свидетельствует о наличии достаточных резервов микроциркуляции и может быть использован как прогностический показатель выживания сомнительного участка кожного лоскута. Возрастание показателя микроциркуляции в дистальном отделе лоскута после ГБО указывает на целесообразность его применения в реконструктивной хирургии последствий ожогов для профилактики развития ишемических нарушений в рубцовом кожном лоскуте. После проведения курса ГБО-терапии послеоперационный период протекал с формированием линейного некроза, что является особенностью заживления в рубцово-измененных тканях, однако образования некрозов, повлиявших на результат оперативного лечения и потребовавших проведения повторной кожной пластики, не наблюдали.
Литература:
1. Yamazaki F., Takahara K., Sone R., Johnson J.M.J. Appl. Physiol.
2007; 103: 2026-2033.
2. Stirban A., Lentrodt S., Nandrean S. et al. Undersea and Hyperbaric Medicine. 2009; 36 (5): 381-390.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ПРОТЕОМНЫЙ АНАЛИЗ СЕКРЕТОМА МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ РЕАКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АЛЛОГЕННОГО КОСТНОГО МОЗГА
Н.А. Петинати1, Н.И. Дризе1, Г.П. Арапиди2, В.О. Шендер2, М.А. Лагарькова2, Л.А. Кузьмина1, Е.Н. Паровичникова1, В.Г. Савченко1
1 ФГБУ НЦМИ гематологии Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия
2 ФГБУ ФНКЦ физико-химической медицины ФМБА, Москва, Россия
e-mail: loel@mail.ru
Ключевые слова: Мультипотентные мезенхимные стро-мальные клетки; трансплантация костного мозга, секретом, рецидив острого лейкоза.
Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК), полученные от донора гемопоэтических стволовых клеток, вводили внутривенно пациентам после трансплантации аллогенного костного мозга в момент восстановления числа лейкоцитов до 109/л. МСК вводили для предотвращения развития острой реакции трансплантат против хозяина (РТПХ). При ретроспективном изучении эффективности введения МСК оказалось, что нет достоверных отличий в частоте развития РТПХ между группами пациентов, которым вводили и не вводили МСК. Многофакторный анализ показал, что после введения МСК достоверно увеличивается общая выживаемость пациентов и уменьшается частота рецидивов. Целью работы было проанализировать отличия в составе белков, секретируемых МСК, в зависимости от последующего развития рецидива основного заболевания у больных.
В работе был проанализирован секретом 5 образцов МСК, введенных пациентам у, которых впоследствии не было рецидива (МСК-к) и 5 образцов МСК, введенных пациентам, у которых впоследствии развился рецидив (МСК-Р). Секретом МСК включал белки, секре-тируемые в составе везикул и экзосом. Анализ белков проводили на масс-спектрометре TripleTOF 5600+. Для
характеристики идентифицированных белков использовали онлайн-сервис STRING-db и базу данных GO. Из 1841 проанализированных белка 443 не секретиро-вались МСК-к, 171 белок секретировали только МСК-к. Среди них белки, относящиеся к внеклеточному пространству: TCN2, NOTCH2, LIPG, CDH11, ALB, CYTL1, CTSF, CASP3, GREM2, PTTG1IP, B7RP1, CETN2, COL4A3. 450 белков слабее секретированы МСК-Р по сравнению с МСК-к. К слабо секретируемым белкам относятся 8 белков, участвующий в регуляции ответа на цитокины (GAS6, HPX, UBE2K, PAFAH1B1, DHX9, MAVS, CPNE1, SPPL2A) и в ангиогенезе. Среди них рецепторы к факторам роста PDGFRA и PDGFRB, NOTCH3-рецептор к белку NOTCH, TGFB1, участвующий в адгезии, и другие.
548 белков сильнее секретированы в МСК-Р. Среди них большой кластер объединяет связанные с адгезией клеток к субстрату, активацией, связыванием с ростовыми факторами и коллагеном.
