CC BY
44
www.sibac.info
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
4.3. ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ПИРИМИДИНА В АСПЕКТЕ «ДОЗА-ЭФФЕКТ»
Цибизова Александра Александровна
ст. преподаватель кафедры фармакогнозии, фармацевтической технологии и биотехнологии, Астраханский государственный медицинский университет,
РФ, г. Астрахань E-mail: sasha3633@yandex. ru
Самотруева Марина Александровна
д-р мед. наук, зав. кафедрой фармакогнозии, фармацевтической технологии и биотехнологии, Астраханский государственный медицинский университет,
РФ, г. Астрахань E-mail: ms1506@mail.ru
Тюренков Иван Николаевич
д-р мед. наук, профессор, чл.-кор. РАН, зав. кафедрой фармакологии и биофармации ФУВ, Волгоградский государственный медицинский университет,
РФ, г. Волгоград, E-mail: fibfuv@mail.ru
Озеров Александр Александрович
д-р хим. наук, профессор, зав. кафедрой фармацевтической химии и токсикологической химии, Волгоградский государственный медицинский университет,
РФ, г. Волгоград, E-mail: post@volgmed. ru
86
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
СибАК
www. sibac. info
Глухова Елена Григорьевна
мл. науч. сотр. НИИ фармакологии, Волгоградский государственный медицинский университет,
РФ, г. Волгоград, E-mail: nost@yolgmed. ru
THE STUDY OF IMMUNOTROPIC ACTION A NEW PYRIMIDINE DERIVATIVE IN THE ASPECT OF "DOSE-EFFECT"
Aleksandra Tsibizova
senior teacher of the Department ofpharmacognosy, pharmaceutical technology and biotechnology, «Astrakhan state medical university», Russia, Astrakhan
Marina Samotrueva
doctor of Medicine, Head of the Department ofpharmacognosy, pharmaceutical technology and biotechnology, «Astrakhan state medical university», Russia, Astrakhan
Ivan Tyurenkov
doctor of Medicine, professor, Corresponding Member of the RAMS, Head of the Department ofpharmacology and biopharmacy Faculty of Advanced Medical, “Volgograd state medical university”,
Russia, Volgograd
Aleksandr Ozerov
doctor of Chemical Sciences, professor, Head of the Department of pharmaceutical and toxicological chemistry, “Volgograd state medical university”, Russia, Volgograd
Elena Glukhova
junior researcher of Research institute of pharmacology, “Volgograd state medical university”, Russia, Volgograd
87
www.sibac.info
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
АННОТАЦИЯ
Показана иммунотропная активность нового производного пиримидина под лабораторным шифром «ВМА-13-03». Приведены результаты исследования зависимости иммунотропных свойств нового соединения в аспекте «доза-эффект». Установлено, что новое соединение «ВМА-13-03» в дозах 31 мг/кг и 62 мг/кг способно восстанавливать нарушенные циклофосфамидом процессы пролиферации клеток иммунокомпетентных органов.
ABSTRACT
Shown immunotropic activity of a new pyrimidine derivative under laboratory code «BMA-13-03».The results of the study of the immunotropic properties of the new connection in the aspect of “dose-effect”. It is found that the new compound "VMA-13-03" in doses of 31 mg/kg and 62 mg/kg of cyclophosphamide is able to restore the disturbed during cell proliferation of immunocompetent organs.
Ключевые слова: производные пиримидина; иммунотропная активность, циклофосфамид; иммунодепрессия.
Keywords: pyrimidine derivatives; immunotropic activity;
cyclophosphamide; immunodepression.
Иммунная система, являясь наиболее чувствительной к действию как внешних, так и внутренних факторов из всех функциональных систем, вовлечена во все физиологические и патофизиологические процессы, происходящие в организме человека [4, с. 85]. Воздействие различных патологических факторов влечет за собой появление специфических иммунологических сдвигов, роль которых может быть различной: этиопатогенетической, приводящей к развитию
иммунодепрессии или аутоиммунных нарушений; отягощающей, влекущей за собой усугубление течения патологического процесса; сопутствующей, способной привести к ухудшению результатов лечения [1, с. 75]. В связи с чем, отмечается повышенный интерес к иммунотропным препаратам не только в лечении разнообразных иммунодефицитных состояний, но и в терапии инфекционных, аутоиммунных, онкологических, соматических и других заболеваний [2, с. 57;3, с. 132; 9, с. 13].
