CC BY
11
© СОЛЯНИКОВ Д. А., МАРИНКИН И. О. , ВОЛЧЕК А. В., МИХАЙЛОВА Е. С., АЙДАГУЛОВА С. В. УДК 618.14-006.36:611.66]-091.8 DOI: 10.20333/25000136-2022-6-93-105
Изучение маркеров ангиогенеза и воспаления в доминантных миоматозных узлах и миометрии
Д. А. Соляников, И. О. Маринкин, А. В. Волчек, Е. С. Михайлова, С. В. Айдагулова
Новосибирский государственный медицинский университет, Новосибирск 630091, Российская Федерация Цель исследования. Изучить маркеры ангиогенеза и воспаления в доминантных миоматозных узлах и миометрии.
Материал и методы. Проведена миомэктомия у 226 пациенток репродуктивного возраста с миомой матки. Образцы доминантных миоматозных узлов и миометрия 35 женщин, в т.ч. у 12 в условиях применения селективного модулятора PgR, были исследованы на содержание в среде инкубации гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и 17-окси-прогестерона с помощью иммуноферментного анализа (ИФА); изучали спонтанный и стимулированный поликлональными активаторами (ПА) уровень маркеров. Изучали экспрессию прогестероновых рецепторов (PgR) и VEGF с помощью иммуногистохимии (ИГХ). Применяли методы непараметрической статистики: для внутригрупповых сравнений - критерий Вилкоксона, для межгрупповых - критерий Манна-Уитни; корреляционные связи между биомаркерами изучали с помощью коэффициента корреляции Спирмена.
Результаты. В операционном материале лейомиом и миометрия без гормонотерапии выявлены статистически значимые различия для стимулированной ПА продукции ГМ-КСФ в среде инкубации in vitro (в 2 раза меньше в узле, чем в миометрии), а также для экспрессии VEGF в тканевых образцах (в 2 раза больше в узле, чем в миометрии). Экспрессия PgR в миометрии прямо коррелировала с воспалительной инфильтрацией лей-омиомы. Применение селективного модулятора PgR способствовало снижению продукции ГМ-КСФ и экспрессии VEGF в узле при отсутствии влияния на миометрий, снижению 17-ОН-прогестерона в миометрии без изменения в узлах и отрицательной корреляции между экспрессией PgR и продукции VEGF в лейомиомах.
Заключение. В доминантном миоматозном узле применение селективного модулятора PgR способствовало снижению экспрессии VEGF и продукции in vitro Ш-КСФ при отсутствии влияния на перифокальный миометрий, что демонстрирует его проангиогенный и провоспалительный потенциал у пациенток с миомой матки.
Ключевые слова: миома матки, миометрий, цитокины, прогестероновые рецепторы, поликлональные активаторы, иммуноферментный анализ, иммуногистохимия.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Для цитирования: Соляников ДА, Маринкин ИО, Волчек АВ, Михайлова ЕС, Айдагулова СВ. Изучение маркеров ангиогенеза и воспаления в доминантных миоматозных узлах и миометрии. Сибирское медицинское обозрение. 2022;(6):93-105. DOI: 10.20333/25000136-2022-6-93-105
Studying the markers of angiogenesis and inflammation in dominant fibroids and myometrium
D. A. Solyanikov, I. O. Marinkin, A. V. Volchek, E. S. Mikhailova, S. V. Aidagulova Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk 630091, Russian Federation
The aim of the research. To study markers of angiogenesis and inflammation in dominant fibroids and myometrium.
Material and methods. Myomectomy in 226 patients of reproductive age with uterine myoma was carried out. The resected samples of dominant myomatous nodules and perifocal myometrium of 35 females including 12 treated using selective progesterone receptor (PgR) modulator were examined for the content of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), vascular endothelial growth factor (VEGF) and 17-hydroxyprogesterone in the incubation medium using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Spontaneous and stimulated by polyclonal activators (PA) levels of the markers were studied. Additionally, the expression of PgR and VEGF was analysed through immunohistochemistry (IHC). Nonparametric statistics methods were used. The Wilcoxon test was used for intragroup comparison, the Mann-Whitney test was used for intergroup comparison. The correlations between biomarkers were studied using the Spearman correlation coefficient.
Results. In the surgical specimens of leiomyoma and myometrium treated without hormone therapy, statistically significant differences were revealed for PA-stimulated GM-CSF production incubated in vitro (2-fold lower in the nodule than in the myometrium), as well as for VEGF expression in tissue samples (2-fold higher in the nodule than in the myometrium). PgR expression in the myometrium directly correlated with the inflammatory infiltration of the nodule. The use of the selective PgR modulator contributed to the downregulation of GM-CSF production and VEGF expression in the nodule with no effect on the myometrium, as well as to a decrease in 17-OH-progesterone in the myometrium without changes in the nodules, and to a negative correlation between PgR expression and VEGF production in leiomyomas.
Conclusion. For the dominant fibroid, application of the selective PgR modulator contributed to a downregulation of VEGF expression and to the decrease of in-vitro production of GM-CSF without influence on the perifocal myometrium, which demonstrates its proangiogenic and proinflammatory potential in patients with uterine myoma.
Key words: uterine fibroid, myometrium, cytokines, progesterone receptors, polyclonal activators, enzyme immunoassay, immunohistochemistry. Conflict of interest. The authors declare the absence of obvious and potential conflicts of interest associated with the publication of this article. Citation: Solyanikov DA, Marinkin IO, Volchek AV, Mikhailova ES, Aidagulova SV. Studying the markers of angiogenesis and inflammation in dominant fibroids and myometrium. Siberian Medical Review. 2022;(6):93-105. DOI: 10.20333/25000136-2022-6-93-105
Введение
Лейомиома (или миома, фибромиома) матки -доброкачественная гормонозависимая опухоль у женщин, очень широко распространенная, особенно среди пациенток позднего репродуктивного и перименопаузального возраста, но с явной тенденцией «омоложения» и смещением заболеваемости в ранний репродуктивный возраст, что отчасти можно объяснить широким применением инструментальных методов визуализации [1, 2]. В современном экономически развитом обществе, с учетом увеличения возраста реализации детородной функции с рождением желанного ребенка, проблема миомы матки становится все более острой, поскольку наряду с хроническим эндометритом и эндометри-оидной болезнью является фактором первичного и вторичного бесплодия [3, 4]. Миоматозные узлы, как солитарные, так и множественные, в репродуктивном возрасте могут длительное время развиваться бессимптомно, при этом примерно в 25 % случаев пациенткам требуется медикаментозное и/или хирургическое лечение [5, 6].
