CC BY
67
15. Sepiashvili R. I. Immunotropnye preparaty: klassifikatsiya, problemy i perspektivy [Immunotropic drugs: classification, problems and prospects]. Allergologiya i immunologiya [Allergology and Immunology], 2015, vol. 16, no. 1, pp. 64-69.
16. Sergalieva M. U., Yasenyavskaya A. L. Antioksidantnye i immunotropnye svoystva ekstrakta travy Astragala lis'ego (Astragalus vulpinus willd) [Antioxidant and immunotropic properties of herb extract of Astragalus vulpinus willd]. Materialy IV Vserossiyskoy nauchno-prakticheskoy konferentsii s mezhdunarodnym uchastiem "Innovatsii v zdorov'e natsii" [Materials of the 4th All-Russian Scientific-Practical Conference with International Participation "Innovations in National Health", November 09-10, 2016]. Saint-Petersburg, Saint-Petersburg State Chemical and Pharmaceutical Academy, pp. 169-171.
17. Sirin D. O. Nekotorye osobennosti neyroendokrinnoy regulyatsii deyatel'nosti immunnoy sistemy [Some features of neuroendocrine regulation of immune system activity]. Mezhdunarodnyy studencheskiy nauchnyy vestnik [International Student Scientific Journal], 2017, no. 5, pp. 12.
18. Tulyasheva M. A., Karimov A. K., Shakhidoyatov Kh. M. Sintez i izucheniye biologicheskoy aktivnosti 2,4-zameshchennykh khinazolinov [Synthesis and study of biological activity of 2,4-substituted quinazolines]. Vestnik KGMA im. I.K. Akhunbaeva [Bulletin of the Kyrgyz State Medical Academy named after I. K. Akhunbaev], 2014, no. 2, pp. 136-139.
19. Tyurenkov I. N., Tsibizova A. A., Samotrueva M. A., Ozerov A. A. Immunotropnye svoystva karbonil'nogo proizvodnogo khinazolina [Immunotropic properties of carbonylquinazoline derivative]. Astrakhanskiy meditsinskiy zhurnal [Astrakhan Medical Journal], 2017, vol. 12, no. 2, pp. 81-88.
20. Shubik V M., Alishev N. V, Drabkin B. A., Baranova O. V., Koroleva T. M., Puchkova E. I. Psik-hologicheskiy stress - immunitet - zdorov'e. Soobshchenie 1. Radiatsiya - stress - immunitet - zdorov'e u veteranov podrazdeleniy osobogo riska [Psychological stress - immunity - health. Communication 1. Radiation - stress - immunity - health for veterans of special risk units]. Radiatsionnaya gigiena [Radiation Hygiene], 2012, vol. 5, no. 3, pp. 38-47.
21. Yasenyavskaya A. L. Izuchenie vliyaniya immobilizatsionnogo stressa i antioksidantov na gormonal'nuyu aktivnost' shchitovidnoy zhelezy belykh krys na raznykh etapakh ontogeneza [The effect of immobilization stress and antioxidants on the thyroid gland hormonal activity of white rats at different stages of ontogenesis]. Vestnik Nizhe-gorodskogo universiteta im. N.I. Lobachevskogo [Vestnik of Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod], 2010, no. 2-2, pp. 689-693.
22. Nerkar A. G. In silico design, synthesis and pharmacological screening of novel mono and di-bromoquinazolinone derivatives as NMDA receptor antagonists for anticonvulsant activity. Int. J. Pharm. Sci., 2013, vol. 5, no. 1, pp. 331-335.
23. Plecheva, D. V Oxymethyluracil stimulates reparative regeneration of skin in rats. Eksp. Klin. Farmakol., 2004, vol. 67, no. 5, pp. 63-66.
24. Shah D. R. Novel quinazolinone-thiazolidinone hybrid : design, synthesis and in vitro antimicrobial and antituberculosis studies. Ind. J. Chem., 2014, vol. 53B, pp. 1169-1177.
14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология (медицинские науки)
УДК 615.1.03
DOI 10.17021/2018.13.4.115.123 © Ю.В. Шур, В.Ю. Шур, ИВ. Пустохайлов, 2018
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ АСТРАГАЛА ЛИСЬЕГО В АСПЕКТЕ «ДОЗА-ЭФФЕКТ»
Шур Юлия Владимировна, ассистент кафедры фармакогнозии, фармацевтической технологии и биотехнологии, ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: 8-905-480-94-87, e-mail: [email protected].
Шур Владимир Юдаевич, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры патологической физиологии, ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: 8-917-185-04-95, e-mail: [email protected].
Пустохайлов Иван Викторович, студент лечебного факультета, ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел: 8-960-859-76-22, e-mail: [email protected].
Изучены иммунотропные эффекты водно-этанольных экстрактов Астрагала лисьего (Astragalus vulpinus) в возрастающих концентрациях на показатели иммунного ответа и периферической крови белых мышей линии Balb/c в условиях циклофосфамид-индуцированной иммунодепрессии.
Установлено, что экстракт Астрагала лисьего оказывает выраженное влияние на показатели лейкоцитарной
формулы животных в условиях иммунодепрессии, вызванной введением циклофосфамида. Особую активность водно-этанольный экстракт проявляет в отношении нейтрофильного ростка белой крови, вызывая в различных концентрациях увеличение числа палочкоядерных нейтрофилов.
