CC BY
28НАУЧНЫЙ ЭЛЕКТРОННЫЙ ЖУРНАЛ INNOVA № 4 (17) 2019 fJTfl
SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (17) 2019 il il Ii http://innova-journal.ru/
ИЗУЧЕНИЕ ГЕМОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КРОВООСТАНАВЛИВАЮЩИХ ИМПЛАНТОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VITRO
RESEARCH OF THE HEMOSTATIC ACTIVITY OF BLOOD REMOVING IMPLANTS IN THE IN VITRO EXPERIMENT
Lipatov V.A.
Doctor of Medical Sciences Sotnikov K.A.
Severinov D.A.
Kosogolov M.V.
Piskovitina S.G.
Gladneva S.Yu.
Maletin S.E.
Kursk State Medical University
Резюме
Остановка кровотечения при травмах, плановых и экстренных оперативных вмешательствах является сложной и до конца не решенной проблемой. Поэтому в современной хирургии наиболее перспективным направлением является разработка новых лекарственных средств, влияющих на систему гемостаза, и локально действующих кровоостанавливающих средств. В данной статье представлены результаты исследования, посвященного сравнительному анализу способности аппликационных гемостатических средств образовывать сгусток крови в эксперименте in vitro. Изучены гемостатические свойства следующих средств: губчатые импланты на основе натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы в двух вариантах: без модификации и термостабиллизированная, губка гемостатическая коллагеновая, губка гемостатическая «Тахокомб». Эксперимент проводили с использованием стабилизированной цитратом крови 10 доноров-добровольцев, с ее последующей рекальцификацией, на коагуометре АПГ2-02-П. Данным исследованием мы подтвердили эффективность данной методики для сравнительного анализа гемостатических имплантов. Кроме того, результаты исследования показали, что все применяемые нами образцы достоверно снижают время образования сгустка крови в эксперименте по сравнению с контролем.
Ключевые слова: кровотечение, гемостаз, аппликационные импланты, гемостатические средства, время свертывания
Summary
Stopping bleeding during injuries, planned and emergency surgical interventions is a difficult and not completely resolved problem. Accordingly, in modern surgery, the most promising direction is the development of new drugs that affect the hemostatic syste m and locally acting hemostatic agents. This article presents the results of the research on the comparative analysis of the ability of application hemostatic agents to form a blood clot in the in vitro experiment. The hemostatic properties of the following agents were studied: sponge implants based on sodium salt of carboxymethyl cellulose in two versions: unmodified and thermostabilized, hemostatic collagen sponge, and «Tachocomb» hemostatic sponge. The experiment was performed using stabilized blood citrate of 10 volunteer donors, which was recalcification subsequently, on an APG2-02-P coaguometer. In this research, we confirmed the effectiveness of this technique for the comparative analysis of hemostatic implants. In addition, the results of the research showed that all the s amples used by us significantly reduce the coagulation time in the experiment compared with the control.
Key words: bleeding, hemostasis, application implants, hemostatic agents, coagulation time
References to the article
Lipatov V.A., Sotnikov K.A., Severinov D.A., Kosogolov M.V., Piskovitina S.G., Gladneva S.Yu., Maletin S.E. Research of the hemostatic activity of blood removing implants in the in vitro experiment // Innova. - 2019. - №
4(17).-P. 6-9.
Липатов В.A.
доктор медицинских наук Сотников K.A.
Северинов Д.А.
Косоголов М.В.
Писковитина С.Г.
Гладнева С.Ю.
Малетин С.Э.
Курский государственный медицинский университет
E-mail: drli@yandex.ru
Библиографическая ссылка на статью
Липатов В.А., Сотников К.А., Северинов Д.А., Косоголов М.В., Писковитина С.Г., Гладнева С.Ю., Малетин С.Э. Изучение гемостатической активности кровоостанавливающих имплантов в эксперименте in vitro // Innova. - 2019. - № 4 (17). - С. 6-9.
DOI: 10.21626/innova/2019.4/01
б
НАУЧНЫЙ ЭЛЕКТРОННЫЙ ЖУРНАЛ IN NOVA № 4 (17) 2019 SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (17) 2019
Введение
Повреждение паренхиматозных органов всегда сопровождается обильным
кровотечением, что обусловлено их анатомическими особенностями [1]. Этот факт обязывает хирургов проявлять высокую осторожность при выполнении оперативных вмешательств [7,8]. В абдоминальной хирургии для уменьшения числа осложнений, связанных с кровопотерей, используют различные методы остановки капиллярно-паренхиматозного
кровотечения - сдавление ткани органа зажимом, кенгутовой сеткой, подшивание сальника, эмболизация питающей артерии, наложение гемостатических швов, применение гемостатических губок, а также
фармакологические методы гемостаза и прочие [2]. Однако ни один из методов в полной мере не соответствует требованиям современной медицины. В настоящее время активно внедряются гемостатические материалы местного действия [3]. Такая тенденция привела к разработке большого числа аппликационных гемостатических имплантов различного состава как отечественного, так и зарубежного производства [4,5]. Тем не менее многие из них на фоне низкой гемостатической активности способствуют развитию спаечного процесса в брюшной полости. Некоторые образцы обладают местно-раздражающим действием, что приводит к развитию воспаления [5]. В связи с этим возникает необходимость в тестировании и апробации эффективности данных средств как в опытах in vivo, так и в лабораторных условиях.