Воспалительный процесс является одним из механизмов, лежащих в основе инициации большинства опухолей; провоспалительное микроокружение в миометрии способствует клональной пролиферации миоцитов и формированию мио-матозных узлов [7]. Хроническое воспаление поддерживается множеством цитокинов, продуцируемых иммунными и стромальными клетками [8], которые вовлечены в сложные перекрестные контакты с опухолевыми миоцитами. Цитокины и стероидные гормоны влияют на пролиферацию, фиброз и ангиогенез, которые, в свою очередь, обусловливают образование, рост и рецидивирование миоматозных узлов [9, 10].
В настоящее время не синтезировано эффективного препарата для длительного лечения пациенток с миомой матки без нежелательных побочных проявлений, и агонисты гонадотропин-рилизинг
гормона (ГнРГ), прогестагены и антигестагены используют в клинической практике кратковременно, преимущественно в период подготовки к оперативному лечению. Определенные надежды были связаны с улипристала ацетатом (УА) - селективным модулятором прогестероновых рецепторов (PR), однако его применение для купирования симптомов миомы перед операцией индуцировало ряд проблем, оценка которых продолжает привлекать внимание. Тем не менее, не утратил своей актуальности анализ клинического применения УА [11-14], а фундаментальные исследования можно использовать для более глубокого изучения патогенеза лейомиомы как пролифера-тивно-клеточного опухолевого процесса.
Цель работы - изучить маркеры ангиогенеза и воспаления в доминантных миоматозных узлах и миометрии.
Материал и методы
Проведено оперативное лечение 226 пациенток репродуктивного возраста с лейомиомой матки (D25) в возрасте от 23 до 46 (39,7±4,3) лет. Обследование пациенток включало в себя общеклинические и инструментальные методы (УЗИ во всех случаях, МРТ по показаниям); изучены жалобы, акушерско-гинеко-логический анамнез и экстрагенитальная патология. Пациентки прооперированы в 2015 - 2019 г. в гинекологическом отделении ГБУЗ НСО «Государственная Новосибирская областная клиническая больница», являющемся клинической базой кафедры акушерства и гинекологии НГМУ; исследование одобрено Этическим комитетом ГНОКБ (протокол № 3 от 28.11.2013).
Общие критерии включения в исследование: клинические показания к оперативному лечению пациенток репродуктивного возраста с миоматоз-ными узлами в матке [15], уровень фолликулости-мулирующего гормона < 12 мЕд/мл и информированное согласие пациентки. Критерии невключения: проявления пременопаузы, противопоказания к хирургическому лечению, индекс массы тела (ИМТ) более 40 кг/м2, опухолевые процессы и декомпенсиро-
ванные соматические и инфекционные заболевания. Критерии исключения: некроз или злокачественная опухоль при гистологическом исследовании удаленных миоматозных узлов. Пациентки подписывали информированное согласие на участие в исследовании в соответствии с законодательством РФ и этическими принципами проведения медицинских исследований, изложенными в Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации.
Из 226 пациенток 35 женщин участвовали в комплексном неконтролируемом исследовании с помощью иммуноферментного (ИФА) и иммуногистохи-мического (ИГХ) анализа операционного материала. Критерии исключения из ИФА- и ИГХ-исследования: макроскопические дегенеративные изменения ткани узла, гистологически выявленные фокусы аденомиоза и признаки злокачественного процесса. Контрольную (1-ю группу) составили 23 пациентки 40,5±3,4 лет без гормонального лечения в течение 3-х мес перед операцией, 2-ю группу - случайно выбранные 12 женщин 39,5±3,3 лет (р=0,62), которым перед операцией для снижения риска кровопотери был рекомендован прием УА (Эсмия®) по стандартной схеме - ежедневно в течение 3-х мес в дозе 5 мг [16].
При лапароскопической миомэктомии из доминантного узла и перифокального миометрия иссекали по 2 макроскопически идентичных фрагмента объемом по 4 мм3 и инкубировали в термостате при 37 °С в течение 3-х суток во флаконах с 2 мл питательной среды; при этом в один из флаконов была добавлена смесь поликлональных активаторов (ПА): 4 мкг/мл фитогемагглютинина, 4 мкг/мл конкана-валина А и 2 мкг/мл липополисахарида, что имело целью индуцировать продукцию цитокинов и факторов роста клетками узлов и миометрия. После окончания инкубации супернатанты аликвотирова-ли, хранили при -80 °С, а фрагменты ткани фиксировали в 10%-м забуференном формалине и заливали в гистомикс.
В супернатантах с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) исследовали спонтанный (базовый) и стимулированный ПА уровни гранулоцитарно-макрофагального коло-ниестимулирующего фактора (ГМ-КСФ), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и 17-гидрокси-прогестерона( 17-ОН-Рг-продуктаметаболизмапрогесте-рона в цепочках синтеза тестостерона или кортизола).
В работе использовали наборы «Цитокин-Сти-мул-Бест» производства ЗАО «Вектор-Бест» в соответствии с инструкцией производителя. Рассчитывали индекс влияния поликлональных активаторов (ИВПА) ГМ-КСФ, VEGF и 17-ОН-Рг как соотношения стимулированного ПА и базового количества молекулярных маркеров, которые выражали в условных единицах [17].
В фиксированных после инкубации образцах «кле-точность» опухолевого узла оценивали с помощью учебного пособия [1]: микроскопические отличия простой и клеточной миомы и промежуточное количество миоцитов в препарате соответствовало 1-3 баллам. Выраженность фиброзной компоненты узла оценивали при окраске по ван Гизону по рекомендации G.P. Flake и соавт.: 1-я степень фиброза - площадь фиброзной ткани менее 15 %, 2-я степень - от 10 до 50 % и 3-я степень - более 50 % площади среза [18]. Степень воспалительно-клеточной инфильтрации оценивали в баллах от 1 до 3 по периваскулярным скоплениям.
Экспрессию VEGF и прогестероновых рецепторов (PgR) в миоматозных узлах и миометрии изучали на парафиновых срезах с помощью двухшагового стреп-тавидин-биотинового метода и реактивов производства ThermoScientific. В качестве первичных антител использовали готовые к использованию кроличьи мо-ноклональные антитела к VEGF (IgG, клон SP28, кат. № RM-9128-R7) и к PgR (IgG, клон YR85, кат. № RM-2114-R7); использовали также набор «UltraVision Quanto Detection System HRP» с диаминобензидином (DAB); ядра клеток докрашивали гематоксилином. Продукты ИГХ реакции оценивали при увеличении 400 с помощью микроскопа Axio Scope. A1 с фотокамерой AxioCam MRc5 и программного обеспечения ZEN blue (С. Zeiss) и выражали в % площади для VEGF и численной плотности меченых ядер для PgR.