Изучение специфических реакций иммунного ответа у экспериментальных животных (индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа и реакции пассивной гемагглютинации) показало, что 1 % водно-этанольный экстракт Астрагала лисьего способен ослаблять супрессивное действие циклофосфамида, нормализуя клеточно-опосредованную иммунную реакцию гиперчувствительности замедленного типа, оказывая при этом незначительное влияние в отношении гуморального звена иммунитета, которое проявляется в увеличении титра антител.
Ключевые слова: Астрагал лисий, водно-этанольный экстракт, циклофосфамид, иммунитет, иммунная депрессия, белые мыши, периферическая кровь, реакция гиперчувствительности замедленного типа, реакция пассивной гемагглютинации, иммунотропное действие.
STUDYING IMMUNOTROPIC ACTIVITY OF EXTRACTS OF ASTRAGALUS VULPINUS
IN THE ASPECT OF «DOSE-EFFECT»
Shur Yuliya V., Assistant, Astrakhan State Medical University, 121 Bakinskaya St., Astrakhan, 414000, Russia, tel.: 8-905-480-94-87, e-mail: [email protected].
Shur Vladimir Yu., Cand. Sci (Med.), Assistant, Astrakhan State Medical University, 121 Bakinskaya St., Astrakhan, 414000, Russia, tel.: 8-917-185-04-95, e-mail: [email protected].
Pustokhailov Ivan V., student, Faculty of General Medicine, Astrakhan State Medical University, 121 Bakinskaya St., Astrakhan, 414000, Russia, tel: 8-960-859-76-22, e-mail: [email protected].
We have studied the immunotropic effects of water-ethanol extracts of Astragalus vulpinus in increasing concentrations on the immune response and peripheral blood of Balb/c white mice under conditions of cyclophosphamide-induced immunosuppression.
It has been found that the extract of Astragalus vulpinus has a pronounced effect on the leukocyte index of animals under conditions of immunodepression caused by the administration of cyclophosphamide. Water-ethanol extract shows particular activity in relation to the neutrophilic white blood sprout, causing an increase in the number of stab neutrophils in various concentrations.
The study of specific immune response reactions in experimental animals, such as delayed type hypersensitivity reaction and treponema pallidum hemagglutination assay indices, showed that 1 % Astragalus water-ethanol extract can weaken the suppressive effect of cyclophosphamide, normalizing the cell-mediated immune delayed type hypersensitiv-ity reaction, while having a slight effect on the humoral immunity, manifested by an increase in antibody titer.
Key words: Astragalus vulpinus, water-ethanol extract, cyclophosphamide, immunity, immune depression, white mice, peripheral blood, delayed type hypersensitivity reaction, passive hemagglutination reaction, immunotropic action.
Введение. Сегодня одной из самых востребованных в современной фармакологии является группа иммунотропных препаратов, что обусловлено их способностью оптимизировать иммунный ответ в процессе комплексного лечения инфекционных и воспалительных заболеваний [2, 5, 8]. Широкий диапазон применения иммунотропных средств связан с ростом количества патологических процессов, в генезе которых иммунный дисбаланс играет важнейшую роль. В последние годы установлено, что к группе иммуноопосредованных заболеваний относят не только инфекционно-воспалительные и аутоиммунные процессы, но и весь спектр дизрегуляционной патологии, обусловленной нарушением иммунной регуляции многих физиологических реакций в организме [9, 15].
Наряду с часто используемыми в медицинской практике иммунотропными средствами синтетического происхождения, хорошо зарекомендовали себя препараты, полученные из лекарственных растений [7]. Преимущество иммунотропных лекарственных средств растительного происхождения определяется тем фактом, что они, являясь по своей природе естественными биогенными соединениями, в результате эволюционно сложившихся механизмов метаболизма живого организма малотоксичны и достаточно эффективны [1].
Иммунотропные свойства биологически активных веществ (БАВ), содержащихся в растениях, часто сочетаются с их противомикробной и противовоспалительной активностью. Такая комбинация фармакологических эффектов особенно актуальна при профилактике и лечении инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных резистентными к традиционной противомикробной терапии и персистирующими микроорганизмами [6]. Иммунотропная и антимикробная активность лекарст-
венных растений обусловлена содержанием в них фенольных соединений, полисахаридов и сапонинов, биологическая роль которых в растительном организме заключается в борьбе с огромным числом поражающих его фитопатогенов [13, 14].
Исходя из вышеизложенного, поиск и изучение свойств нового сырья растительного происхождения в качестве источников для получения средств, обладающих иммунокорригующей активностью, является сегодня, несомненно, актуальным направлением в современной фармакологии и иммунологии. Примером одного из таких растений является крупный род семейства бобовых (Fabaceae) Астрагал (Astragalus), насчитывающий около 2 500 широко распространенных видов, среди которых в достаточной степени изучены свойства лишь его отдельных представителей [11, 12].
Растения рода Астрагал, содержащие богатый комплекс БАВ, обладают широким спектром фармакологической активности, достаточно подробно изученной у такого представителя рода, как Астрагал перепончатый (Astragalus membranaceus Bunge). В настоящее время имеются сведения о выраженных мембраностабилизирующих и антиоксидантных свойствах сухого экстракта корней Астрагала перепончатого. Установлено, что исследуемое фитосредство способствует восстановлению биологических субстратов, обладает хелатирующими свойствами, существенно снижает интенсивность индуцированного перекисного гемолиза эритроцитов, при этом его антирадикальная активность вполне сопоставима с активностью известного антиоксиданта ионола и превосходит таковую у аскорбиновой кислоты [4].
