CC BY
20
DOI: 10.48612/ddk1-bvdu-99au УДК 636.2.053:612.1
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ВИРУС-ВАКЦИНЫ «БОЛЬШЕВАК»
Красочко Петр Альбинович1, д-р вет наук, д-р биол. наук Красочко Павел Петрович1, д-р биол. наук, канд. вет. наук Машеро Владимир Александрович1, канд. вет. наук Понаськов Михаил Александрович1 Черных Олег Юрьевич2, д-р вет. наук, профессор Кривонос Роман Анатольевич2, канд. вет. наук Белоусов Василий Иванович3, д-р вет. наук, профессор
1Учреждение образования «Витебская ордена «Знак Почёта» государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Республика Беларусь
2ФГБОУВО «Кубанский государственный аграрный университет им. И.Т. Трубилина», г. Краснодар, Российская Федерация
3Федеральное государственное бюджетное учреждение «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория», г. Москва, Российская Федерация
Приведены сведения об иммуногенной активности поливалентной культуральной инак-тивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, пара-гриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной инфекции крупного рогатого скота «Большевак». Установлено, что двукратная иммунизацией поливалентной культуральной инактивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной инфекции крупного рогатого скота «Большевак» сопровождается достоверным увеличением уровня специфических антител в сыворотках крови сухостойных коров к 70-му дню. Проведенные исследования на морских свинках и белых мышах показали, что опытная партия вакцины является иммуно-генным, безвредным и стерильным биопрепаратом.
Ключевые слова: вакцина «Большевак»; иммуногенная активность; коровы; специфическая профилактик
STUDY OF IMMUNOGENICITY OF POLYVALENT VIRUS-VACCINE "BOLSHEVAK"
Krasochko Petr Albinovich1, Dr. Vet. Sci., Dr. Biol. Sci. Krasnochko Pavel Petrovich1, Dr. Biol. Sci., PhD Vet. Sci. Mashero Vladimir Alexandrovich1, PhD Vet. Sci. Ponaskov Mikhail Alexandrovich1 Chernykh Oleg Yurievich2, Dr. Vet. Sci. Krivonos Roman Anatolievich2, PhD Vet. Sci. BelousovVasily Ivanovich3, Dr. Vet. Sci.
1Institution of education "Vitebsk Order" Badge of Honor "State Academy of Veterinary Medicine", Vitebsk, Republic of Belarus
2Kuban State Agrarian University named after I. T. Trubilin, Krasnodar, Russian Federation 3 Federal State Budgetary Institution "Central Scientific and Metodological Veterinary Laboratory", Moscow, Russian Federation
Information on immunogenic activity of polyvalent culture inactivated virus-vaccine against infectious rhinotracheitis, viral diarrhea, parainfluenza-3, respiratory syncytial, rota-, coronavirus infection of cattle "Bolshevak" is given. It was established that two-fold immunization of a polyvalent culture inactivated virus-vaccine against infectious rhinotracheitis, viral diarrhea, parainfluenza-3, respiratory syncytial, rota-, coronavirus infection of cattle "Bolshevak" is accompanied by a reliable increase in the level of specific antibodies in blood sera of dry-resistant cows by the 70th day. Studies
conducted in guinea pigs and white mice showed that the experimental vaccine batch is an immuno-genic, harmless and sterile biopreparation.
Key words: "Bolshevak" vaccine; immunogenic activity; cows; specific prophylaxis
Животноводство в Республике Беларусь является ведущей отраслью сельского хозяйства. Важнейшая задача современного промышленного скотоводства направлена на повышение сохранности, и снижение заболеваемости молодняка крупного рогатого скота. Для увеличения поголовья телят и коров, производства сельскохозяйственной продукции, необходимо создать кормовую базу, строго соблюдать правила ухода, содержания, кормления, и санитарного состояния в животноводческих помещениях. Болезни телят вирусной этиологии с поражением органов дыхания и желудочно-кишечного тракта, называемые пневмоэнтеритами, согласно ветеринарной отчетности, занимают одно из ведущих мест. Пневмоэнтериты телят имеют широкое распространение, как в Беларуси, так и за рубежом. По степени распространения, смертности, вынужденному убою и недополучению привесов они превалируют над прочими заболеваниями. При этом установлено, что каждый новорожденный теленок в Беларуси переболевает до 2 раз до 6-месячного возраста. Экономический ущерб, причиняемый респираторными заболеваниями, очень велик, в результате у больных и переболевших животных снижаются привесы в 2-3 раза. Чаще всего ведущей причиной респираторных заболеваний телят являются инфекционные агенты, в том числе: вирусы, бактерии, микоплазмы, хламидии и грибы, вирулентность которых усиливается на фоне различных стрессовых факторов и иммунно-дефицитных состояний. Как правило, они протекают по типу смешанных инфекций [2, 4].