При статистической обработке данных использовали программное обеспечение MedCalc Statistical Software, version 18.9.1 (http://www.medcalc.org; 2018) и пакет RStudio (http://www.rstudio.com/). Проверку нормальности распределения данных осуществляли с помощью критерия Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения данные представлены в виде M±a. При отсутствии нормального распределения показателей применяли методы непараметрической статистики: внутригрупповые сравнения
проводились с помощью критерия Вилкоксона; межгрупповые сравнения данных - с помощью критерия Манна-Уитни; корреляционные связи - с применением коэффициента корреляции Спирмена. Данные на графиках представлены в виде медианы ^е), первого и третьего квартилей (Q1; Q3). Различия считали статистически значимыми при уровне р < 0,05.
Результаты и обсуждение
Среди 226 женщин с миомой матки у 119 (53 %) имелись фенотипические признаки избыточной массы тела: у 63 пациенток ИМТ составил от 25 до 29,9 и расценивался как предожирение; у 39 ИМТ варьировался от 30 до 34,9 (ожирение I-й степени); у 17 - от 35 до 39,9 кг/м2 (ожирение II-й степени).
У 78 % пациенток миома была множественной, т.е. обнаруживалось два и более интерстициальных (интрамуральных), интерстицио-субсерозных или интерстицио-субмукозных узлов диаметром от 40 мм и более, с единичными субсерозными узлами диаметром около 5 мм, с сопутствующим бесплодием. У остальных 22 % женщин доминировали миомато-зные узлы больших размеров, диаметром от 100 до 150 мм, при этом интраоперационно очень редко визуализировались дополнительные узлы, обычно мелкие, до 10 мм. Пациентки оперированы с использованием лапароскопического, лапаротомного и ги-стерорезектоскопического доступа с сохранением репродуктивной функции, выполняли миомэктомию всех узлов (до 23 максимально) с ушиванием ложа в 2 ряда с помощью Vicryl 1.
На стадии предоперационной подготовки при гистологическом исследовании пайпель-биопсии эндометрия в пролиферативную фазу цикла у 136 (60 %) пациенток выявлены хронический эндометрит, у 56 (25 %) - гиперплазия эндометрия без ати-пии, у 38 (17 %) - железистый или железисто-фиброзный полип. Наряду с миомой матки, у 62 (27 %) женщин диагностирован наружный генитальный или глубокий инфильтративный эндометриоз, причем у 6 из них показанием к оперативному вмешательству явилась резекция эндометриоидных гете-ротопий при подготовке к ЭКО, и синхронно была выполнена миомэктомия узлов диаметром менее 50 мм. Аденомиоз был обнаружен у 52 (23 %) пациенток с миомой матки, в т. ч. в 4-х случаях диагностирован сочетанный внутренний и наружный эндометриоз. Высокий процент сочетания «доброкачественных
гинекологических заболеваний» патогенетически может быть обусловлен воспалением и множеством других факторов [19].
Из гормональных препаратов, наиболее часто используемых пациентками в период 3 мес до ми-омэктомии, были КОК (Жанин, Джес плюс или Яри-на) - всего 36 (16 %) клинических наблюдений; реже применяли прогестагены - 22 (10 %) случаев, агони-сты ГнРГ - 16 (7 %) случаев, УА - 12 (5 %) и антиге-стагены - 5 (2 %) женщин. Следует отметить, что при самостоятельном выборе препаратов предпочтения базировались на контрацептивном и наименьших побочных эффектах (КОК), а остальные были назначены лечащими врачами при наличии менорра-гий, эндометриоза, боли и анемии, исходя из экономических возможностей, опыта применения и интереса к сравнительно новому в тот период УА.
Пациентки 2-й группы, принимавшие УА в течение 3-х мес, характеризовались уменьшением ме-норрагий и болевого синдрома, а также повышением содержания гемоглобина, что позволило выполнить миомэктомию. В отличие от 1-й группы без гормонотерапии, по данным УЗИ перед операцией, объем матки и диаметр доминирующего миоматозного узла статистически значимо уменьшились по сравнению с показателями до лечения [16].
При светооптическом исследовании доминирующие миоматозные узлы пациенток 1-й группы соответствовали фенотипу «простой миомы» [1] с разнонаправленными пучками опухолевых миоци-тов и варьирующим количеством внеклеточного ма-трикса. У пациенток 2-й группы, применявших перед операцией УА, фрагменты доминирующего узла представлены пучками дистрофически измененных мио-цитов с оптически светлой цитоплазмой и кариорек-сисом. Перифокальный миометрий в образцах обеих групп пациенток был представлен пучками гетерогенных гладкомышечных клеток с различной долей соединительной ткани и варьирующей по плотности периваскулярной клеточной инфильтрацией с доминированием макрофагов и лимфоцитов (рис. 1).