Курсовое введение экстракта Астрагала перепончатого в дозе 50 мг/кг белым крысам на фоне 18-часового иммобилизационного стресса оказывало стресс-протективное действие, уменьшая выраженность катаболических изменений во внутренних органах экспериментальных животных. Стресс-лимитирующее действие экстракта обусловлено его ингибирующим влиянием на процессы свобод-норадикального окисления и активацией системы антиоксидантной защиты организма [3]. Полисахариды, содержащиеся в Астрагале перепончатом, повышают антиоксидантный статус и препятствуют развитию оксидативного стресса при окислительном повреждении скелетной мускулатуры у крыс, вызванном хроническим физическим перенапряжением, развивающимся при чрезмерных беговых нагрузках, достоверно снижая в мышцах концентрацию маркеров окисления [18].
Не менее интересные данные получены при изучении свойств экстракта подземной части этого растения. Установлено, что он увеличивает число стволовых клеток в костном мозге и лимфоидных тканях, стимулирует их трансформацию в активные иммуноциты, индуцирует продукцию иммуноглобулинов и фагоцитарную активность клеток ретикуло-эндотелиальной системы [22]. Внутривенное введение полисахаридной фракции из корня Астрагала перепончатого полностью устраняет экспериментальную иммуносупрессию, вызванную циклофосфамидом [20].
Биологические свойства Астрагала перепончатого не ограничиваются только его антиокси-дантной и иммуномодулирующей активностью. Так, экспериментально доказано, что сапонины корней Астрагала перепончатого обладают противоопухолевыми свойствами, подавляя рост клеток рака толстой кишки человека НТ-29 и аденокарциномы желудка in vitro посредством стимуляции апоптоза через активацию каспазного механизма [16, 17]. Сумма полисахаридов Астрагала перепончатого в высокой дозе значительно уменьшает жизнеспособность клеток рака печени HepG2 [23]. Полисахариды, содержащиеся в Астрагале перепончатом, ингибируют рост клеток гепатоцеллюлярной карциномы мышей за счет повышения уровня интерлейкинов-2, -6, фактора некроза опухоли-альфа, увеличения экспрессии белка Вах и «блокады» экспрессии белка Вс1-2, что способствует апоптозу опухолевых клеток [19].
Экстракт Астрагала перепончатого также является перспективным средством профилактики и лечения острого вирусного миокардита, вызванного вирусом Коксаки группы B: он способен подавлять репликацию Коксаки-вируса В-2 в культуре клеток сердца крыс на раннем этапе инфицирования [21].
Значительный спектр фармакологической активности БАВ Астрагала перепончатого привлек внимание исследователей и к другим представителям рода Астрагал, в частности, Астрагалу шерсти-стоцветковому (Astragalus dasyanthus Pall.), Астрагалу солодколистному (Astragalus glycyphyllos L.), а также к произрастающему на территории Астраханской области Астрагалу лисьему (Astragalus vulpinus Willd.).
Цель: изучить влияние водно-этанольных экстрактов Астрагала лисьего (Astragalus vulpinus Willd.) на некоторые показатели иммунного ответа и периферической крови белых мышей линии Balb/c в условиях иммунной патологии, вызванной внутрибрюшинным введением циклофосфамида.
Материалы и методы исследования. Объектом исследования явились 54 белые мыши линии Balb/c 3-месячного возраста, содержавшиеся в стандартных условиях вивария при естественном освещении c соблюдением этических норм и правил лабораторной практики, в соответствии с Приказом Минздрава России № 199н от 01.04.2016 «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики».
Для установления иммунотропного влияния из сырья Астрагала лисьего были приготовлены водно-этанольные экстракты в возрастающих концентрациях (1, 3, 5, 10 %).
Все животные были разделены на 6 групп (n = 9):
• 1 группу составили контрольные особи, которым в течение 14 дней через зонд вводили физиологический раствор, при этом на 8, 9 и 10 дни эксперимента животным внутрибрюшинно вводили воду для инъекций в количестве, эквивалентном раствору циклофосфамида (ЦФА);
• 2 группа - животные, которым в течение 14 дней через зонд вводили физиологический раствор, при этом на 8, 9 и 10 дни эксперимента животным внутрибрюшинно вводили раствор ЦФА в дозе 125 мг/кг в сутки;
• 3 группа - особи, получавшие внутрижелудочно на протяжении 14 дней 1 % жидкий экстракт Астрагала лисьего и внутрибрюшинно в те же сроки, что и животные 2 группы, раствор ЦФА в той же дозе;
• 4 группа - животные, получавшие внутрижелудочно на протяжении 14 дней 3 % жидкий экстракт Астрагала лисьего и внутрибрюшинно на 8-10 сутки раствор ЦФА в аналогичной дозе;
• 5 группа - мыши, получавшие внутрижелудочно в течение 14 дней 5 % жидкий экстракт Астрагала лисьего и внутрибрюшинно на 8-10 сутки раствор ЦФА в той же дозе, что и животные предыдущих групп;
• 6 группа - особи, получавшие внутрижелудочно в течение 14 дней 10 % жидкий экстракт Астрагала лисьего и внутрибрюшинно в вышеуказанные дни раствор ЦФА в стандартной дозе 125 мг/кг в сутки.
Для изучения функциональной активности иммунной системы животных применяли следующие стандартные иммунофармакологические методы: реакция гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) с определением индекса реакции, реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) с определением титра антител, анализ показателей лейкоцитарной формулы [10].
Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакетов программ: Microsoft Office Excel 2007 («Microsoft», США), BIOSTAT 2008 Professional 5.1.3.1. («Analyst-Soft Inc.», США). При обработке полученных результатов использовали параметрический метод с определением t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия в группах сравнения оценивали при постоянно выбранном уровне значимости p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение. Общее количество лейкоцитов в контрольной группе составило 9,03 ± 0,90 х 109/л, тогда как во 2 группе животных на фоне иммунной патологии, вызванной введением ЦФА, наблюдалась выраженная лейкопения, общее количество лейкоцитов снизилось на 62,5 % и составило 3,39 ± 0,42 х 109/л (p < 0,001). У животных, получавших 1 % раствор Астрагала лисьего на фоне иммуносупрессии, общее количество лейкоцитов было ниже контрольных значений на 59 % и на 9 % больше, чем во 2 группе и составило 3,72 ± 0,25 х 109/л, что оказалось значительно ниже контрольных показателей (pi < 0,001 и p2 > 0,05, соответственно). В группе животных, получавших 3 % экстракт Астрагала лисьего и подвергавшихся иммуносупрессии ЦФА, количество лейкоцитов зафиксировано на 12 % выше, чем в группе с иммунодепрессией 3,80 ± 0,14 х 109/л (р1 < 0,001 и p2 > 0,05, соответственно). В опытной группе особей, получавших 5 % экстракт растения и также получавших ЦФА, наблюдалось значимое повышение общего количества лейкоцитов на 29 % по сравнению с показателями животных 2 контрольной группы (р1 < 0,001 и p2 > 0,05, соответственно). В группе животных, получавших 10 % экстракт и ЦФА, общее количество лейкоцитов было равным - 3,87 ± 0,60 х 109/л, что оказалось на 57 % ниже контрольных значений и выше на 14 %, чем у мышей 2 группы, получавших ЦФА (р1 < 0,001 и p2 > 0,05).
При подсчете лейкоцитарной формулы были получены следующие результаты: в контрольной группе количество палочкоядерных нейтрофилов было равным - 2,22 ± 0,48 %, сегментоядерных нейтрофилов оказалось 22,55 ± 1,21 %, лимфоциты были равны 68,44 ± 1,73 %, количество моноцитов составило 3,77 ± 0,47 %.
Во 2 контрольной группе животных, подвергавшихся иммуносупрессии ЦФА, были отмечены следующие результаты: количество сегментоядерных нейтрофилов увеличилось на 25 % (p1 > 0,05), при этом отмечался значительный сдвиг лейкоцитарной формулы влево - количество палочкоядерных
нейтрофилов почти в 8 раз превысило «нормальные» значения и составило 16,0 ± 0,80 % (р! > 0,05). Количество лимфоцитов было ниже на 31 % и соответствовало 47,0 ± 0,94 % (р! > 0,05). Количество моноцитов снизилось на 38 % по сравнению с 1 контрольной группой (р! < 0,05).
Анализ показателей лейкоцитарной формулы в группе особей, получавших 1 % экстракт Астрагала лисьего, выявил следующие значения: количество сегментоядерных нейтрофилов оказалось равным 22,22 ± 1,05 %, что практически не отличалось от значений в контрольной группе и на 26 % превышало показатель во 2 контрольной группе (р1 > 0,05 и р2 < 0,01, соответственно). При этом также отмечался сдвиг лейкоцитарной формулы влево с появлением большого количества палочкоядер-ных нейтрофилов (12,89 ± 0,61 %, при р! > 0,05), хотя их число оказалось несколько меньше, чем во 2 контрольной группе (р2 < 0,01). Лимфоциты были на 27 % выше, чем в группе животных, подвергнутых индуцированной ЦФА-иммунодепрессии (р!2 > 0,05), количество моноцитов у мышей на 21 % превышало их значения по сравнению с 1 контрольной группой и выросло на 95 % по сравнению с животными 2 группы (р12 > 0,05).
В группе мышей, получавших экстракт Астрагала лисьего в концентрации 3 %, количество сегментоядерных нейтрофилов практически не отличалось от контрольных значений и составило 21,0 ± 3,25 % (р! > 0,05 и р2 < 0,05, соответственно), однако изменение количества палочкоядерных нейтрофилов в этой группе имело различную направленность: у 45 % особей оно было низким и составило 3,0 ± 0,41 % (р!2 > 0,05), у остальных 55 % мышей количество палочкоядерных нейтрофилов оказалось значительно выше и было равным 26,80 ± 3,84 % (р!2 > 0,05). В этой же группе отмечена индивидуальная чувствительность к действию введенного экстракта в отношении лимфоцитов: у 55 % особей отмечался лимфоцитоз и количество лимфоцитов составило 75,60 ± 3,93 % (р!2 > 0,05), тогда как у остальных животных была выявлена лимфоцитопения, где количество лимфоцитов оказалось равным 32,50 ± 1,70 % (р!2 < 0,001). В этой же опытной группе у 5 особей в мазке крови отсутствовали моноциты, у остальных животных этой группы их количество составило 3,0 ± 1,05 % (р!2 > 0,05).
