CC BY
4
Таблица 2
Частота аберраций хромосом в клетках костного мозга мышей при действии ингибитора ДПФ-1
Доза, иг/кг Число животных Число проанализированных ме-тафаз Частота метафаз с аберрациями.
2800 5 500 1,20±0,37
1400 5 500 0,80±0,37
280 5 500 1,00±0,45
140 5 500 1,00±0,32
Контроль 5 500 0,80±0,37
возрастанию частоты хромосомных аберраций. Однако это различие с контролем оказалось недостоверным (Я>0,05).
Таким образом, цитогенетическим анализом на клетках костного мозга крыс и мышей мутагенного действия исследованных концентраций и доз ингибитора ДПФ-1 не выявлено.
Выводы. 1. Ингибитор ДПФ-1 в концентрациях, равных токсикологическому порогу раздражающего действия
(0,5 мг/м3) и ПДК (20 мг/м3), при ингаляционном воздействии не вызывает изменения частоты хромосомных аберраций в клетках костного мозга самцов белых нелинейных крыс.
2. Ингибитор ДПФ-1 в изученных дозах (140— 2800 мг/кг) при внутрижелудочном введении не изменяет частоту структурных хромосомных аберраций в клетках костного мозга самцов мышей линии СВА.
3. Полученные данные могут быть использованы для обоснования гигиенических стандартов содержания ингибитора ДПФ-1 в производственных условиях.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бочков Н. П., Демин Ю. С., Лучник Н. В. — Генетика, 1972, № 5, с. 133—141.
2. Малашенко А. М.. Суркова Н. И., Семенов X. X. Определение мутагенности химических соединений (генетический скрининг) на лабораторных мышах. (Метод, указания). М„ 1977.
3. Орлов В. Н„ Чудиновская Г. А.. Крюкова Е. П. Исследование хромосомных наборов млекопитающих. М., 1976.
4. Ford С., Wollam D. — Exp. Cell Res., 1963, v. 32, p. 320—326.
Поступила 01.11.83
1 УДК 614.7:615.285.71-07:612.6.052+ 615.285.7.066:612.6.052
Л. М. Бахитова, Ю. В. Пашин ИЗУЧЕНИЕ МУТАГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА ГХЦГ
Институт общей генетики им. Н. И. Вавилова АН СССР, Москва
Хлорорганические соединения, применяемые в сельском хозяйстве, отличаются сравнительно высокой стабильностью и способны накапливаться в объектах окружающей среды. В\результате миграции по пищевой цепи хлорорганические пестициды могут попадать в организм человека. По данным литературы, в организм человека с пищей ежедневно может поступать до 16,5 мкг такого хлорорганического пестицида, как ГХЦГ. В жировой ткани людей при профессиональных контактах это соединение обнаруживается в концентрации до 0,36 мг/кг. Особенности действия хлорорганнческих соединений определяют необходимость изучения их мутагенных свойств. Мутагенная активность ГХЦГ изучена на клетках растений |1, 4] и костного мозга мышей [2].
Целью настоящей работы являлось изучение мутагенной активности технического препарата (ТП) ГХЦГ.
Для исследования мутагенных свойств препарата в системе in vitro использована линия клеток китайского хомячка V-79. Мутагенную активность оценивали по числу индуцированных прямых генных мутаций по сцепленному с Х-.хромосомой локусу гнпоксантин-гуанинфосфорибозил-трансферазы (ГГФРТ).
ТП, содержащий 12% ГХЦГ, как основная форма практического использования, растворяли в условиях сельскохозяйственного производства в этаноле, затем разводили средой Игла до необходимых концентраций. Клетки обрабатывали во флаконах Повицкого в течение 21 ч с последующей отмывкой раствором Хенкса. Обработанные клетки выращивали при малой плотности посева по методу А. Abbon-dantlolo и соавт. [5] в среде Игла с добавлением 10% эмбриональной сыворотки на чашках Петри при 37 "С в инкубаторе с СОг. После периода фенотипического проявления мутаций в питательную среду добавляли 8-азагуанин (30 мкг/мл). Выросшие из отдельных мутантных клеток клоны через 12—14 дней после обработки окрашивали и подсчитывали.