В последние годы проводится интенсивное изучение природных нуклеотидов и нуклеозидов, обладающих широким диапазоном биологических эффектов. В настоящее время известны разнообразные физиологические и патофизиологические функции нуклеотидов,
88
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
СибАК
www. sibac info
проявляющих как краткосрочные (индукция секреции нейро-и иммуномодуляторов), так и долгосрочные (индукция пролиферации и дифференцировки клеток, а также регуляция апоптоза и процессов регенерации) [6, с. 136; 10, с. 274; 12, с. 14].
Наибольший интерес вызывают производные природных нуклеотидов пиримидинового ряда, обладающие широким спектром фармакологического действия: противомикробным, противовирусным, противовоспалительным, противоопухолевым, регенераторным и др. [5]. К числу пиримидинов, обладающих иммунотропными свойствами, относится общеизвестный препарат — метилурацил, оказывающий стимулирующее влияние на процессы регенерации тканей, лейкопоэз и антителообразование [5, с. 117]. В настоящее время совместная работа ученых Волгоградского государственного медицинского университета и Астраханского государственного медицинского университета направлена на исследование иммуно-тропных свойств новых производных пиримидина [11, с. 71].
Целью настоящего исследования явилось изучение дозозависимости иммунотропных свойств соединения под лабораторным шифром «ВМА-13-03» в норме и в условиях «циклофосфамидной» иммунодепрессии.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ. Исследования проведены на мышах обоего пола 3—4 мес. возраста линии СВА. Содержание животных соответствовало правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.396 и 51000.4-96) и Приказу Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. № 708-н «Об утверждении правил лабораторной практики» (GLP) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997 г.) [7].
Животные были разделены на группы (n=9-10): контроль
1представленживотными, получавшимиэквиобъем дистиллированной воды; контролем11 служили мыши, получавшие циклофосфамид (в дозе 100 мг/кг, внутрибрюшинно, однократно); опытные животные, которые в течение 3-х дней получали внутрибрюшинно производное пиримидина «ВМА-13-03» в дозах 15,5 мг/кг (опыт № 1), 31 мг/кг (опыт № 2), 62 мг/кг (опыт № 3) и 124 мг/кг (опыт № 4); опытные группы животных № 5—8 получали на фоне введения циклофос-фамида изучаемое производное пиримидина в дозах 15,5 мг/кг, 31 мг/кг, 62 мг/кг и 124 мг/кг соответственно.
89
www.sibac.info
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
О наличии иммунотропной активности нового производного пиримидина «ВМА-13-03» судили по изменениям массы и клеточ-ности иммунокомпетентных органов (тимуса и селезенки) [8, с. 624].
Готовили клеточные суспензии в среде 199 из расчета для селезенки 50 мг/мл, для тимуса — 10 мг/мл, фильтровали, отмывали двукратно средой 199 от частиц жировой ткани (по 10 мин при 1500 об/мин), после чего ресуспендировали в среде 199 до исходной концентрации. Суспензии лимфоидных органов для подсчета предварительно 1: 1 смешивали с 3 % уксусной кислотой, подкрашенной метиленовой синью, и подсчитывали количество ядросодержащих клеток (спленоцитов и тимоцитов) в камере Г оряева.
Статистическая обработка данных проводилась с использованием программ STATISTICA 6.0 и электронных таблиц MS Excel. Результаты были обработаны статистически с применением t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия между сравниваемыми параметрами считали статистически значимыми при р<0,05.
Результаты исследования. Введение исследуемого вещества под лабораторным шифром «ВМА-13-03» привело к дозозависимым изменениям пролиферативных процессов в селезенке и тимусе. Полученные в ходе исследования результаты представлены в таблице.
Таблица 1.