В группе животных, подвергнутых индуцированной иммунопатологии и получавших внутри-желудочно 5 % экстракт Астрагала лисьего, наблюдался выраженный нейтрофилез, преимущественно за счет большого числа палочкоядерных нейтрофилов. Количество сегментоядерных нейтрофилов у мышей этой группы на 31 % было больше, чем в контрольной группе и на 5 % выше показателя во 2 группе (р! 2 > 0,05), при этом число палочкоядерных нейтрофилов достигало высоких значений (34,88 ± 0,67 %) (р1, 2 < 0,05). Количество лимфоцитов при этом было на 49 % ниже контрольных значений и ниже на 26 % по сравнению со 2 контрольной группой (р!2 < 0,001). Отмечена выраженная моноцитопения: количество моноцитов оказалось на 53 % меньше, чем у животных контрольной группы и на 24 % ниже, чем у особей с иммунодепрессией (р! < 0,05 и р2 < 0,05, соответственно).
Интересные результаты были получены в опытной группе лабораторных животных, получавших 10 % экстракт Астрагала лисьего. На фоне указанной выше лейкопении у мышей данной группы отмечался резко выраженный нейтрофилез: общее количество нейтрофилов у животных этой группы составило 77,65 %, из них число сегментоядерных нейтрофилов увеличилось на 67 % по сравнению с 1 группой и на 34 % по сравнению со 2 группой (р!2 < 0,001), а количество палочкоядерных нейтрофилов было значительно выше (39,88 ± 1,74 %) (р!2 < 0,001). У животных данной группы на этом фоне отмечалась выраженная лимфоцитопения: количество лимфоцитов оказалось на 69 % ниже нормы и на 55 % меньше показателя у мышей 2 группы (р!2 < 0,05), число моноцитов было на 68 % ниже показателя в контроле и уменьшилось на 48 % по сравнению с данным показателем у мышей с имму-нодепрессией (р! < 0,001 и р2 < 0,05, соответственно).
Таким образом, было установлено, что водно-этанольные экстракты Астрагала лисьего в концентрациях 5 и 10 % усиливают иммуносупрессивное действие циклофосфамида.
При изучении воздействия различных концентраций экстракта Астрагала лисьего на показатели периферической крови у иммунодепрессированных животных было установлено, что изучаемое растение оказывает выраженное влияние на параметры лейкоцитарной формулы животных, получавших циклофосфамид. Выраженную стимулирующую активность водно-этанольный экстракт растения проявляет в отношении нейтрофильного ростка белой крови, вызывая в основном в различных концентрациях увеличение числа палочкоядерных нейтрофилов. Единственным исключением является эффект 3 % экстракта Астрагала лисьего, где у 4 из 9 опытных особей он не оказал выраженного стимулирующего эффекта. Помимо этого, 3 % экстракт Астрагала лисьего у 5 особей вызвал развитие выраженного лимфоцитоза, а во всех остальных случаях - лимфоцитопении (табл. 1).
Таблица 1
Влияние экстракта Астрагала лисьего на показатели лейкоцитарной формулы животных _в условиях циклофосфамид-индуцированной иммунодепресии_
Показатели крови (М ± т) Экспериментальные группы (п = 9)
Контроль 1 (физ- р-р) Контроль 2 (ЦФА) ЦФА + Астрагал 1 % ЦФА- + Астрагал 3 % ЦФА + Астрагал 5 % ЦФА + Астрагал 10 %
Общее количество лейкоцитов, х 109/л 9,03±0,90 3,39±0,42* 3,72±0,25~™ 3,80±0,14~™ 4,36±0,35~™ 3,87±0,60~™
Палочкоядерные нейтрофилы, % 2,22±0,48 16,0±0,80* 12,89±0,61 ** |3,0±0,41~* Т26,80±3,84*# 34,88±0,67** 39,88±1,74"™
Сегментоядерные нейтрофилы, % 22,55±1,21 28,11±0,97* 22,22±1,05** 21,0±3,25*# 29,55±2,10*# 37,77±1,20**
Лимфоциты, % 68,44±1,73 47,0±0,94* 59,77±1,79*# 432,50±1,70™"" Т75,60±3,93****#### 34,77±3,43** 21,10±0,85*#
Моноциты, % 3,77±0,47 2,33±0,53* 4,55±0,38** 3,0±1,05 **** в 5 случаях «0» 1,78±0,49*# 1,22±0,27"**
Примечание:* - р1 < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001; **** - р > 0,05 - относительно контроля 1 (физ. р-р); # - р2<0,05; ## - р < 0,01; ### - р < 0,001; #### - р > 0,05 - относительно контроля 2 (ЦФА); { - снижение уровня показателей в 4-х случаях, | - повышение уровня показателей в 5 случаях. (^критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони для множественных сравнений)
Влияние водно-этанольных экстрактов Астрагала лисьего в различных концентрациях на состояние гуморального иммунитета у лабораторных животных оценивали по титру антител после иммунизации эритроцитами барана (ЭБ). Влияние на клеточное звено иммунного ответа оценивали по РГЗТ согласно стандартной методике [15].
Внутрибрюшинное введение ЦФА в дозе 125 мг/кг сопровождалось снижением индекса кле-точно-опосредованной РГЗТ на 30,3 % и тотальным подавлением процесса антителообразования, проявляющегося отсутствием РПГА, что, видимо, связано с активацией Т-супрессорного звена иммунитета. Введение 1 % водно-спиртового экстракта Астрагала лисьего подопытным животным, получавшим его на фоне ЦФА-индуцированной иммунопатологии, вызвало коррекцию индекса РГЗТ до нормальных значений и оказало в отношении гуморального иммунитета незначительный эффект, проявившийся в увеличении титра антител. В остальных группах экспериментальных животных, которым вводили 3, 5 и 10 % раствор экстракта Астрагала лисьего на фоне иммунодепрессии, не наблюдалось нормализации показателя индекса РГЗТ, титр антител отсутствовал (табл. 2).