Целью настоящего исследования является изучение гемостатической активности
кровоостанавливающих средств в опыте in vitro.
Материалы и методы
Оценку эффективности гемостатических имплантов проводили, исследуя влияние образцов на образование сгустка согласно разработанной методике (Патент РФ № 2700165 от 13.09.2019 «Способ сравнительного изучения влияния хирургических материалов на процесс образования сгустка крови in vitro») [3]. Обработка результатов исследования производилась с помощью электронных таблиц MicrosoftExcel 2010. Достоверность различий средних величин оценивалась, используя критерий Манна-Уитни, при допустимом для медико-биологических исследований значений р<0,05.
Исследования проводили на образцах:
№ 1 - губка на основе натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ) без
модификации;
№ 2 - губка на основе натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ)
термостабилизированная (120°С, 10 минут в сухожаровом шкафу).
Данные образцы разработаны и изготовлены на базе лаборатории экспериментальной хирургии и онкологии Научно-исследовательского института
экспериментальной медицины. Также исследования выполняли на образцах, обладающих, согласно данным производителя, гемостатическим эффектом: губка
гемостатическая коллагеновая № 3 (состав: коллаген, субстанция - раствор 2% - 49 г (0,98 г сухого коллагена) нитрофурал (фурацилин) -0,0075 г, борная кислота - 0,0125 г., производитель: ООО «Лужский завод «БЕЛКОЗИН»), губка гемостатическая «Тахокомб» № 4 (состав: фибриноген, тромбин, альбумин, аргинина гидрохлорид, коллаген, натрия хлорид, натрия цитрат, рибофлавин; производитель: Такеда Австрия ГмбХ, Австрия. Ст. Петерштрассе, 25, А-4020, Линц, Австрия). Контролем служило время свертывания без внесения в кювету гемостатических средств. С кровью каждого донора произвели по пять опытов. В каждой группе исследуемых образцов выполняли по 10 коагулометрических тестов [3]. В стерильных условиях кровь у 10 здоровых доноров-добровольцев с письменного согласия, соблюдая правила асептики и антисептики, для исследования забирали из локтевой вены в вакутайнер, содержащий 3,2% раствор цитрата натрия. После чего производили рекальцификацию стабилизированной цитратом натрия крови, добавив к 0,5 мл цитратной крови 0,1 мл раствора тромбоп ласти на и 0,1 мл 5% раствора кальция хлорида. Далее кровь из пробирки дозировали микропипеткой в объеме 200 мкл в кювету коагулометра АПГ2-02-П, в которую после этого помещали стальной шарик и вносили тестируемые образцы различных хирургических материалов стандартного размера (цилиндрической формы с диаметром 0,5 см и высотой 0,2 см). Образцы размещали таким образом, чтобы верхний край цилиндра соответствовал переходу узкой части кюветы в широкую и был полностью погружен в кровь [3] (рис. 1). Таймер коагулометра запускали вручную после установки кювет в измерительные ячейки аппарата согласно инструкции, прилагаемой к АПГ2-02-П. Также учитывали время от начала рекальцификации крови до момента погружения в нее исследуемых объектов, которое в последствии суммировали с показателями прибора [6,9].
Результаты и обсуждение
НАУЧНЫЙ ЭЛЕКТРОННЫЙ ЖУРНАЛ IN NOVA № 4 (17) 2019 SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (17) 2019
Полученные данные (табл.1) указывают на статистически достоверное сокращение времени свертывания при использовании различных образцов гемостатических губок. Наименьший показатель времени свертывания по сравнению с контролем имеет образец гемостатической губки «Тахокомб» на 17 секунд меньше по сравнению с контрольной группой, что вероятно связано с наличием в его составе биологически активных
веществ (коллаген, рибофлавин, фибриноген, тромбин и другие). Наименьшее влияние на образование сгустка крови выявлено при исследовании губки гемостатической
коллагеновой, которая состоит в основном из волокон коллагена (на 9,2 секунды быстрее контрольной группы). Образцы № 1 и № 2 сократили время свертывания крови на 16,8% и 18,7% соответственно.
