CC BY
124
Медицинская иммунология 2010, Т. 12, № 4-5, стр. 433-436 © 2010, СПб РО РААКИ
Краткие сообщения
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОФЕНОТИПА ЛИМФОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ с МИКСТ-ИНФЕКЦИЕЙ, ВЫЗВАННОЙ
ВИРУСАМИ семейства
HERPESVIRIDAE
Долгих Т.И., Соколова Т.Ф., Минакова Е.Ю.
ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Центральная научно-исследовательская лаборатория Омской государственной медицинской академии, г. Омск
Резюме. В работе отражены специфические иммунологические изменения, характерные для микст-инфекции, вызванной вирусами семейства Herpesviridae в фазе активации: увеличение количества CD3+/CD25+ и CD3+/CD4+ лимфоцитов, снижение уровня CD3+/CD95+ клеток, увеличение количества натуральных киллеров, установление новых взаимосвязей между показателями системы иммунитета. Наличие ЦМВ или ВЭБ в составе микст-инфекции вносят особенности в изменение субпопуляционного состава лимфоцитов: для ассоциации ВПГ-1/2 и ЦМВ характерно повышение уровня активированных Т-лимфоцитов и Т-хелперов, ВПГ-1/2 и ВЭБ резкое снижение количества CD3+/CD95+ лимфоцитов.
Ключевые слова: микст-инфекция, вирус герпеса 1 и 2 типов, цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр, иммунокомпетентные клетки.
Dolgikh T.I., Sokolova T.F., Minakova E.Y.
STUDIES OF LYMPHOCYTE SUBSETS IN PATIENTS WITH A MIXED INFECTION CAUSED BY THE
viruses from herpesviridae family
abstract. Present work deals with specific immunologic changes that are typical to various types of mixed infection caused by viruses from Herpesviridae family during their activation phase. These changes include increased amounts of CD3+/CD25+ lymphocytes and CD3+/CD4+ cells, decreased levels of CD3+/CD95+ cells, increased contents of natural killer cells, altered interrelations between the immune system parameters. Involvement of cytomegalovirus or Epstein-Barr virus (EBV) in the mixed infection is associated with some special changes of the lymphocyte subsets. I.e., a co-infection with herpes virus simplex (HSV) type 1/2 and cytomegalovirus is characterized by increased amounts of activated T-lymphocytes and T-helper cells, whereas mixed HSV/EBV infection is accompanied by sharp reduction in CD3+/CD95+ lymphocytes. (Med. Immunol., vol. 12, N3, pp 433-436)
Keywords: mixed infection, herpes simplex virus type 1(HSV-1), herpes simplex virus type 2 (HSV-2), cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, immunocompetent cells.
человечества герпесвирусными инфекциями из года в год нарастает, опережая скорость прироста населения Земли. Проблема герпесвирусной инфекции приобретает медико-социальный характер, а многообразие клинических проявлений, особенности возбудителей, возможность их распространения практически всеми известными путями передачи позволили Европейскому региональному бюро ВОЗ отнести герпесвирусные инфекции в группу болезней, которые
Введение
На фоне высокого уровня инфицированности вирусами семейства Herpesviridae заболеваемость
Адрес для переписки:
Долгих Татьяна Ивановна,
644001, ул. 20лет РККА, 15.
Тел.: (3812) 37-03-43.
Факс: (3812) 36-17-90.
E-mail: dolgih-ti@mail.ru
433
Долгих Т.И. и др.
Медицинская Иммунология
определяют будущее инфекционной патологии в текущем столетии [2, 6].
Длительная персистенция вирусов на фоне вторичного иммунодефицита и их реактивация, сопровождающаяся нередко рецидивами заболевания и нарастанием клинических проявлений, являются одной из проблем современной медицины. Известно, что ведущая роль в формировании противовирусного иммунитета принадлежит клеточным механизмам защиты при их взаимодействии с гуморальными факторами [1, 5]. Именно состояние Т-клеточного звена, играющего ключевую роль в формировании противогерпетического иммунитета, и эффективность межклеточного взаимодействия во многом определяют частоту, степень выраженности и продолжительность рецидивов инфекции [4]. Качество иммунного ответа непосредственно связано с активностью различных субпопуляций иммунокомпетентных клеток, а их определение позволит проводить оценку способности иммунной системы отвечать на антигенную стимуляцию [8].