Таблица 2
Влияние экстрактов Астрагала лисьего на формирование показателей РГЗТ и РПГА _в условиях циклофосфамидной иммунодепрессии_
Показатели (М ± т) Экспериментальные группы (п = 9)
Контроль 1 (физ. р-р) Контроль 2 (ЦФА) ЦФА + Астрагал 1 % ЦФА + Астрагал 3 % ЦФА + Астрагал 5 % ЦФА- + Астрагал 10%
Индекс РГЗТ, М+т, % 6,22±0,72 4,33±0,33* 6,11 ±0,42** 3,0±0,75**** 2,78±0,32**** 2,56±0,58****
Титр антител в РПГА, М+т, 42,81±8,95 0 * 0,6** 0 0 0
Примечание:* - р1 < 0,05; ** - р1 < 0,01; - относительно контроля 1 (физ. р-р.); # - р2<0,05; ## - р2 < 0,01; - относительно контроля 2 (ЦФА); критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони для множественных сравнений)
Заключение. Результаты проведенного экспериментального исследования позволяют сделать вывод о том, что водно-спиртовой экстракт Астрагала лисьего в зависимости от концентрации вводимой дозы проявляет иммунотропные свойства различной направленности. В концентрации 1 % он оказывает иммунокорригирующее действие на фоне циклофосфамид-индуцированной иммуноде-прессии, тогда как в более высоких концентрациях способен подавлять реакции иммунного ответа, усугубляя иммуносупрессивный эффект циклофосфамида, что свидетельствует о необходимости дальнейшего детализированного изучения иммунотропных свойств экстракта Астрагала лисьего.
Список литературы
1. Абатуров, А. Е. Фитотерапия в лечении и профилактике острых респираторных заболеваний у детей / А. Е. Абатуров // Природная медицина. - 2011. - № 7. - С. 56-59.
2. Азнабаева, Л. Ф. Иммунопатогенез хронических воспалительных заболеваний гортани / Л. Ф. Азнабаева, Н. А. Арефьева, А. Н. Даянов // Вестник оториноларингологии. - 2012. - № 6. - С. 27-29.
3. Батоцыренова, Э. Т. Антистрессорное действие сухого экстракта астрагала перепончатого / Э. Т. Батоцыренова, Л. Н. Шантанова, А. А. Торопова, О. Д.-Д. Цыренжапова, Э. А. Алексеева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2012. - № S3. - С. 55-59.
4. Батоцыренова, Э. Т. Мембраностабилизирующая и антиоксидантная активность сухого экстракта Astragalus membranaceus / Э. Т. Батоцыренова, А. А. Торопова, Л. М. Танхаева, Л. Н. Шантанова, Э. А. Алексеева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2012. - № 12. - С. 15-18.
5. Железникова, Г. Ф. Иммунопатогенез инфекционно-воспалительных заболеваний центральной нервной системы / Г. Ф. Железникова, Н. В. Скрипченко // Журнал инфектологии. - 2011. - Т. 3, № 2. -С. 28-32.
6. Караулов, А. В. Иммунотерапия инфекционных болезней: проблемы и перспективы / А. В. Караулов, О. В. Калюжин // Терапевтический архив. - 2013. - Т. 85, № 11. - С. 100-108.
7. Козлов, И. Г. Иммунопатогенез дерматологических заболеваний / И. Г. Козлов. - М.: Ваш полиграфический партнер, 2010. - 80 с.
8. Конович, Е. А. Иммунопатогенез воспалительных заболеваний кишечника / И. Г. Конович, И. Л. Халиф, М. В. Шапина // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2013. -Т. 23, № 4. - С. 69-78.
9. Кубраков, К. М. Состояние иммунитета у нейрохирургических больных с гнойно-воспалительными осложнениями // К. М. Кубраков, А. Н. Косинец, Е. И. Скребло // Вестник Витебского государственного медицинского университета. - 2008. - Т. 7, № 3. - С. 90-95.
10. Миронов, А. Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств : в 2 ч. / А. Н. Миронов, Н. Д. Бунатян, А. Н. Васильев, О. Л. Верстакова, М. В. Журавлева, В. К. Лепахин, Н. В. Коробов, В. А. Меркулов, С. Н. Орехов, И. В. Сакаева, Д. Б. Утешев, А. Н. Яворский - М. : Гриф и К, 2012. - Ч. I. - 944 с.
11. Сергалиева, М. У. Биологическая активность экстрактов растений рода Astragalus / М. У. Сергалиева, М. В. Мажитова, М. А. Самотруева // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 5. - Режим доступа: http: www.science-education.ru/128-21809, свободный. - Заглавие с экрана. - Яз. рус. - Дата обращения: 28.09.2015.
12. Сергалиева, М. У. Растения рода Астрагал: перспективы применения в фармации / М. У. Сергалиева, М. В. Мажитова, М. А. Самотруева // Астраханский медицинский журнал. - 2015. - Т. 10, № 2. - С. 17-31.
13. Сычев, И. А. Биологическая активность растительных полисахаридов / И. А. Сычев, О. В. Калинкина, Е. А. Лаксаева // Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. - 2009. - № 4. -С. 143-148.
14. Титов, В. Ю. Молекулярно-генетические механизмы устойчивости высших растений к патогенам: обзор / В. Ю. Титов // Экологическая безопасность в АПК. Реферативный журнал. - 2001. - № 2. - С. 336-338.