При балльной оценке количества миоцитов (так называемой «клеточности опухолевого узла») сравнительный анализ двух групп по Манну-Уитни не выявил статистически значимых различий (р=0,684). Не выявлены различия по выраженности фиброзной компоненты миоматозных узлов, оцениваемой
1-я группа /I51 group
2-я группа /2nd group
Клеточная (нфнльтраци: (Г и Э) / Cellular infiltration (Н@Е)
Фиброз (ван Гизон) /
Fibrosis (van Gieson)
Экспрессия PgR (ИГХ) / PgR-expression (ШС)
Экспрессия VEGF (ИГХ) / VEGF-expression (ШС)
'V '-/.л-. ;■ Jv л- L/^X i лч v •. •• ■ ■ - , ' ■ . \ -41 « , - ) ■ • ... •• о •■;.' . "■ - - . • • .Л.С.;:, К If У ^^ 'у. ¿5 Г-Т »•*■ * !' - v ; ' , "" ч "> Г ^T'V-" > ' • ' -- '' . » , ■ ,
•fM '-\v ,, - . • . , * ' • -V • а ••• vrri.: -Sift 5f/f . - ■ '-г? 1 .. - i ' .. ' ' , t s ' sj ■ ■ ■ v'^i- > ^ n • - ' ^ - " . * f ' . • , % * .1
с-•:.,'> ••• • - .'/* ~. ■Г h • v , V Sf v ,,<;' / -л. J. '■ . - lu ierv " • • os. л . «Д->. - : я ■ " . . ^ .-. - Ч . • «•, .->'. ^ л". ^^ -V " i* ' » • /г , . ■}. * - Ч Hp A"' Г - ^ % ifr "'. iT btei?JaS
Vv' я : • f-^ ^ • Т .*■>« Vr*-« . А • - "и ■. - • ., , , - - -, . i- . ■■ i . . >• \ ■ * 4- •'•'•' ^ ' ' Щ ff&K^M v.- - r '■■ - ...;:. rtLf V: . ■ 4 ■ f.'f-v ■■ Г- - • ■ ••• *
Миоматозный узел / Myomatous node
Миометрий / Myometrium
Миоматозный узел / Myomatous node
Миометрий / Myometrium
Рисунок 1. Гистологическое (окраска гематоксилином и эозином (Г и Э) и по ван Гизону - коллагеновые волокна красного цвета) и иммуногистохимическое (экспрессия PgR и VEGF, продукты реакции коричневого цвета) исследование образцов доминантных миоматозных узлов и перифокального миометрия у пациенток репродуктивного возраста с миомой матки без гормонотерапии (1-я группа) и в условиях применения УА (2-я группа). Ув. 400.
Figure 1. Histological (haematoxylin and eosin (H&E) and van Gieson's stain with red collagen fibres) and immunohistochemical study (PgR and VEGF expression with brown reaction products) of samples of dominant myomatous nodules and perifocal myometrium in patients of reproductive age with uterine fibroids without hormone therapy (group 1) and under UPA use (group 2). Magn. 400.
на окрашенных по ван Гизону препаратах (р=0,075), хотя медиана 2-й группы (2,25) была несколько выше, чем в 1-й (2,00). При балльном сравнении степени воспалительно-клеточной инфильтрации (ВКИ) выявлена ее меньшая плотность у пациенток 2-й группы, использовавших перед операцией УА (р=0,020).
В 1-й группе корреляционный анализ по Спирме-ну выявил закономерную сильную отрицательную корреляцию между «клеточностью» узла и его фиброзом: Г8=-0,813 (р<0,0001; ДИ от -0,918 до -0,603) и положительную средней силы - между «клеточно-стью» узла и наличием воспалительной инфильтрации: Г8=0,613 (р=0,002; ДИ от 0,269 до 0,819). При этом
фиброз и инфильтрация имели обратную умеренную корреляцию между собой: Г8=-0,618 (р=0,002; ДИ от -0,821 до -0,276). Во 2-й группе, как и в 1-й, с близкими значениями выявлена отрицательная корреляция между «клеточностью» узла и его фиброзом: Г8=-0,877 (р<0,001; ДИ от -0,973 до -0,692); но в отличие от 1-й группы, корреляции с инфильтрацией и другие зависимости между гистологическими характеристиками отсутствовали.
Далее приводим результаты статистического анализа взаимосвязей между продукцией цито-кина ГМ-КСФ, фактора роста VEGF и содержанием 17-ОН-Рг в доминантных миоматозных узлах
и перифокальном миометрии в условиях спонтанной (базовой) и стимулированной ПА продукции, а также взаимосвязей экспрессии VEGF и 17-ОН^г в этих компартментах матки.
С помощью критерия Спирмена изучены взаимосвязи между гистологическими и молекуляр-но-биологическими параметрами миоматозных узлов и миометрия в каждой группе. Важно отметить, что показатели базовой продукции ГМ-КСФ и VEGF в миоматозных узлах и перифокальном миометрии, оцениваемые по супернатантам, очень редко демонстрировали взаимозависимости и корреляционные связи с другими данными, и наибольшее количество прямых и отрицательных корреляций имели показатели стимулированной ПА продукции сигнальных молекул и их ИВПА.
В 1-й группе имела место умеренная отрицательная корреляция между «клеточностью» миоматозно-го узла и экспрессией в нем PgR: rs=-0,493 (р=0,017; ДИ от -0,752 до -0,101), при этом клеточная инфильтрация в узле положительно коррелировала с экспрессией PgR, но не в узле, а в миометрии пациенток данной группы: rs=0,460 (р=0,027; ДИ от 0,058 до 0,733). Выраженность фиброза в мио-матозном узле умеренно отрицательно коррелировала с содержанием VEGF в супернатанте узла: rs=-0,497 (р=0,016; ДИ от -0,755 до -0,107). Содержание в супернатанте миометрия стимулированной ПА продукции ГМ-КСФ умеренно положительно коррелировало с ИВПА VEGF в супернатанте ми-ометрия: rs=0,464 (p=0,026; ДИ от 0,064 до 0,736). Другие пары показателей характеризовались еще более низкими значениями коэффициента ранговой корреляции Спирмена.
Во 2-й группе «клеточность» миоматозного узла прямо коррелировала и с базовым содержанием VEGF в супернатанте узла (rs=0,858, p<0,001; ДИ от 0,241 до 0,914), и в супернатанте индуцированного ПА миоме-трия (rs=0,706, р=0,01; ДИ от 0,434 до 0,943). Соответственно, поскольку выше отмечена сильная отрицательная корреляция между «клеточностью» узла и его фиброзом, то степень фиброза миоматозного узла отрицательно коррелировала и с базовым содержанием VEGF в супернатанте узла (rs=-0,824, р=0,001; ДИ от -0,914 до -0,241), и с показателем в супернатанте индуцированного ПА миометрия (rs=-0,802, p<0,001;
ДИ от -0,943 до -0,433); в свою очередь, содержание стимулированного ПА VEGF в супернатанте мио-метрия имело сильную положительную корреляцию с его фоновым показателем в узле: rs=0,895, p<0,001; ДИ от 0,766 до 0,981.
Кроме того, во 2-й группе выявлена прямая умеренная зависимость между ИВПА на продукцию ГМ-КСФ в опухолевом узле и перифокальном миометрии: rs=0,655 (р=0,021; ДИ от 0,273 до 0,919), а также между ИВПА на продукцию VEGF в опухолевом узле и перифокальном миометрии: rs=0,800 (р=0,018; ДИ от 0,418 до 0,942).