В этой связи специфическая профилактика этих инфекций является одним из наиболее эффективных мероприятий по недопущению болезней животных [1, 3, 5, 6, 7]. Возбудители инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респиратор-но-синцитиальной, рота- и коронавирусной инфекций имеют широкое распространение в животноводческих хозяйствах республики и вызывают пневмоэнтериты у телят. Учитывая эпизоотологическую ситуацию по данным болезням, была разработана опытная поливалентная культуральная инактивированная вирус-вакцина против инфекционного рино-
трахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, ре-спираторно-синцитиальной, рота-, коронави-русной инфекций крупного рогатого скота «Большевак».
Цель исследования: определить имму-ногенность поливалентной культуральной инактивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Большевак» в производственных и лабораторных условиях.
Методика исследований. Исследования проведены в условиях кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней и отраслевой лаборатории ветеринарной биотехнологии и заразных болезней животных УО «Витебская ордена «Знак Почёта» государственная академия ветеринарной медицины». Для изучения эффективности поливалентной вакцины исследования проводили в условиях СРДУП «Улишицы-Агро» Городокского района и клиники кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней УО ВГАВМ.
Для проведения исследований было сформировано 3 группы клинически здоровых коров белорусской черно-пестрой голштинизированной породы на 6-7 месяцах стельности по 5 голов в группе. Коров первой опытной группы иммунизировали инактиви-рованной вирус-вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, пара-гриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Большевак» в дозе 5,0 см3, животных второй опытной группы - 2,5 см3 внутримышечно в области крупа двукратно с интервалом 14-21 дней с соблюдением правил асептики и антисептики.
Животных контрольной группы не подвергали иммунизации. За обработанными животными было проведено клиническое наблюдение в течение 70 дней. При этом проводилась термометрия, исследовались общеклинические показатели, реакция на месте введения вакцины, состояние поедаемости кормов, продуктивность.
У пяти коров из каждой группы были отобраны сыворотки крови для определения уровня специфических антител до иммуниза-
ции, затем на 14-й, 35-й и 70-й дни после вакцинации. Полученный биологический материал доставлялся для исследования в течение 4 часов после отбора.
В сыворотке крови от вакцинированных коров определили наличие антител в вирусам инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, ко-ронавирусной инфекций крупного рогатого скота в ИФА с использованием следующих наборов: набор «IDScreen IBRgB Competition» (IDvet, Франция) или «IDEXX IBR gB X3 AbTest» (iDEXX, США) или набор «INgezim IBR Compac 2.0» (Ingenasa, Испания) для определения антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота; набор «INgezim PESTIVIRUS Compac» (Ingenasa, Испания) или набор «MonoscreenAbELISA BVDV (E0)» (Bio-X, Бельгия)для определения антител к вирусу вирусной диареи крупного рогатого скота; набор «INgezim BRSV Compac» (Ingenasa, Испания) для определения антител к респиратор-но-синтициальному вирусу крупного рогатого скота; набор «Monoscreen AbELISA Bovinero-tavirus» (Bio-X, Бельгия)для определения антител к ротавирусу крупного рогатого скота; набор «Monoscreen AbELISA Bovinecoronavirus» (Bio-X, Бельгия) для определения антител к коронавирусу крупного рогатого скота; для определения антител к возбудителю пара-гриппа-3 крупного рогатого скота в РТГА -«Набор диагностикума для серодиагностики парагриппа-3 КРС в реакции торможения ге-магглютинации (РТГА)» (Агровет, Россия).
Иммуногенность опытной партии поливалентной вакцины была проверена на лабораторных животных (морских свинках и белых мышах). Морским свинкам вакцину вводили внутримышечно в область бедра двукратно с интервалом в 21 день по 0,5 см3. У животных были взята пробы кровь до введения вакцины и через 21 день после вторичного введения вакцины.
На белых мышах иммуногенность проведена после двукратного введения вакцины в дозе 0,2 см3 внутримышечно с интервалом в 21 день. У мышей пробы крови были взяты через 21 день после второго введения вакцины.