Персистенция вирусов затрагивает практически все факторы противовирусного иммунитета [3]. Для инфекции, вызванной вирусами семейства Herpesviridae, характерным является переход вируса в латентную фазу. Вирусный антиген перестает экспрессироваться на поверхности клеток, и патоген становится недосягаемым для иммунных факторов. Частота активации вируса зависит от резистентности и иммунологической реактивности организма человека [7]. В период репликации вируса происходит активация иммунокомпетентных клеток. Вместе с тем, в настоящее время до конца не изучен иммунопатогенез герпесвирусных инфекций.
Цель исследования — изучить фенотип лимфоцитов у пациентов с герпесвирусной микстинфекцией.
Материалы и методы
В исследование было включено 22 женщины и 10 мужчин с хронической инфекцией, вызванной вирусами герпеса 1 и 2 типов (ВПГ-1/2) в сочетании с цитомегаловирусом (ЦМВ) или вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ). Средний возраст составил 31,9±12,2 лет. Длительность заболевания колебалась от 1 года до 14 лет, средняя длительность заболевания составила 6,1±3,6. У всех пациентов имела место вирусная микст-инфекция в фазе активации вируса, доказанной с использованием комплекса прямых (полимеразная цепная реакция, реакция иммунофлюоресценции) и непрямых (иммуноферментный анализ, иммуно-блот) лабораторных методов. Преимущественно наблюдалось сочетание инфекций, вызванных ВПГ-1/2 и ЦМВ - в 24 случаях (75%), ВПГ-1/2 и ВЭБ — в 8 случаях (25%). В дальнейшем для оценки влияния микст-инфекции на формирование иммунного ответа все пациенты, включенные в исследование, были разделены на две груп-
пы. В IA группу вошли пациенты с герпетической инфекцией, сочетающейся с ЦМВ-инфекцией, в 1Б группу - пациенты с герпетической инфекцией в сочетании с ВЭБ - инфекцией. II группу (контроль) составили 40 практически здоровых людей, сопоставимых по возрасту и полу.
Показатели общего анализа крови оценивали в автоматическом режиме на гематологическом анализаторе «EXCELL-22». Определение субпопуляций лимфоцитов по маркерам клеточной дифференцировки (CD3+, CD3+/CD4+, CD3+/CD8+, CD20+/CD19+, CD16+/CD56+,
CD3-CD16+/CD56+, CD3+CD16+/CD56+,
CD3+/CD25+, CD3+/CD95+, CD19+/CD5+,
CD4+/CD25+, CD3+/CD50+, CD14+HLA-DR+) проводили методом проточной цитометрии (ци-тофлюориметр проточный «Cytomics FC-500») с использованием коммерческих реагентов производства компании «Beckman Coulter» (США).
Для статистической обработки данных использовали пакет прикладных программ «Statistica-6,0» для Windows. Нормальность распределения показателей определяли с помощью одновыборочного критерия Колмогорова-Смирнова. Полученные данные представлены в виде среднего арифметического и стандартного отклонения (при нормальном распределении) или с указанием медианы (Me) и верхнего (Р75) и нижнего квартилей (Р25) (при распределении, отличном от нормального). Проведение определения нормальности распределения обосновало дальнейшую необходимость использования непараметрических методов статистической обработки. Для сравнения двух групп использовали U-критерий Манна-Уитни. Результаты считались значимыми при p < 0,05. Корреляционный анализ проводили с использованием r-коэффициента Спирмена.
Результаты и обсуждение
Анализ клинических данных показал наличие у пациентов следующих клинических проявлений: лабиальный герпес (41%), генитальный герпес (23%), офтальмогерпес (33%), сиаладенит (37%), лимфаденопатия (83%) и субфебрилитет (78%). У включенных в исследование больных герпетическая инфекция протекала в виде легкой и среднетяжелой формы с частотой рецидивиро-вания от 4 до 8 раз в год (в среднем 6,2±1,5 раз в год).
