CC BY
20
УДК 616.379-008.64; 615.451.16; 582.894
http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2226-7425-2018-20-10-111-115
ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭКСТРАКТОВ КИЗИЛА ОБЫКНОВЕННОГО
Шаталов И.С., Шаталова Т.А., Мичник О.В., Мичник Л.А., Сергеева Е.О., Терехов А.Ю., Кодониди И.П., ГорбатюкН.О.
Пятигорский медико-фармацевтический институт -филиал ФГБОУ ВО ВолгГму, г. Пятигорск, Рос-
сийская Федерация
Аннотация. В качестве объектов исследования использовали два экстракта из листьев кизила обыкновенного (Cornus mas), собранных на территории Ставропольского края. Экстракт №1 получали из листьев, собранных в период начала плодоношения растения. При экстрагировании использовали метод реперколяции (экстрагент 70% этиловый спирт). Экстракт №2 получали из листьев, собранных после сбора плодов. Для получения экстракта №2 применяли метод ремацерации (экстрагент 40% этиловый спирт). Процесс проводили при температуре 60°С и рН среды около 7. Исследование гепатопротекторной активности экстрактов кизила выполняли на крысах-самцах Wistar. В качестве модели в эксперименте использовали острый гепатоз, полученный с использованием четыреххло-ристогоуглерода. Целью исследования являлось изучение ге-патопротекторного действия экстрактов из листьев кизила. Результаты исследования показали, что лечебно-профилактическое введение исследуемых объектов (экстрактов листьев кизила) на фоне СС14-гепатоза вызывало значительное снижение активностей индикаторных ферментов печени; нормализацию содержания общего белка в сыворотке крови и отдельных фракций - глобулинов и альбуминов, снижение содержания холестерина, триглицеридов, глюкозы, общего, прямого, непрямого билирубина. Гепато-протекторное действие экстракта №2 превосходило действие экстракта №1 и, в ряде случаев, карсила. Ключевые слова: экстракты из листьев кизила обыкновенного, острый гепатоз, гепатопротекторное действие, биохимические показатели сыворотки крови, показатели ли-пидного, белкового, углеводного обмена._
STUDY OF HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF EXTRACTS OF CORNUS MAS
Shatalov I.S., Shatalova T.A., Michnik O. V., Michnik L.A., Sergeeva E.O., Terekhov A.Y., Kodonidi I.P., Gorbatyuk N.O.
Pyatigorsk medical pharmaceutical institute of Volgograd state medical university, Pyatigorsk, Russian Federation
Annotation. Two extracts from the leaves of Cornus mas were used as the objects of study. The leaves of Cornus mas were collected in the Stavropol region. Extract №1 was obtained from the leaves collected during the beginning of fruiting. We used the method of repercolation (extractant 70% ethyl alcohol) to obtain extract №1. Extract №2 was obtained from the leaves collected after harvesting. We used the method of remaciation (extractant 40% ethyl alcohol) to extract No. 2. The process was carried out at a temperature of 60°C andpH 6,0 - 6,5. The study of hepatoprotective activity of extracts of Cornus mas was performed on male Wistar rats. The extracts were studied in rats. In rats, a model of acute hepatosis using carbon tetrachloride was created. The aim of the study was to study the extracts from the leaves of Cornus mas. Therapeutic and prophylactic administration of the studied objects against the background of CCU-hepatosis caused a significant decrease in the activity of indicator liver enzymes; normalization of total protein content in blood serum and individual fractions - globulins and albumins, reduction of cholesterol, triglycerides, glucose, total, direct, indirect bilirubin. Hepatoprotective effect of the extract No. 2 was superior to the effect of the extract No. 1 and, in some cases, the Carsil®.
Key words: extracts from the leaves of Cornus mas, acute hepa-tosis, hepatoprotective effect, biochemical parameters of blood serum, lipid, protein, carbohydrate metabolism.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИИ СПИСОК
[1] Морфолого-анатомическое исследование стебля и почек кизила обыкновенного Cómus mas L. семейства кизиловые (Comaceae Dumort.) / И.С. Луговой, Е.Н. Хромцова, Т.А. Шаталова, Л.А. Мичник, О.В. Мичник //Фармация и фармакология. 2014. № 6 (7). С. 18-21.