В сыворотке крови лабораторных животных (белые мыши и морские свинки) определен титр противовирусных антител к
вирусам инфекционного ринотрахеита, ре-спираторно-синцитиальной инфекции в ИФА, к вирусу диареи - в РНГА, парагрипа-3 - в РТГА, рота- и коронавирусной инфекции - в РН.
Для выявления антител к вышеуказанным вирусам в ИФА использовали следующие наборы: для определения антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота - набор «ID Screen IBR gBCompetition» (IDvet, Франция) или «IDEXX IBR gB X3 AbTest» (IDEXX, США) или набор «INgezim IBR Compac 2.0» (Ingenasa, Испания); к респираторно-синтициальному вирусу крупного рогатого скота - набор «INgezim BRSV Compac» (Ingenasa, Испания); для определения в РТГА антител к вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота - «Набор диагностикума для серодиагностики парагриппа-3 КРС в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)» (Агровет, Россия).
Результаты исследований и их обсуждение. Результаты серологических исследований вакцинированных коров представлены на рисунке 1.
В результате проведенных серологических исследований установлено, что применение поливалентной культуральной инак-тивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота приводит к интенсивному синтезу специфических антител в организме вакцинированных животных. В сыворотке крови сухостойных коров, иммунизированных сконструированной вакциной, к 70 дню после вакцинации отмечено достоверное увеличение уровня противоротавирусных антител. Уровень антител к вирусу инфекционного ринотрахеита составил в среднем 50,44±5,509 %, парагриппа-3 - 83,67±11,867 %, ротавируса - 51,22±6,951 % и коронавиру-са - 53,89±1,604 %. В сыворотках крови не вакцинированных коров уровень специфических антител оставался практически без изменений на протяжении всего опыта.
Уровень антител к вирусам вирусной диареи и респираторно-синцитиальная инфекции определяли по оптической плотности. В таблице 1 представлены результаты исследований.
120
100
80
60
40
20
0
113,89
76,66
24,24
1 взятие
4 взятие
2 взятие 3 взятие
■ ИРТ ■ Парагрипп 3 ИРотавирус ■ Коронавирус
Рисунок 1 - Уровень специфических антител в сыворотках крови вакцинированных коров
Полученные результаты свидетельству- та-, коронавирусной инфекций крупного рога-ют об активном иммунном ответе коров на того скота.
введение поливалентной инактивированной На рисунке 2 отображены результаты
культуральной вирус-вакцины против инфек- серологических исследований сывороток кро-ционного ринотрахеита, вирусной диареи, па- ви морских свинок. рагриппа-3, респираторно-синцитиальной, ро-
Таблица 1 - Содержание антител к вирусу вирусной диареи и респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в крови коров (M±m, n=5)
Вирусная диарея* Респираторно-синцитиальная инфекция **
1 взятие 1,16±0,149 + 0,29±0,065 +
2 взятие 1,37±0,131 + 0,37±0,039 +
3 взятие 1,25±0,073 + 0,44±0,166 +
4 взятие 1,27±0,069 + 0,22±0,061 +
* чем больше оптическая плотность, тем больше антител;
** чем меньше оптическая плотность, тем больше антител
В сыворотках крови морских свинок, вакцинированных поливалентной инактиви-рованной культуральной вирус-вакциной до иммунизации титр противопарагриппозных антител составлял - 1,5+0,01 противоди-арейных, противоротовирусных и противоко-ронавирусных - 0. На 21 день после вторичного введения вакцины содержание антител значительно увеличилось. Так титр антител против вируса парагриппа 3 составил 5,0+1,23 ^2, диареи -5,0 ^2, ротавируса - 5,5 ^2, ко-ронавируса - 4,0 ^2.
В таблице 2 приведены результаты изучения содержание антител против вируса
инфекционного ринотрахеита и респира-торно-синцитиальной инфекции на морских свинках.
Из данных, приведенных в таблице 2 видно, что введение морским свинкам опытной партии вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагрипа -3, респираторно-синцитиальной, рота- и ко-ронавирусной инфекции способствует выработки противовирусных антител, что свидетельствует об иммуногенности вакцины.
Динамика титров антител у белых мышей после введения вакцины представлены в таблицах 3 и 4.