15. Трунова, Л. А. Иммунопатогенез воспалительных заболеваний придатков матки у девушек пубертатного возраста / Л. А. Трунова, О. М. Горбенко, А. П. Шваюк, О. О. Обухова, В. В. Черных, Н. И. Анисимова, А. Н. Трунов // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. - 2010. - Т. 8, № 4. - С. 215-217.
16. Auyeung, K. K. Astragalus saponins modulate cell invasiveness and angiogenesis in human gastric adenocarcinoma cells / K. K. Auyeung, P. K. Woo, P. C. Law, J. K. Ko // Journal Ethnopharmacol. - 2012. - Vol. 141, № 2. - Р. 635-641.
17. Auyeung, K. K. Astragalus saponins modulate mTOR and ERK signaling to promote apoptosis through the extrinsic pathway in HT-29 colon cancer cells / K. K. Auyeung, N. L. Mok, C. M. Wong, C. H. Cho, J. K. Ko // Int. Journal Mol. Med. - 2010. - Vol. 26, № 3. - Р. 341-349.
18. Deng, Z. Effect of Astragalus membranaceus polysaccharides on oxidative damage in skeletal muscle of exhaustive exercise rats / Z. Deng, Q. Hu // African Journal of Agricultural Research. - 2011. - Vol. 6, № 17. -Р. 4086-4090.
19. Huang, W. H. Astragalus polysaccharide induces the apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells by decreasing the expression of Notch1 / W. H. Huang, W. R. Liao, R. X. Sun // International Journal of Molecular Medicine - 2016. - Vol. 38, № 2. - P. 551-557.
20. Jiang, J. Effects of Astragalus polysaccharides on immunologic function of erythrocyte in chickens infected with infectious bursa disease virus / J. Jiang, C. Wu, H. Gao J. Song, H. Li // Vaccine. - 2010. - Vol. 28, № 34. -Р. 5614-5616.
21. Li, S. G. Effects of Astragalus polysaccharide on nephritis induced by cationic bovine serum albumin in rats / S. G. Li, Y. Chen, Y. Q. Zhang // Zhong Yao Cai. - 2010. - Vol. 33, № 12. - Р. 1913-1916.
22. Wang, T. Enhancement of non-specific immune response in sea cucumber (Apostichopus japonicas) by Astragalus membranaceus and its polysaccharides / T. Wang, Y. Sun, L. Jin, Y. Xu, L. Wang, T. Ren, K. Wang // Fish Shellfish Immunol. - 2009. - Vol. 27, № 6. - Р. 757-762.
23. Yejin, W. Inhibition of Astragalus membranaceus polysaccharides against liver cancer cell HepG2 / W. Yejin, W. Yanqun // African Journal Microbiol Res. - 2010. - Vol. 4, № 20. - Р. 2181-2183.
References
1. Abaturov A. E. Fitoterapiya v lechenii i profilaktike ostrykh respiratornykh zabolevaniy u detey [Herbal medicine in the treatment and prevention of acute respiratory infections in children]. Medical Nature, 2011, no. 7, pp. 56-59.
2. Aznabaeva L. F., Arefeva N. A., Dayanov A. N. Immunopatogenez khronicheskikh vospalitel'nykh zabolevaniy gortani [Immunopathogenesis of chronic inflammatory diseases of the pharynx]. Vestnik otorinolaringologii. [Bulletin of Otorhinolaryngology], 2012, no. 6, pp. 27-29.
3. Batotsyrenova E. T., Shantanova L. N., Toropova A. A., Tsyrenzhapova O. D.-D., Alekseeva E. A. Antistressornoe deystvie sukhogo ekstrakta astragala pereponchatogo [The stress-protective effect of the astragalus membranaceus dry extract]. Vestnik Buryatskogo gosudarstvennogo universiteta. [Bulletin of the Buryat State University], 2012, no. S3, pp. 55-59.
4. Batotsyrenova E. T., Toropova A. A., Tankhaeva L. M., Shantanova L. N., Alekseeva E. A. Membranostabiliziruyushchaya i antioksidantnaya aktivnost' sukhogo ekstrakta Astragalus membranaceus [Membrane stability and antioxidant activities of dry extract of Astragalus Membranaceus]. Vestnik Buryatskogo gosudarstvennogo universiteta. [Bulletin of the Buryat State University], 2012, no. 12, pp. 15-18.
5. Zheleznikova G. F., Skripchenko N. V. Immunopatogenez infektsionno-vospalitel'nykh zabolevaniy tsentral'noy nervnoy sistemy [Immunopathogenesis of infectious-inflammatory diseases of central nervous system]. Zhurnal infektologii. [Journal of Infectology], 2011, vol. 3, no. 2, pp. 28-32.
6. Karaulov A. V., Kalyuzhin O. V. Immunoterapiya infektsionnykh bolezney: problemy i perspektivy [Immunotherapy for infectious diseases: challenges and prospects]. Terapevticheskiy arkhiv. [Therapeutic Archive], 2013, vol. 85, no. 11, pp. 100-108.
7. Kozlov I. G. Immunopatogenez dermatologicheskikh zabolevaniy [Immunopathogenesis of dermatological diseases]. Moscow, Vash poligraficheskiy partner [Your printing partner], 80 p.