REFERENCES
[1] Morphological and anatomical study of the stem and buds of dogwood common Cornus mas L. dogwood family (Cornaceae Dumort.)/ I.S. Lugovoj, E.N. Hromcova, T.A. Shatalova, L.A. Michnik, O.V. Michnik //Farmaciya i faimakologiya. 2014. № 6 (7). Р. 18-21. (in Russian)
2 Попова О.И., Коновалов Д.А., Попов И.В. Использование и охрана ресурсов лекарственных растений на Северном Кавказе //Фармация. 2013. № 7. С. 3-6.
[3] Разработка технологии и анализ экстракта листьев кизила жидкого./ Т.А. Шаталова, А.Ю. Айрапетова, Л.А. Мичник, О.В. Мичник, В.И. Погорелов, Е.Н. Хром-цова, И.С. Луговой, Л.А. Саджая //Известия Самарского научного центра Российской академии наук. 2012. Т. 14. № 5-3. С. 768-770.
[4] Рудакова Ю.Г., Попова О.И. Биологическая активность Teucrium polium (Ъат1асеае)//Растительные ресурсы. 2014. Т. 50. № 2. С. 307-315.
[5] Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - Москва, 2005. С. 683 -691.
[6] Сигарева С.С., Василенко Е.А., Сергеева Е.О. Влияние порошков и извлечений из плодов моркови дикой и моркови посевной на биохимический состав крови при токсическом поражении печени // Современная наука и инновации. 2016. №1(13). С.135-139.
[2] Popova O.I., Konovalov D.A., Popov I.V. Use and protection of medicinal plant resources in the North Caucasus // Farmaciya, 2013, № 7, p.p. 3-6. (in Russian)
[3] Technology development and analysis of liquid dogwood leaf extract. / / T.A. Shatalova, A.Y. Ajrapetova, L.A. Michnik, O.V. Michnik, V.I. Pogorelov, E.N. Hromcova, I.S. Lugovoj, L.A. Sadzhaya //Izvestiya of Samara scientific centre of the Russian academy of sciences, 2012, vol. 14, № 5-3, p.p. 768-770. (in Russian)
[4] Rudakova YU.G., Popova O.I. Biological activity of Teucrium polium (Lamiaceae)// Rastitel'nye resursy, 2014, vol. 50, № 2, p.p. 307-315. (in Russian)
[5] Habriev R.U. Guidelines for experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. - Moscow, 2005, p.p. 683 - 691. (in Russian)
[6] Sigareva S.S., Vasilenko E.A., Sergeeva E.O. Effect of powder and extracts of fruits of carrot and wild carrot on the biochemical composition of blood at liver toxicity// Sovremennaya nauka i innovaci, 2016, №1(13), p.p. 135139. (in Russian)
Листья кизила мужского (Cornus mas) широко используются народами Северного Кавказа для лечения различных заболеваний [1]. Поэтому представляет интерес изучение обоснованности применения листьев кизила при заболеваниях печени в народной медицине для внедрения нового вида лекарственного сырья в медицинскую практику [2].
Целью исследования является, изучение гепа-топротекторного действия экстрактов из листьев кизила обыкновенного (Cornus mas), собранных в период начала плодоношения и после сбора плодов, полученных с использованием разных экстрагентов.
Материалы и методы исследования. В качестве объектов исследования использовали экстракты из листьев кизила (№1 и №2). Экстракт №1 (ЭК-1) получали из листьев кизила обыкновенного (Cornus mas), собранных в период начала плодоношения растения (конец мая - начало июля). При экстрагировании использовали метод реперколяции (экстрагент 70% этиловый спирт) [3]. Экстракт №2 (ЭК-2) получали из листьев, собранных после сбора плодов (начало - середина августа). Для получения экстракта №2 применяли метод ремацерации (экстрагент 40% этиловый спирт). Процесс проводили при температуре 60°С и рН среды 6,0 - 6,5 (для этого сырье перед экстрагированием смешивали с карбонатом кальция). По результатам изучения качественного и количественного состава сырья, в качестве основных веществ, экстракт №1 (ЭК-1) содержал флавоноиды, антоцианы, экстракт №2 (ЭК-2) -иридоиды. Исследование гепатопротекторной
активности экстрактов из листьев кизила (ЭК-1 и ЭК-2) выполняли на аутбредных крысах-самцах Wistar весом 220-250 г (на момент начала эксперимента). В качестве модели в эксперименте использовали острый гепатоз, полученный с использованием четыреххлори-стого углерода (СС14- гепатоз) [4], который воспроизводили путем перорального троекратного введения (через день) животным 50% масляного раствора СС14 в дозе 0,15 мл/100 г массы тела. Животных разделяли на 5 групп по 6 особей (крыс) в каждой группе. Животные группы № 1 служили здоровым контролем и получали растворитель (воду) в эквиобъемном вводимым объектам количестве. У животных групп №№ 2-5 создавали модель острого СС14-гепатоза [5]. Животные группы № 2 являлись контрольными (СС14 - гепатоз). Крысы группы № 3 получали ЭК-1, группы № 4 - ЭК-2, группы № 5 - препарат сравнения карсил, соответственно. Карсил - гепатопротектор растительного происхождения, получаемый из семян расторопши пятнистой (АО Софарма, Болгария), является рекомендуемым в качестве препарата сравнения при изучении ге-патопротекторных лекарственных средств (Хабриев Р.У., 2005 г.) [5].