Экспрессия PR в парафиновых срезах миомато-зных узлов отрицательно коррелировала с ИВПА на продукцию VEGF в опухолевом узле: rs=-0,648 (р=0,023; ДИ от -0,891 до -0,118) и, как следовало ожидать, со стимулированной ПА продукцией VEGF в опухолевом узле: rs=-0,853 (p<0,001; ДИ от -0,958 до -0,547). Наряду с этим, экспрессия PgR имела сильную обратную зависимость от содержания стимулированного ПА уровня ГМ-КСФ в супернатан-тах перифокального миометрия: rs=-0,874 (p<0,001; ДИ от -0,970 до -0,659), а также от ИВПА ГМ-К-СФ в миометрии: rs=-0,825 (р=0,001; ДИ от -0,955 до -0,523).
Экспрессия PR в парафиновых срезах перифо-кального миометрия отрицательно коррелировала с ИВПА ГМ-КСФ в миометрии: rs=-0,608 (р=0,036; ДИ от -0,876 до -0,053) и с ИВПА на продукцию VEGF в опухолевом узле: rs=-0,583 (р=0,047; ДИ от -0,867 до -0,013), а также прямо коррелировала с базовой продукцией VEGF в миометрии, оцениваемой по супер-натантам инкубированных образцов ткани: rs=0,608 (р=0,036; ДИ от 0,053 до 0,876).
Взаимосвязи между стимулированными ПА ци-токинами и показателями их ИВПА были сильно положительными для ГМ-КСФ в миометрии, для VEGF в миоматозном узле; кроме того, умеренно отрицательными для ИВПА и базовой продукции VEGF в миометрии.
ИВПА ГМ-КСФ в миометрии положительно коррелировал с ИВПА ГМ-КСФ в узле: rs=0,680 (р=0,015; ДИ от 0,273 до 0,919), с ИВПА VEGF в узле: rs=0,625 (р=0,029; ДИ от 0,239 до 0,914) и со стимулированным ПА содержанием VEGF в супернатанте узла: rs=0,713 (р=0,009; ДИ от 0,236 до 0,913). Как и следовало
Рисунок 2. Содержание гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) в супернатантах в условиях стимулированной поликлональными активаторами (ПА) продукции in vitro в 1-й группе без предоперационной гормонотерапии: в 2 раза меньше в миоматозном узле, чем в миометрии (t-крите-рий Вилкоксона для парных переменных, р=0,045).
Figure 2. The content of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in supernatants under the conditions of in-vitro production being stimulated by polyclonal activators (PA) in group 1 without preoperative hormone therapy: 2-fold lower in the myomatous nodule than in the myometrium (Wilcoxon t-test, р=0.045).
Рисунок 3. Экспрессия VEGF в операционном материале после in vitro стимуляции поликлональными активаторами (ПА) 1-й группе без предоперационной гормонотерапии почти в 2 раза выше в миоматозном узле, чем в перифокальном миометрии (t-критерий Вилкоксона для парных переменных, р=0,001).
Figure 3. Expression of VEGF in the surgical material after in vitro stimulation with polyclonal activators (PA) in group 1 without preoperative hormone therapy is almost 2-fold higher in the myomatous nodule than in the perifocal myometrium (Wilcoxon t-test, р=0.001).
ожидать, стимулированная ПА продукция ГМ-КСФ в миометрии положительно коррелировала с ИВПА VEGF в миоматозном узле (гэ=0,583, р=0,047; ДИ от 0,241 до 0,914) и с уровнем его стимулированной ПА продукции (гэ=0,748, р=0,005; ДИ от 0,306 до 0,925); кроме того, выявлена положительная умеренная корреляция с ИВПА ГМ-КСФ в узле: гэ=0,680 (р=0,015; ДИ от 0,173 до 0,902).
Стимулированная ПА продукция ГМ-КСФ в узле положительно коррелировала с ИВПА VEGF в миометрии (гб=0,691, р=0,013; ДИ от 0,194 до 0,906), а также с ИВПА VEGF в узле: гэ=0,734 (р=0,006; ДИ от 0,028 до 0,871) и со стимулированным ПА содержанием VEGF в супернатанте узла: гэ=0,580 (р=0,047; ДИ от 0,009 до 0,866).
С помощью критерия Вилкоксона в 1-й группе без предоперационной гормонотерапии статистически значимые попарные различия между миоматозным узлом и миометрием выявлены для стимулированной ПА продукции ГМ-КСФ (в 2 раза меньше в узле, чем в миометрии, р=0,045) (рис. 2); а также для ИГХ экспрессии VEGF (почти в 2 раза выше в узле, чем
в миометрии, р=0,001) (рис. 3). Для остальных сравниваемых параметров, в т.ч. для содержания 17-ОН-Рг и экспрессии PgR, существенные различия не выявлены.
У женщин 2-й группы статистически значимые попарные различия между миоматозным узлом и ми-ометрием также выявлены для стимулированной ПА продукции ГМ-КСФ (почти в 7 раз меньше в узле, чем в миометрии, р<0,001), что определило значимые различия (р<0,001) при сравнении ИВПА ГМ-КСФ между показателями узла и миометрия. Другие показатели во 2-й группе при попарном сравнении с помощью критерия Вилкоксона не имели статистической значимости.
С помощью критерия Манна - Уитни для независимых выборок проведено сравнение 1-й и 2-й групп между собой по 16 параметрам, полученным с помощью ИФА супернатантов инкубируемых образцов и ИГХ исследования парафиновых срезов операционного материала. Выявлено всего 4 статистически значимых пар различий. Наиболее показательным стало почти 2-кратное уменьшение стимулирован-
Рисунок 4. Продукция ГМ-КСФ клетками миоматозных узлов после in vitro стимуляции поликлональными активаторами статистически значимо меньше во 2-й группе (МТМ+УА) после применения УА по сравнению с 1-й группой (МТМ). Критерий Манна-Уитни, р<0,0001.
Figure 4. The production of GM-CSF by the cells of myomatous nodules after in-vitro stimulation by polyclonal activators is statistically significantly less in group 2 after UA administering compared with the 1st group (UF). Mann-Whitney test, р<0.0001.
Рисунок 5. Экспрессия VEGF в миоматозном узле при ИГХ исследовании была выше в 1-й группе (МТМ) по сравнению со 2-й (МТМ+УА). Критерий Манна-Уитни, р=0,009.
Figure 5. Expression of VEGF in the myomatous nodule revealed by IHC analysis was higher in group 1 compared to group 2. Mann-Whitney test, p=0.009.