Показано, что между секретомом МСК пациентов, у которых рецидив развился в течение полугода после их введения (ранний рецидив — МСК-РР) и пациентов, у которых рецидив развился позже 2-х лет (поздний рецидив — МСК-ПР) существует большая достоверная разница. Выявлены отличия в количестве секретируемых белков между МСК-к, МСК-РР и МСК-ПР. Несмотря на то, что МСК быстро элиминируются из организма после внутривенного введения и секретом МСК сильно варьирует у доноров, секретируемые белки влияют на дальнейшую судьбу пациента. Среди выявленных различающихся белков могут быть ключевые факторы, повлиявшие на развитие рецидива. Эти белки могли повлиять как на оставшиеся опухолевые клетки, так и на костномозговую нишу, регулирующую кроветворение и стволовые клетки опухоли. Работа была выполнена при поддержке гранта РФФИ 19-29-040-23.
ИЗУЧЕНИЕ IBA-1-ИММУНОПОЗИТИВНЫХ КЛЕТОК В СЕДАЛИЩНОМ НЕРВЕ КРЫСЫ ПОСЛЕ НАЛОЖЕНИЯ ЛИГАТУРЫ И СУБПЕРИНЕВРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ МСК
Е.С. Петрова, Е.А. Колос
ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: iempes@yandex.ru
Ключевые слова: нерв, регенерация, белок Iba-1, макрофаги, МСК.
Применение мезенхимных стволовых клеток (МСК) может способствовать регенерации нерва [1, 2]. Вопрос о влиянии экзогенных МСК на репаративные процессы, происходящие в нервном стволе в ранние сроки после травмы, мало изучен. Субпериневральная трансплантация МСК является удобной моделью для изучения межклеточных коммуникаций, происходящих в нерве после повреждения. Цель настоящей работы — исследование распределения популяции макрофагов в седалищном нерве крысы после травмы и однократной трансплантации МСК. МСК костного мозга крыс Вистар-Киото были получены в ООО «Транстехнологии» (руководитель к.б.н. Д.Г. Полынцев). Седалищные нервы крыс Вистар-Киото (n=12) повреждали (лигатура, 40 с), что приводило к развитию валлеровской дегенерации (ВД) в дистальном сегменте нерва [3]. Части животных субпериневрально вводили суспензию МСК (5х104 клеток в 5 мкл). Через 7 сут исследовали популяцию макрофагов, содержащих
кальций-связывающий белок Iba-1 (маркер фагоцитирующих клеток) [4]. На срезах через дистальный сегмент нерва реципиента определяли площадь, занимаемую Iba-1 + клетками. Показано, что в интактном нерве идентифицируются отдельные Iba-1 + резидентные макрофаги. Через 7 сут после наложения лигатуры в дистальном сегменте нерва резко увеличивается количество макрофагов. Это наблюдение подтверждает известный факт повышения числа гематогенных макрофагов, которые участвуют в процессах ВД после повреждения нерва. Нами было проведено сравнительное исследование площади, занимаемой иммунореактивными клетками в группе крыс с лигатурой и в группе крыс, которым после наложения лигатуры трансплантировали МСК. Оказалось, что однократное введение суспензии МСК приводит к снижению количества Iba-1+макрофагов. Полученные данные свидетельствуют об изменении процессов ВД в нерве реципиента после однократной субпериневральной трансплантации МСК и требуют дальнейшего углубленного изучения.
Литература:
1. Siemionow M., Strojny M.M., Kozlowska K. et al. Stem Cell Rev Rep. 2021. V.18. P. 642-659.
2. Lavorato A., Raimondo S., Boido M. et al. Int J Mol Sci. 2021. V. 22. P. 572.
3. Petrova E.S., Kolos E.A. Neurosci Behav Physiology. 2021. V. 51. P. 513-518.
4. Kolos E.A., Korzhevskii D.E. Acta Naturae. 2020. V.12(1). P. 4-17.
ВЛИЯНИЕ АУТОЛОГИЧНОГО ЛЕЙКОКОНЦЕНТРАТА, ОБОГАЩЕННОГО ГЕНЕТИЧЕСКИМ МАТЕРИАЛОМ, НА РЕМОДЕЛИРОВАНИЕ НЕЙРОГЛИИ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ МИНИ-СВИНЕЙ С ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ
В.П. Петрова, А.Р. Сираева, И.И. Гайнуллин, Р.Х. Ахметов, И.С. Минязева, К.Р. Яппарова, Д.А. Трофимов, В.А. Маркосян, Р.Р. Исламов, З.З. Сафиуллов
ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России, Казань, Россия
e-mail: andrei.izmaylov@kazangmu.ru
Ключевые слова: аутологичный лейкоконцетрат, генная терапия, ишемический инсульт, мини-свинья, сосудистый эн-дотелиальный фактор роста (VEGF), глиальный нейротрофи-ческий фактор (GDNF), нейрональная молекула клеточной адгезии (NCAM).