На основании максимальной суточной дозы кар-сила для человека и с учетом межвидовых коэффициентов пересчета доз, в качестве оптимальной для изучения гепатозащитной активности на крысах, была выбрана доза карсила 20 мг/кг в сутки. Исследуемые экстракты из сырья кизила (доза 300 мг/кг в сутки) вводили с водой очищенной перорально животным групп
---—
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
№№ 3, 4 за 7 дней до создания СС14-гепатоза и затем на фоне воспроизведения СС14 - поражения печени. Карсил (доза 20 мг/кг в сутки) использовали для крыс группы № 5 также за 7 дней до создания СС14-гепатоза, а затем на фоне возникшего гепатоза. Контрольным животным (группа №1) вводили такой же объем растворителя (воды очищенной). Забой животных проводили путем декапитации через сутки после окончания введения препаратов. Оценку гепатопротекторного действия проводили по широкому кругу биохимических показателей, отражающих состояние липидного, белкового, углеводного обменов. Кроме этого, измеряли активность индикаторных ферментов (аланин-аминотрансферазы (АлАт), аспартат-аминотрансфе-разы (АсАт), щелочной фосфатазы (ЩФ)) в сыворотке
крови. Все показатели определяли на автоматическом биохимическом анализаторе BS-380 (ММгау) с набором реактивов «Б1а8у5» (Диасис, Германия) [6]. В качестве препарата сравнения использовали препарат карсил (АО Софарма, Болгария).
Результаты исследования и обсуждение. Введение животным четыреххлористого углерода привело к развитию острого СС14-гепатоза, характеризовавшегося развитием цитолиза, холестаза, нарушением белково-синтетической и антитоксической фун-кий печени. Данные о влиянии лечебно-профилактического введения объектов (ЭК-1, ЭК-2, карсила) на активность индикаторных ферментов при остром СС14-гепатозе у крыс представлены в таблице 1.
Таблица1
Влияние лечебно-профилактического введения экстрактов кизила и карсила на активность индикаторных ферментов при остром СС14-гепатозе у крыс, п=6
Группы/ Препараты Показатели активности инд икаторных ферментов, Ед/л
АсАт АлАт ЩФ
сыворотки крови сыворотки крови сыворотки крови
1. Интактные 156,02±8,11 57,86 ±3,45 482,21±25,24
100% 100% 100%
2. СС14-гепатоз (кон- 1369,27±56,13+ 1284,42±54,51 + 1500,29±70,53+
троль) +778% +2120% +211%
3. ЭК-1 713,12±29,48+ 742,62±17,69+ +1183%; - 743,48±33,51 +
+357%; -48%* 42%* +54%; -50%*
4. ЭК-2 324,28±15,63+ 302,43±17,61+ +520%; - 486,25±26,34*
+208%; -76%* 76%* + 1%; -68%+
5. Карсил 518,63±26,67+ 751,25 ±42,06+ +1198%; 663,78±25,82+
+232%; -62%* -42%* +37%; -56%*
Примечание. + - p 00,01 в сравнении с интактными животными; * - p 00,01 в сравнении с контролем.