Рисунок 6. Индекс влияния поликлональных активаторов (ИВПА) на содержание in vitro П-ОН-Pr ниже в образцах миометрияу пациенток 2-й (МТМ+УА) группы. Критерий Манна-Уитни, р=0,002.
Figure 6. The stimulation index of polyclonal activators (SIPA) on the in-vitro content of 17-OH-Pr is lower in myometrium specimens of group 2patients. Mann-Whitney test, p=0.002.
ной ПА продукции ГМ-КСФ клетками миоматозных узлов после применения УА женщинами 2-й группы по сравнению с 1-й (p<0,001) (рис. 4), что определило и статистическую значимость отличий для ИВПА ГМ-КСФ (р=0,008).
Экспрессия VEGF при ИГХ-исследовании была выше в 1-й группе по сравнению со 2-й (р=0,009), но только в миоматозном узле (рис. 5); при этом показатели миометрия во 2-й группе после применения УА слегка превышали экспрессию в 1-й группе. И последний показатель, демонстрирующий значимые отличия 1-й и 2-й групп, - это метаболит прогестерона: ИВПА 17-ОН-Рг был ниже в образцах миометрия у женщин, применявших УА перед миомэ-ктомией (р=0,002) (рис. 6), однако показатели миоматозных узлов в двух группах не отличались.
В целом, инкубация образцов операционного материала в питательной среде с ПА позволила выявить особенности цитокинопродукции клеточных элементов лейомиом и миометрия. У пациенток без гормонотерапии выявлены статистически значимые различия для стимулированной ПА продукции ГМ-КСФ (в 2 раза меньше в узле, чем в миометрии), а также для экспрессии VEGF в тканевых образцах (в 2 раза больше в узле, чем в миометрии). Экспрессия PgR в миометрии прямо коррелировала с воспалительной инфильтрацией лейомиомы. По данным [12], хороший ответ на УА с уменьшением объема миомы может быть связан со снижением числа макрофагов и снижением иммуноэкспрессии TGFß, IL6 и IL10, что рассматривается авторами как важный компонент суммарного действия УА на ткань миомы матки, но без влияния на васкуляризацию миомы. И в нашей работе применение селективного модулятора PgR способствовало снижению продукции ГМ-КСФ и экспрессии VEGF в узле при отсутствии влияния на миометрий; кроме того, выявлено снижение 17-ОН-Pr в миометрии без изменения в узлах и отрицательная корреляция между экспрессией PgR и продукцией VEGF в лейомиомах.
Многочисленные исследования патогенеза миомы матки убедительно демонстрируют роль стероидного гормона прогестерона и его рецепторов, а также эстрогенов, с помощью различных методов, в частности, новых, с помощью протеомного анализа [20]. По данным [21], уровни экспрессии генов стероидных рецепторов в миоматозных узлах в 2-9 раз превыша-
ли их показатели в миометрии, при этом экспрессия генов PgR в узлах и миометрии была наибольшей у пациенток с «клеточной» миомой и наименьшей при наличии аденомиоза. В нашем исследовании статистически значимые отличия в экспрессии PgR между группами, а также между узлом и миометрием в каждой группе и с другими изучаемыми маркерами, не выявлены, по-видимому, в связи с доминированием «простой» миомы, а не «клеточной»; отмечен лишь более высокий ИВПА для 17-ОН-Рг в 1-й группе для миометрия по сравнению со 2-й (рис. 6) при отсутствии различий для узлов.
Выявление статистически значимо более высоких показателей стимулированной продукции ГМ-К-СФ в миоматозных узлах у женщин 1-й группы по сравнению со 2-й отражает антивоспалительное воздействие УА, доказанное ранее [12], но отсутствие его влияния на показатели миометрия свидетельствует о торпидности и проопухолевом потенциале пери-фокальной мышечной ткани.
Определенные надежды на регулирование роста миоматозных узлов были связаны с подавлением экспрессии VEGF [22]. Было показано повышение экспрессии VEGF в лейомиоме по сравнению с пе-рифокальным миометрием и миометрием женщин репродуктивного возраста без миоматозных узлов [23]. С другой стороны, опубликованы результаты ПЦР и ИФА об отсутствии различий в уровне VEGF в миоматозных узлах массой менее 10 г и более 100 г по сравнению с перифокальным миоме-трием [24]. Ранее нами [25] у пациенток репродуктивного возраста с лейомиомой матки выявлены статистически значимые реципрокные отношения между экспрессией VEGF в доминирующем узле и перифокальном миометрии, что отражает системность миоматозной трансформации с муль-фокальностью опухолевого роста и потенциалом прогрессирования патологического процесса с образованием новых миоматозных узлов. Кроме того, выявлена обратная зависимость между экспрессией VEGF в доминирующем узле и степенью его фиброза, что может свидетельствовать о вовлечении данного фактора роста в пролиферацию опухолевых миоцитов с ведущей ролью клеточной компоненты в противовес биосинтетической активности с продукцией компонентов экстрацеллюлярного матрикса.
Заключение
По данным гистологического исследования, снижена плотность воспалительно-клеточной инфильтрации в образцах доминантных миоматозных узлов у пациенток, использовавших перед операцией селективный модулятор PgR; при этом экспрессия PgR в миометрии прямо коррелировала с воспалительной инфильтрацией лейомиомы. При исследовании молекулярно-биологических маркеров воспаления и ангиогенеза показатели базовой продукции ГМ-КСФ и VEGF в миоматозных узлах и перифокальном миометрии были сопоставимыми, в отличие от стимулированной ПА продукции данных сигнальных молекул. Так, содержание ГМ-КСФ в супернатантах в условиях стимуляции in vitro в образцах наблюдений без предоперационной гормонотерапии было } в 2 раза меньше в миоматозных узлах, чем в миометрии, а экспрессия VEGF - почти в 2 раза выше.
Продукция ГМ-КСФ в миоматозных узлах после in vitro стимуляции статистически значимо меньше во 2-й группе после применения селективного модулятора PgR по сравнению с 1-й группой без гормонотерапии; экспрессия VEGF в миоматозном узле при ИГХ исследовании была выше в 1-й группе по сравнению со 2-й. ИВПА метаболита Pg - 17-ОН-Рг -в образцах миометрия в условиях стимуляции in vitro был ниже во 2-й группе.
В целом, в доминантном миоматозном узле применение селективного модулятора PgR способствовало снижению экспрессии VEGF и продукции in vitro ГМ-КСФ при отсутствии влияния на перифокальный миометрий, что демонстрирует его проангиогенный и провоспалительный потенциал у пациенток с миомой матки.