Мутагенную активность ТП в системе in vivo определяли по методу J. Heddle, W. Schmid (7, 9]. Принцип метода
состоит в том, что под действием мутагенных факторов из хроматид, хромосом или их фрагментов в цитоплазме эрит-робластов костного мозга млекопитающих образуются микроядра. После завершающего митоза эритробласты теряют ядро, превращаясь в молодые полихроматофильные эритроциты, в которых при соответствующей окраске можно выявить микроядра.
Эксперименты проводили на гибридных мышах (СВАХ ХС57ВЬ/6Л) р, в возрасте 60—80 дней с массой тела 23— 25 г. ТП растворяли в подсолнечном масле в концентрациях, соответствующих '/з и Чг.ь ЬО^ в пересчете на активное действующее начало. ¿Мазки костного мозга через 24, 36 и 48 ч после однократной внутрибрюшинной инъекции ТР фиксировали в метаноле, промывали в бидистиллнрованной воде и окрашивали в 7% растворе Гимзы при рН 6,8 [3, 8]. Статистическую обработку данных проводили по методу Стьюдента.
Таблица 1
Влияние технического препарата ГХЦГ на выживаемость клеток линии У-79 и индукцию прямых генных мутаций по локусу ГГФРТ
Показатель Доза ТП, мкг/мл
контроль 100 200 500
Выживаемость клеток Число индуцированных генных мутаций, 10* 100 1,3±0,4 93±6,3 1,70±0,4 53±5,1 4,3±0,5* 1,6±0,4
Примечание. Выживаемость указана в % к контролю. Звездочка — Р<0,01 по сравнению с контролем.
Таблица 2
Изменение числа микроядер (в °/оо ) в полихроматофнльных эритроцитах костного мозга мышей после введения технического препарата ГХЦГ (¡г±5;)
Число Срок исследования, я
Доза, мг/кг подсчитанных клеток 24 36 48
loo (i/lo ld50) 200 (1/5,5 LDso) 9 000 11 000 5,3±0,39* 4,3±0,28 2.7±0,63 2,2±0,41 2,3±0,59 1,7±0,30
Контроль 10 000 3,8±0,28 3,8±0,25 3,7±22
Примечание, нию с контролем.
Звездочка — /><0,02 по сравне-
Согласно результатам исследований, ТДэд (средняя токсичная доза) для ТП по критерию выживаемости культивируемых клеток китайского хомячка составила 200 мкг/мл. Мутагенный фактор при 2-часовой экспозиции клеток данной концентрации ТП а 4 раза превышал спонтанный уровень (Я<0,01). При дальнейшем увеличении концентрации ТП выживаемость клеток резко снижалась, что препятствовало выявлению мутантных клонов из-за общетоксического действия препарата (табл. 1).
В опытах in vivo по учету индуцированных микроядер в эритроцитах костного мозга мыши наблюдалось превышение в 1,4 раза числа эритроцитов с мнкроядрами при однократной инъекции '/s LDso (/><0,02). Максимальное число микроядер обнаруживалось через 24 ч после введения ТП; через 36 ч количество их снижалось до контрольного уровня (табл. 2).
По международной номенклатуре вещество считается мутагенным, если оно индуцирует in vitro в системе V-79/ГГФРТ число мутаций, не менее чем в 3 раза превышающее уровень спонтанных точковых мутаций [6].
В наших опытах четырехкратное превышение спонтанного уровня достигалось только при среднетоксичной дозе.
Уменьшение числа микроядер после их индукции указывает на возможность неспецифического ингибирования мнто-тической активности клеток эритрондного ряда и расценивается как следствие общетокснческого действия препарата.
По данным литературы, мутагенная активность ГХЦГ в клетках костного мозга мышей выявлялась в значительно меньших дозах. Так, Д. С. Маркарян |2] на уровне 4% LDso наблюдал повышение в 1,7 раза частоты перестроек хромосом через 21 ч после введения препарата по сравнению с контролем. Меньший мутагенный ответ в наших экспериментах, очевидно, можно объяснить различиями в технологии производства и степени частоты ГХЦГ.