До иммунизации После иммунизации
■ Парагрипп-3 ■ Вирусная диарея ИРотавирус ИКоронавирус
Рисунок 2 - Уровень специфических антител в сыворотках крови морских свинок
Таблица 2 - Титры специфических антител против вируса инфекционного ринотрахеита и респираторно-синцитиальной инфекции в крови морских свинок (М±т, п=5)
Вирус Титр антител
До иммунизации После иммунизации
Инфекционного ринотрахеита 65,97+13,12 7,14+0,84
Респираторно-синцитиальной инфекции 0,99+0,05 0,725+0,32
Примечание: особенностью интерпретации результатов является то, что чем меньше оптическая плотность, тем выше содержание антител.
Таблица 3 - Иммуногенность поливалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота на белых мышах (в процентах) (п=4)
Антиген Инфекционный ринотрахеит* Парагрипп-3 Ротавирус Коронавирус
Опытная группа 68,02 +++ 113,61 +++++ 3,10 0 -0,82 0
Контрольная группа 89,71 +++++ 3,32 0 -6,12 0 3,67 0
*для расчета процента блокировки специфических антител ИРТ от 100 вычитали коэффициент S/N%, рассчитанного в соответствии с инструкцией к набору
Таблица 4 - Иммуногенность поливалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота на белых мышах (по оптической плотности) (п=4)
Вирусная диарея * Респираторно-синцитиальная инфекция **
Опытная группа -0,11 - 1,233 -
Контрольная группа -0,12 - 2,046 -
* Набор непрямой, поэтому только для КРС правильные результаты;
** чем меньше оптическая плотность, тем больше антител
Таблица 5 - Иммуногенность вакцины «Большевак» для белых мышей
Вирус Количество животных в группе Иммунологическая реакция Титр антител
До иммунизации После иммунизации
Диареи 4 РНГА **0 **5,0log2
Парагрипа-3 4 РТГА **1,5+0,01 5,0+1,23 log2
Ротавирус 4 РН ****0 ****5,5 log2
Коронавирус 4 РН ****0 ****4,0 log2
Выводы. Результаты серологических исследований свидетельствуют о том, что двукратная иммунизацией поливалентной культуральной инактивированной вирус-вакциной против инфекционного ринотрахе-ита, вирусной диареи, парагриппа-3, респира-торно-синцитиальной, рота-, коронавирусной инфекции крупного рогатого скота «Больше-вак» сопровождается достоверным увеличением уровня специфических антител в сыворотках крови сухостойных коров к 70-му дню.
Проведенные исследования на морских свинках и белых мышах показали, что опытная партия вакцины является иммуногенным, безвредным и стерильным биопрепаратом.
Список литературы:
1. Красочко П.А. Специфическая профилактика вирусных энтеритов телят / П.А. Красочко, М.А. Понаськов // Ветеринарное дело. 2019. - № 7. - С. 14-18.
2. Красочко П.А. Диагностика, профилактика и терапия респираторных желудочно-кишечных заболеваний молодняка/ П.А. Кра-сочко, И.А. Красочко // Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве. Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Х.С. Горегляда и
М.К. Юсковца. 1998. - С. 15-18.
3. Специфическая профилактика вирусно-бактериальных пневмоэнтеритов молодняка крупного рогатого скота /П.А. Красочко [и др.] //Ветеринарная наука - производству. 2005. -№ 38. - С. 302-305.
4. Красочко П.А. Моно- и ассоциативные вирусные респираторные инфекции крупного рогатого скота (иммунологическая диагностика, профилактика и терапия) : автореферат дис. ... д-ра вет.наук : 16.00.06 / П.А. Красочко : БелНИИЭВ им. С.Н. Вывшелесского: -Минск. 1997. - 40 с.
5. Красочко П.А. Современные подходы к специфической профилактике вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота/ П.А. Красочко, И.А. Красочко, С.Л. Борознов // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2008. - Т.6. - С. 243-251.
6.Средства специфической профилактики инфекционных болезней крупного рогатого скота и свиней : [практическое пособие] / П.А. Красочко [и др.]; ред. П.А. Красочко. - Минск : ИВЦ Минфина. 2018. - 367 с.
7. Сывороточные и вакцинные препараты для профилактики и терапии инфекционных болезней животных / Е.В. Сусский [и др.]. -Армавир. 2013. - 338 с.
DOI: 10.48612^4x1^9^^ УДК 636.2.053:612.1
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ТЕЛЯТ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ЖИВОЙ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Красочко Петр Альбинович1, д-р вет. наук, д-р биол. наук Притыченко Алеся Викторона1, канд. вет. наук Красочко Ирина Александровна1, д-р вет. наук Сайдалиев Дилшот Исмоилович2, канд. вет. наук Овчинникова Вероника Викторовна1, аспирант