Государственное задание Министерства здравоохранения РФ на осуществление научных исследований и разработок на 2022 г. № 121021700349-8.
Литература / References
1. Леваков СА, Зайратьянц ОВ, Мовтаева ХР. Миома матки: Учебное пособие; 2019: 168с. [Levakov SA, Zayratjyants OV, Movtaeva HR. Uterine myoma: Uchebnoe posobie; 2019: 168p. (In Russian)]
2. Awiwi MO, Badawy M, Shaaban AM, Menias CO, Horowitz JM, Soliman M, Jensen CT, Gaballah AH, Ibarra-Rovira JJ, Feldman MK, Wang MX, Liu PS, Elsayes KM. Review of uterine fibroids: Imaging of typical and
atypical features, variants, and mimics with emphasis on workup and FIGO classification. Abdominal Radiology. 2022; 47(7): 2468-85. DOI: 10.1007/s00261-022-03545-x
3. Nicolaus K, Brauer D, Sczesny R, Lehmann T, Diebolder H, Runnebaum IB. Unexpected coexistent endometriosis in women with symptomatic uterine leiomyomas is independently associated with infertility, nulliparity and minor myoma size. Archives of Gynecology and Obstetrics. 2019; 300(1): 103-108. DOI: 10.1007/ s00404-019-05153-5
4. Бадмаева СЖ, Цхай ВБ, Каплунов ВА, Нар-кевич АН. Сравнительный анализ эффективности различных видов медикаментозной профилактики рецидива миомы матки у пациенток репродуктивного возраста, перенесших миомэктомию. Сибирское медицинское обозрение. 2020;(4):77-83. DOI: 10.20333/2500136-2020-4-77-83 [Badmaeva SZ, Tshay V.B., Kaplunov VA, Narkevich AN. Comparative analysis of the effectiveness of various types of drug prevention of uterine fibroids recurrence in patients of reproductive age who underwent myomectomy. Siberian Medical Review. 2020;(4):77-83. (In Russian)]
5. Хашукоева АЗ, Хлынова СА, Маркова ЭА, Ка-ранашева АХ. Миома матки: Алгоритм ведения и лечения. Акушерство и гинекология. 2021; 3(Приложе-ние): 24-27. [Hashukoeva AZ, Hlynova SA, Markova EA, Karanasheva AH. Uterine myoma: Algorithm for management and treatment. Obstetrics and Gynecology. 2021;(3):24-27. (In Russian)]
6. Leyland N, Leonardi M, Murji A, Singh SS, Al-Hendy A, Bradley L. A Call-to-action for clinicians to implement evidence-based best practices when caring for women with uterine fibroids. Reproductive Sciences. 2022; 29(4): 1188-1196. DOI: 10.1007/s43032-022-00877-3
7. Wegienka G. Are uterine leiomyoma a consequence of a chronically inflammatory immune system? Medical Hypotheses. 2012; 79(2): 226-231. DOI: 10.1016/j. mehy.2012.04.046
8. Orciani M, Caffarini M, Biagini A, Lucarini G, Delli Carpini G, Berretta A, Di Primio R, Ciavattini A. Chronic inflammation may enhance leiomyoma development by the involvement of progenitor cells. Stem Cells International. 2018; (2018): 1716246. DOI: 10.1155/2018/1716246
9. Ciarmela P, Islam MS, Reis FM, Gray PC, Bloise E, Petraglia F, Vale W, Castellucci M. Growth factors and myometrium: Biological effects in uterine fibroid
and possible clinical implications. Human Reproduction Update. 2011; 17(6): 772-790. DOI: 10.1093/humupd/ dmr031
10. Тоноян НМ, Козаченко ИФ, Асатурова АВ, Кометова ВВ, Магнаева АС, Теврюкова НС, Фран-кевич ВЕ, Адамян ЛВ. Иммуногистохимические маркеры рецидивирования миомы матки. Акушерство и гинекология. 2022;(4):123-31. DOI: 10.18565/ aig.2022.4.123-131 [Tonoyan NM, Kozachenko IF, Asaturova AV, Kometova VV, Magnaeva AS, Tevryukova NS, Frankevich VE, Adamyan LV. Immunohistochemical markers of uterine fibroids recurrence. Obstetrics and Gynecology. 2022;(4):123-31. (In Russian)]
11. Middelkoop MA, Bet PM, Drenth JPH, Huirne JAF, Hehenkamp WJK. Risk-efficacy balance of ulipristal acetate compared to surgical alternatives. British Journal of Clinical Pharmacology. 2021; 87(7): 2685-97. DOI: 10.1111/bcp.14708
12. Szydiowska I, Grabowska M, Nawrocka-Rutkowska J, Kram A, Piasecka M, Starczewski A. Markers of inflammation and vascular parameters in selective progesterone receptor modulator (ulipristal acetate)-treated uterine fibroids. Journal of Clinical Medicine. 2021; 10(16): 3721. DOI: 10.3390/jcm10163721
13. Szydiowska I, Grabowska M, Nawrocka-Rutkowska J, Piasecka M, Starczewski A. Markers of cellular proliferation, apoptosis, estrogen/progesterone receptor expression and fibrosis in selective progesterone receptor modulator (ulipristal acetate)-treated uterine fibroids. Journal of Clinical Medicine. 2021;10(4):562. DOI: 10.3390/jcm10040562.
