -13,8 -20,9 -8,9 -10,3 -27,1 -7,8 -16,7 -21,0 -6,4
Р > 0,95 > 0,95 > 0,99 > 0,99 > 0,95 > 0,95 > 0,99 > 0,95 > 0,99 > 0,99 > 0,99
Р > 0,95 - критерий низкой достоверности; Р > 0,99 - критерий средней достоверности.
При выяснении влияния А-витаминной недостаточности на структуру плаценты установлено следующее. Количество котиледонов у животных сравниваемых групп не отличалось - 80,4 и 82,6 соответственно (+2,2 или +2,7%), тогда как другие показатели имели различия. Так, масса плодов животных опытной группы ниже на 544,6 г (17,2%), составив соответственно 3160,2 г и 3704,8 г.
Площадь ворсинчатого хориона у контрольных животных равнялась 363,4 см2, тогда как у животных опытной группы - 407,6 см2, т.е. больше на 44,2 см2 (12,2%).
На микроморфологическом уровне в плаценте обнаружены дистрофия ворсин, явления дезинтеграции и аутолиза клеток, уменьшенная васкуляризация сосудов (рисунок).
Гистопрепарат фетальной плаценты козы: а - с нормальными показателями гомеостаза; б - с А-витаминной недостаточностью (гематоксилин и эозин х 400)
Установлено снижение (на 4,47 пг/мл, или 57,4%) концентрации эстриола у животных с дефицитом витамина А по сравнению с имевшими показатели гомеостаза в пределах нормы (табл. 4).
Таблица 4
Концентрация эстриола у коз, имеющих показатели гомеостаза в пределах нормы
и при дефиците витамина А
Группа животных Концентрация эстриола, пг/мл % Р*
С нормальными показателями гомеостаза (n = 5) 7,78 ± 0,58 57,4 0,999
С дефицитом витамина А (n = 5) 3,31 ± 0,38
* Р > 0,95 - критерий низкой достоверности.
Установлено, что снижение уровня эстрогенов ведет к нарушению антенатального развития плода: уменьшению длины туловища на 13,4-22,3% и массы - на 19,7-35,8%.
Выводы
Таким образом, проведенными исследованиями определено: в основе патогенеза антенатальной гипотрофии козлят лежит дефицит витамина А, это негативно влияет на морфо-функциональное состояние органов фетоплацентарного комплекса, обусловливая патологию развития плода.
Список литературы
1. Кошевой, В.П. Проблемы вщтворення овець та шз i шляхи виршення : монографiя / В.П. Кошевой, П.М. Скляров, С.В. Науменко ; за заг. ред. В.П. Кошевого. - Харшв ; Дншропетровськ : Гамалiя, 2011. - 467 с.
2. Дашкевич, В.С. Плацентарна недостатнють: сучасш аспекти патогенезу, дiагностики, профшактики та л^вання / В.£. Дашкевич // Мистецтво л^вання. - 2004. - № 4. - С. 22-25.
3. Майоров, М.В. Фетоплацентарная недостаточность: актуальные особенности патогенеза, диагностики и терапии [Электронный ресурс] / М.В. Майоров // Провизор. - 2005. - № 3. - Режим доступа: http://www. provisor.com.ua/ archive/2005/N3/art_29.htm.
4. Скляров, П.М. Особливосп структури плаценти вiвцi при А-вггамшнш недостатносп / П.М. Скляров, В.П. Кошовий // Проблеми зооiнженерil та ветеринарно! медицини. - Харшв : РВВ ХДЗВА, 2006. - Вип. 13 (33), ч. 2. - С. 240-243.
5. Скляров, П.Н. Развитие плаценты и плода у овец и коз в зависимости от уровня эстрогенов / П.Н. Скляров // Бюл. науч. работ ФГОУ ВПО «Белгородская гос. сельхоз. акад.». - Белгород, 2010. - № 21 : спецвыпуск, посвящ. 25-летию факультета вет. мед. - С. 36-38.
6. Стадник, А.М. Роль пренатально! гшотрофп в етюлогп незаразних хвороб телят / А.М. Стадник // Наук. вюник Львiвськоl держ. акад. вет. мед. iм. С.З. Гжицького. - Т. 4 (№ 5). - Львiв, 2002. - С. 212-215.
7. Харута, Г.Г. Гiпотрофiя новонароджених телят / Г.Г. Харута, Б.П. 1васенко, Ю.М. Ордш // Ветеринар-на медицина Укра!ни. - 1997. - № 6.- С. 28-29.
8. Чуб, В.В. Фетоплацентарная дисфункция: основы патогенеза, проблемы диагностики, тактика лечения : метод. рекомендации / В.В. Чуб, И.В. Чибисова, В.А. Климов. - Луганск, 2003. - 36 с.
9. Штехина, Е.Е. Структурная организация органов иммуногенеза плодов овец при нормальной беременности и фетоплацентарной недостаточности : дис. ... канд. биол. наук : 16.00.02 / Е.Е. Штехина. - Ставрополь, 2005. - 125 с.
SUMMARY
P.N. Sklyarov
Studies of the pathogenesis of antenatal hypotrophy of kids
Established that the pathogenesis of antenatal hypotrophy of kids is vitamin A deficiency, which leads to violations of morphofunctional fetoplacental pathology and cause fetal development.
Keywords: kids, fetoplacental complex, vitamin A, antenatal hypotrophy, fetus.