Влияние разных доз производного пиримидина «ВМА-13-03» на массу и клеточность тимуса и селезенки
Экспериментальные группы Масса селезенки, M ± m, мг Кол-во спленоцитов в селезенке, M ± m, х 106 Масса тимуса, M ± m, мг Кол-во тимоцитов в тимусе, M ± m, х 105
Контроль I (дист.вода) 109,6 ± 13,8 594,4 ± 74,9 31,3 ± 2,3 233,6 ± 36,4
Контроль II (циклофосфамид) 76,5 ± 4,8 252,8 ± 19,8* 26,5 ± 1,8 165,8 ± 24,6*
Опыт № 1: «ВМА-13-03» 15,5 мг/кг 128,0 ± 14,1 291,5 ± 72,6 32,2 ± 3,5 257,1 ± 29,7
Опыт № 2: «ВМА-13-03»31 мг/кг 127,2 ± 15,4 494,8 ± 47,4 38,3 ± 1,18* 322,4 ± 52,5
Опыт № 3: «ВМА-13-03»62 мг/кг 116,1 ± 8,2 584,3 ± 66,3 30,7 ± 2,3 296,5 ±34,6
Опыт № 4: «ВМА-13-03»124 мг/кг 107,6± 11,0 351,3 ± 58,2* 27,8 ± 1,9 251,47 ± 33,6
90
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
СибАК
www. sibac info
Опыт № 5: «ВМА-13-03» 15,5 мг/кг + циклофосфамид 91,8± 8,7 279,6 ± 27,1 28,7± 1,5 178,4± 20,4
Опыт № 6: «ВМА-13-03» 31 мг/кг + циклофосфамид 109,0± 7,8** 372,9± 16,3** 35,0±2,0** 226,5±14,0
Опыт № 7: «ВМА-13-03»62 мг/кг + циклофосфамид 110,3±5,0** 370,8±16,2** 34,1±2,1** 221,8±13,8
Опыт № 8: «ВМА-13-03»124 мг/кг + циклофосфамид 104,5±8,6** 272,2±30,4 25,6±1,9 165,5±24,1
Примечание:* — pi < 0,05 — уровень значимости различий
относительно контроляI; ** — р2 < 0,05 — уровень значимости различий относительно контроля II
Применение экспериментальным животным «ВМА-13-03» в дозе 15,5 мг/кг сопровождалось увеличением массы селезенки по сравнению с контролем более чем на 15 % (p1>0,05), а массы тимуса — всего на 3 % (p1>0,05). Количество тимоцитов после введения изучаемого вещества в указанной дозе увеличилось по сравнению с контролем не более чем на 10 % (p1>0,05), количество спленоцитов практически не изменилось.
Введение изучаемой субстанции в дозе 31 мг/кг способствовало увеличению массы селезенки на 16 % (p1>0,05), тимуса — на 22 % (p1<0,05). Увеличение числа тимоцитов произошло на 38 % (p1>0,05) по сравнению с контролем, тогда как количество спленоцитов снизилось на 17 % (p1>0,05).
При введении «ВМА-13-03» в дозе 62 мг/кг наблюдалось незначительное увеличение массы селезенки — на 6 % (p1>0,05), масса тимуса практически не изменилась. Количество тимоцитов увеличилось на 27 % (p1>0,05), в то же время количество клеток селезенки уменьшилось на 7 % (p1>0,05).
Следует отметить, что под влиянием нового производного пиримидина «ВМА-13-03» при введении в дозе 124 мг/кг масса тимуса снизилась более чем на 10 % (p1>0,05), тогда как масса селезенки практически не изменилась. При этом, количество спленоцитов уменьшилось на 40 % (p1<0,05), а количество клеток тимуса увеличилось при введении изучаемого вещества практически на 8 %.
Применение циклофосфамида привело к снижению массы селезенки на 30 % (p1>0,05) и количества клеток в ней практически
91
www.sibac.info
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
на 60 % (pi<0,05). Кроме того, отмечалось уменьшение массы тимуса на 15 % (p1>0,05) и количества клеток органа на 30 % (p1<0,05).
Применение исследуемого вещества под шифром «ВМА-13-03» на фоне «циклофосфамидной» иммунодепрессии сопровождалось выраженными изменениями и массы и клеточности иммунокомпетентных органов.
Введение вещества «ВМА-13-03» в дозе 15,5 мг/кг приводило к увеличению массы селезенки по сравнению с контролем II более чем на 40 % (p2>0,05), а массы тимуса — на 8 % (p2>0,05). При этом количество клеток селезенки и тимуса увеличиласьне более чем на 10 % (p2>0,05) и 8 % (p2>0,05).