14. Ekanem E, Talaulikar V. Medical Therapy for fibroids: What next for Ulipristal Acetate? Advances in Therapy. 2021; 38(1): 137-148. DOI: 10.1007/s12325-020-01555-z
15. Серов ВН, Сухих ГТ. ред. Акушерство и гинекология: Клинические рекомендации; 2015. 1024с. [Serov VN, Sukhikh GT. eds. Obstetrics and Gynecology: Clinical recommendations; 2015. 1024p. (In Russian)]
16. Маринкин ИО, Пивень ЛА, Волчек АВ, Соля-ников ДА, Зенина ЮВ, Михайлова ЕС, Омигов ВВ, Айдагулова СВ. Клинические и гистологические особенности миомы матки у женщин репродуктивного возраста в условиях применения селективного модулятора прогестероновых рецепторов. Сибирский научный медицинский журнал. 2020; 40(1): 39-44. [Marinkin IO, Piven LA, Volchek AV, Solyanikov DA,
Zenina UV, Mikhaylova ES, Omigov VV, Aidagulova SV. Clinical and histological features of uterine fibroids in women of reproductive age under the using of a selective progesterone receptor modulator. Sibirian Scientific Medical Journal. 2020; 40(1): 39 - 44. (In Russian)] DOI: 10.15372/SSMJ20200105
17. Autenshlyus A, Arkhipov S, Mikhail ova E, Marinkin I, Varaksin N, Vavilin V, Lyakhovich V. Effects of polyclonal activators on cell differentiation and cytokine production of cultured invasive breast carcinoma of no special type, their association with tumour histopathological parameters and lymph node metastasis. International Journal of Immunopathology and Pharmacology. 2020;(34):2058738420950580. DOI: 10.1177/2058738420950580
18. Flake GP, Moore AB, Sutton D, Kissling GE, Horton J, Wicker B, Walmer D, Robboy SJ, Dixon D. The natural history of uterine leiomyomas: Light and electron microscopic studies of fibroid phases, interstitial ischemia, inanosis, and reclamation. Obstetrics and Gynecology International. 2013; 2013: 528376. DOI: 10.1155/2013/528376
19. AlAshqar A, Reschke L, Kirschen GW, Borahay MA. Role of inflammation in benign gynecologic disorders: From pathogenesis to novel therapies. Biology of Reproduction. 2021; 105(1): 7-31. DOI: 10.1093/biolre/ ioab054
20. Rizzello A, Franck J, Pellegrino M, De Nuccio F, Simeone P, Fiore G, Di Tommaso S, Malvasi A, Tinelli A, Fournier I, Salzet M, Maffia M, Vergara D. A proteomic analysis of human uterine myoma. Current Protein and Peptide Science. 2017;18(2):167-174. DOI: 10.2174/1389 203717666160322150603
21. Шрамко СВ, Гуляева ЛФ, Баженова Л Г, Левченко ВГ. Миома матки и аденомиоз: Молекулярная характеристика по экспрессии генов стероидных рецепторов. Акушерство и гинекология. 2018; (4): 58-63. https://dx.doi.org/10.18565/aig. 2018.4.58-63 [Shramko SV, Gulyaeva LF, Bazhenova LG, Levchenko VG. Uterine myoma and adenomyosis: Molecular characterization of steroid receptor gene expression. Obstetrics and Gynecology. 2018; 4: 58-63. (In Russian)]
22. Arjaans M, Schröder CP, Oosting SF, Dafni U, Kleibeuker JE, de Vries EG. VEGF pathway targeting agents, vessel normalization and tumor drug uptake: from bench to bedside. Oncotarget. 2016; 7(16): 21247-58. DOI: 10.18632/oncotarget.6918
23. Lewicka A, Osuch B, Cendrowski K, Zegars-ka J, Stelmachow J. Expression of vascular endothe-lial growth factor mRNA in human leiomyomas. Gynecological Endocrinology. 2010; 26: 451-455. DOI: 10.3109/09513591003632159
24. Wolanska M, Maikowski A, Romanowicz L, Bankowski E. Does vascular endothelial growth factor participate in uterine myoma growth stimulation? European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 2012;164(1):93-97. DOI: 10.1016/j. ejogrb.2012.05.021
25. Маринкин ИО, Айдагулова СВ, Зенина ЮВ, Соляников ДА, Пивень ЛА, Тимофеева ЮС, Архипов СА, Омигов ВВ. Роль фактора роста эндотелия сосудов в прогрессировании лейомиомы матки у женщин репродуктивного возраста. Российский вестник акушера-гинеколога. 2016; 16(6): 4-8. DOI: 10.17116/ rosakush20161664-8 [Marinkin IO, Aidagulova SV, Zenina UV, Solyanikov DA, Piven LA, Timofeeva US, Arkhipov SA, Omigov VV. The role of vascular endothelial growth factor in the progression of uterine leiomyoma in women of reproductive age. Russian Bulletin of an Obstetrician-Gynecologist. 2016; 16(6): 4-8. (In Russian)] DOI: 10.17116/rosakush20161664-8
Сведения об авторах
Соляников Дмитрий Александрович, аспирант, Новосибирский государственный медицинский университет; адрес: Российская Федерация, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел.: +7(383)315-98-65; e-mail: [email protected]; http://orcid.org/0000-0002-8043-7370
Маринкин Игорь Олегович, д.м.н, профессор, Новосибирский государственный медицинский университет; адрес: Российская Федерация, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел.: +7(383)222-32-04; e-mail: [email protected], http://orcid. org/0000-0002-9409-482X
Волчек Александр Викторович, науч. сотрудник, Новосибирский государственный медицинский университет; адрес: Российская Федерация, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел.: +7(913)0031722; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0003-4458-1158
Михайлова Елена Семеновна, науч. сотрудник, Новосибирский государственный медицинский университет; адрес: Российская Федерация, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел.: +7(383)226-35-60; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-8364-819Х
Айдагулова Светлана Владимировна, д.б.н., профессор, Новосибирский государственный медицинский университет; адрес: Российская Федерация, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел.: +7(913)9092251; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0001-7124-1969
Author information
Dmitriy A. Solyanikov, graduate student, Novosibirsk State Medical University; Address: 52, Krasny Prospect Str., Novosibirsk, Russian Federation 630091; Phone: +7(383)3159865; e-mail: [email protected]; http://orcid.org/0000-0002-8043-7370
Igor' O. Marinkin, Dr.Med.Sci., Professor, Novosibirsk State Medical University; Address: 52, Krasny Prospect Str., Novosibirsk, Russian Federation 630091; Phone: +7(383)2223204; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-9409-482X
Alexander V. Volchek, senior researcher, Novosibirsk State Medical University; Address: 52, Krasny Prospect Str., Novosibirsk, Russian Federation 630091; Phone: +7(913)0031722; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0003-4458-1158
Elena S. Mikhailova, senior researcher, Novosibirsk State Medical University; Address: 52, Krasny Prospect Str., Novosibirsk, Russian Federation 630091; Phone: +7(383)2263560; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-8364-819Х
Svetlana V. Aidagulova, Dr.Biol.Sci., Professor, Novosibirsk State Medical University; Address: 52, Krasny Prospect Str., Novosibirsk, Russian Federation 630091; Phone: +7(913)9092251; e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0001-7124-1969
Дата поступления 18.10.2022 Дата рецензирования 01.11.2022 Принята к печати 03.11.2022
Received 18 October 2022 Revision Received 01 November 2022 Accepted 03 November 2022