Таблица 1. Время свертывания исследовательских групп
Время свертывания (t), сек.
Статистические показатели Контроль Образец № 1 Образец № 2 Образец № 3 Образец № 4
Среднее 55,63 46,26 45,21 46,36 38,57
Стандартное отклонение 7,81 8,69 7,68 8,12 6,57
Стандартная ошибка 2,47 2,75 2,43 2,57 2,08
Медиана 55,45 44,82 43,70 45,33 37,33
Ошибка медианы 0,98 1,09 0,96 1,02 0,82
Сравнение уровня значимости различий между исследуемыми образцами представлены ниже
Таблица 2. Сравнение уровня значимости различий времени свертывания крови исследуемых
образцов (Р-уа!ие)
Образец Контроль № 1 № 2 № 3 № 4
Контроль 0,0284* 0,0065* 0,0126* 0,0004*
№ 1 0,7055 0,8206 0,0963
№ 2 0,6501 0,0890
№ 3 0,0413*
№ 4
* достоверность отличия р < 0,05
Из таблицы видно, что достоверными являются отличия средних значений времени свертывания между всеми исследуемыми образцами и контролем, а также между образцами № 3 (губка гемостатическая коллагеновая) и № 4 (губка гемостатическая «Тахокомб»).
Выводы
Согласно приведенным данным можно сделать вывод о том, что данную методику целесообразно использовать для дальнейшей оценки гемостатических свойств аппликационных кровеостанавливающих средств ввиду ее
точности, технической простоты и объективности. Все исследуемые образцы в той или иной степени ускоряют образование сгустка крови. Но стоит отметить, что после проведенного нами исследования с уверенностью можно заключить, что добавление биологически активных веществ в состав губки, оказывающих влияние на систему гемостаза, открывает перспективы разработки новых высокоэффективных средств остановки интраоперационных кровотечений.
Список литературы
1. Бояринцев В.В., Юдин A.B., Назаров В.В., Самойлов A.C., Фрончек Э.В., Коваленко P.A.
НАУЧНЫЙ ЭЛЕКТРОННЫЙ ЖУРНАЛ IN NOVA № 4 (17) 2019 SCIENTIFIC ELECTRONIC JOURNAL INNOVA № 4 (17) 2019
Доклиническая оценка эффективности местных гемостатических препаратов (экспериментальное исследование) // Медицина катастроф. 2010;3. С. 23-25.
2. Константинова Ю.Е., Абросимова Н.В., Сотников К.А., Липатов В.А. Показатели кровоостанавливающей активности губок на основе карбоксиметилцеллюлозы // Здоровье и образование в XXI веке. 2016;1. С. 142-144.
3. Лазаренко В.А., Липатов В.А., Нетяга A.A., Лазаренко C.B., Северинов Д.А., Сотников К.А. Разработка способа сравнительного изучения влияния хирургических материалов на процесс образования сгустка крови in vitro // Современные проблемы науки и образования. 2019;1 DGI:10.17513/spno.28511; URL: http://www.science-education.ru/article/view?id=28511
4. Бледнов A.B. Перспективные направления в разработке новых перевязочных средств // Новости хирургии. 2006. Т. 14. №. 1. С. 9-19.
5. Жаворонок И.С., Кондратенко Г.Г., Гапано-вич В.Н., Есепкин A.B., Карман Д.Д.. Остановка паренхиматозного кровотечения из печени с помощью гемостатического средства на основе
неорганических солей. Новости хирургии. 2016;24(4):361-67.
6. Липатов В.А., Лазаренко C.B., Сотников К.А., Северинов Д.А., Ершов М.П. К вопросу о методологии сравнительного изучения степени гемостатической активности аппликационных кровоостанавливающих средств // Новости хирургии. 2018; 1 ] DOI: 10.18484/23050047.2018.1.81
7. Белозерская Г.Г., Макаров В.А., Абоянц Р.К., Малыхина Л.С. Аппликационное средство гемостаза при капиллярнопаренхиматозном кровотечении. Хирургия Журн им. Н.И. Пирогова. 2004;(9):55-59.
8. Чередников Е.Ф., Кашурникова М.А., Роман-цов М.Н., Баранников C.B., Болховитинов А.Е., Гапоненков Д.Г., Любимов П.Ю. Экспериментальное изучение новых средств местного гемостаза в лечении язвенных кровотечений. Науч-мед вестн Центрального Черноземья. 2016;(65):27-33
9. Кобелевская Н.В. Современные аспекты лекарственной гемостатической терапии. Вестн последиплом мед образования. 2014;(3):5-9.