Естественные ограничения регенерации в ЦНС остаются основной проблемой при лечении неврологических заболеваний, в том числе ишемических инсультов головного мозга. Среди активно разрабатываемых способов предупреждения развития постишемических негативных последствий является доставка в мозг терапевтических генов, кодирующих нейропротекторные молекулы. Цель исследования — оценить влияние аутологичного генетически обогащенного лейкоконцентрата (ГЛ), продуцирующего рекомбинантные сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), глиальный нейротрофический фактор (GDNF) и нейрональную молекулу клеточной адгезии (NCAM), на ремоделирование нейроглии в периинфаркт-ной области головного мозга через 21 сут после моделирования ишемического инсульта у мини-свиньей.
Вьетнамские вислобрюхие мини-свиньи (25-30 кг) были разделены на три группы: (1) контрольные (n=3), опытные (n=3) и интактные (n=3) животные. Контрольным и опытным животным моделировали ишемический инсульт путем окклюзии средней мозговой артерии. Через 4 часа после операции мини-свиньям из опытной группы внутривенно вводили аутологичный ГЛ, трансдуцирован-ный аденовирусными векторами (Ad5/F35), несущими гены vegf165, gdnf и ncam1, а животным из контрольной группы — аутологичный нативный ГЛ. Через 3 недели после моделирования инсульта животных вводили в глубокий наркоз. Головной мозг извлекали из черепной коробки и фиксировали в 4% забуференном растворе параформальдегида. Из периинфарктной области готовили замороженные срезы толщиной 20 |_im. Постишемические изменения астроцитов, олигодендро-цитов и клеток микроглии изучали с использованием специфических антител к GFAP, Olig2 и Iba 1, соответственно, на площади 0,5 мм2.
Иммунофлуоресцентный анализ астроцитов выявил увеличение площади GFAP-положительной площади в контрольной группе [5,48 (4,89-6,26)], по сравнению с опытной [3,51 (2,35-4,86)] и интактной [3,95 (3,254,50)] группами. Количество миелинообразующих 0Пд2-позитивных клеток было снижено в контрольной группе [52,00 (48,50-52,50)], по сравнению с интакт-ной группой [62,00 (60,50-74,50)]. Количество Olig2-позитивных клеток в опытной группе [55,00 (52,5058,00)] не отличалось от интактных значений. Анализ клеток микроглии показал увеличение ^^позитивной площади у контрольных [17,53 (15,50-18,44)] и опытных [13,09 (12,55-13,57)] животных, при сравнении с интактными [3,35 (2,85-3,64)] мини-свиньями.
Полученные нами данные свидетельствуют, что внутривенное введение аутологичного ГЛ, продуцирующего рекомбинантные молекулы VEGF, GDNF и NCAM, через 4 часа после моделирования ишемического инсульта сдерживает развитие астроглиоза и поддерживает миелинизацию нервных отростков в периинфарктной области мозга. Исследование поддержано грантом Российского научного фонда № 19-75-10030.
ДИНАМИКА УРОВНЕЙ ЦИТОКИНОВ В РЕГЕНЕРИРУЮЩИХ ТКАНЯХ ТЕРМИЧЕСКИХ ОЖОГОВ КОЖИ КРЫС ПРИ ПРИМЕНЕНИИ МАЗИ С НОВЫМ ПРОИЗВОДНЫМ N-АЦЕТИЛАМИНОГЕКСАНОВОЙ КИСЛОТЫ
М.А. Петровская, М.Б. Петрова, Е.В. Андрианова, Е.Н. Егорова
ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России, Тверь, Россия
e-mail: solm1990@mail.ru
Ключевые слова: регенерация тканей, термические ожоги кожи, производное ацексамовой кислоты, фактор некроза опухоли альфа, трансформирующий фактор бета.
В эксперименте изучалось использование нового производного N-ацетил^-аминогексановой кислоты (N-ацетил^-АК) при заживлении ожоговых ран кожи площадью 225 мм2. Методом иммуноферментного анализа определяли уровни цитокинов, ассоциированных с воспалением — фактора некроза опухоли альфа (TNFa) и трансформирующего фактора бета (TGFß) в гомоге-натах регенерирующих тканей с помощью тест-систем