Результаты сравнительного исследования относительного содержания субпопуляций иммунокомпетентных клеток у обследованных пациентов в сравнении с контролем представлены в таблице 1. У больных с герпесвирусными инфекциями было выявлено высокое содержание CD3+ лимфоцитов, при этом имело место статистически значимое повышение процентного числа CD4+ клеток по сравнению с соответствующими показателями у здоровых доноров. В тоже время количество лимфоцитов с цитотоксической активностью (CD8+) и В-клеток (CD20+)
434
2010, Т. 12, № 4-5
Лимфоциты при микст-инфекции
не отличалось от показателей в контрольной группе. Показано достоверное увеличение процентного содержания исследуемых субпопуляций NK-клеток (CD16+/CD56+, CD3-CD16+/ CD56+) и увеличение числа маркера ранней активации Т-лимфоцитов — CD3+/CD25+ на фоне уменьшения CD3+/CD95+Т-клеток. При сравнительном анализе количества CD4+/CD25+ достоверных различий не установлено.
Полученные нами данные свидетельствуют об активации CD3+, CD4+ лимфоцитов у пациентов с микст-инфекцией, вызванной вирусами семейства Herpesviridae, что может быть обусловлено высоким уровнем репликации вируса. Проведение корреляционного анализа установило наличие положительной связи содержания CD3+/CD4+ с процентным содержанием CD3+/CD50+ (г = 0,56, p = 0,02), а также уменьшение содержания CD3+/CD95+ Т-клеток, что свидетельствует о нарушении процессов индукции апоптоза лимфоцитов в условиях выраженной стимуляции иммунной системы.
На данном этапе обследования мы не получили отличий процентного числа CD3+/CD50+ (ICAM-3) и CD19+/CD5+ от контрольных значений. Но следует отметить, что результаты проведенного исследования позволили выявить положительную корреляционную связь средней силы между процентным содержанием лимфоцитов и CD19+/CD5+ (г = 0,52, p = 0,05), а также CD20+/CD19+ и CD19+/CD5+ (г = 0,57, p = 0,03). В тоже время наблюдалась отрицательная корреляция между возрастом и процентным содержанием CD19+/CD5+ (г = -0,59, p = 0,02). Так, с увеличением возраста пациентов отмечалось более низкое содержание CD19+/CD5+. Интересен и тот факт, что у пациентов с микстинфекцией, вызванной вирусами семейства Herpesviridae, снижение количества моноцитов и повышение уровня CD3+/CD50+ коррелировали между собой (г = -0,51, p = 0,04). Отмече-
на тенденция к снижению по сравнению с контрольными значениями процентного содержания CD14+HLA-DR+, являющимся одним из основных маркеров миелоидных клеток. Снижение экспрессии CD14 сопровождалось повышением экспрессии CD16 с последующим приобретением моноцитами свойств тканевых макрофагов с выраженной провоспалительной активностью, что является характерным в фазу репликации вируса. Процентное содержание CD14+HLA-DR+ отчетливо коррелировало с количеством лимфоцитов (г = 0,54, p = 0,05), моноцитов (г = 0,56, p = 0,04), а также с уровнем CD3+CD16+/56+ (г = 0,54, p = 0,05).