Результаты исследований, представленные в таблице 1, показывают, что после создания модели гепа-тоза у животных в группах №№ 2 - 5 возник цитолити-ческий синдром. В его развитии главным следует считать повышение проницаемости клеточных мембран из-за изменений в состоянии липидов мембран. В результате этого оболочка клеток стала более проницаемой для внутриклеточных ферментов, которые выходили в кровь, где и регистрировали повышение их активности. В группе № 2 произошла степень подъёма активности АлАт на 2120%, АсАт на 778%. Лечебно-профилактическое введение исследуемых объектов, как и карсила, не привело к полной нормализации активностей всех исследованных индикаторных ферментов (были отмечены достоверные различия с группой интактных крыс). Активность фермента АсАт снизилась в большей степени под влиянием экстракта из листьев кизила (ЭК-2) на 76%, по сравнению с контрольной группой животных; на 14% больше по сравнению с группой, получавшей карсил. Введение экстракта из листьев кизила (ЭК-1) вызвало снижение активности данного показателя на 48%. Примерно такие же изменения наблюдались и при изучении активности АлАт.
Лидером также оказался экстракт из листьев кизила (ЭК-2). Но уровня интактных животных при введении ни одного из исследуемых объектов достигнуто не было.
Кроме того, результаты исследований, представленные в таблице 1, показывают, что после создания модели гепатоза у животных групп №№ 2 - 5 возник холестаз. Об этом свидетельствует повышение активности щелочной фосфатазы (ЩФ). Щелочная фосфа-таза вырабатывается в печени, слизистой оболочке кишечника, плаценте, лактирующей молочной железе, костной системе. Однако, печень является главным выделительным органом для этого фермента. Щелочная фосфатаза относится к мембранно-связанным ферментами и локализуется преимущественно в каналикуляр-ной мембране гепатоцитов. В печени наибольшая активность щелочной фосфатазы обнаружена на плазматической мембране синусоидального полюса и мембранах микроворсинок гепатоцитов. Кроме того, активность фермента регистрируется в эпителии мельчайших желчных ходов.
Наибольшее снижение активности фермента ЩФ наблюдается при введении экстракта из листьев кизила
Данные о влиянии лечебно-профилактического введения объектов (ЭК-1, ЭК-2, карсила) на белково-синтетическую функцию печени при остром СС14-ге-патозе у крыс представлены в таблице 2.
Таблица 2
Влияние лечебно-профилактического введения экстрактов кизила и карсила на показатели белкового
обмена при остром СС14-гепатозе у крыс, п=6
(ЭК-2) по сравнению с контролем, значение ЩФ при этом практически достигло нормы, в отличие от ЭК-1 и карсила.
Группы/Препараты Показатели белкового обмена, г\л
Общий белок Альбумины Глобулины
1. Интактные 65,21±3,84 27,36±1,16 38,85±1,98
2. СС14-гепатоз (контроль) 42,34±2,29+ 20,47±0,73+ 23,95±1, 14+
-35% -25% -38%
З.Экстракт из листьев кизила (ЭК-1) 68,36±2,81 30,12±1,27 38,19±1,81
+61%* +47%* +59%*
4.Экстракт из листьев кизила (ЭК-2) 68,36±2,81 28,73±1,35 34,97±1,51
+61%* +40%* +46%*
5. Карсил 62,87±3,09 29,12±1,49 33,75±1,66
+48%* +42%* +45%*
Примечание. + - p 00,01 в сравнении с интактными животными; * - p 00,01 в сравнении с контролем.
Результаты исследований, представленные в таблице 2, показывают, что после создания модели гепа-тоза у животных в группе № 2 произошло нарушение белково-синтетической функции печени и снизились показатели белкового обмена: содержание общего белка (-35%), альбуминов (-25%), глобулинов (-38%). У животных в группах №№ 3-5 под влиянием всех исследуемых объектов (ЭК-1, ЭК-2, карсила) была
отмечена нормализация содержания общего белка в сыворотке крови и отдельных фракций - глобулинов и альбуминов. Действие ЭК-2 находилось на уровне действия карсила, ЭК-1 - превышало действие карсила. Данные о влиянии лечебно-профилактического введения объектов (ЭК-1, ЭК-2, карсила) на показатели ли-пидного и углеводного обменов при остром СС14-гепа-тозе у крыс представлены в таблице 3.