Таким образом, проведенные эксперименты показывают, что технический ГХЦГ проявляет относительно низкую мутагенную активность в узком диапазоне доз. Результаты исследований заслуживают внимания специалистов, работающих в области гигиены применения пестицидов. Апробированные на примере ГХЦГ методы, как представляется, целесообразно более широко использовать в исследованиях по оценке мутагенной активности пестицидов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Куринный А. И., Пилинская М. А. — Цитол. и генет., 1974, № 4, с. 342.
2. Маркарян Д. С. — Генетика, 1966, № 1, с. 132.
3. Пашин Ю. В.. Торопцев С. Н. — Бюлл. экспер. биол., 1983, № 1, с. 72.
4. Чеботарь А. А., Суржу А. И. — В кн.: Теоретические и практические подходы к проблеме мутагенеза и канцерогенеза окружающей среды. М., 1976, с. 33.
5. Abbondandolo A., Bonatti S., Colella С. et al.— Mutât. Res., 1976, Bd 37, S. 239.
6. Bradley M. O.. Bhuyan В., Francis M. C. et al. — Ibid., 1981, Bd 87, S. 81.
7. Heddle J. A.- Ibid., 1973, Bd 18, S. 187.
8. Salamone M.. Heddle J.. Stuart E. et al.—Ibid., 1980, Bd 74, S. 347.
9. Schmid If. - Ibid., 1975, Bd 31, S. 9.
Поступила 26.10.83
УДК 615.285.7.065:616-006.6
Г. Г. Диденко, Т. Д. Гупалович, О. Г. Петровская
ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНЫХ БЛАСТОМОГЕННЫХ СВОЙСТВ ГАРДОНЫ
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
Фосфорорганический инсектицид гардона (транс-изомер-2-хлор-1-(2,4,5-трихлорфенил)-виннлдиметилфосфат) применяется в борьбе с листогрызущнми гусеницами, плодожоркой и другими вредителями на различных культурах. Препарат малотоксичен для теплокровных; относится к группе слабокумулнрующих пестицидов. Гардона не обладает выраженной мутагенной активностью при определении на клетках костного мозга мышей in vivo, на культуре периферической крови человека in vitro [6] и в бактериальных системах [12]. Имеющиеся в литературе данные о бластомогенных свойствах препарата немногочисленны и противоречивы.
В настоящей работе приведены результаты изучения бластомогенных свойств гардоны. Критериями оценки бластомогенности служили онкологические (частота образования опухолей, их гистологическая характеристика и латентный период появления) и биохимические (состояние 14 показателей нуклеинового, белкового, углеводного обмена в тканях) показатели, которые, по данным наших исследований, могут изменяться в предопухолевом периоде при введении ряда канцерогенных веществ [3, 4].
Опыты выполнены на 268 беспородных кры/ах и 325 мышах обоего пола с исходной массой 80 и /8 г соответственно. Гардону (50 % смачивающийся порошок фирмы «Schell», США) вводили животным в желудок в виде водной эмульсин дважды в неделю в максимально переносимых дозах (430 мг/кг крысам и 266 мкг/кг мышам) на протяжении 18—20 нед. Суммарная доза введенного препарата для крыс составила 15,05 г/кг (5,1 LDSo) для мышей — 9,3 г/кг (5 LDso). Продолжительность опыта на крысах 80 нед, на мышах — 72 нед. У животных опытных и контрольных групп органы и выявленные опухоли подвергали гистологической обработке, препараты анализировали микроскопически. Биохимические исследования проводили в динамике после прекращения применения гардоны, спустя 3, 6, 9 и 12 мес. Определяли содержание ДНК, РНК в модификации В. В. Галкина и Г. Д. Бер-дышева [1], общих гистонов [5], фракций гистонов, богатых лизином и аргинином по E. Dp Nooij и соавт. [10], в клеточных ядрах, выделенных из тканей печени и костного мозга крыс и мышей по S. Martin и соавт. [II], активность дезоксирибонуклеазы в модификации О. П. Че-