Сравнительный анализ результатов имму-нофенотипирования крови пациентов с микстинфекцией показал (табл. 2), что в случае сочетания ВПГ-1/2 с ЦМВ (IA группа) было выявлено статистически значимое повышение процентного числа CD4+ клеток в IA группе по сравнению с соответствующими показателями у здоровых доноров, в то время как при сочетании ВПГ-1/2 с ВЭБ (1Б группа) различий с показателями контроля не установлено, но имеется тенденция к повышению процентного содержания исследуемых субпопуляций NK-клеток (CD16+/CD56+, CD3-CD16+/CD56+). Количество активированных Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности ранний маркер активации CD25+, в IA группе в 2,3 раза превышало аналогичный показатель в 1Б группе. При этом в 1Б группе отмечено резкое снижение CD3+/CD95+ — (в 3 раза по сравнению со значениями в IA группе и в 5,7 раза по сравнению с контрольными значениями). По уровню CD19+/CD5+ достоверных различий в группах не получено, однако процентное содержание CD3+/CD50+ в обеих подгруппах имело тенденцию к повышению, причем это было более характерно при сочетании ВПГ-1/2 с ЦМВ. Процентное содержание моноцитов 1Б группы прак-
ТАБЛИЦА 1. ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОГО СТАТУСА У ПАЦИЕНТОВ С ГЕРПЕСВИРУСНОЙ МИКСТ-ИНФЕКЦИЕЙ, Me (Р25; Р75)
Показатели Группа с микст-инфекцией n = 32 Контрольная группа n = 40
CD3+, % 74,0 (63,6; 77,7) 67,3 (59,6; 73,4)
CD3+/CD4+, % 43,3 (36,7; 53,3)* 35,5 (29,3; 43,8)
CD3+/CD8+, % 25,0 (20,4; 28,5) 23,7 (17,5; 28,3)
CD3+/CD25+, % 1,0 (0,7; 1,6)* 0,3 (0,2; 0,3)
CD3+/CD95+, % 0,8 (0,4; 1,9)* 2,3 (2,2; 2,5)
CD3+/CD50+, % 74,2 (67,5; 78,4) 74,8 (67,1; 79,3)
CD4+/CD25+, % 4,2 (3,2; 5,1) 3,5 (2,9; 4,3)
CD20+/CD19+, % 8,4 (6,7; 11,3) 9,3 (8,8; 9,9)
CD19+/CD5+, % 1,1 (0,4; 1,7) 1,6 (0,7; 2,1)
CD16+/CD56+, % 18,9 (13,4; 22,8)* 12,2 (11,6; 13,0)
CD3+CD16+/56+, % 2,0 (1,2; 3,6) 2,2 (1,1; 3,8)
CD3-CD16+/56+, % 16,5 (11,4; 18,1)* 9,2 (8,3; 10,1)
CD14+HLA-DR+, % 77,3 (66,7; 96,2) 87,5 (56,3; 99,4)
Примечание. * - достоверность различий по отношению к контролю (р < 0,05).
435
Долгих Т.И. и др.
Медицинская Иммунология
ТАБЛИЦА 2. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК У ПАЦИЕНТОВ С герпесвирусной мИКсТ-ИНфЕКцИЕй, Me (р25; р75)
Показатели IA группа, n = 24 1Б группа, n = 8
Лимфоциты, % 33,8 (30,0; 39,0) 29,0 (25,0; 36,0)
CD3+, % 74,2 (63,5; 77,5) 74,0 (63,6; 78,5)
CD3+/CD4+, % 46,9 (35,8; 56,0)л 40,7 (36,8; 44,7)
CD3+/CD8+, % 24,2 (21,0; 27,9) 25,4 (17,3; 33,9)
CD3+/CD25+, % 1,4 (0,8; 2,0)* 0,6 (0,2; 1,3)
CD3+/CD95+, % 1,3 (0,6; 1,9) 0,4 (0,3; 0,8)л
CD3+/CD50+, % 75,1 (67,5; 79,9) 70,4 (65,0; 77,3)
CD4+/CD25+, % 3,2 (1,3; 4,2) 4,7 (3,8; 5,6)
CD20+/CD19+, % 8,7 (7,0; 11,8) 8,0 (4,7; 11,3)
CD19+/CD5+, % 1,1 (0,6; 1,7) 0,9 (0,1; 1,6)
CD16+/CD56+, % 18,7 (13,3; 19,3) 22,5 (13,5; 23,6)
CD3-CD16+/56+, % 13,2 (11,3; 16,9) 19,6 (11,4; 21,3)
CD3+CD16+/56+, % 2,1 (1,3; 4,0) 1,5 (1,2; 2,4)
Моноциты,% 5,9 (4,0; 8,0) 9,0 (5,0; 10,0)
CD14+HLA-DR+, % 77,3 (60,8; 96,2) 77,4 (69,2; 93,8)
Примечание. * - достоверность различий по отношению к показателям 1Б группы (р < 0,05), л - достоверность различий по отношению к контролю (p < 0,05).