Новое производное пиримидина в дозе 31 мг/кг на фоне иммунодепрессии привело к увеличению массы селезенки на 42 % (p2<0,05), а тимуса — на 32 % (p2<0,05). Увеличение числа спленоцитов, по отношению к контролю II, отмечалось на уровне 48 % (p2<0,05), количество тимоцитов изменилось в сторону увеличения более чем на 36 % (p2>0,05).
Введение «ВМА-13-03» в дозе 62 мг/кг животным с экспериментальной иммунодепрессией также привелок увеличению массы иммунокомпетентных органов: селезенки — на 44 % (p2<0,05), а тимуса — на 28 % (p2<0,05). Количество спленоцитов увеличилось на 47 % (p2<0,05). Увеличение клеток тимуса было отмечено более чем на 30 % (p2>0,05).
На фоне введения иммунодепрессированным животным «ВМА-13-03» в дозе 124 мг/кг статистически значимыми были лишь изменения массы селезенки (на 36,5 % при p2<0,05), тогда как остальные из изучаемых параметров оставались неизменными (p2>0,05).
Приведенные данные позволяют считать, что изучаемое в работе новое производное пиримидина под лабораторным шифром «ВМА-13-03» обладает иммуномодулирующими свойствами и наиболее выраженную активность соединение проявляет в дозах 31 мг/кг и 62 мг/кг. Следует отметить, что по мере увеличения применяемой дозы «ВМА-13-03» наблюдается либо угнетение пролиферативных процессов, либо отсутствие иммунокорригирующего влияния. На основании вышесказанного установленная в ходе данного исследования дозозависимость иммунотропного эффекта «ВМА-13-03» указывает на необходимость дальнейшего углубленного изучения данного химического соединения.
92
Современная медицина: актуальные вопросы № 8-9 (42), 2015 г
СибАК
www. sibac info
Список литературы:
1. Афиногенова В.П., Лукачев И.В., Костинов М.П. Иммунотерапия: механизм действия и клиническое применение иммунокорригирующих препаратов // Лечащий врач. — 2010. — № 4. — С. 75—78.
2. Долгушина И.И., Селянина Г.А., Шалашова М.А., Колесникова А.А., Додонов Н.П., Колесников О.Л. Оценка воздействия иммунной недостаточности на психологический статус пациентов // Иммунология Урала. — 2006. — № 1(5). — С. 57—58.
3. Золотарёва Т.А., Змиевский А.В., Насибуллин Б.А., Ярошенко Н.А. Современные представления о механизме стресс-обусловленной дисфункции клеток иммунного ответа // Мир медицины и биологии. — 2011. — № 4. — С. 132—133.
4. Инжутова А.И., Ларионов А.А., Салмина А.Б. и др. Молекулярноклеточные механизмы эндотелиальной дисфункции различного генеза // Сибирский медицинский журнал. — 2010. — № 5. — С. 85—88.
5. Макляков Ю.С., Иванова Е.В., Овчар С.А., Батурин А.Л. Новые пиримидины — стимуляторы регенерации // Биомедицина. — 2006. — № 2. — С. 117—121.
6. Мышкин В.А., Бакиров А.Б. Оксиметилурацил (очерки экспериментальной фармакологии). — Уфа: ДАР, 2001. — 218 с.
7. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. № 708-н «Об утверждении Правил лабораторной практики».
8. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. — 944 с.
9. Самотруева М.А., Цибизова А.А., Ясенявская А.Л., Озеров А.А., Тюренков И.Н. Фармакологическая активность производных пиримидинов // Астраханский медицинский журнал. — 2015. — № 1. — С. 12—29.
10. Серебряная Н.Б. Нуклеотиды как регуляторы иммунного ответа // Иммунология. — 2010. — Т. 31, — № 5. — С. 273—281.
11. Цибизова А.А., Тюренков И.Н., Самотруева М.А., Озеров А.А., Глухова Е.Г. Оценка иммунотропных свойств нового производного пиримидина // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. — 2013. — № 11. — С. 71—72.
12. Чернышенко Ю.Н., Мустафин А.Г., Гимадиева А.Р., Абдрахманов И.Б.,
Герчиков А.Я., Сафарова И.В. Синтез и антиокислительная активность аминометилированных производных 6-метилурацила // Химико-
фармацевтический журнал. — 2010. — № 3. — С. 14—16.
93