8. Konovich E. A., Khalif I. L., Shapina M. V. Immunopatogenez vospalitel'nykh zabolevaniy kishechnika [Immunopathogenesis of inflammatory intestinal disease]. Rossiyskiy zhurnal gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii. [Russian Journal of Gastroenterology, Hepatology, Coloproctology], 2013, vol. 23, no. 4, pp. 69-78.
9. Kubrakov K. M., Kosinets A. N., Skreblo E. I. Sostoyanie immuniteta u neyrokhirurgicheskikh bol'nykh s gnoyno-vospalitel'nymi oslozhneniyami [Immunity in neurosurgical patients with purulent-inflammatory complications]. Vestnik Vitebskogo gosudarstvennogo meditsinskogo universiteta. [Vestnik of Vitebsk State Medical University.], 2008, vol. 7, no. 3, pp. 90-95.
10. Mironov A. N., Bunatyan N. D., Vasil'ev A. N., Verstakova O. L., Zhuravleva M. V., Lepakhin V. K., Korobov N. V., Merkulov V. A., Orekhov S. N., Sakaeva I. V., Uteshev D. B., Yavorskiy A. N. Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskikh issledovaniy lekarstvennykh sredstv. Chast' I [The guidelines for preclinical studies of pharmaceuticals. Part I]. Moscow, Grif i K, 2012, 944 p.
11. Sergalieva M. U., Mazhitova M. V., Samotrueva M. A. Biologicheskaya aktivnost' ekstraktov rasteniy roda Astragalus [Biological activity of extracts of plants of the genus Astragalus]. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. [Modern Problems of Science and Education], 2015, no. 5, Availible at: http: www.science-education.ru/128-21809 (accessed 09 September 2013).
12. Sergalieva M. U., Mazhitova M. V., Samotrueva M. A. Rasteniya roda Astragal: perspektivy primeneniya v farmatsii [Plants of the genus Astragalus: prospects of application in pharmacy]. Astrakhanskiy meditsinskiy zhurnal. [Astrakhan Medical Journal], 2015, vol. 10, no. 2, pp. 17-31.
13. Sychev I. A., Kalinkina O. V., Laksaeva E. A. Biologicheskaya aktivnost' rastitel'nykh polisakharidov [Biological activity of the vegetable polysaccharides]. Rossiyskiy mediko-biologicheskiy vestnik im. akademika I. P. Pavlova [I.P. Pavlov Russian Medical Biological Herald], 2009, no. 4, pp. 143-148.
14. Titov V. Yu. Molekulyarno-geneticheskie mekhanizmy ustoychivosti vysshikh rasteniy k patogenam: obzor [Molecular genetic mechanisms of resistance of higher plants to pathogens: a review]. Ekologicheskaya bezopasnost' v APK. Referativnyy zhurnal. [Environmental Safety in the AIC. Abstract Journal], 2001, no. 2, pp. 336-338.
15. Trunova L. A., Gorbenko O. M., Shvayuk A. P., Obukhova O. O., Chernykh V. V., Anisimova N. I., Trunov A. N. Immunopatogenez vospalitel'nykh zabolevaniy pridatkov matki u devushek pubertatnogo vozrasta [Immunopathogenesis of inflammatory diseases of the uterus appendages in adolescent girls]. Vestnik Novosibirskogo gosudarstvennogo universiteta. Seriya: Biologiya, klinicheskaya meditsina. [Bulletin of Novosibirsk State University. Series: Biology, Clinical Medicine], 2010, vol. 8, no. 4, pp. 215-217.
16. Auyeung K. K., Woo P. K., Law P. C., Ko J. K. Astragalus saponins modulate cell invasiveness and angiogenesis in human gastric adenocarcinoma cells. Journal Ethnopharmacol., 2011, vol. 141, no. 2, рр. 635-641.
17. Auyeung K. K., Mok N. L, Wong C. M., Cho C. H., Ko J. K. Astragalus saponins modulate mTOR and ERK signaling to promote apoptosis through the extrinsic pathway in HT-29 colon cancer cells. Int. Journal Mol. Med, 2010, vol. 26, no. 3, рр. 341-349.
18. Deng Z., Hu Q. Effect of Astragalus membranaceus polysaccharides on oxidative damage in skeletal muscle of exhaustive exercise rats. African Journal of Agricultural Research, 2011, vol. 6, no. 17, pp. 4086-4090.
19. Huang W. H., Liao W. R., Sun R. X. Astragalus polysaccharide induces the apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells by decreasing the expression of Notch1. International Journal of Molecular Medicine, 2016, vol. 38, no. 2, pp. 551-557.
20. Jiang, J., Wu C., Gao J. Song H., Li H. Effects of Astragalus polysaccharides on immunologic function of erythrocyte in chickens infected with infectious bursa disease virus. Vaccine, 2010, vol. 28, no. 34, pp. 5614-5616.
21. Li, S. G., Chen Y., Zhang Y. Q. Effects of Astragalus polysaccharide on nephritis induced by cationic bovine serum albumin in rats. Zhong Yao Cai, 2010, vol. 33, no. 12, pp. 1913-1916.
22. Wang T., Sun Y., Jin L., Xu Y., Wang L., Ren T., Wang K. Enhancement of non-specific immune response in sea cucumber (Apostichopus japonicas) by Astragalus membranaceus and its polysaccharides. Fish Shellfish Immunol., 2009, vol. 27, no. 6, pp. 757-762.
23. Yejin W., Yanqun W. Inhibition of Astragalus membranaceus polysaccharides against liver cancer cell HepG2. African Journal Microbiol Res., 2010, vol. 4, no. 20, pp. 2181-2183.