тически в 2 раза больше уровня IA группы, при этом количество CD14+HLA-DR+ не отличалось.
Таким образом, активация герпесвирусной инфекции вызывает изменения иммунофенотипа лимфоцитов: увеличение ко-
личества активированных Т-лимфоцитов (CD3+/CD25+) и Т-хелперов (CD3+/CD4+), снижение уровня Т-лимфоцитов, несущих маркеры апоптоза (CD3+/CD95+). Изменение фенотипа Т-лимфоцитов сопровождается увеличением количества натуральных киллеров (CD3_CD16+/56+). Наличие инфекции способствует установлению новых взаимосвязей между показателями системы иммунитета: положительной корреляционной связи между содержанием в крови Т-хелперов (CD3+/CD4+) и клеток, несущих на своей поверхности молекулы адгезии (CD3+/CD50+), отрицательной взаимосвязи CD3+/CD4+ клеток и Т-лимфоцитов, несущих маркеры апоптоза (CD3+/CD95+), прямых корреляционных связей между уровнем В1-клеток, продуцирующих IgM-аутоантитела, и общим количеством лимфоцитов и В-лимфоцитов. Содержание CD14+HLA-DR+ клеток коррелировало с количеством лимфоцитов, моноцитов, а также с уровнем CD3+CD16+/56+ лимфоцитов. Наличие ЦМВ или ВЭБ в составе микст-инфекции вносят особенности в изменение субпопуляционного состава лимфоцитов: для ассоциации ВПГ-1/2 и ЦМВ характерно повышение уровня активированных Т-лимфоцитов и Т-хелперов, ВПГ-1/2 и ВЭБ — резкое снижение количества CD3+/CD95+ лимфоцитов.
Список литературы
1. Бахов Н.И., Барсуков А.А., Земсков В.М. Клеточные системы защиты организма от вирус-
ной инфекции: внутриклеточные механизмы защиты // Успехи современной биологии. — 2003. — Т. 123, № 2. - С. 161-174.
2. Железникова Г.Ф. Инфекция и иммунитет: стратегия обеих сторон // Медицинская иммунология. - 2006. - Т. 8, № 5-6. - С. 597-614.
3. Наследникова И.О., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Ткаченко С.Б., Зима А.П. Дисбаланс иммунорегуляторных Th1- и ^2-цитокинов при персистентных вирусных инфекциях // Медицинская иммунология. - 2007. - № 1. - С. 53-60.
4. Полеско И.В., Бутов Ю.С., Малиновская В.В., Халдин А.А. Иммунологический статус при простом герпесе // Российский медицинский журнал. - 2001. - № 6. - С. 37-38.
5. Порядин Г.В., Салмаси Ж.М., Казимир-ский А.Н. Активационные маркеры лимфоцитов как показатели дизрегуляции иммунной системы при воспалении // Патологическая физиология и экспериментальная медицина. - 2006. - № 1. -С. 2-8.
6. Сухих Г.Т., Ванько Л.В., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес. - Н.-Новгород: Изд-во НГМА, 1997. - 224 с.
7. Jones С.А., Fernandez, Here М.К., Bosnjak L., Miranda-Saksena M., Boadle R.A., Cunningham A. Herpes simplex virus Type 2 induces rapid cell death and functional impairment of murine dendritic cells in vitro // J. Virology. - 2003. - Vol. 77, N 20. -P. 11139-11149.
8. Lundberg P., Welander P, Han Herpes simplex virus type 1 DNA is immunostimulatory in vitro and in vivo // J. Virology. - 2003. - Vol. 77, N 20. -P. 11158-11169.
поступила в редакцию 24.12.2009 отправлена на доработку 28.01.2010 принята к печати 27.02.2010
436