Таблица 3
Влияние лечебно-профилактического введения экстрактов кизила и карсила на показатели липидного и углеводного обменов при остром СС14-гепатозе у крыс, п=6
Группы/Препараты Показатели, ммоль\л
Холестерин Триглицериды Глюкоза
1.Интактные 1,47±0,07 1,67±0,06 6,62±0,32
2. СС14-гепатоз (контроль) 2,45±0,12+ 2,93±0,09+ 9,36±0,44+
+67% +75% +41%
3. ЭК-1 1,81±0,08+ 1,79±0,08+ 6,62±0,31
+23%+; -26%* +7%+; -39%* 0; -29%*
4. ЭК-2 1,52 ±0,09 + 1,54±0,03+ 6,33±0,33+
3,4% +; -38%* -8%+; -47%* -4%+; -32%*
5. Карсил 1,95 ±0,04+ 1,98±0,05+ 6,36±0,31
+33%; -20%* + 19%; -32%* -4%+; -33%*
Примечание. + - p 00,01 в сравнении с интактными животными; * - p 00,01 в сравнении с контролем.
Результаты исследований, представленные в таблице 3, показывают, что после создания модели гепа-тоза у животных в группе № 2 произошло изменение показателей липидного и углеводного обменов: повысилось содержание холестерина (на 67%), триглицери-дов (на 75%), глюкозы (на 41%). Под влиянием исследуемых веществ отмечено снижение содержания холестерина в сыворотке крови на -38% (ЭК-2), на -26% (ЭК-1), на -31% (ЭК-2), соответственно, что превышает действие карсила (-20%). Содержание уровня триглицеридов сыворотки крови было снижено
достоверно, по сравнению с контролем, и достигло уровня нормы в группах, получавших ЭК-1 (- 39%) и ЭК-2 (- 47%). В отношении углеводного обмена отмечена полная нормализация содержания глюкозы в крови при введении всех исследуемых объектов. Эффект сопоставим с действием карсила.
Влияние лечебно-профилактического введения объектов на антитоксическую функции печени при остром СС14-гепатозе у крыс представлено в таблице 4.
Таблица 4
Влияние лечебно-профилактического введения объектов на антитоксическую функции печени при
остром СС14-гепатозе у крыс, п=6
Группы/Препараты Билирубин сыворотки крови, мкмоль/л
Общий Прямой Непрямой
1. Интактные 11,43±0,37 0,69±0,04 10,73±0,64
2. СС14-гепатоз (контроль) 21,52±0,94+ +88% 1,64±0,07+ + 138% 19,81±0,94+ +85%
3. ЭК-1 14,09±0,67+ +23%+; -35%* 0,93±0,07+ +35%+; -43%* 12,49±0,51 + 16%+; -37%*
4. ЭК-2 11,15±0,4 -2%+; -88%* 0,62±0,03 -11%+; -62%* 10,53±0,45 -2%+; -47%*
5. Карсил 14,52±0,74+ +27%+; -33%* 1,04±0,05+ +51%+; -37%* 13,48±0,64 +25%+; -32%*
Примечание. + - p 00,01 в сравнении с интактными животными; * - p 00,01 в сравнении с контролем.
Результаты исследований, представленные в таблице 4, показывают, что после создания модели гепатоза у животных в группе № 2 произошло нарушение антитоксической функции печени: повысилось содержание общего билирубина на +88%, прямого билирубина на +138%, непрямого билирубина на +85%. В группах, получавших экстракт из листьев (ЭК-2), содержание общего билирубина нормализовалось. При введении экстракта из листьев (ЭК-1) также отмечено достоверное снижение общего билирубина на 35%, но к полной нормализации это не привело. Содержание прямого билирубина нормализовалось в группах, получавших ЭК-2. При введении животным ЭК-1 содержание прямого билирубина осталось на уровне контрольных животных. Содержание непрямого билирубина нормализовалось под влиянием экстракта из листьев
(ЭК-2) и улучшилось под влиянием экстракта из листьев (ЭК-1) и карсила.
Выводы. Лечебно-профилактическое введение исследуемых объектов (ЭК-1, ЭК-2, карсила) на фоне СС14- гепатоза сдерживает развитие цитолиза и холе-стаза (значительное снижение активностей АсАт, АлАт, ЩФ), улучшает восстановительные процессы белкового, липидного и углеводного обменов (нормализация содержания общего белка в сыворотке крови и отдельных фракций - глобулинов и альбуминов, снижение содержания холестерина, триглицеридов, глюкозы), восстанавливает антитоксическую функцию печени (нормализация содержания общего, прямого, непрямого билирубина). Действие экстракта из листьев кизила (ЭК-2) превосходило действие экстракта ЭК-1 и, в ряде случаев, карсила.
Конфликт интересов - нет.
